馬甲子或其提取物在制備治療燒燙傷的藥物中的用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及馬甲子或其提取物的新用途，具體是馬甲子或其提取物在制備治療燒燙傷的藥物中的用途。外用馬甲子及其提取物可有效促進(jìn)燒燙傷傷口愈合，起效時(shí)間和治療效果均優(yōu)于臨床常用對(duì)照藥物，說(shuō)明外用馬甲子及其提取物治療燒燙傷在療效上優(yōu)于現(xiàn)有常用藥物。
【專利說(shuō)明】
馬甲子或其提取物在制備治療燒燙傷的藥物中的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及馬甲子或其提取物的新用途，具體是馬甲子或其提取 物在制備治療燒燙傷的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 馬甲子(Paliurus ramosissimus(Lour. )Poir)為落葉灌木，是一種常見(jiàn)藥用植 物，據(jù)報(bào)道枝葉根花果均藥用。性味苦、平，無(wú)毒。能除寒活血，發(fā)表解熱，消腫，治跌打損傷 及心腹疼痛。但尚未見(jiàn)馬甲子及其提取物可用于治療燒燙傷的報(bào)道。
[0003] 燒燙傷臨床常見(jiàn)，一般指熱力，包括熱液(水、湯、油等）、蒸氣、高溫氣體、火焰、熾 熱金屬液體或固體(如鋼水、鋼錠)等所引起的組織損害，主要指皮膚和/或黏膜，嚴(yán)重者也 可傷及皮下或/和黏膜下組織，如肌肉、骨、關(guān)節(jié)甚至內(nèi)臟。燙傷是由熱液、蒸氣等所引起的 組織損傷，是熱力燒傷的一種。燒燙傷常分為三度:一度燒燙傷只傷及表皮層，受傷的皮膚 發(fā)紅、腫脹，覺(jué)得火辣辣地痛，但無(wú)水泡出現(xiàn);二度燒燙傷傷及真皮層，局部紅腫、發(fā)熱，疼痛 難忍，有明顯水泡;三度燒燙傷全層皮膚包括皮膚下面的脂肪、骨和肌肉都受到傷害，皮膚 焦黑、壞死，因神經(jīng)損傷而疼痛不明顯。較大面積的燒燙傷不及時(shí)治療，可引起電解質(zhì)紊亂、 細(xì)菌感染、持續(xù)潰瘍等問(wèn)題。西醫(yī)主要采用清創(chuàng)、復(fù)合傷處理、鎮(zhèn)靜止痛、抗菌、修復(fù)等方法 治療，然而，這些治療對(duì)于組織再生修復(fù)并無(wú)明顯作用，雖在肉芽增生期由過(guò)去待其自愈發(fā) 展到使用生長(zhǎng)因子，因后者對(duì)組織修復(fù)的機(jī)理尚未完全明了，各個(gè)生長(zhǎng)因子間的關(guān)系不很 清楚，起使用也受到極大限制。
[0004] 本發(fā)明的發(fā)明人在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)馬甲子及其提取物具有良好的治療燒燙傷作 用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供的馬甲子及其提取物的新用途為馬甲子或其提取物在制備治療燒燙 傷的藥物中的應(yīng)用;具體的，所述藥物為外用藥物。
[0006] 應(yīng)用時(shí)，馬甲子采用馬甲子全株植物或其中任一部位的鮮品或干品；其中，藥用部 位可為根、莖、葉、花、果任一部位或其混合。最優(yōu)選的部位為葉。
[0007] 鑒于藥材的采集期和保存便利性，為了便于臨床用藥，可以馬甲子全株植物或其 中任一部位的鮮品或干品為原料藥，粉碎后直接制備成適宜的制劑應(yīng)用，也可以制成提取 物后制備成適宜的制劑應(yīng)用。具體的，所述馬甲子為鮮品或干品的粉碎品或提取物，粉碎品 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥，采用粉碎機(jī)或其他器械粉碎制 得;提取物以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥，采用常規(guī)提取方法制 備而得。
[0008] 應(yīng)用時(shí)，馬甲子提取物是以馬甲子全株植物或其中任一部位為原料藥，采用常規(guī) 提取方法制備而得。本發(fā)明所得馬甲子提取物主要成分包括黃酮類、萜類、生物堿類、香豆 素類;進(jìn)一步還包括上述黃酮、萜、生物堿、香豆素的苷及其單體成分;還包括多糖類和纖維 素。
[0009] 本發(fā)明馬甲子的粉碎品的制備方法如下：
[0010] A、以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[0011] B、粉碎，過(guò)篩，即得。
[0012] 所述粉碎包括粉碎機(jī)或其他器械粉碎。
[0013] 采用上述方法制備的粉碎品，稱為馬甲子粉碎品。
[0014] 本發(fā)明馬甲子提取物的制備方法如下：
[0015] 制備方法一：
[0016] 所述馬甲子的提取物的制備方法一：
[0017] A、以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[0018] B、粉碎，過(guò)篩；
[0019] C、以水或有機(jī)溶劑提取、干燥、即得。
