專(zhuān)利名稱(chēng)：一種超臨界流體萃取紅麻種子的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種超臨界流體萃取紅麻種子的方法。
背景技術(shù)：
紅麻(Hibiscus cannabinus L.)是一種兩年生的短日照草本植物，因莖部有韌皮 纖維而被栽植。屬于錦葵科，因其在經(jīng)濟(jì)上和園藝上的重要性而著稱(chēng)。在印度，孟加拉國(guó)， 泰國(guó)，非洲的部分地區(qū)，歐洲東南部的小范圍有悠久的種植歷史。紅麻樹(shù)在非洲種植時(shí)間超 過(guò)了 4000年，在當(dāng)?shù)厣鐣?huì)，其不同部位可用作食品，動(dòng)物飼料，手工藝品制作和燃料。其中 有幾個(gè)品種在許多國(guó)家生長(zhǎng)得很普遍。當(dāng)前，主要種植區(qū)遍布中國(guó)，印度和許多其他國(guó)家， 包括澳大利亞的麥凱；美國(guó)的得克薩斯州(種子農(nóng)場(chǎng))和墨西哥的塔毛利帕斯州。在馬來(lái)西亞，紅麻由于在纖維板，生物復(fù)合材料和高蛋白動(dòng)物飼料制造方面有廣 泛的應(yīng)用而日益受到制造商的重視。馬來(lái)西亞政府正嘗試把紅麻培養(yǎng)為國(guó)內(nèi)第四個(gè)經(jīng)濟(jì)作 物，以取代煙草種植和實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)多樣化。在2000年年初馬來(lái)西亞開(kāi)始對(duì)紅麻生產(chǎn)進(jìn)行研 究，第一批紅麻種子生產(chǎn)是在沙登區(qū)，雪蘭莪州內(nèi)進(jìn)行的。然而，在馬來(lái)西亞紅麻種植仍處 于試驗(yàn)階段，在工業(yè)上還沒(méi)有實(shí)現(xiàn)最優(yōu)化利用。舉例來(lái)說(shuō)，在收獲或加工紅麻的時(shí)候，含有 相當(dāng)可觀的可能具有保健價(jià)值的油量的紅麻種子被作為廢物處理。外形上，紅麻種子相對(duì)較小(6毫米長(zhǎng)X4毫米寬)，顏色為板巖黑，形狀上為銳角 三角形。紅麻品種的種子生產(chǎn)量從36，000到40，000種子數(shù)/公斤。紅麻種子的產(chǎn)量高度 依賴(lài)種子的品種和種子的種植地。當(dāng)前在馬來(lái)西亞，種子產(chǎn)量只有大約700kg/公頃。如果 種子收益能持續(xù)達(dá)到1500公斤/公頃，基于20%的油萃取率，紅麻可能是一種能獲利的油 料作物。紅麻種子油成分與棉籽油非常相似，除了棉籽油里有棉酚存在(一種有毒的酚的 色素)。紅麻種子油(通過(guò)索氏萃取法萃取)中不飽和脂肪酸含量高(76. 0% -81. 5%), 其中亞油酸(C18:2)作為主要脂肪酸(45. 9% )。此外，紅麻種子油中磷脂和植物甾醇含量也 很高(含量分別是6.0%和0.9%)。由于紅麻種子油的含量相當(dāng)多且成分獨(dú)特，在現(xiàn)有技 術(shù)中已建議將紅麻種子油作為供人們消費(fèi)的食用油的經(jīng)濟(jì)的選擇。但是，使用像正己烷或石油醚的有機(jī)溶劑萃取油，令其使用的安全性經(jīng)常遭到懷 疑。因此，在這種情況下超臨界二氧化碳流體萃取(SFE)看起來(lái)是很好的解決方案。SFE在 萃取中優(yōu)選了無(wú)毒，無(wú)爆炸，環(huán)境友好，有成本效益的，省時(shí)的和選擇性可調(diào)的溶劑(超臨 界二氧化碳流體)。此外，它能使油的萃取在低溫下進(jìn)行，并在萃取的最后階段把溶劑徹底 除去。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明提供了 一種超臨界流體萃取(SFE)萃取紅麻種子 (Hibiscuscannabinus L.)油的方法，其中SFE方法采用了超臨界流體，并在壓力范圍200 到600巴，溫度范圍40°C到80°C的條件下實(shí)施。
