以毒素為主的治療性肽的眼科用途和其藥用組合物的制作方法
【專利說明】
[0001] 相關(guān)申請案的奪叉參考
[0002] 本申請案主張2013年7月22日申請的美國臨時(shí)專利申請案序號(hào)61/857, 157的 優(yōu)先權(quán)，所述案是以其全文引用的方式并入本文中。
技術(shù)領(lǐng)域
[0003] 本文中所公開的方法涉及一種以毒素為主的治療性肽特別在治療包括干眼和葡 萄膜炎的眼科病癥的用途。所述的以毒素為主的治療性肽可以包括以ShK為主的肽。還公 開含有所述以毒素為主的治療性肽的藥用組合物。
【背景技術(shù)】
[0004] 眼睛的淚液分泌可保護(hù)并維持包括角膜、角膜緣、結(jié)膜、血管和眼瞼的眼表面組織 的完整性。淚液分泌對保護(hù)眼睛免受感染性因子和環(huán)境損傷影響具有重要性。通過淚液形 成的液膜還為提供平滑光學(xué)表面和維持細(xì)胞健康所必需。
[0005] -種最常見的眼科病癥為干眼綜合癥（也稱為干燥性角膜結(jié)膜炎和"干眼"）。干 眼是由會(huì)導(dǎo)致眼睛炎癥和損傷的淚液不足或缺乏所定義。
[0006] 干眼可能具有許多種病因。例如，干眼的暫時(shí)形式可能因眼睛創(chuàng)傷或感染的炎癥 反應(yīng)所引起。其中，暫時(shí)性干眼可（例如）在局部眼自體免疫病癥形成時(shí)變?yōu)殚L期性的。
[0007] 干眼還可能因全身性病癥引起。例如，休格倫氏綜合癥（Sjogren'ssyndrome)為 通過其兩種最常見癥狀眼干和口干識(shí)別的自體免疫疾病。休格倫氏綜合癥會(huì)導(dǎo)致對眼睛和 口的粘膜和水分分泌腺造成免疫系統(tǒng)損傷。細(xì)胞和組織損傷會(huì)導(dǎo)致淚液和唾液生成減少。 休格倫氏綜合癥通常伴隨著其它的如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和紅斑狼瘡的免疫系統(tǒng)疾病。
[0008] 針對因休格倫氏綜合癥引起的干眼的當(dāng)前治療包括藥品，如毛果蕓香堿 (Pilocarpine)、環(huán)孢霉素或西維美林（Cevimeline)，這兩者在經(jīng)口服使用的情況下主要增 加唾液生成。毛果蕓香堿可呈滴眼劑形式投與，但必需考慮瞳孔的收縮和癲癇類型效應(yīng)風(fēng) 險(xiǎn)。
[0009] 休格倫氏綜合癥僅為導(dǎo)致干眼的病癥的一個(gè)實(shí)例，其缺乏無不可接受副反應(yīng)的有 效治療。作為另一個(gè)實(shí)例，在美國約10%的視力受損是因葡萄膜炎（葡萄膜炎癥）所致。葡 萄膜包括虹膜、睫狀體和脈絡(luò)膜。葡萄膜炎在解剖學(xué)上最常被分類為前部、中間、后部或彌 漫性。前部葡萄膜炎主要位于眼睛前段且包括虹膜炎和虹膜睫狀體炎。中間葡萄膜炎（也 稱為周邊葡萄膜炎）集中在緊接于睫狀體和平坦部區(qū)域中虹膜和晶狀體之后的區(qū)域，因此 還可使用替代術(shù)語"睫狀體炎"和"平坦部炎"。后部葡萄膜炎表示葡萄膜炎的許多種形式， 包括視網(wǎng)膜炎、脈絡(luò)膜炎和視神經(jīng)炎。彌漫性葡萄膜炎意味著涉及眼睛所有部分（包括前 部、中間和后部結(jié)構(gòu)）的炎癥。針對于葡萄膜炎的當(dāng)前治療包括主要局部應(yīng)用和/或全身 性類固醇療法。
[0010] 在美國，約6%的葡萄膜炎病例發(fā)生在兒童中，而國際人群中2. 2到33. 1 %的葡萄 膜炎病例發(fā)生在兒童和青少年中。小兒葡萄膜炎的一種主要病因是與包括以下的自體免疫 疾病相關(guān)聯(lián)：幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、僵直性脊椎炎、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病(Crohnsdisease)、兒童期類肉瘤病和川崎?。↘awasakidisease)。