絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供參與提高皮膚的保濕功能的、新的促進(jìn)絲聚蛋白基因表達(dá)的物質(zhì)。發(fā)現(xiàn)絲聚蛋白基因以約24小時(shí)周期的節(jié)律性而表達(dá)增減，添加候選物質(zhì)后，在表達(dá)變成最大的時(shí)間篩選候選物質(zhì)，將花椒提取物、3-(1’-哌啶)-丙酸、天竺葵油、柏木油、玫瑰油、白松香油、胡椒油、羅勒油、鄰甲基苯甲酸甲酯、鄰氨基苯甲酸甲酯、鄰甲氨基苯甲酸甲酯確定為絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。
【專利說(shuō)明】絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化妝品和皮膚外用劑，更具體而言，涉及參與提高皮膚的保濕功能的 絲聚蛋白基因的表達(dá)促進(jìn)劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 皮膚的角質(zhì)層覆蓋生物體并進(jìn)行水分的保持、和/或?qū)Ξ愇锶肭值姆烙?。角質(zhì)層 由表皮角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生的角蛋白（keratin)、絲聚蛋白（filaggrin)等蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等各 種各樣的物質(zhì)構(gòu)成。絲聚蛋白在將角蛋白纖維束成層狀而制作被稱為角蛋白模型的結(jié)構(gòu)的 過(guò)程中承擔(dān)重要的作用，從由絲聚蛋白基因（FLG)編碼的前體物質(zhì)絲聚蛋白原，伴隨角化 而產(chǎn)生絲聚蛋白，使角蛋白纖維凝聚。進(jìn)一步地，絲聚蛋白在角質(zhì)上層被分解而形成被稱為 天然保濕因子的低分子肽和/或氨基酸，參與保濕和/或紫外線吸收。
[0003] 這樣，絲聚蛋白深入地參與皮膚角質(zhì)層的保濕、屏障功能，絲聚蛋白產(chǎn)生的降低與 尋常性魚(yú)鱗病、特應(yīng)性皮炎、老年性干皮癥等干燥性皮膚疾病的發(fā)病相關(guān)（非專利文獻(xiàn)1)。 要維持健康美麗的肌膚狀態(tài)，必須使絲聚蛋白適當(dāng)?shù)禺a(chǎn)生，并使角化以適當(dāng)?shù)闹芷诶^續(xù)。
[0004] 出于這樣的背景，關(guān)于促進(jìn)絲聚蛋白合成的物質(zhì)進(jìn)行了研宄，到目前為止，作為具 有絲聚蛋白合成促進(jìn)效果的物質(zhì)，已知野生百里香提取物、丁香提取物、鼠尾草提取物等植 物提取物等（專利文獻(xiàn)1)。另外，也已知某些細(xì)菌為了調(diào)節(jié)滲透壓而蓄積的ECTOINE抑制 由干燥導(dǎo)致的絲聚蛋白降低（專利文獻(xiàn)2)。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0006] 專利文獻(xiàn)
[0007] 專利文獻(xiàn)1:日本特許第4768238號(hào)公報(bào)
[0008] 專利文獻(xiàn)2:日本特許第4540872號(hào)公報(bào) [0009] 非專利文獻(xiàn)
[0010] 非專利文獻(xiàn) I :Morar N. et. al. Filaggrin mutations in children with severe atopic dermatitis. Journal of Investigative Dermatology，127, 1667-1672, 2007
[0011] 非專利文獻(xiàn) 2:Akashi，M.，et al. Noninvasive method for assessing the humaneircadian clock using hair follicle cells.Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 107(35), 15643-15648, 2010.