3
本發(fā)明由幾種新的特征和這些特征的結(jié)合組成，在下文的說(shuō)明書(shū)和附圖中將得到 完整地描述和闡述。應(yīng)當(dāng)理解的是，在不脫離本發(fā)明范圍或犧牲本發(fā)明任何優(yōu)點(diǎn)的前提下， 可以在細(xì)節(jié)上作出各種變化。


下面給的細(xì)節(jié)描述和相應(yīng)的附圖將幫助充分理解本發(fā)明，附圖只是為了闡述本發(fā) 明，因而不是對(duì)本發(fā)明作出的限制，其中圖1顯示了在不同SFE萃取參數(shù)下，紅麻種子油的產(chǎn)率；圖2顯示了通過(guò)DPPH清除活性，紅麻種子油和商業(yè)食用油的IC5tl值；圖3顯示了通過(guò)BCB測(cè)定，紅麻種子油和商業(yè)食用油抗氧化活性。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種超臨界流體萃取紅麻種子的方法。以下根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施 例，說(shuō)明書(shū)將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述。然而，應(yīng)當(dāng)理解的是，對(duì)優(yōu)選實(shí)施例的限制性描述僅僅是 為了方便本發(fā)明的討論，并且，可以預(yù)見(jiàn)到的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不脫離所附權(quán)利要 求的前提下設(shè)計(jì)出各種修改和等價(jià)替換。實(shí)施例1紅麻種子(Qui Ping 3)的萃取a.準(zhǔn)備干燥的紅麻種子紅麻種子(品種Qui Ping 3)被清洗后，放在50°C的烤箱(FD115，F(xiàn)isher Scientific，拉夫堡，萊斯特郡，英國(guó))里干燥到恒定的重量。干燥后，緊接著將紅麻種子保 存在4°C下直至萃取前。b.超臨界二氧化碳流體萃取(SFE)用超臨界二氧化碳萃取儀(TharlOOOF，Thar技術(shù)公司，匹茲堡，賓夕法尼亞，美 國(guó))在9種不同的萃取參數(shù)下(壓力(巴)/溫度(°C ) 600/40 ；600/60 ；600/80 ；400/40 ； 400/60 ；400/80 ；200/40 ；200/60 ；200/80)萃取紅麻種子。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，100克的紅麻種子用 韋林?jǐn)嚢铏C(jī)攪拌一分鐘后放到1升萃取容器內(nèi)。把萃取容器緊固密封后，設(shè)定所需的萃取 溫度。在萃取容器內(nèi)的壓力是由一個(gè)持續(xù)的二氧化碳流量(25克/分鐘)所建立的，且通過(guò) 自動(dòng)回壓調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)。在到達(dá)預(yù)期的溫度和壓力后SFE萃取開(kāi)始。整個(gè)萃取過(guò)程歷時(shí)150 分鐘，每間隔30分鐘測(cè)定油的產(chǎn)量。萃取完成后，萃取容器減壓，從收集容器中收集油。從 萃取中獲得的油的總量是通過(guò)區(qū)間產(chǎn)量累加計(jì)算出的。c.索氏萃取法50克紅麻種子用韋林?jǐn)嚢铏C(jī)攪拌一分鐘后，平分到2個(gè)萃取套管內(nèi)。然后每個(gè)套 管被轉(zhuǎn)移到一個(gè)索氏萃取器里(Witeg-Labortechnik GmbH，維特海姆，德國(guó))。每個(gè)燒瓶里 加入大約300毫升正己烷(Fisher Scientific，拉夫堡，萊斯特郡，英國(guó))，燒瓶連接有萃 取器和冷凝器。