小兒葡萄膜炎為兒童 的主要健康問題，因?yàn)椴l(fā)癥包括帶狀角膜病變、青光眼、結(jié)核、白內(nèi)障形成、黃斑水腫和視 神經(jīng)退化。慢性葡萄膜炎會(huì)導(dǎo)致致病和視力損失。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明提供治療包括干眼、葡萄膜炎、鞏膜炎和眼睛的其它炎癥病癥的眼科病癥 的方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供治療全身性自體免疫疾病的眼表現(xiàn)（如表層鞏膜炎、角膜炎、視 網(wǎng)膜血管炎或其它的涉及角膜、視網(wǎng)膜、鞏膜和/或眼窩炎癥的疾?。┑姆椒?。所述方法通 過投與治療有效量的含有以毒素為主的治療性肽的藥用組合物來治療眼科病癥。還提供識(shí) 別將從所述治療獲益的個(gè)體的方法。
【附圖說明】
[0012] 圖1提供一組顯示ShK-186對經(jīng)毒胡蘿卜素刺激的人全血中炎癥性細(xì)胞激素含量 的效應(yīng)的四個(gè)圖。ShK-186是以劑量依賴方式抑制炎癥性細(xì)胞激素介白素（IL)-2、IL-17、 IL-4和干擾素（IFN)-y。
[0013] 圖2提供一組顯示ShK-186對經(jīng)毒胡蘿卜素刺激的人周邊血液單核細(xì)胞（PBMC) 中炎癥性細(xì)胞激素含量的效應(yīng)的四個(gè)圖。ShK-186是以劑量依賴方式抑制炎癥性細(xì)胞激素 IL-2、IL-17、IL-4 和IFN-γ。
[0014] 圖3Α到3D顯示依指示每天局部投與ShK-186或ShK-198三次后局部（眼睛）和 全身（血漿）流體中ShK-186和ShK-198的定量。圖3A顯示發(fā)現(xiàn)局部投與的ShK-186以 顯著濃度存于經(jīng)處理的右眼（RE)之前房房水中而不存于左眼（LE)或血漿（P)中，表明藥 物的眼內(nèi)遞送。圖3B顯示在取自未經(jīng)處理的左眼（LE)的樣本中不存在可檢測的ShK-186 但在經(jīng)處理的右眼（RE)中存在顯著量的藥物。在給藥21天后收集樣本。圖3C顯示局部投 與0. 1%ShK-186或1%ShK-186持續(xù)7天導(dǎo)致眼睛前房中藥物濃度以濃度依賴方式增加。 全身暴露量低于檢測水平（未顯示）。1-1到1-4 :經(jīng)生理鹽水媒劑處理；3-1到3-3 :在P6N 中的ShK-1860. 1%溶液；4-1到4-4 :在P6N中的ShK-1861%溶液。在第19天用29號(hào)針頭 回收前房房水，稀釋并通過標(biāo)準(zhǔn)ELISA方法分析。圖3D顯示每天局部投與0. 1 %ShK-198 或1%ShK-198三次持續(xù)7天導(dǎo)致眼睛中藥物濃度以濃度依賴方式增加。全身暴露量低于 檢測水平（未顯示）。2-1到2-4 :經(jīng)P6N媒劑處理；5-1到5-4 :在P6N中的ShK-1980. 1 % 溶液；6-1到6-4 :在P6N中的ShK-1981%溶液。在第19天用29號(hào)針頭回收房水，稀釋并 通過標(biāo)準(zhǔn)ELISA方法分析。
[0015] 圖4A到4D顯示實(shí)驗(yàn)前部葡萄膜炎模型中局部投與ShK-186的療效。圖4A: ShK-186的局部投與使得實(shí)驗(yàn)自體免疫前部葡萄膜炎（EAAU)大鼠模型中的臨床得分值減 小。在通過免疫接種輔助黑色素相關(guān)抗原（MAA)乳液誘發(fā)EAAU后第11天、第13天、第15 天和第18天使用裂隙燈對每只動(dòng)物進(jìn)行臨床觀察?；谕坠δ埽s?。?、虹膜結(jié)構(gòu)、前房 中細(xì)胞的存在和前房中蛋白質(zhì)的存在（紅腫）來給出眼睛個(gè)別得分值。接著將得分值轉(zhuǎn)換 為每天綜合臨床得分值。發(fā)現(xiàn)從第〇到第8天每天經(jīng)0. 1 %ShK-186處理眼睛三次和從第9 到第18天每天經(jīng)1 %ShK-186局部處理眼睛三次的動(dòng)物的綜合得分值明顯低于用媒劑處理 的那些。