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 發(fā)明要解決的課題
[0013] 如上所述，消費(fèi)者對(duì)于具有更高的絲聚蛋白合成促進(jìn)效果的物質(zhì)的要求強(qiáng)烈，要 求開(kāi)發(fā)新的絲聚蛋白合成促進(jìn)劑。因此，本發(fā)明的課題在于提供新的促進(jìn)絲聚蛋白基因的 表達(dá)的物質(zhì)。
[0014] 用于解決課題的方法
[0015] 本
【發(fā)明者】們關(guān)于絲聚蛋白基因的表達(dá)進(jìn)行了深入研宄，驚人地首次發(fā)現(xiàn)，絲聚蛋 白基因以約24小時(shí)周期的節(jié)律性而表達(dá)增減。因此發(fā)現(xiàn)，為了像現(xiàn)有技術(shù)中進(jìn)行的那樣， 促進(jìn)絲聚蛋白產(chǎn)生而維持健康正常的皮膚狀態(tài)，重要的是不僅要單純地提高絲聚蛋白產(chǎn) 生、和/或抑制由干燥導(dǎo)致的絲聚蛋白產(chǎn)生降低，而且要考慮節(jié)律性地促進(jìn)絲聚蛋白產(chǎn)生。 于是，考慮節(jié)律性而對(duì)于候選物質(zhì)關(guān)于絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)作用進(jìn)行了篩選，結(jié)果發(fā)明 了本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。
[0016] 作為具有絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)效果的藥劑，由本
【發(fā)明者】們篩選出花椒提取物、 3_(1' -哌啶）_丙酸、天竺葵油、柏木油、玫瑰油、白松香油、胡椒油、羅勒油、鄰甲基苯甲酸 甲酯、鄰氨基苯甲酸甲酯和鄰甲氨基苯甲酸甲酯。
[0017] 因此，本發(fā)明涉及絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，包含選自花椒提取物、3_(1' -哌 啶）_丙酸、天竺葵油、柏木油、玫瑰油、白松香油、胡椒油、羅勒油、鄰甲基苯甲酸甲醋、鄰氨 基苯甲酸甲酯和鄰甲氨基苯甲酸甲酯中的一種以上。
[0018] 本發(fā)明的另一方式中，本發(fā)明涉及促進(jìn)絲聚蛋白基因表達(dá)的方法，包括對(duì)需要促 進(jìn)絲聚蛋白基因表達(dá)的對(duì)象施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，所述絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑 選自花椒提取物、3_(1' -哌啶）_丙酸、天竺葵油、柏木油、玫瑰油、白松香油、胡椒油、羅勒 油、鄰甲基苯甲酸甲酯、鄰氨基苯甲酸甲酯和鄰甲氨基苯甲酸甲酯中的一種以上。
[0019] 本發(fā)明的另一方式中，本發(fā)明也涉及選自花椒提取物、3-(Γ -哌啶）-丙酸、天竺 葵油、柏木油、玫瑰油、白松香油、胡椒油、羅勒油、鄰甲基苯甲酸甲醋、鄰氨基苯甲酸甲酯和 鄰甲氨基苯甲酸甲酯中的一種以上用于制造絲聚蛋白基因的表達(dá)促進(jìn)劑的用途。
[0020] 并且，基于絲聚蛋白基因以約24小時(shí)周期的節(jié)律性而表達(dá)增減的間接，本發(fā)明還 涉及絲聚蛋白基因的表達(dá)促進(jìn)方法或美容方法，按照使絲聚蛋白基因表達(dá)量的生物體節(jié) 律、與通過(guò)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律同步的時(shí)間 安排，來(lái)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。并且，本發(fā)明也涉及一種絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn) 劑，其特征在于，以如下方式使用：按照使絲聚蛋白基因表達(dá)量的生物體節(jié)律、與通過(guò)施與 絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律同步的時(shí)間安排，來(lái)施與該 絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑；和/或一種絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，其特征在于，以如下方式 使用：對(duì)絲聚蛋白基因表達(dá)量的生物體節(jié)律紊亂的對(duì)象，通過(guò)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn) 劑，從而按照使絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律恢復(fù)的時(shí)間安排，來(lái)施與該絲聚蛋白基因表達(dá) 促進(jìn)劑。