萃取啟動(dòng)后，手動(dòng)調(diào)節(jié)溶劑流速到7分鐘/循環(huán)。最后，分別在20個(gè)循環(huán) (快速索氏萃取，S0X/S)和100個(gè)循環(huán)(經(jīng)典索氏萃取，S0X/L)后萃取過(guò)程終止。萃取完 成后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器R210，BUChi，POStfaCh，弗拉維爾，瑞士)在50°C減小的 壓力下去除正己烷。蒸發(fā)后，緊接著將該燒瓶放入干燥箱里放置一小時(shí)。分別計(jì)算獲得的油的重量和產(chǎn)率。d.傳統(tǒng)的超聲波輔助溶劑萃取(SONIC)25克紅麻種子研磨后，用300ml正己烷(Fisher Scientif ic，萊斯特郡，英國(guó))在 13500 轉(zhuǎn)速 / 分鐘勻漿 3 分鐘(Ultra-turax T25basic, IKA -WERKEGmbH & Co. KG，施陶 芬，德國(guó))。然后，混合物經(jīng)過(guò)在超聲波浴(Powersonic 505，HwaShin Technology Co.，首 爾，韓國(guó))超聲處理(高頻率設(shè)置)90分鐘后，混合物通過(guò)濾紙(Whatman No. 1)過(guò)濾，殘 渣按照同樣的程序重新萃取。最后，收集濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器R210，Buchi, Postfach，弗拉維爾，瑞士)進(jìn)行蒸發(fā)。燒瓶在干燥箱里冷卻一個(gè)小時(shí)后計(jì)算出油的產(chǎn)率。圖1顯示了在9個(gè)不同的SFE萃取參數(shù)下紅麻種子油的產(chǎn)率。在一般情況下， 在SFE萃取150分鐘，消耗了 3. 75千克的二氧化碳后，紅麻種子油的產(chǎn)率從2. 12%到 20. 18%。顯然，隨著萃取壓力上升，紅麻種子油的產(chǎn)率按照下面的順序依次提高600/80 彡 600/60 彡 600/40 彡 400/80 彡 400/40 彡 400/60 > 200/40 > 200/60 彡 200/80 (P < 0. 05)。 除了油產(chǎn)率的增加，還發(fā)現(xiàn)萃取壓力的上升能加速萃取進(jìn)程。根據(jù)圖1顯示的萃取趨勢(shì)，在600巴下萃取60至90分鐘后萃取達(dá)到“平穩(wěn)期”，而 在400巴下只在萃取90到120分鐘時(shí)候觀察到“平穩(wěn)期”，在200巴下觀察不到“平穩(wěn)期”， 而是發(fā)現(xiàn)每隔30分鐘油的產(chǎn)率呈現(xiàn)顯著的，持續(xù)的升高直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。在這項(xiàng)研究中，如 果SFE萃取是在高、中級(jí)萃取壓力(600巴和400巴)(P > 0. 05)下進(jìn)行，萃取溫度不是影 響油產(chǎn)量的非常關(guān)鍵的因素，然而，在低的萃取壓力下(200巴)萃取溫度的提高顯著降低 了油的產(chǎn)率(P<0. 05)。對(duì)于溶劑萃取，SOX/L,S0X/S 和 SONIC 產(chǎn)率分別為 24. 81 % ±0. 32,22. 40 % 士0. 72 和 21. 08% 士0. 001。溶劑萃取中 S0X/L 的產(chǎn)量高于 S0X/S 和 S0NIC(P < 0. 05)。這 表明，熱處理相對(duì)于勻漿處理后的超聲處理能更有效的幫助萃取紅麻種子油，另外，延長(zhǎng)索 氏萃取時(shí)間也能增加油的獲取產(chǎn)率。在本研究中從溶劑萃取中獲得的紅麻種子油的含量在 紅麻種子油產(chǎn)率范圍內(nèi)是較低的(21. 64%到26.4% )。