N= 8只大鼠/16只眼睛。圖4B:ShK-186的局部投與使得實(shí)驗(yàn)自體免疫葡萄膜炎 的大鼠模型中總病理減低。左圖：每天三次用媒劑（P6N)對動(dòng)物給藥。在免疫接種后第18 天，觀察到動(dòng)物3-2具有13的綜合臨床得分值：縮小的瞳孔完全充滿蛋白質(zhì)（得分值=4)， 有一定程度損傷的充盈虹膜血管（得分值=3)，許多浸潤細(xì)胞存于前房中（得分值=4 ;未 描繪出）和輕度紅腫（得分值=2 ;未描繪出）。右圖：動(dòng)物從免疫接種誘發(fā)EAAU后第0天 至IJ(且包括）第8天接受0· 1 %ShK186繼而在第9天開始接受1 %ShK-186直到（且包括） 第18天。在免疫接種后第18天，觀察到動(dòng)物4-8具有0的綜合臨床得分值：正常瞳孔（得 分值=0)，正常虹膜血管和結(jié)構(gòu)（得分值=0)，前房中不存在可見的細(xì)胞或蛋白質(zhì)（各分 別為得分值=〇 ;未描繪出）。圖4C:ShK-186的局部投與使得EAAU組織病理減低。將免疫 接種輔助MAA后第19天收集于10%福爾馬林中的眼睛切片并使用蘇木精和伊紅染色。觀察 眼睛切片且基于虹膜及睫狀體結(jié)構(gòu)和炎癥性細(xì)胞浸潤到虹膜和/或睫狀體和前房的基質(zhì) 的程度（基于金姆（Kim)等人，韓國眼科學(xué)雜志（KoreanJ.Ophthalmol. ) 12,14-18 (1998) 中所概述的參數(shù)）由獨(dú)立獸醫(yī)病理學(xué)家來評(píng)分。（1.)對照健康眼睛（10X) ; (2.)及（4.)對 來自經(jīng)媒劑處理的動(dòng)物的眼睛給出的組織病理學(xué)得分值為2(10X、40X) ; (3.)及（5.)對來 自每天經(jīng)0. 1 %ShK-186處理三次持續(xù)9天接著每天經(jīng)1 %ShK-186處理三次持續(xù)10天的 動(dòng)物的眼睛給出的組織病理學(xué)得分值為〇(1〇Χ、40Χ)。（6.)基于對來自媒劑處理組（P6N) 或如上所示ShK-186處理組（l%ShK-186)的四只眼睛的組織病理學(xué)分析的綜合臨床得分 值。圖4D:ShK-198的局部投與使得EAAU大鼠模型中的臨床得分值減小。在通過免疫接種 輔助MAA乳液誘發(fā)EAAU后第13天使用裂隙燈對每只動(dòng)物進(jìn)行臨床觀察。基于前房中細(xì)胞 的存在（上圖）和前房中蛋白質(zhì)的存在或紅腫（下圖）來給出眼睛個(gè)別得分值。每天使用 P6N媒劑或1%ShK-198局部處理大鼠眼睛三次。N= 10只大鼠/20只眼睛。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 淚液分泌是通過具有緊密神經(jīng)連接的復(fù)雜系統(tǒng)來調(diào)節(jié)，此由對身體、環(huán)境、微生物 和情緒刺激的快速淚液分泌反應(yīng)得到證實(shí)。淚液分泌組織包括淚腺、瞼板腺、結(jié)膜杯狀細(xì)胞 和上皮細(xì)胞。淚液形成系統(tǒng)的完全或部分破壞會(huì)導(dǎo)致淚液生成不足，一種稱為干眼的病癥。 [0017] 干眼可能是因局部性或全身性病癥引起。例如，呈局部性病癥的干眼可能是因眼 表面應(yīng)力所導(dǎo)致。這種眼睛應(yīng)力可能是因感染和/或炎癥因子（如細(xì)胞激素及趨化細(xì)胞激 素）的調(diào)節(jié)受到破壞所致。這種病癥可能是暫時(shí)的。然而，在其它實(shí)例中，在眼表面破壞期 間，抗原呈現(xiàn)細(xì)胞（APC)可得以活化且使經(jīng)過處理并呈現(xiàn)的自體抗原內(nèi)化，由此促進(jìn)自體 免疫反應(yīng)。所產(chǎn)生的組織損傷會(huì)引起持續(xù)自體免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致對包括角膜、杯狀細(xì)胞和 上皮細(xì)胞的眼組織的破壞。這種破壞會(huì)最終導(dǎo)致持續(xù)干眼和炎癥性眼睛疾病的其它表現(xiàn)。