[0021] 發(fā)明的效果
[0022] 本發(fā)明所涉及的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑具有以下列舉的效果：
[0023] 促進(jìn)絲聚蛋白基因的表達(dá)；
[0024] 增強(qiáng)皮膚屏障功能；以及
[0025] 保濕
[0026] 之中至少一個(gè)以上的效果。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0027] 圖1是顯示在添加了皮質(zhì)醇的培養(yǎng)基中暫時(shí)培養(yǎng)而得的培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞中絲 聚蛋白基因表達(dá)以24小時(shí)的節(jié)律而增減的圖。
[0028] 圖2是顯示在添加了皮質(zhì)醇的培養(yǎng)基中暫時(shí)培養(yǎng)而得的培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞中，絲 聚蛋白基因、以及時(shí)鐘基因 BMLl和PER3的表達(dá)以24小時(shí)的節(jié)律而增減的圖。
[0029] 圖3是顯示關(guān)于候選藥劑的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)作用的結(jié)果的圖。
[0030] 圖4是顯示關(guān)于使用3-(Γ-哌啶）-丙酸、花椒提取物、以及他們的組合作為候選 藥劑的情況下的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)作用的結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0031] 本發(fā)明涉及絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，包含選自花椒提取物、3_(1' -哌啶）_丙 酸、天竺葵油、柏木油、玫瑰油、白松香油、胡椒油、羅勒油、鄰甲基苯甲酸甲酯、鄰氨基苯甲 酸甲酯和鄰甲氨基苯甲酸甲酯中一種以上。作為絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，可以將上述列 舉出的物質(zhì)單獨(dú)使用，也可以組合使用。更優(yōu)選選擇花椒提取物作為本發(fā)明的絲聚蛋白基 因表達(dá)促進(jìn)劑。進(jìn)一步更優(yōu)選選擇花椒提取物與3-(Γ-哌啶）-丙酸的組合作為絲聚蛋白 基因表達(dá)促進(jìn)劑。
[0032] 另一方式中，本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑可以進(jìn)一步包含已知的其他具有 絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)效果的藥劑，例如野生百里香提取物、丁香提取物、鼠尾草提取物或 ECTOINE。
[0033] 本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑能夠通過(guò)促進(jìn)絲聚蛋白基因的表達(dá)來(lái)促進(jìn)絲 聚蛋白的合成。如果更詳細(xì)地記載，則通過(guò)絲聚蛋白基因的表達(dá)，絲聚蛋白原的合成被促 進(jìn)，絲聚蛋白原受到磷酸化，然后在角化時(shí)經(jīng)過(guò)去磷酸化以及由肽?；彼崦搧啺访复?化的水解，從而合成絲聚蛋白。因此，絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑也有時(shí)稱為絲聚蛋白原基因 表達(dá)促進(jìn)劑，也可以是介由促進(jìn)絲聚蛋白基因表達(dá)而促進(jìn)絲聚蛋白的合成的絲聚蛋白合成 促進(jìn)劑。
[0034] 本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑能夠促進(jìn)絲聚蛋白合成，進(jìn)一步引起作為絲聚 蛋白分解而產(chǎn)生的天然保濕因子（NMF)的主成分的氨基酸的增加。因此，本發(fā)明的絲聚蛋 白基因表達(dá)促進(jìn)劑可以是天然保濕因子增強(qiáng)劑或保濕劑，并且由于增強(qiáng)天然保濕因子而也 可以是皮膚屏障功能增強(qiáng)劑，能夠配合在化妝品中。進(jìn)而，通過(guò)本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá) 促進(jìn)劑和/或絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)方法，能夠治療干燥肌膚，以及干燥性的肌膚疾病、例 如老年性干皮癥、特應(yīng)性皮炎、尋常性魚(yú)鱗病等皮膚疾病。