[0020]上述技術(shù)方案中，步驟C所述有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯或 石油醚;優(yōu)選乙醇。
[0021] 上述技術(shù)方案中，步驟C所述提取采用浸漬、回流、滲漉或其他常規(guī)方法提?。?br>[0022] 上述技術(shù)方案中，步驟C所述干燥為減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其 他常規(guī)干燥方法。
[0023] 制備方法二：
[0024] A、以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[0025] B、粉碎，過(guò)篩；
[0026] C、以溶劑a提取，濾液濃縮，得濃縮液；
[0027] D、以溶劑b萃取步驟C所得濃縮液，得萃取液，干燥，即得；
[0028] 或，干燥步驟C所得濃縮液得提取物1，以溶劑b固-液萃取，干燥，即得。
[0029] 上述技術(shù)方案中，步驟C所述提取方法采用浸漬、回流、滲漉或其他常規(guī)方法提??；
[0030] 上述技術(shù)方案中，步驟C所述溶劑a選自選自水和常規(guī)有機(jī)溶劑（甲醇、乙醇、丙酮、 異丙醇、乙酸乙酯或石油醚）；優(yōu)選乙醇。
[0031] 上述技術(shù)方案中，步驟D所述溶劑b選自乙酸乙酯、石油醚或正丁醇；優(yōu)選乙酸乙 酯。
[0032] 上述技術(shù)方案中，步驟D以溶劑b萃取步驟C所得濃縮液，得萃取液的方式屬于液-液萃取;以干燥步驟C所得濃縮液得提取物1，采用溶劑b萃取的方式屬于固-液萃取。
[0033] 上述技術(shù)方案中，步驟D所述干燥為減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其 他常規(guī)干燥方法。
[0034] 制備方法三：
[0035] A、以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[0036] B、以水或有機(jī)溶劑提取、干燥、即得。
[0037]上述技術(shù)方案中，步驟B所述有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯或 石油醚;優(yōu)選乙醇。
[0038] 上述技術(shù)方案中，步驟B所述提取采用浸漬、回流、滲漉或其他常規(guī)方法提?。?br>[0039] 上述技術(shù)方案中，步驟B所述干燥為減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其 他常規(guī)干燥方法。
[0040] 制備方法四：
[0041] A、以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[0042] B、以溶劑a提取，濾液濃縮，得濃縮液；
[0043] C、以溶劑b萃取步驟B所得濾液，得液相，干燥，即得；
[0044] 或，濃縮并干燥步驟B所得濾液得提取物1，以溶劑b提取，干燥提取液，即得。
[0045] 上述技術(shù)方案中，步驟B所述提取方法采用浸漬、回流、滲漉或其他常規(guī)方法提取；
[0046] 上述技術(shù)方案中，步驟B所述溶劑a選自選自水和常規(guī)有機(jī)溶劑（甲醇、乙醇、丙酮、 異丙醇、乙酸乙酯或石油醚）；優(yōu)選乙醇。
[0047]上述技術(shù)方案中，步驟C所述溶劑b選自乙酸乙酯、石油醚或正丁醇；優(yōu)選乙酸乙 酯。
[0048]上述技術(shù)方案中，步驟C以溶劑b萃取步驟B所得濃縮液，得萃取液的方式屬于液-液萃取;以干燥步驟B所得濃縮液得提取物1，采用溶劑b萃取的方式屬于固-液萃取。
[0049] 上述技術(shù)方案中，步驟C所述干燥為減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其 他常規(guī)干燥方法。
[0050] 采用上述方法制備的提取物，如以方法一和三制備所得，以方法一的步驟C或方法 三的步驟B所用溶劑命名為對(duì)應(yīng)的提取物，如馬甲子乙醇提取物，馬甲子甲醇提取物、馬甲 子異丙醇提取物、馬甲子乙酸乙酯提取物、馬甲子石油醚提取物。如按方法二和四制備所 得，則以方法二的步驟D或方法四的步驟C所用溶劑b命名為對(duì)應(yīng)的提取物，如馬甲子石油醚 提取物，馬甲子乙酸乙酯提取物;而方法二步驟D和方法四步驟C所得提取物1則以方法二步 驟C和方法四步驟B所用溶劑a命名對(duì)應(yīng)的提取物，如馬甲子乙醇提取物，馬甲子甲醇提取 物、馬甲子異丙醇提取物。
[0051] 上述技術(shù)方案中，提取物的制備方法一的步驟C和制備方法三的步驟B所使用的溶 劑與馬甲子的用量關(guān)系為，溶劑添加量為馬甲子質(zhì)量的1-40倍;優(yōu)選的，溶劑添加量為馬甲 子質(zhì)量的2-20倍;更進(jìn)一步的，溶劑添加量為馬甲子質(zhì)量的4-12倍。