[0018] 干眼還可能是因包括休格倫氏綜合癥、眼瘢痕性類天皰瘡和史蒂芬-強(qiáng)森綜合癥 (Stevens-Johnson syndrome)的全身性自體免疫疾病所致。導(dǎo)致干眼的全身性自體免疫性 還可能是起因于干細(xì)胞移植中的同種異體移植，表現(xiàn)為移植物抗宿主疾病。
[0019] 導(dǎo)致干眼的局部性和全身性自體免疫反應(yīng)一般使得自體反應(yīng)性T-和/或B-細(xì)胞 活化。一般來說在干眼中且更特定來說在休格倫氏綜合癥中，自體反應(yīng)性T-細(xì)胞活化、分 化和歸巢到眼表面組織是與包括干擾素（IFN)-y和介白素（IL)-17的細(xì)胞激素的增加相 關(guān)聯(lián)。IFN-γ改變角膜上皮細(xì)胞上的粘蛋白從而導(dǎo)致組織損傷和減小的杯狀細(xì)胞密度。
[0020] 關(guān)于干眼小鼠模型的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步支持T-細(xì)胞在病癥的發(fā)展和病理中的作用。斯 特恩（Stern)等人（國際免疫學(xué)評(píng)論（Int.Rev.Immunol. )32:19-41, 2013)通過暴露于產(chǎn) 生干燥應(yīng)力的條件來誘發(fā)小鼠干眼。數(shù)天后，小鼠呈現(xiàn)T-細(xì)胞浸潤和增加的細(xì)胞激素含量 (IFN-γ、IL-1β、腫瘤壞死因子（TNF)-a和IL-17)。眼表面呈現(xiàn)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞死亡，且 淚液生成減少。
[0021] 衍生自這些干眼小鼠（供者小鼠）的淋巴結(jié)及脾臟的⑶4+T-細(xì)胞經(jīng)移除并注射 到T-細(xì)胞缺乏小鼠（受者小鼠）中。受者小鼠發(fā)展出與供者小鼠類似的干眼病癥，包括 T-細(xì)胞歸巢到眼表面組織、增加的細(xì)胞激素含量、減低的杯狀細(xì)胞密度、減低的淚液生成和 減低的淚液更換。斯特恩等人的結(jié)論為衍生自供者小鼠的CD4+T-細(xì)胞足以誘發(fā)受者小鼠 的干眼。所述結(jié)論與觀測到活化CD4+T-細(xì)胞位于干眼患者的眼表面組織中一致。
[0022] 與T-細(xì)胞浸潤和活化相關(guān)聯(lián)的炎癥性眼睛疾病或病癥包括棘阿米巴蟲 (acanthamoeba)感染、急性視網(wǎng)膜色素上皮炎、過敏、關(guān)節(jié)炎、細(xì)菌感染、貝塞特氏病 (Behcet'sdisease)、貝塞特氏病相關(guān)視網(wǎng)膜炎、瞼炎、化學(xué)品暴露、脈絡(luò)膜炎、脈絡(luò)膜視網(wǎng) 膜炎癥、克羅恩?。–rohn'sdisease)、結(jié)膜炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、干眼、表層鞏膜炎、眼 睛瘀傷、眼睛創(chuàng)傷、食物過敏、異物暴露、真菌感染、蕁麻疹、虹膜睫狀體炎、虹膜炎、幼年特 發(fā)性關(guān)節(jié)炎、角膜炎、狼瘡、分枝桿菌感染、視神經(jīng)視網(wǎng)膜炎、寄生蟲感染、手術(shù)后病癥、后部 睫狀體炎、視網(wǎng)膜血管炎、視網(wǎng)膜炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、類肉瘤病、類肉瘤病相關(guān)視網(wǎng)膜炎、季 節(jié)性過敏、鞏膜炎、螺旋體感染、毒素暴露、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎和病毒感染。
[0023] 許多種免疫相關(guān)疾病和代謝疾?。ò═-細(xì)胞介導(dǎo)的眼科病癥）至少部分地歸 因于記憶T-細(xì)胞的作用。已知的記憶T-細(xì)胞的兩種類別為：中央記憶T-細(xì)胞（TJ和效 應(yīng)子記憶T-細(xì)胞（TEM)。