[0035] 本發(fā)明的一個(gè)方式中，本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑可以通過(guò)任意途徑施 與，可以通過(guò)口服或非口服（例如，透皮、經(jīng)粘膜、皮下、靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、經(jīng)肺、肌肉內(nèi)）的任 一方式施與。作為口服施與，絲聚蛋白基因促進(jìn)劑可以制劑化成片劑、膠囊劑等而施與，也 可以作為飲料和/或添加物施與。作為透皮施與，可以通過(guò)配合在化妝品或皮膚外用劑中、 涂布于皮膚上而施與。作為經(jīng)肺施與，可以通過(guò)制成溶解有絲聚蛋白基因促進(jìn)劑的溶液的 霧，或者通過(guò)使其氣化吸入來(lái)施與，例如以芳香療法的方式施與。從促進(jìn)表皮細(xì)胞中的絲聚 蛋白基因表達(dá)的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選將絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑透皮施與。
[0036] 本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑不僅可以對(duì)需要促進(jìn)絲聚蛋白基因表達(dá)的對(duì) 象、例如希望保濕和/或增強(qiáng)皮膚屏障功能的對(duì)象施與，還可以對(duì)絲聚蛋白基因表達(dá)量的 生物體節(jié)律紊亂的對(duì)象施與。作為需要促進(jìn)絲聚蛋白基因表達(dá)的對(duì)象，例如可以舉出干燥 肌膚，患有干燥性的肌膚疾病、例如老年性干皮癥、特應(yīng)性皮炎、尋常性魚(yú)鱗病等皮膚疾病 的對(duì)象。
[0037] 本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑是指化妝品、藥品、準(zhǔn)藥品、適用于外皮的制 品，因此，其劑型也可以采取水溶液體系、增溶體系、乳化體系、粉末體系、凝膠體系、軟膏體 系、乳霜、水-油雙層體系、水-油-粉末三層體系等廣泛的形態(tài)。例如作為化妝品，可以在 例如化妝水、霜、乳液、凝膠、美容液、軟膏、面膜、入浴劑、沐浴阜、香波、清洗劑、粉底等中應(yīng) 用。如果是藥品或準(zhǔn)藥品，則可以以各種軟膏、霜等形態(tài)應(yīng)用。
[0038] 在本發(fā)明的化妝品和/或皮膚外用劑中，可以包含能夠在化妝品和/或皮膚外用 劑的制造中通常使用的有效成分和/或賦形劑，例如可以包含水、醇、甘油、透明質(zhì)酸等基 質(zhì)、表面活性劑、保濕劑、增稠劑、pH調(diào)節(jié)劑、紫外線吸收劑、穩(wěn)定劑、抗菌劑、香料等。
[0039] 如圖1所示，在角質(zhì)形成細(xì)胞的培養(yǎng)細(xì)胞體系中，絲聚蛋白基因以約24小時(shí)周期 的節(jié)律而表達(dá)增減，認(rèn)為該節(jié)律相當(dāng)于晝夜節(jié)律。所謂晝夜節(jié)律，特別是指通過(guò)由CLOCK、 BMAL1、CRY、PER等時(shí)鐘蛋白質(zhì)構(gòu)成的反饋回路控制的、約24小時(shí)周期的周期節(jié)律，已知在 生物體中，睡眠/清醒、激素分泌、體溫、細(xì)胞周期等各種生理現(xiàn)象受其影響。
[0040] 認(rèn)為絲聚蛋白基因在體內(nèi)（in vivo)也按照晝夜節(jié)律進(jìn)行表達(dá)增減，因而本發(fā)明 的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑通過(guò)與晝夜節(jié)律相配合地施與、更具體而言通過(guò)以絲聚蛋白表 達(dá)的最大時(shí)期或最小時(shí)期同步的方式施與，可以更有效地促進(jìn)絲聚蛋白合成。
[0041] 本發(fā)明的另一方式中，本發(fā)明也涉及美容方法，按照絲聚蛋白基因表達(dá)量的生物 體節(jié)律、與通過(guò)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律同步的 時(shí)間安排，來(lái)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。在本發(fā)明中，所謂美容方法，不僅是對(duì)個(gè)人進(jìn) 行的方法，也可以在提供與美容相關(guān)的商品時(shí)，作為適合顧客的化妝品的處方提供，可以由 除醫(yī)生以外的化妝品售貨員和/或美容師提供。