與SFE萃取相比，S0X/L的產(chǎn)油率(24. 81% )比在各種參數(shù)下的SFE萃取產(chǎn)油率 (2. 12%至20. 18%)要高。然而，盡管S0X/L的產(chǎn)油率上升了很小的比例，但它完成整個(gè)萃 取過(guò)程要超過(guò)12個(gè)小時(shí)，而SFE只用150分鐘，因此不經(jīng)濟(jì)。沒(méi)有觀察到在600巴S0X/S 和SONIC之間萃取紅麻種子油的產(chǎn)率有明顯區(qū)別(P > 0. 05)。這表明，在高壓下的SFE萃 取可能成為一個(gè)優(yōu)選的萃取紅麻種子油的方法，由于它具有不含溶劑，節(jié)省時(shí)間(相對(duì)于 S0X/L)和環(huán)境友好的特點(diǎn)。實(shí)施例2紅麻種子油相對(duì)于7種商業(yè)食用油的抗氧化活性a. DPPH自由基清除活性根據(jù)Ramadan，Kroh和Morsel (2003)描述的方法進(jìn)行了微小調(diào)整，測(cè)量紅麻種子 油和商業(yè)可食用油(棕櫚油，(FFM Berhad, Sungai Buloh，雪蘭莪，馬來(lái)西亞)，毛佐洛玉 米油，毛佐洛大豆豆油，毛佐洛菜籽油，毛佐洛葵花籽油(ACH食品公司，科爾多瓦，田納西 州，美國(guó))，米糠油(AmornchaiCo. Ltd.，Bangrak，曼谷，泰國(guó))，純橄欖油(80%精煉橄欖油 和20%輕榨優(yōu)質(zhì)橄欖油)(Basso Fedele e figli s. r. 1.，圣米凱萊迪塞里諾，意大利)) 的抗自由基清除活性。α "生育酚(Sigma-Aldrich Co.，圣路易斯，密蘇里州，美國(guó))被用作這次測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)脂溶性抗氧化劑。簡(jiǎn)言之，0. 1毫升不同濃度樣品的甲苯的溶液再添加 0. 39毫升新鮮甲苯DPPH溶液(0. ImM) (Sigma-AldrichCo.，圣路易斯，密蘇里州，美國(guó))。然 后，用力搖勻混合物，在黑暗中放置60分鐘。最后，使用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(Pharmaspec uv-1700，島津，京都，日本)用純的甲苯(空白)作為對(duì)照測(cè)出該混合物在515nm處的光吸 收值。從下面公式里推測(cè)出紅麻種子油和商業(yè)食用油的抗自由基活性%抑制率=([A對(duì)照-A樣品]/A對(duì)照)χ100其中Ase =對(duì)照組的吸光光度值(包括了除了樣品以外所有的試劑)Atis =試驗(yàn)組化合物的吸光光度值樣品的50%抑制濃度值(IC5tl)用mg/ml表示，且通過(guò)線性回歸分析插值法進(jìn)行計(jì) 算。試驗(yàn)中IC5tl被定義為抑制50%的DPPH自由基時(shí)油的濃度。b. β -胡蘿卜素漂白(BCB)測(cè)試對(duì)紅麻種子油和商業(yè)食用油的β胡蘿卜素漂白(BCB)測(cè)試方法是根據(jù)Kumazawa 等人(2002年)描述的方法確定的。在這個(gè)測(cè)試?yán)铴?生育酚是作為標(biāo)準(zhǔn)的脂溶性抗氧化 劑使用的。簡(jiǎn)言之，3ml β -胡蘿卜素溶液(100μ g/ml的氯仿)(Sigma-Aldrich Co.，圣路 易斯，密蘇里州，美國(guó))被加到40mg亞油酸(Sigma-Aldrich Co.，圣路易斯，密蘇里州，美 國(guó))和400mg吐溫20 (FisherScientif ic，拉夫堡，萊斯特郡，英國(guó))中。然后，混合好混合 物，在氮?dú)饬髦懈稍铩ｋS即，100毫升的蒸餾水被加入到干的混合物中，形成β-胡蘿卜素/ 亞油酸乳狀液。1.5ml乳狀液與20 μ 1的甲醇(對(duì)照組)或濃度為5mg/ml甲醇的樣品混 合。