[0052] 上述技術(shù)方案中，提取物的制備方法二的步驟C和制備方法四的步驟B所使用的溶 劑a與馬甲子的用量關(guān)系為，溶劑a添加量為馬甲子質(zhì)量的1-40倍;優(yōu)選的，溶劑a添加量為 馬甲子質(zhì)量的2-20倍;更進(jìn)一步的，溶劑a添加量為馬甲子質(zhì)量的4-12倍。
[0053]優(yōu)選的，溶劑a采用乙醇時(shí)，乙醇添加量為馬甲子質(zhì)量的1-40倍;優(yōu)選的，乙醇添加 量為馬甲子質(zhì)量的2-20倍;更進(jìn)一步的，優(yōu)選甲醇或乙醇添加量為馬甲子質(zhì)量的4-12倍。 [0054] 其中，所述乙醇的濃度為10-95 %。優(yōu)選的，采用乙醇濃度為40-95 %。最優(yōu)選的，采 用乙醇濃度為60-95 %。
[0055] 本發(fā)明所述的藥物為外用制劑。以馬甲子或其提取物作為活性成分，加入藥劑學(xué) 中可接受的輔料，按常規(guī)方法制備而得的外用制劑;包括軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、涂膜劑、 搽劑、洗劑、噴霧劑、混懸劑、溶液劑、乳劑、糊劑或巴布劑。
[0056] 其中，以馬甲子為活性成分時(shí)，是鮮品或干品植物直接粉碎，加入藥劑學(xué)中可接受 的輔料，按常規(guī)方法制備而得的外用制劑。
[0057] 其中，以馬甲子提取物為活性成分時(shí)，是采用前述提取方法制備得到提取物，加入 藥劑學(xué)上可接受的輔料，按常規(guī)方法制備而得的外用制劑。
[0058] 綜上，外用馬甲子及其提取物可有效促進(jìn)燒燙傷傷口愈合，起效時(shí)間和治療效果 均優(yōu)于臨床常用對(duì)照藥物，說(shuō)明外用馬甲子及其提取物治療燒燙傷在療效上優(yōu)于現(xiàn)有常用 藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0059] 以下通過(guò)對(duì)本發(fā)明【具體實(shí)施方式】的描述說(shuō)明但不限制本發(fā)明。
[0060] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0061] 用于治療燒燙傷的馬甲子藥材原粉或馬甲子提取物，取馬甲子葉、馬甲子莖葉、馬 甲子全株植物鮮品或干品粉碎，或取馬甲子葉、馬甲子莖葉、馬甲子全株植物，加入馬甲子 質(zhì)量1-40倍的水或常規(guī)有機(jī)溶劑（甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯或石油醚)提取;或者 進(jìn)一步將提取物進(jìn)一步用乙酸乙酯或石油醚提取;提取液濃縮后干燥，制得馬甲子提取物； 馬甲子提取物或馬甲子藥材原粉，成分包括萜類、黃酮類、生物堿類、香豆素類、多糖類和纖 維素類以及萜、黃酮、生物堿、香豆素的苷類和單體。
[0062]所述的馬甲子提取物或馬甲子藥材原粉，為馬甲子用水或常規(guī)有機(jī)溶媒提取，或 將馬甲子鮮品或干品直接粉碎入藥;有機(jī)溶媒包括甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、石油醚或 其他常規(guī)溶劑;所述提取方法包括浸漬、回流、滲漉或其他常規(guī)提取方法;所述干燥方法包 括減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其他常規(guī)干燥方法。
[0063]所述的馬甲子提取物或馬甲子藥材原粉的制劑，包括軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、涂 膜劑、搽劑、洗劑、噴霧劑、混懸劑、溶液劑、乳劑、糊劑或巴布劑。
[0064]所述的馬甲子提取物或馬甲子藥材原粉的應(yīng)用，為用于制備治療燒燙傷的外用 藥。
[0065] -、馬甲子提取物或馬甲子藥材原粉的制備方法
[0066] 1.全株水提取物的制備
[0067]取馬甲子全株5kg粉碎，加入8倍量的水煎煮提取3次，收集提取液，減壓濃縮并干 燥即得馬甲子水提取物。
[0068] 2.全株乙醇提取物的制備
[0069]取馬甲子全株5kg粉碎，加入8倍量的95%乙醇浸漬提取數(shù)次，收集提取液，減壓回 收乙醇至無(wú)醇味，干燥即得馬甲子乙醇提取物。
[0070] 3.莖葉乙醇、石油醚和乙酸乙酯提取物的制備
[0071]取馬甲子莖葉5kg粉碎，加入10倍量的95 %乙醇回流提取數(shù)次，收集提取液，60°C 減壓回收乙醇至無(wú)醇味，干燥即得馬甲子乙醇提取物。將馬甲子乙醇提取物加水分散后，依 次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到馬甲子石油醚提取物和乙酸乙酯提取物。
[0072] 4.全株石油醚和乙酸乙酯提取物的制備
[0073]取馬甲子全株5kg粉碎，加入10倍量的甲醇浸漬提取數(shù)次，收集提取液，40°C下減 壓回收甲醇，干燥即得馬甲子甲醇提取物，將馬甲子甲醇提取物加水分散后，依次用石油 醚、乙酸乙酯萃取，得到馬甲子石油醚提取物和乙酸乙酯提取物。