[0042] 本發(fā)明的另一方式中，本發(fā)明涉及絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，其特征在于，以如下 方式使用：按照絲聚蛋白基因表達(dá)量的生物體節(jié)律、與通過(guò)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑 而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律同步的時(shí)間安排來(lái)施與。
[0043] 在又另一方式中，本發(fā)明涉及絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)方法，其中，對(duì)需要促進(jìn)絲聚 蛋白基因表達(dá)的對(duì)象，按照絲聚蛋白基因表達(dá)量的生物體節(jié)律、與通過(guò)施與絲聚蛋白基因 表達(dá)促進(jìn)劑而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律同步的時(shí)間安排，來(lái)施與絲聚蛋白基因表 達(dá)促進(jìn)劑。該絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)方法也是干燥肌膚，以及干燥性的肌膚疾病、例如老年 性干皮癥、特應(yīng)性皮炎、尋常性魚(yú)鱗病等皮膚疾病的治療方法。
[0044] 所謂按照同步的時(shí)間安排來(lái)施與，是以絲聚蛋白基因的表達(dá)量在生物體節(jié)律中的 峰值、與通過(guò)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因表達(dá)量的增減的峰值重 疊的方式進(jìn)行施與，是指在例如絲聚蛋白基因表達(dá)量變成最大的16?22小時(shí)、更具體而言 為17?21小時(shí)、進(jìn)一步具體而言為18?20小時(shí)之前，施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。實(shí) 際上對(duì)于人而言，推定絲聚蛋白基因表達(dá)的峰值在上午5時(shí)?11時(shí)左右，更具體而言在上 午6?10時(shí)，進(jìn)一步具體而言在上午7時(shí)?9時(shí)，因此考慮優(yōu)選在例如其16?22小時(shí)、更 具體而言17?21小時(shí)、進(jìn)一步具體而言18?20小時(shí)之前，施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。 考慮優(yōu)選在例如相當(dāng)于16?22小時(shí)之前的"上午7時(shí)?下午1時(shí)左右"?"下午1時(shí)?下 午7時(shí)左右"之間施與。
[0045] 如本發(fā)明中闡明那樣，絲聚蛋白按照生物鐘的節(jié)律而表達(dá)，認(rèn)為如果由于年齡增 加和/或壓力、熬夜和/或生活節(jié)奏的紊亂等一些原因而生物鐘的節(jié)律紊亂，則與其相應(yīng)地 絲聚蛋白的表達(dá)節(jié)律偏離和/或表達(dá)量減少。因此，能夠期待通過(guò)按照適當(dāng)?shù)臅r(shí)間安排來(lái) 施與本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，從而促進(jìn)絲聚蛋白的表達(dá)節(jié)律的恢復(fù)，和/或使 表達(dá)量增加。于是，本發(fā)明的另一方式中，以按照適當(dāng)?shù)臅r(shí)間安排來(lái)施與為特征的本發(fā)明的 絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，也能夠作為絲聚蛋白的表達(dá)節(jié)律的改善或恢復(fù)劑使用。關(guān)于適 當(dāng)?shù)臅r(shí)間安排，例如對(duì)于人來(lái)說(shuō)，估計(jì)絲聚蛋白基因表達(dá)的峰值在上午5時(shí)?11時(shí)左右，更 具體而言在上午6?10時(shí)，進(jìn)一步具體而言在上午7時(shí)?9時(shí)，因此考慮優(yōu)選在其16?22 小時(shí)、更具體而言17?21小時(shí)、進(jìn)一步具體而言18?20小時(shí)之前，施與絲聚蛋白基因表 達(dá)促進(jìn)劑。