在此之后，樣品在50°C水浴中溫浴1小時(shí)。最后，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(Pharmaspec uv-1700，島津，京都，日本)，以蒸餾水(空白)為對(duì)照測(cè)量樣品在470nm處的吸光光度值。用這個(gè)公式計(jì)算樣品的抗氧化活性百分比(％ AA)%AA= 100(DR 對(duì)照-DR 樣品)/DR 對(duì)照其中，DR =降解率；(a/b) /60a =溫浴前樣品在470nm處的吸光光度值b =溫浴后樣品在470nm處的吸光光度值DR對(duì)照=對(duì)照樣品的降解率DR#p =測(cè)試樣品的降解率本研究中紅麻種子油和商業(yè)食用油的抗氧化活性用mg α-生育酚當(dāng)量(Teq)/g 油樣品表示。紅麻種子油和商業(yè)可食用油的DPPH清除活性的IC5tl值在圖2中被呈現(xiàn)。通常來(lái) 說(shuō)，紅麻種子油IC5tl值范圍從12. 27mg/ml到39. 80mg/ml，而商業(yè)食用油范圍是從20. 59mg/ ml到70. 43mg/ml。相比較所有的測(cè)試樣品，紅麻油在200/80條件下的超臨界萃取顯示出最 高的抗自由基活性(P < 0. 05)。相比較之下，橄欖油的抗自由基活性最弱(P < 0. 05)。結(jié)果 證明在10個(gè)測(cè)試的植物油中橄欖油的DPPH抗自由基活性最弱。棕櫚仁油和米糠油被發(fā)現(xiàn) 是植物油樣品中抗自由基的活性最強(qiáng)的樣品(P < 0. 05)，可能是由于不飽和脂肪酸的含量 和抗氧化劑的含量，(如生育酚，生育三烯酸和Y-谷維素)。抑制DPPH自由基的油的效力
6順序?yàn)榧t麻200/80 >棕櫚 >米糠油 > 紅麻200/60 >紅麻200/40 >紅麻400/60 >紅 麻400/40 >紅麻S0X/S >大豆>菜籽>葵花籽>玉米>紅麻600/60 >紅麻600/80彡 紅麻=SONIC彡紅麻600/40彡紅麻400/80彡紅麻:S0X/L >橄欖(P < 0. 05)。在400巴 以上壓力超臨界萃取的紅麻種子油具有與溶劑萃取的紅麻種子油和絕大多數(shù)除了棕櫚油， 米糠油和橄欖油(P >0.05)以外的商業(yè)食用油相似的抗自由基活性。然而，這些商用食用 油在制作過(guò)程中被加了像ΒΗΑ,ΒΗΤ和TBHQ這樣的合成的抗氧化劑。因此，和這些商用的食 用油相比，紅麻種子油可能有更好的抗自由基活性，可作為功能性的食用油。圖3顯示了通過(guò)BCB測(cè)試的紅麻種子油和商業(yè)食用油的抗氧化活性。樣品的 抗氧化活性通過(guò)插值α -生育酚標(biāo)準(zhǔn)曲線(y = 9841. 8X-3. 1626 ；r2 = 0. 9801)計(jì)算出， 并用mgTeq/g油表達(dá)。一般來(lái)說(shuō)，研究的樣品的抗氧化活性的范圍從0. 15mgTeq/g油到 1. 85mgTeq/g油。與DPPH試驗(yàn)矛盾，在BCB測(cè)試中萃取溫度似乎是決定SFE萃取的紅麻種 子油的抗氧化活性的關(guān)鍵因素。萃取溫度升高到80°C，萃取壓力為400巴和600巴時(shí)，樣品 的抗氧化活性大幅下降(P < 0. 05)。紅麻種子油在200巴壓力下，樣品的抗氧化活性隨著 溫度上升而緩慢降低(P <0.05)。解釋這個(gè)結(jié)果可能的原因是在高的壓力和溫度下萃取 的紅麻種子油可能含有易受熱分解的抗氧化性成分。由于這個(gè)原因，這些樣本可能在無(wú)熱 量的DPPH測(cè)試中表現(xiàn)出良好的抗氧化活性，但在BCB測(cè)試中有矛盾的結(jié)果。此外，相對(duì)于 DPPH基，高溫萃取的紅麻種子油對(duì)亞油?