[0024] 常在罹患免疫相關(guān)疾病的患者中觀察到TEM擴(kuò)增群體，且在一些情況中，這是影響 調(diào)節(jié)T-細(xì)胞（Treg)的疾病的結(jié)果。Treg為抑制其它細(xì)胞（包括TEM)的免疫反應(yīng)的T-細(xì) 胞的一種類型。在不存在正常含量的Treg下，身體免疫反應(yīng)變得不受控制并侵襲健康組織 和器官。Treg功能的這種破壞會(huì)導(dǎo)致多種自體免疫疾?。òㄑ劭撇“Y）。
[0025] 活化后，TEM上調(diào)其Kvl. 3K+離子通道表達(dá)。引起并造成損傷自體免疫過程結(jié)果的 TEM高度依賴這些Kvl. 3通道以維持為活化、增殖和細(xì)胞激素生成所需的細(xì)胞內(nèi)鈣含量。因 此，TEM的增殖對Kvl.3K+通道阻斷劑敏感。伍爾夫（Wulff)等人，臨床研究雜志（J.Clin. Invest. )，111，1703-1713 (2003)?？杀磉_(dá)Kvl. 3通道且對炎癥具重要性的其它細(xì)胞類型包 括巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、類別轉(zhuǎn)換記憶B-細(xì)胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
[0026] 在不受理論約束下，認(rèn)為本文中所公開的以毒素為主的治療性肽可通過阻斷 Kvl. 3K+通道有效地治療干眼和其它炎癥性眼科病癥（包括與上調(diào)的TEM相關(guān)聯(lián)的那些）。 因此，本發(fā)明提供使用以毒素為主的治療性肽來治療如干眼和葡萄膜炎的免疫介導(dǎo)的眼科 病癥的方法。所述的以毒素為主的治療性肽提供針對于免疫介導(dǎo)的眼科病癥的新穎治療選 項(xiàng)，其可以比現(xiàn)有治療更有利的安全特性減低自體免疫相關(guān)的眼睛損傷和干眼。
[0027] 以毒素為主的治療性肽
[0028] 用于本文所公開的方法中的以毒素為主的治療性肽的特定實(shí)例結(jié)合電壓閘控通 道。示例性的電壓閘控通道包括Kvl. 1、Kvl. 2、Kvl. 3、Kvl. 4、Kvl. 5、Kvl. 6、Kvl. 7、Kv2. 1、 Kv3. 1、Kv3. 2、Kvll. 1、Kcl. 1、Kc2. 1、Kc3. 1、Navi. 2、Navi. 4 和Cavl. 2。
[0029] 毒素肽可由多種生物體產(chǎn)生并已演進(jìn)成與離子通道和受體結(jié)合。衍生自蛇、蝎、蜘 蛛、蜜蜂、蝸牛和海葵的天然毒素肽通常為10到80個(gè)氨基酸長且包含2到5個(gè)建立緊湊分 子結(jié)構(gòu)的二硫鍵。這些肽似乎已從小數(shù)目的結(jié)構(gòu)架構(gòu)演進(jìn)。所述的肽叢集成為折迭形式 的家族，其透過半胱氨酸/二硫回路結(jié)構(gòu)保守以維持造成效能、穩(wěn)定性和選擇性結(jié)果的三 維結(jié)構(gòu)（彭寧頓（Pennington)等人，生物化學(xué)（Biochemistry) ,38, 14549-14558 (1999); 圖爾多（Tudor)等人，歐洲生物化學(xué)雜志（Eur.J.Biochem.)，251，133-141 (1998);及賈丁 (Jaravine)等人，生物化學(xué)，36, 1223-1232(1997))。
[0030] 如本文中所使用，"以毒素為主的治療性肽"包括表1的以毒素為主的肽（或其變 體、D取代類似物、具有羧基末端的酰胺、修飾物、衍生物或藥學(xué)上可接受的鹽）或表2的以 ShK為主的肽（或其變體、D取代類似物、具有羧基末端的酰胺、修飾物、衍生物或藥學(xué)上可 接受的鹽）。以毒素為主的治療性肽可以是合成或天然存在的。