[0046] 絲聚蛋白基因具有約24小時(shí)的周期性而增減，因而絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的 篩選中，針對(duì)培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞等培養(yǎng)細(xì)胞，將施與候選藥劑后約〇?10小時(shí)、優(yōu)選2?8 小時(shí)、更優(yōu)選4?6小時(shí)的表達(dá)最小期的絲聚蛋白基因表達(dá)量、與16?22小時(shí)、優(yōu)選17? 21小時(shí)、更優(yōu)選18?20小時(shí)的表達(dá)最大期的絲聚蛋白基因表達(dá)量進(jìn)行比較，由此可以更高 精度地篩選絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。在又另一方式中，可以以表達(dá)最大期的絲聚蛋白基 因表達(dá)量作為指標(biāo)來(lái)篩選絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。在又另一方式中，還可以以第2周期 以后的表達(dá)最大期、例如40?48小時(shí)、64?72小時(shí)等作為指標(biāo)來(lái)篩選絲聚蛋白基因表達(dá) 促進(jìn)劑。
[0047] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的天竺葵油，是來(lái)自香葉 天竺葵（Pelargonium graveolens)等天竺葵屬的全草的精油，例如是將上述天竺葵屬的全 草進(jìn)行水蒸氣蒸餾而得的精油。
[0048] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的柏木油，是來(lái)自意大利 柏木（Cupressus sempervirens)的精油，例如是將柏木的枝葉等進(jìn)行水蒸氣蒸餾而得的精 油。
[0049] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的玫瑰油，是來(lái)自洋薔薇 (Rosa centifolia L)、突厥薔薇（Rosa damascena Mill.)等薔薇屬的花瓣的精油，例如是 將上述薔薇屬的花瓣進(jìn)行水蒸氣蒸餾而得的精油。
[0050] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的白松香油，是來(lái)自從傘 形科的古蓬阿魏（Ferula galbaniflua)以及親緣種的葉和/或芽中滲出的膠狀滲出物的 精油，例如是進(jìn)行水蒸氣蒸餾而得的精油。
[0051] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的胡椒油，是來(lái)自作為屬 于胡椒科的多年生植物的胡椒（Piper nigrum L )的衆(zhòng)果的精油，例如是將衆(zhòng)果進(jìn)行水蒸 氣蒸餾而得的精油。
[0052] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的羅勒油，是來(lái)自作為唇 形科一年生草本植物的羅勒（Ocimum basilicum L.)的地上部全草的精油，例如是將地上 全草進(jìn)行水蒸氣蒸餾而獲得的精油。
[0053] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的花椒提取物，是蕓香科 花椒屬的花椒（Zanthoxylum piperitum)的提取物。本發(fā)明花椒提取物可以通過(guò)常規(guī)方法 得到，例如可以將花椒的葉、莖、根、花、果實(shí)、果皮、果核、全草或它們的混合物與提取溶劑 一同浸漬或加熱回流后，過(guò)濾、濃縮而得到。作為提取溶劑，只要是通常用于提取的溶劑，就 能夠任意使用，例如可以將水、甲醇、乙醇、丙二醇、1，3-丁二醇、甘油等醇類、含水醇類、三 氯甲烷、二氯乙烷、四氯化碳、丙酮、乙酸乙酯、己烷等有機(jī)溶劑等分別單獨(dú)使用或者組合使 用。另外，也可以根據(jù)需要直接使用上述溶劑提取而得的提取液，或者使用將上述提取液濃 縮而得的提取物使用吸附法、例如離子交換樹(shù)脂而除去雜質(zhì)而得的物質(zhì)，或者使用使上述 提取液用吸附在多孔聚合物（例如Amberlite XAD-2)的柱上之后、用甲醇或乙醇溶出并濃 縮而得的物質(zhì)。另外，也可以使用通過(guò)分配法、例如水/乙酸乙酯提取而得的提取物等。從 在直接適用于皮膚的化妝品或藥品、例如皮膚外用劑等中使用的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選使用低刺 激性的溶劑，例如水、1，3-丁二醇、甘油等提取而得的提取物。
[0054] 所謂精油，是植物中包含的對(duì)水不溶?難溶性的有機(jī)化合物的混合物，通常包含 揮發(fā)性的有機(jī)化合物，與原料相應(yīng)地具有芳香性。由于精油是植物中包含對(duì)水不溶?難溶 性的有機(jī)化合物的混合物，因此通常經(jīng)水蒸氣蒸餾而生成。但是，在本發(fā)明中，精油并不是 限于經(jīng)水蒸氣蒸餾而生成的混合物，而是也包含以植物體的一部分為原料用有機(jī)溶劑提取 的、對(duì)水不溶?難溶性的提取物。即，在本發(fā)明中，所謂"精油"，是通過(guò)用作原料的植物（以 及根據(jù)情況有時(shí)是其部位）而特定的有機(jī)化合物的混合物，是指具有本發(fā)明所希望的效 果、即絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)作用的有機(jī)化合物的混合物。