；?linolyradicals)(例如過(guò)氧自由基和烷基自 由基)的抗氧化性較低，這也是解釋該情況的一個(gè)可能的原因，因?yàn)镈PPH的清除活性在很 大程度上取決于抗氧化劑對(duì)于自由基反應(yīng)位點(diǎn)的硬脂?？杉靶?stearic accecibility) (Prior，Wu和Schaich 2005)。然而，根據(jù)Lim和Quah (2007)，由于不同的反應(yīng)系統(tǒng)，BCB的 測(cè)試結(jié)果不能與DPPH自由基清除檢測(cè)結(jié)果相關(guān)聯(lián)。在BCB的檢測(cè)中，棕櫚油和橄欖油分別代表7種被測(cè)試的商業(yè)食用油樣品中具有 最強(qiáng)和最弱的抗氧化活性的樣品(P <0.05)。與商業(yè)食用油相比較，幾乎所有的紅麻種子 油樣品(除了紅麻400/80和600/80)具有更高的抗氧化活性，盡管絕大多數(shù)商業(yè)食用油 中添加有合成的抗氧化劑(P < 0. 05)。絕大多數(shù)的通過(guò)SFE萃取(除了 200/60 ；200/80 ； 400/80和600/80)和溶劑萃取的紅麻種子油的抗氧化活性沒(méi)有顯著的差別(P < 0. 05)。這 表明SFE能替代有機(jī)溶劑萃取紅麻種子油，其萃取的油相對(duì)于商業(yè)食用油對(duì)熱誘導(dǎo)的亞油 酸過(guò)氧化反應(yīng)有強(qiáng)的抗氧化活性。實(shí)施例3V36紅麻種子油的萃取和抗氧化活性評(píng)估a.準(zhǔn)備干燥的紅麻種子紅麻種子(品種V36)被清洗后，放在40°C的烤箱(FD115，F(xiàn)isherScientific，拉 夫堡，萊斯特郡，英國(guó))里干燥到恒定的重量。干燥后，緊接著將紅麻種子在4°C保存直至萃 取。b.超臨界二氧化碳流體萃取根據(jù)實(shí)施例1 (b)描述的方法，用超臨界二氧化碳萃取儀(TharlOOOF， TharTechnologies, Inc.，匹茲堡，賓夕法尼亞，美國(guó))，在最優(yōu)選的萃取參數(shù)(壓力(巴)/ 溫度(V) :600/40和600/60)萃取紅麻種子油，在萃取150分鐘后計(jì)算出獲得的油的總量。c.傳統(tǒng)的超聲波輔助溶劑萃取(SONIC)
7
根據(jù)實(shí)施例1 (d)描述的方法溶劑萃取V36紅麻種子。d.總酚含量測(cè)定根據(jù)Ramadan等人(2003年)描述的方法凈化紅麻種子油。簡(jiǎn)單說(shuō)，2g樣品溶解 在正己烷(5毫升)里，并在渦旋器中一個(gè)玻璃試管里與10毫升甲醇-水(80 20, ν/ν) 混勻2分鐘，經(jīng)過(guò)10分鐘3000rpm離心后，用巴斯德吸管把水醇提取物從脂質(zhì)相中分離。然 后，收集水醇提取物，在50°C減壓濃縮，直至形成漿狀(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器R210，Buchi，Postfach, 弗拉維爾，瑞士)。水醇提取物被重新溶解在乙腈(15ml)里，混合物用正己烷洗3次(每 次15ml)。在50°C下乙腈純化組分被減壓濃縮(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器R210，Buchi, postfach，弗拉 維爾，瑞士)，然后被溶解在甲醇里用來(lái)測(cè)定總酚含量。根據(jù)Singh等人(2002年)的方法測(cè)定紅麻種子油中的總酚含量。整IOOmg 萃取物被溶解在IOml的甲醇里。半毫升試樣量分別被加入2. 5毫升福林一喬卡梯奧試 劑(Sigma-Aldrich Chemie Co.，布克斯，瑞士 )里，后混入 2ml 的 7. 5% 碳酸鈉(Sigma Aldrich Co.，圣路易斯，密蘇里州，美國(guó))。混合物被混勻，并在40°C下溫浴30分鐘。在 760nm處測(cè)量樣品的吸光光度值(Pharmaspec uv 1700，島津，京都，日本)。