[0074] 5.取馬甲子全株5kg，干燥，粉碎，過(guò)80目藥篩。
[0075] 6.取馬甲子全株鮮品1kg，粉碎，過(guò)60目藥篩。
[0076]二、馬甲子提取物的成分研究
[0077]樣品供試液的配制：取全株乙醇提取物樣品lg，溶于25ml無(wú)水乙醇中，離心。取上 清液2ml，無(wú)水乙醇稀釋5倍，至終濃度為0.008g/ml。
[0078](一)成分的定性研究 [0079] 1、三萜類成分的檢識(shí)
[0080] (l)L-B 反應(yīng)
[00811將樣品溶于乙酸酐中，加濃硫酸一乙酸酐（1: 20)數(shù)滴，可產(chǎn)生黃-紅-紫-藍(lán)等 顏色變化，最后褪色，表明含有三萜類化合物。
[0082] (2)Kahlenberg 反應(yīng)
[0083]將樣品的氯仿或醇溶液點(diǎn)于濾紙上，噴20%五氯化銻的氯仿溶液(或三氯化銻飽 和的氯仿溶液），干燥后60 - 70 °C加熱，顯藍(lán)色，表明含有三萜類化合物。
[0084] (3)R_H 反應(yīng)
[0085] 將樣品供試液滴在濾紙上，噴出25%三氯乙酸乙醇溶液，加熱至100°C，顯紅色，逐 漸變?yōu)樽仙砻骱腥祁惢衔铩?br>[0086] (4)Salkowki 反應(yīng)
[0087] 將樣品溶于氯仿，加入濃硫酸后，在硫酸層呈現(xiàn)紅色或藍(lán)色，氯仿層有綠色熒光出 現(xiàn)，表明含有三萜類化合物。
[0088] (5)Tschugaeff 反應(yīng)
[0089]將樣品溶于冰乙酸中，加乙酰氯數(shù)滴及氯化鋅結(jié)晶數(shù)粒，稍加熱，則呈現(xiàn)淡紅色或 紫紅色，表明含有三萜類化合物。
[0090] 2、黃酮類成分的檢識(shí)
[0091] (1)鹽酸一鎂粉還原反應(yīng)(還原反應(yīng)顯色）
[0092]取少量樣品溶于lmL乙醇中，加入少許鎂粉及濃鹽酸，振蕩片刻，觀察反應(yīng)顏色呈 紫紅色，表明含有黃酮類化合物。
[0093] (2)三氯化鋁反應(yīng)(金屬離子的絡(luò)合反應(yīng)顯色）
[0094]用玻璃棒蘸取樣品供試液涂于濾紙上，吹干，噴1 %的三氯化鋁乙醇溶液，吹干，觀 察現(xiàn)象。置紫外燈下顯鮮黃色，表明含有黃酮類化合物。
[0095] (3)三氯化鐵反應(yīng)(金屬離子的絡(luò)合反應(yīng)顯色）
[0096]用玻璃棒蘸取供試液涂于濾紙上，吹干，在紫外燈下觀察熒光后，噴3 %的三氯化 鐵乙醇溶液，吹干，出現(xiàn)暗藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，再經(jīng)氨熏后轉(zhuǎn)變?yōu)樽厣珶晒獍唿c(diǎn)，表明含有黃酮 類化合物。
[0097] (4)堿性試劑顯色
[0098]用玻璃棒蘸取供試液涂于濾紙上，干燥后，噴以氫氧化鈉水溶液或暴露于氨蒸汽 中，在日光燈下觀察時(shí)，氨蒸汽能使樣品色點(diǎn)轉(zhuǎn)變?yōu)榱咙S色，表明含有黃酮類化合物。
[0099] 3、生物堿類成分的檢識(shí)
[0100] (1)改良碘化祕(mì)鉀(Dragendorf f)法
[0101]①次硝酸鉍〇.85g溶于10ml冰醋酸與40ml水中；②碘化鉀8g溶于20ml水中。試液① 與試液②等量混合置棕色瓶?jī)?nèi)保存作貯備液。用前將lml貯備液、4ml冰醋酸與12ml水混合。 將樣品供試液加入上述試劑中，呈紅棕色溶液，加蒸餾水一搖即有沉淀產(chǎn)生，表明含有生物 堿類化合物。
[0102] (2)碘-碘化鉀(Wagner)法
[0103] 碘lg與碘化鉀10g溶于50ml水，加2ml乙酸，加水至100ml。取上述試劑適量，加入 lml樣品供試液即顯棕褐色，表明含有生物堿類化合物。
[0104] (3)娃媽酸（Bertrand)法
[0105] 5g硅鎢酸溶于100ml水中，加濃鹽酸少量調(diào)至pH=2左右。取上述試劑適量，加入 lml樣品供試液即顯棕褐色，表明含有生物堿類化合物。
[0106] 4、香豆素類成分的檢識(shí)
[0107] (1)異羥肟酸鐵反應(yīng)
[0108] ① a.鹽酸羥胺20g溶于50ml水，用乙醇稀釋至200ml，冷處保存;b.氫氧化鉀50g溶 于少許水中，加500ml乙醇。②氯化鐵(FeC13 · 6H20)10g溶于20ml 36%鹽酸溶液中，加乙醚 200ml搖勻，置密閉容器內(nèi)保存。使用時(shí)將試液① a.與① b.按1:2混合，濾去沉淀，濾液放冰 箱保存。用玻璃棒蘸取樣品供試液涂于濾紙上，先噴ab混合試液，稍干，再噴試液②，即顯紅 色，表明含有香豆素類化合物。
[0109] (2)重氮化試劑反應(yīng)
[0?10] ①對(duì)硝基苯胺0.35g，溶于濃鹽酸5ml中，加水至50ml;②亞硝酸鈉5g，加水50ml。取 ①、②液等量在冰水浴中混合后使用。取少量樣品供試液滴加重氮化試劑，即顯橙紅色，表 明含有香豆素類化合物。
[0111](二)成分定量分析