[0055] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的鄰甲基苯甲酸甲酯 (Methyl o-toluate，英語(yǔ)別名 METHYL 2-METHYLBENZOATE)，是分子式為 C9HltlO2、分子量為 150. 17、常溫下為液體的化合物。
[0056] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的鄰氨基苯甲酸甲酯 (Methyl anthranilate，英語(yǔ)別名 METHYL 2-AMIN0BENZ0ATE)，是分子式為 C8H902N、分子量 為151. 17、常溫下為液體的化合物。
[0057] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的鄰甲氨基苯甲酸甲酯 (Methyl N-METHYL ANTHRANILATE，英語(yǔ)別名 2-Methyl AMINO METHYL BENZOATE)是分子式 為C9H11O2N、分子量為165. 20、常溫下為液體的化合物。
[0058] 作為本發(fā)明的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑的有效藥劑之一的3_(1' -哌啶）_丙酸 (3-(1' -piperidine)-propionic acid :1PP)是分子式為 C8H15NO2、分子量為 157. 21、常溫 下為固體的化合物。
[0059] 實(shí)施例
[0060] 實(shí)施例1 :來(lái)自人皮膚的角質(zhì)形成細(xì)朐中的絲聚蛋白基閔表汰的研究
[0061] 將市售的來(lái)自正常成人皮膚的角質(zhì)形成細(xì)胞（Cellntec社）以3X IO3個(gè)/cm 2接 種在培養(yǎng)板上，在上皮細(xì)胞用培養(yǎng)基（CnT-ΒΜ. 1，Cellntec社）中于37°C、5% CO2氣氛下 培養(yǎng)。3天后，換成包含皮質(zhì)醇50ng/mL的培養(yǎng)基，于37°C、5 % CO2下進(jìn)行同步培養(yǎng)。2 小時(shí)后，換成通常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，經(jīng)時(shí)地采取細(xì)胞。利用市售的RNA提取-cDNA合成試 劑盒（FastLane Cell cDNA Kit，Qiagen社）由采取的細(xì)胞提取RNA，制備cDNA。利用該 cDNA通過(guò)定量PCR(QPCR)法測(cè)定絲聚蛋白基因的表達(dá)量。同時(shí)，測(cè)定時(shí)鐘基因 PER3和 BMALl的表達(dá)量，與絲聚蛋白基因的表達(dá)節(jié)律進(jìn)行比較。QPCR法使用市售的QPCR試劑盒 (BrilliantIIIUltra-Fast SYBR Green QPCR Kit，Agilent社）和QPCR測(cè)定裝置（MX-3000P Real-time Quantitative PCR System，Agilent 社）。將作為持家基因的 RPLPO 基因的表 達(dá)量進(jìn)行定量而作為內(nèi)標(biāo)，計(jì)算出相對(duì)于RPLPO的相對(duì)表達(dá)量作為絲聚蛋白基因表達(dá)量。 PCR用引物使用市售的絲聚蛋白、PER3、BMAL1、RPLP0用引物（Perfect Real Time Primer， 夕力Y才社）。表1顯不所使用的引物序列。
[0062] 表1引物序列
[0063]

【權(quán)利要求】
1. 一種絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，包含選自花椒提取物、3-(Γ -哌啶）-丙酸、天竺葵 油、柏木油、玫瑰油、白松香油、胡椒油、羅勒油、鄰甲基苯甲酸甲酯、鄰氨基苯甲酸甲酯和鄰 甲氨基苯甲酸甲酯中的一種以上。
2. -種絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，其特征在于，以如下方式使用：按照使絲聚蛋白基 因表達(dá)量的生物體節(jié)律、與通過(guò)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因表達(dá) 量的節(jié)律同步的時(shí)間安排，來(lái)施與該絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。