樣品中總酚含 量通過(guò)沒(méi)食子酸(Sigma-Aldrich Chemie Co.，布克斯，瑞士)的標(biāo)準(zhǔn)曲線被測(cè)定，并用mg 沒(méi)食子酸當(dāng)量/g樣品(GAE/g樣品)表示。e. DPPH自由基清除活性DPPH自由基清除活性測(cè)試是根據(jù)Ramadan等人(2003)描述的方法進(jìn)行了細(xì)微的 調(diào)整而進(jìn)行的。簡(jiǎn)言之，0.39ml 0. ImM的DPPH(Sigma-AldrichC0.，圣路易斯，密蘇里州，美 國(guó))乙醇溶液與0.1ml不同濃度的樣品萃取物在室溫下反應(yīng)。用力搖晃混合物，并在黑暗 中放置60分鐘。電子自旋共振(ESR) (JEOL FA100,Jeol Ltd，東京，日本)條件如下調(diào)制 頻率IOOKHz ；中心磁場(chǎng)(center field) :336· 734mT士5 ；掃描時(shí)間1分鐘；功率:8mff ；調(diào) 制幅度(mod width) 0. 2mT ；持續(xù)時(shí)間=0. 15秒；振幅160?？箟难?Sigma-Aldrich Chemie Co.，Steinheim，德國(guó))和α-生育酚(Sigma-Aldrich Co.，圣路易斯，密蘇里州，美 國(guó))作為這個(gè)測(cè)試標(biāo)樣。紅麻種子油的DPPH清除活性用mg α -生育酚當(dāng)量/g樣品(毫 克Teq/g樣品)和mg抗壞血酸當(dāng)量/g樣品(mg AAeq/g樣品)表示。f.羥基清除活性測(cè)試采用電子自旋共振(JEOL FA100, Jeol Ltd，東京，日本)在石英扁平池中進(jìn)行羥 基清除活性測(cè)試。反應(yīng)在混合了 40ul DMP0(Labotec Ltd.，東京，日本)(400mM), 37. 5ul FeSO4(BDH Chemicals Ltd.，普爾，英國(guó))(0. 4mM)，112. 5ul EDTA(Sigma-Aldrich, Inc.， 圣路易斯，密蘇里州，美國(guó))(0. ImM)，60ul樣品(在不同的濃度)和150ulH202 (Bendosen LaboratoryChemicals，Bendosen，挪威)(2mM)后大約2分鐘時(shí)反應(yīng)開(kāi)始，ESR的條件是中 心磁場(chǎng)336. 45mT士5 ；功率:8mff ；調(diào)制幅度0. ImT ；掃描時(shí)間2分；持續(xù)時(shí)間0. 1秒；振 幅160 ；調(diào)制頻率100kHz。紅麻的羥基清除活性用g DMSO (Fisher Scientific，拉夫堡， 萊斯特郡，英國(guó))當(dāng)量/g樣品(gDMSOE/g樣品)(Thomsen et al. ,2000)表示。 表1顯示了 V36紅麻種子油總酚含量，DPPH清除活性和羥基清除活性。V36紅麻種 子油的產(chǎn)率，總酚含量，DPPH清除活性和羥基清除活性的范圍分別從13. 05%到16. 60%, 0. 008 到 0. 017mg GAE/g 樣品，0. 481 到 0. 594mgTeq/g 樣品和 0. 395 到 0. 484mg AAeq/ g樣品，以及1. 448到3. 349DMS0E/g樣品。正己烷萃取的產(chǎn)率要高于兩種超臨界萃取(P < 0. 05)。在等壓條件下(600巴)萃取溫度從40°C升高到60°C，V36紅麻種子油的產(chǎn)率能 略有提高(P < 0. 05)。這個(gè)結(jié)果與SFE萃取Quiping 3紅麻種子的結(jié)果一致(實(shí)施例Ie)。然而，結(jié)果也 表明V36紅麻種子相比Qui Ping 3有更低的油量。正己烷萃取，SFE600/40，SFE600/60萃 取V36紅麻種子的油產(chǎn)率分別比Quiping 3的產(chǎn)率低21. 