[0112] 1、取馬甲子莖葉乙酸乙酯提取物0. lg，三份，加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，加乙酸乙酯至刻 度，再?gòu)闹芯芪?ml溶液加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，揮干溶劑后，加入5 %香草醛-冰醋酸 0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙酯稀釋至刻度，置70 °C恒溫水浴中加熱15min，冷卻 至室溫，并轉(zhuǎn)移至l〇ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度， 計(jì)算供試品溶液中總?cè)坪?含三萜以美洲茶酸計(jì)）。經(jīng)計(jì)算lg馬甲子提取物中三萜類成 分含418mg。
[0113] 2、取馬甲子葉鮮品粉碎品0.1 g，三份，加入10m 1容量瓶?jī)?nèi)，加乙酸乙酯適量，超聲 提取30分鐘，冷卻后定容至刻度，再?gòu)闹芯芪?ml溶液加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，揮干溶劑后， 加入5 %香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙酯稀釋至刻度，置70°C恒溫 水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，在 540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算供試品溶液中總?cè)坪?含三萜以美洲茶酸計(jì)）。經(jīng)計(jì)算lg 馬甲子提取物中三萜類成分含46mg。
[0114] 3、取馬甲子莖葉干品粉碎品0.1 g，三份，加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，加乙酸乙酯適量，超 聲提取30分鐘，冷卻后定容至刻度，再?gòu)闹芯芪?ml溶液加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，揮干溶劑 后，加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙酯稀釋至刻度，置70°C恒 溫水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，在 540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算供試品溶液中總?cè)坪?含三萜以美洲茶酸計(jì)）。經(jīng)計(jì)算lg 馬甲子提取物中三萜類成分含85mg。
[0115] 4、取馬甲子全株乙醇提取物O.lg，三份，加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，加乙酸乙酯適量，超 聲提取30分鐘，冷卻后定容至刻度，再?gòu)闹芯芪?ml溶液加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，揮干溶劑 后，加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙酯稀釋至刻度，置70°C恒 溫水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，在 540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算供試品溶液中總?cè)坪?含三萜以美洲茶酸計(jì)）。經(jīng)計(jì)算lg 馬甲子提取物中三萜類成分含132mg。
[0116] 5、取馬甲子全株水提取物O.lg，三份，加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，加乙酸乙酯適量，超聲 提取30分鐘，冷卻后定容至刻度，再?gòu)闹芯芪?ml溶液加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，揮干溶劑后， 加入5 %香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙酯稀釋至刻度，置70°C恒溫 水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，在 540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算供試品溶液中總?cè)坪?含三萜以美洲茶酸計(jì)）。經(jīng)計(jì)算lg 馬甲子提取物中三萜類成分含22mg。
[0117]三、馬甲子制劑的制備 [0118] 1.乳膏劑的制備
[0119]取馬甲子莖葉乙酸乙酯提取物，加入適宜輔料，如：十八醇、單硬脂酸甘油脂、甘 油、硬脂酸等制成乳膏劑。
[0120]稱取115g十八醇、115g白凡士林、70g單硬脂酸甘油酯，加熱融化，得到油相，加入 40g馬甲子乙酸乙酯提取物；另取100g甘油、15g十二烷基硫酸鈉、O.Olg鹽酸半胱氨酸，加入 650ml水溶解，得到水相;分別加熱至75°C~80°C，攪拌下將水相緩緩加入油相，然后繼續(xù)攪 拌15分鐘，得到馬甲子乙酸乙酯提取物乳膏劑。