3. -種絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，其特征在于，以如下方式使用：對(duì)絲聚蛋白基因表 達(dá)量的生物體節(jié)律紊亂的對(duì)象，通過(guò)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，從而按照使絲聚蛋白 基因表達(dá)量的節(jié)律恢復(fù)的時(shí)間安排，來(lái)施與該絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，其中，所述絲聚蛋白基因表達(dá)促 進(jìn)劑包含花椒提取物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，其中，所述絲聚蛋白基因表達(dá)促 進(jìn)劑包含花椒提取物和3-(Γ -哌啶）-丙酸。
6. -種美容方法，按照絲聚蛋白基因表達(dá)量的生物體節(jié)律、與通過(guò)施與權(quán)利要求1所 述的絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律同步的時(shí)間安排，來(lái)施 與該絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的美容方法，其中，所述絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑包含花椒提 取物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的美容方法，其中，所述絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑包含花椒提 取物和3-(1' -哌啶）-丙酸。
9. 一種促進(jìn)絲聚蛋白基因表達(dá)的方法，包括對(duì)需要促進(jìn)絲聚蛋白基因表達(dá)的對(duì)象施 與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑，所述絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑選自花椒提取物、3-(1' -哌 啶）_丙酸、天竺葵油、柏木油、玫瑰油、白松香油、胡椒油、羅勒油、鄰甲基苯甲酸甲醋、鄰氨 基苯甲酸甲酯和鄰甲氨基苯甲酸甲酯中的一種以上。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，按照使絲聚蛋白基因表達(dá)量的生物體節(jié) 律、與通過(guò)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律同步的時(shí)間 安排，來(lái)施與所述絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象是絲聚蛋白基因表達(dá)量的生物 體節(jié)律紊亂的對(duì)象，按照使絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律恢復(fù)的時(shí)間安排，來(lái)施與所述絲聚 蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑。
12. 選自花椒提取物、3- (Γ -哌啶）-丙酸、天竺葵油、柏木油、玫瑰油、白松香油、胡椒 油、羅勒油、鄰甲基苯甲酸甲酯、鄰氨基苯甲酸甲酯和鄰甲氨基苯甲酸甲酯中的一種以上用 于制造絲聚蛋白基因的表達(dá)促進(jìn)劑的用途。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其中，所述絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑按照使絲聚蛋 白基因表達(dá)量的生物體節(jié)律、與通過(guò)施與絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑而產(chǎn)生的絲聚蛋白基因 表達(dá)量的節(jié)律同步的時(shí)間安排來(lái)施與。
14. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其中，所述絲聚蛋白基因表達(dá)促進(jìn)劑對(duì)絲聚蛋白基 因表達(dá)量的生物體節(jié)律紊亂的對(duì)象，按照使絲聚蛋白基因表達(dá)量的節(jié)律恢復(fù)的時(shí)間安排來(lái) 施與。
【文檔編號(hào)】A61Q13/00GK104519894SQ201380041595
【公開(kāi)日】2015年4月15日 申請(qǐng)日期:2013年3月29日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月10日
【發(fā)明者】合津陽(yáng)子, 土師信一郎 申請(qǐng)人:株式會(huì)社資生堂