[0031] "以毒素為主的肽"包括任何合成或天然已知的毒素肽和公開于表1中的那些肽和 其變體、D取代類似物、具有羧基末端的酰胺、修飾物、衍生物和藥學(xué)上可接受的鹽。用于本 文所公開的方法中的特定示例性的以毒素為主的治療性肽包括列于表1中且如序列表中 以SEQIDN0:225到256所顯示的以毒素為主的肽。在各種實(shí)施例中，治療眼科病癥的方 法包括投與以毒素為主的治療性肽，包括表1的以毒素為主的肽（SEQIDN0:225到256)。 在各種實(shí)施例中，表1的以毒素為主的肽（SEQIDN0:225到256)可用于制造可治療眼科 病癥的藥用組合物（或藥物）。
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[0034] "ShK"肽為也可用于本文所述的方法和藥用組合物中的毒素肽的亞型。ShK肽最 初是從加勒比?？⊿tichodactylahelianthus)單離得到的。ShK肽充當(dāng)Kvl.3通道的抑 制劑。通過抑制Kvl. 3通道，ShK在某些實(shí)施例中可以皮摩爾濃度抑制TEM或通過TEM的活 化、增殖和/或細(xì)胞激素生成。
[0035] 如本文中所使用，"抑制劑"為任何的可減低或消除通?；诨衔锱c受體相互作 用而產(chǎn)生的生物活性的以毒素為主的治療性肽，所述生物活性包括生物合成和/或催化活 性、受體或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑活性、基因轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)譯、細(xì)胞蛋白質(zhì)輸送等等。
[0036] 天然ShK肽述于（例如）彭寧頓等人，國際肽蛋白質(zhì)研究雜志（1]11:.工？6口1:· ProteinRes. )，46, 354-358(1995)中。屬于本發(fā)明范圍的示例性的ShK結(jié)構(gòu)還公開于比頓 (Beeton)等人，分子藥理學(xué)（Mol.Pharmacol. )，67, 1369-1381 (2005);第 2008/0221024 號(hào) 美國公開案；第W0/2012/170392號(hào)PCT公開案；和第8, 080, 523號(hào)和第8, 440, 621號(hào)美國 專利中。
[0037] "以ShK為主的肽"包括任何合成或天然已知的ShK肽和其變體、D取代類似物、具 有羧基末端的酰胺、修飾物、衍生物和藥學(xué)上可接受的鹽。
[0038] 與本文中所公開的方法和藥用組合物并用的特定示例性的以ShK為主的肽可包 括列于表2中且如序列表中以SEQIDNO: 1到224所顯示的那些肽。在各種實(shí)施例中，一種 治療眼科病癥的方法包括投與治療有效量的表2的以ShK為主的肽（SEQIDNO: 1到224)。 在各種實(shí)施例中，表2的以ShK為主的肽（SEQIDNO: 1到224)可用于制造可治療眼科病 癥的藥用組合物（或藥物）。用于本文所公開的特定實(shí)施例中的以ShK為主的肽包括SEQ IDN0:1、SEQIDN0:49、SEQIDN0:210、SEQIDN0:217 和SEQIDN0:221 的那些肽。
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[0044]
[0045]
[0046] 所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員了解用于設(shè)計(jì)具有改良性質(zhì)的以毒素為主的治療性肽的技 術(shù)，如丙氨酸掃描、使用已知序列和/或分子建?；诒葘閷?dǎo)的突變形成的合理設(shè)計(jì)。例 如，以毒素為主的治療性肽可經(jīng)設(shè)計(jì)以移除蛋白酶裂解部位（例如，在K或R殘基處的胰蛋 白酶裂解部位和/或在F、Y或W殘基處的胰凝乳蛋白酶裂解部位）。非水解性磷酸鹽取代 還賦予對磷酸基團(tuán)的穩(wěn)定效應(yīng)和抗磷酸酶的穩(wěn)定性。非水解性磷酸基團(tuán)包括磷酸酪氨酸的 膦酸鹽類似物，如4-膦?