[0121] 2.馬甲子乙醇提取物凝膠劑的制備
[0122] 取10g卡波姆撒入420ml純化水中，攪拌使溶脹，加入100ml丙二醇攪拌溶解，攪拌 下滴加18g三乙醇胺，制成凝膠基質(zhì)；另取100g馬甲子乙醇提取物與2g羥苯乙酯溶解于 350ml乙醇中，攪拌下加入凝膠基質(zhì)中，攪勻即得。
[0123] 3.馬甲子乙醇提取物涂膜劑的制備
[0124] 取40g聚乙烯醇124溶脹于400ml純化水中；另取100g馬甲子乙醇提取物溶于400ml 乙醇中，再加入l〇〇ml甘油，攪拌均勻后緩緩加入聚乙烯醇溶液中，攪勻后過(guò)濾，再自濾器上 加乙醇至l〇〇〇ml，即得。
[0125] 4.馬甲子石油醚提取物搽劑的制備
[0126] 取100g馬甲子石油醚提取物細(xì)粉置于研缽中，加入500ml花生油研勻，再緩緩加入 飽和氫氧化鈣水溶液至l〇〇〇ml，研磨至均勻白色乳狀物即得。
[0127] 5.馬甲子水提取物洗劑的制備
[0128] 取100g馬甲子水提取物細(xì)粉置于研缽中，加入50ml甘油和適量純化水，研磨成糊 狀，逐漸加入純化水至全量混勻即得。
[0129] 6.馬甲子乙醇提取物軟膏劑的制備
[0130]取馬甲子乙醇提取物，粉碎成極細(xì)粉，加至經(jīng)滅菌、濾過(guò)后放冷的液體石蠟20g中， 攪勻，再加至已干熱滅菌、濾過(guò)并冷至約50°C的凡士林900g和羊毛脂50g中，攪勻，使凝固， 制成1000g，即得。
[0131] 7.馬甲子糊劑的制備
[0132] 取羊毛脂250g、白凡士林250g置水浴加溫融化并放置保持溫度在60°C左右備用； 將300g馬甲子粉碎品加入上述基質(zhì)中，不斷攪拌使其混勻，再加入已過(guò)篩的淀粉125g及氧 化鋅細(xì)粉125g攪拌形成糊狀放冷，即得。
[0133] 8.巴布劑的制備
[0134] 以聚丙烯酸鈉200g、明膠150g、聚乙烯醇250g為粘著劑，溶于蒸餾水100ml中，加熱 攪拌至完全溶解靜置待用。將馬甲子乙醇提取物30g、甘油350g、氧化鋅20g混合后一起加入 到粘著劑中，加熱攪拌l〇min后靜置脫氣，待氣泡趕凈后均勻涂布于200mmX 25mm的無(wú)紡布 基材上，靜置至凝膠化，即得。
[0135] 四、馬甲子提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性燒燙傷的影響
[0136] 1.試驗(yàn)方法
[0137] SD大鼠120只，SPF，雄性，180-220g，四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。背部 脫毛后以烏拉坦麻醉，取110只將直徑3cm的圓筒置于背部，筒內(nèi)噴入蒸氣lmin造成燙傷。次 日根據(jù)燙傷情況將動(dòng)物分層隨機(jī)均分為11組，分別為模型對(duì)照組、馬甲子乙酸乙酯提取物 大劑量組、馬甲子乙酸乙酯提取物小劑量組、馬甲子乙醇提取物大劑量組、馬甲子乙醇提取 物小劑量組、馬甲子水提物組、馬甲子石油醚提取物組、馬甲子鮮品粉碎品組、馬甲子干品 粉碎品組、金黃散對(duì)照組、莫匹羅星對(duì)照組。其余10只動(dòng)物為空白對(duì)照組。上述提取物均以 鮮品提取，劑量按鮮品量計(jì)算，濃度相當(dāng)于lg鮮品/ml，下同。
[0138] 動(dòng)物全部單籠飼養(yǎng)，次日開(kāi)始給予受試物lml/只（鮮品及干品粉碎組按lg鮮品/只 涂抹)或?qū)φ账幬?金黃散按lg生藥/只涂抹;莫匹羅星軟膏，20mg原藥/g膏，按lg膏/只涂 抹），每日1次，其中一半連續(xù)9日，另一半連續(xù)19日。分別于第10日及20日測(cè)量燙傷潰瘍面直 徑，隨后處死動(dòng)物，取燙傷潰瘍面固定、切片，部分進(jìn)行HE染色，觀察組織病理改變。
[0139] 2.試驗(yàn)結(jié)果
[0140] 第9日處死動(dòng)物的HE染色病理組織觀察顯示:模型對(duì)照組可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、 出血及組織壞死；馬甲子乙酸乙酯及乙醇提取物大劑量組、水提物組和鮮品粉碎品組有炎 性細(xì)胞浸潤(rùn)和出血，但未見(jiàn)組織壞死，二組間無(wú)明顯差異;小劑量組、石油醚提取物組、金黃 散組及莫匹羅星組相似，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及出血，部分病例有組織壞死。
[0141] 第20日處死動(dòng)物的HE染色病理組織觀察顯示:模型對(duì)照組仍可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸 潤(rùn)及出血；馬甲子乙酸乙酯及乙醇提取物大劑量組、水提物組和鮮品粉碎品組仍有少量炎 性細(xì)胞浸潤(rùn)，但已可見(jiàn)毛細(xì)血管增生，二組間無(wú)明顯差異；小劑量組、金黃散組及莫匹羅星 組相似，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