3%，35. 3%和31. 4%。正己烷萃 取相對(duì)于SFE萃取提高了 V36紅麻種子酚的含量和羥基清除活性(P < 0. 05)。除此之外，這些結(jié)果也表明，在等壓條件(600巴)下如果SFE的萃取溫度從40°C 升高到60°C，總酚含量及抗氧化活性(DPPH和羥基的清除活性)沒(méi)有顯著變化(P > 0. 05)， 這一結(jié)果與Quiping 3紅麻種子油的DPPH清除活性(實(shí)施例2c)結(jié)果一致。在DPPH清除 活性測(cè)試中樣品之間沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著的區(qū)別(P > 0. 05)。
權(quán)利要求
一種萃取紅麻種子油的超臨界流體萃取(SFE)方法，其中SFE方法利用了一種超臨界流體，并在200到600巴壓力范圍，40℃到80℃溫度范圍實(shí)施。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SFE方法，其中超臨界流體是超臨界二氧化碳。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的SFE方法，其中二氧化碳消耗范圍為0.025到3. 75kg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SFE的方法，其中紅麻種子的種類(lèi)是QuiPing 3和V36。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SFE方法，其中在溫度為40°C并且壓力為600巴時(shí)，油的產(chǎn) 率為 20. 18%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SFE方法，其中在溫度為60°C并且壓力為600巴時(shí)，油的產(chǎn) 率為 20. 85%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SFE方法，其中在溫度為80°C并且壓力為600巴時(shí)，油的產(chǎn) 率為 21. 29%。
8.權(quán)利要求1所述的SFE方法與溶劑萃取比較，其中所用的溶劑是正己烷。
9.權(quán)利要求9所述的SFE與溶劑萃取的比較，其中SFE方法的優(yōu)點(diǎn)是在于沒(méi)有溶劑的 條件下萃取紅麻種子油。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中每克紅麻種子油的抗氧化活性等同于0.4到 2mga-生育酚。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中在200巴萃取的紅麻種子油比在400和600巴 萃取的紅麻種子油有更高的抗自由基活性。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中SFE紅麻種子油的抗自由基活性比溶劑萃取的 紅麻種子油高2到3倍。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用來(lái)萃取紅麻種子油的超臨界流體萃取(SFE)方法，其中，SFE方法利用了一種超臨界流體，并在200到600巴壓力范圍，40℃到80℃溫度實(shí)施。
文檔編號(hào)C11B1/10GK101896589SQ200980101373
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2009年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月4日
發(fā)明者斯提·艾斯亞·格哈法, 瑪茲納·伊斯梅爾, 陳奇?zhèn)?申請(qǐng)人:馬來(lái)西亞博特拉大學(xué)