；谆奖彼幔≒mp)、4-膦?；谆奖彼幔‵2Pmp)、對 膦?；奖彼?、單氟膦?；谆奖彼?、磺基（二氟甲基）苯丙氨酸（F2Smp)和羥基膦 ?；谆奖彼?。在其它實(shí)施例中，可使用磷酸酪氨酸擬似物，如（例如）0MT、F0MT和其 它的如布爾克（Burke)和李（Lee)，化學(xué)研究評(píng)論（Acc.Chem.Res. ),36,426-433 (2003)中 所述的使用羧酸基以復(fù)制磷酸官能度的類似物。在另一個(gè)實(shí)施例中，非水解性類似物包括 甲基_、芳氧基-和硫乙基膦酸。在另一個(gè)實(shí)施例中，非水解性磷酸鹽衍生物包括二氟亞甲 基膦酸和二氟亞甲基磺酸。
[0047] 為增進(jìn)以毒素為主的治療性肽的結(jié)構(gòu)的藥物動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)（PK/PD)性質(zhì)， 可針對于對降解性質(zhì)敏感的殘基進(jìn)行取代、置換或修飾。以酰胺修飾C-端酸官能基還可賦 予穩(wěn)定性。這些針對以毒素為主的治療性肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變可與N-端處陰離子性部分 組合以得到穩(wěn)定且具有選擇性的Kvl. 3阻斷劑。為了制得具有較高活體內(nèi)半衰期的以毒素 為主的治療性肽，可制得所述肽的變體或修飾物，其中關(guān)鍵蛋白質(zhì)分解消化部位可經(jīng)取代 以降低蛋白酶感受性。這可包括非必需殘基由保守電子等排置換物取代（例如，Lys置換 為Lys(乙?；┗騁in)和或由中性置換物（Ala)取代。
[0048] 本文中所公開的以毒素為主的治療性肽的"變體"包括相較本文中所公開的以毒 素為主或以ShK為主的肽具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、缺失、終止位置或取代的肽。
[0049] 氨基酸取代可以是保守或非保守取代。本文中所公開的以毒素為主的治療性肽的 變體可包括具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸取代的那些肽。如本文中所使用，"保守取代"包括 以下保守取代組別中一組中所存在的取代：組別1 :丙氨酸（Ala;A)、甘氨酸（Gly;G)、絲氨 酸（Ser;S)、蘇氨酸（Thr;T);組別2 :天冬氨酸（Asp;D)、谷氨酸（Glu;E);組別3 :天冬酰 氨酸（Asn;N)、谷氨酰胺（Gin;Q);組別4 :精氨酸（Arg;R)、賴氨酸（Lys;K)、組氨酸（His; Η);組別5 :異白氨酸（lie;I)、白氨酸（Leu;L)、甲硫氨酸（Met;M)、纈氨酸（Val;V);及組 另lj6 :苯丙氨酸（Phe;F)、酪氨酸（Tyr;Y)、色氨酸（Trp;W)。
[0050] 另外，氨基酸可依類似功能、化學(xué)結(jié)構(gòu)或組成（例如，酸性、堿性、脂肪族、芳香族、 含硫）分組為保守取代組別。例如，出于取代的目的，脂肪族分組可包括Gly、Ala、Val、Leu和lie。包含被視為對于另一種氨基酸的保守取代的氨基酸的其它組別包括：含硫:Met與 Cys;酸性：Asp、Glu、Asn和Gin;小脂肪族、非極性或略為極性的殘基：Ala、Ser、Thr、Pro 和Gly;極性、帶負(fù)電荷的殘基和其酰胺：Asp、Asn、Glu和Gin;極性、帶正電荷的殘基：His、 Arg和Lys;大脂肪族、非極性殘基：Met、Leu、lie、Val和Cys;和大芳香族殘基：Phe、Tyr 和Trp。其它信息可參見克賴頓（Creighton) (1984)蛋白質(zhì)（Proteins)，W.Η.弗里曼公司 (ff.H.FreemanandCompany)〇
[0051] 本文中所公開的以毒素為主的治療性肽的變體還包括相對本文中所公開的肽序 列具有至少70%序列一致性、至少80%序列一致性、至少85%序列一致性、至少90%序列 一致性、至少95 %序列一致性