[0142] 表面?zhèn)谇闆r評(píng)分如表1所示，評(píng)分以10分制，分?jǐn)?shù)越高，傷口損傷程度越高。
[0143] 表1馬甲子及提取物對(duì)燒燙傷傷口愈合的影響(I±s,n = 10)
[0144]
[0145] 注：與模型對(duì)照組比較，*Ρ<0·05，#Ρ<0·01;與金黃散比較，a P<0.05，aa P< 0.01
[0146] 3 ·試驗(yàn)結(jié)論
[0147] 采用蒸汽燙傷可復(fù)制燒燙傷大鼠模型，模型動(dòng)物創(chuàng)面愈合緩慢，鏡下可見(jiàn)大量炎 性細(xì)胞浸潤(rùn)及出血、組織壞死。馬甲子鮮品、干品及各種提取物均可有效抑制炎性反應(yīng)，減 少組織壞死，促進(jìn)組織新生，并表現(xiàn)為創(chuàng)面較快愈合。在同等生藥劑量下，其促進(jìn)潰瘍面愈 合的效果優(yōu)于中醫(yī)首選的治療藥物金黃散。該結(jié)果提示，在等同生藥劑量下，馬甲子對(duì)燒燙 傷的治療效果優(yōu)于金黃散，具有良好的臨床前景。
[0148] 五、抗炎作用
[0149] 1.試驗(yàn)方法
[0150] KM小鼠100只，按體重分層隨機(jī)均分為10組，分別為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(醋酸 可的松軟膏）、乙酸乙酯提取物小劑量組、乙酸乙酯提取物大劑量組、乙醇提取物小劑量組、 乙醇提取物大劑量組、馬甲子石油醚提取物組、馬甲子水提物組、馬甲子鮮品粉碎品組、馬 甲子干品粉碎品組。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，動(dòng)物稱重，于小鼠右耳兩面仔細(xì)涂抹受試物（提取物按 0.05ml/只涂抹，鮮品或干品按O.lg鮮品/只涂抹)或?qū)φ瘴?醋酸可的松軟膏，10mg原藥/g 膏，O.lg膏/只），或溶劑。藥后40min，擦除藥物，于小鼠右耳兩面仔細(xì)涂抹二甲苯(30ul)，造 型20min以后處死小鼠，沿小鼠耳廓基沿剪取左右兩耳，稱重，計(jì)算腫脹度(兩耳差值）。
[0151] 2.試驗(yàn)結(jié)果
[0152] 結(jié)果如表2。馬甲子提取物各組對(duì)二甲苯刺激所致耳腫脹均有明顯抑制作用，且大 劑量組優(yōu)于小劑量組，乙酸乙酯提取物大劑量組效果與醋酸可的松相近。
[0153] 表2馬甲子及提取物對(duì)小鼠二甲苯所致耳腫脹的影響(n = 10，i±s)
[0154]
[0155] 與模型對(duì)照組比較，*Ρ<0·05，#Ρ<0·01
[0156] 3.試驗(yàn)結(jié)論
[0157] 結(jié)果如表2所示：馬甲子干、鮮品及各種提取物對(duì)直接化學(xué)刺激所致炎癥有明確的 抗炎作用。
[0158] 六、抗菌作用
[0159] 采用四種標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行試驗(yàn):金色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌。實(shí) 驗(yàn)細(xì)菌的濃度為105~106CFU/ml。以乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和水提取物為受試物，以 甲硝唑?yàn)殛?yáng)性對(duì)照，用TSB(Tryptic Soy Broth)稀釋受試物，使成二倍遞減的系列提取物 濃度。在96孔微量U形板上，每孔加稀釋后的受試物和實(shí)驗(yàn)菌液各50μ1，在微型震蕩器上震 蕩混勻后培養(yǎng)48h測(cè)定MIC值，結(jié)果見(jiàn)表3。
[0160] 表3馬甲子提取物對(duì)常見(jiàn)細(xì)菌的抑制作用
[0162]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:本發(fā)明組合物具有較好的抑菌效果，表明其有助于對(duì)抗燒燙傷后的細(xì) 菌感染。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 馬甲子或其提取物在制備治療燒燙傷的藥物中的用途。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于:所述馬甲子采用馬甲子全株植物或其中任 一部位的鮮品或干品； 優(yōu)選的，所述部位為根、莖、葉、花、果任一部位或其混合； 最優(yōu)選的，所述部位為葉。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于： 所述馬甲子為鮮品或干品的粉碎品或提取物，粉碎品以馬甲子全株植物或其中任一部 位鮮品或干品為原料藥，采用粉碎機(jī)或其他器械粉碎制得;提取物以馬甲子全株植物或其 中任一部位鮮品或干品為原料藥，采用常規(guī)提取方法制備而得。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于： 所述馬甲子的粉碎品的制備方法如下： A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 以粉碎機(jī)或其他器械粉碎，過(guò)篩，即得； 所述馬甲子的提取物的制備方法包括以下至少四種方法： 所述馬甲子的提取物的制備方法一： A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 粉碎，過(guò)篩； C、 以水或有機(jī)溶劑提取、干燥、即得； 所述馬甲子的提取物的制備方法二： A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 粉碎，過(guò)篩； C、 以溶劑a提取，濾液濃縮，得濃縮液； D、 以溶劑b萃取步驟C所得濃縮液，得萃取液，干燥，即得； 或，干燥步驟C所得濃縮液得提取物1，以溶劑b固-液萃取，干燥，即得； 所述馬甲子的提取物的制備方法三： A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 以水或有機(jī)溶劑提取、干燥、即得； 所述馬甲子的提取物的制備方法四 A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 以溶劑a提取，濾液濃縮，得濃縮液； C、 以溶劑b萃取步驟B所得濃縮液，得萃取液，干燥，即得； 或，干燥步驟B所得濃縮液得提取物1，以溶劑b固-液萃取，干燥，即得。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的馬甲子提取物的制備方法，其特征在于:滿足以下任意一項(xiàng)： 所述馬甲子的粉碎品的制備方法和馬甲子的提取物的制備方法一和制備方法二中，步 驟B所述粉碎包括粉碎機(jī)或其他器械粉碎； 所述馬甲子的提取物的制備方法一和制備方法二中的步驟C，以及所述馬甲子的提取 物的制備方法三和制備方法四中的步驟B，所述提取方法采用浸漬、回流、滲漉或其他常規(guī) 方法提取； 所述馬甲子的提取物的制備方法一的步驟C、馬甲子的提取物的制備方法二的步驟D、 馬甲子的提取物的制備方法三的步驟B、馬甲子的提取物的制備方法四的步驟C所述干燥方 法采用減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥或微波等常規(guī)干燥方法； 所述馬甲子的提取物的制備方法一的步驟C，以及馬甲子的提取物的制備方法三的步 驟B所述的有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇;優(yōu)選乙醇;所述馬甲子的提取物的制備方 法二的步驟C，以及馬甲子的提取物的制備方法四的步驟B所述溶劑a包括水和有機(jī)溶劑;所 述的有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇;所述的有機(jī)溶劑優(yōu)選乙醇； 所述馬甲子的提取物的制備方法二的步驟D以及馬甲子的提取物的制備方法四的步驟 C所述溶劑b包括乙酸乙酯、石油醚或正丁醇，優(yōu)選乙酸乙酯； 所述馬甲子的提取物的制備方法一的步驟C，以及馬甲子的提取物的制備方法三的步 驟B所使用的溶劑與馬甲子的用量關(guān)系為，溶劑添加量為馬甲子質(zhì)量的1-40倍； 優(yōu)選的，溶劑添加量為馬甲子質(zhì)量的2-20倍； 進(jìn)一步優(yōu)選的，溶劑添加量為馬甲子質(zhì)量的4-12倍； 優(yōu)選的，溶劑采用乙醇時(shí)，乙醇添加量為馬甲子質(zhì)量的2-20倍； 所述馬甲子的提取物的制備方法二的步驟C，以及馬甲子的提取物的制備方法四的步 驟B所使用的溶劑a與馬甲子的用量關(guān)系為，溶劑a添加量為馬甲子質(zhì)量的1-40倍； 優(yōu)選的，溶劑a添加量為馬甲子質(zhì)量的2-20倍； 進(jìn)一步優(yōu)選的，溶劑a添加量為馬甲子質(zhì)量的4-12倍； 溶劑a為乙醇時(shí)，所述乙醇的濃度為10-95 % ; 優(yōu)選的，采用乙醇濃度為40-95 % ; 最優(yōu)選的，采用乙醇濃度為60-95 %。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于：以馬甲子全株植物或其中任一部 位的鮮品/干品的粉碎品或提取物為原料，加入藥劑學(xué)可接受的輔料按常規(guī)方法制備而得 的外用制劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于：所述外用制劑包括軟膏劑、乳膏劑、凝膠 劑、涂膜劑、搽劑、洗劑、噴霧劑、混懸劑、溶液劑、乳劑、糊劑或巴布劑。
【文檔編號(hào)】A61P17/02GK105832840SQ201610345538
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年5月23日
【發(fā)明人】徐超群, 李東曉, 張毅, 詹雁, 譚鐳, 阮佳
【申請(qǐng)人】四川省中醫(yī)藥科學(xué)院