專利名稱：一種慶大霉素Cla的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥品原料的制備方法，具體地說是屬于慶大霉素C1a的提取精制方法。
慶大霉素是由絳紅小單孢菌(Micromonospora purpurea NRRL 2953)產(chǎn)生的一族多組分的氨基糖甙類抗生素?！吨腥A人民共和國藥典》2000年版規(guī)定慶大霉素C組分包括C1、C1a、C2a、C2，其中慶大霉素C1a可作為合成抗菌藥物依替米星的前體藥物。慶大霉素C1a最常采用的制備方法是從小諾霉素的發(fā)酵液中分離得到。該方法通常包括有發(fā)酵、過濾、脫色濃縮、樹脂吸附、洗脫、解吸、濃縮、噴霧干燥工序，即將所得的小諾霉素發(fā)酵液經(jīng)過濾得到濾液，濾液再經(jīng)脫色濃縮，所得小諾霉素濃縮液用大孔樹脂吸附，用三種不同比例的乙醇-氨水進(jìn)行洗脫、解析，解析液經(jīng)濃縮、噴霧干燥得慶大霉素C1a。
這種方法存在許多不足之處，例如，生產(chǎn)工藝周期長(480小時/批)；生產(chǎn)工藝復(fù)雜，樹脂吸附后需用混合溶劑經(jīng)過三次洗脫、解析才能得到慶大霉素C1a；混合洗脫劑和解析劑中的乙醇采用蒸餾塔回收，設(shè)備復(fù)雜，需耗費大量蒸汽；所用大孔樹脂吸附量小；產(chǎn)品含量低(一般為85％-90％)；原材料消耗大，生產(chǎn)成本高。
本發(fā)明的目的在于提供一種制備慶大霉素C1a的新方法，該方法生產(chǎn)效率高、成本低、產(chǎn)品質(zhì)量好。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的本發(fā)明的制備方法包括以下步驟a、將慶大霉素發(fā)酵液過濾、脫色、濃縮；b、將慶大霉素濃縮液加水稀釋，調(diào)PH值到6.0-7.5，經(jīng)弱酸性陽離子交換樹脂吸附后，水洗；c、將吸附后的飽和樹脂用0.2-0.9M銨鹽溶液洗脫，銨鹽溶液PH值為7.0-9.5，洗脫液納濾回收；d、用1.5-3.5M氨水對洗脫后的飽和樹脂進(jìn)行解析；e、對解析液進(jìn)行濃縮、脫色、噴霧干燥。
其具體方法為將慶大霉素發(fā)酵液過濾、脫色、濃縮制備成慶大霉素濃縮液，其過濾、脫色、濃縮的具體方法與現(xiàn)有技術(shù)中制備慶大霉素時的過濾、脫色、濃縮方法相同；慶大霉素濃縮液用水稀釋，以既可保證上樣速度不至于過慢，又避免了因濃度過高在上樣過程中有結(jié)晶析出，造成樹脂吸附不均。稀釋后的慶大霉素液，調(diào)pH值到6.0-7.5；慶大霉素稀釋液經(jīng)弱酸性陽離子樹脂吸附后，用水洗，除去部分雜質(zhì)。弱酸性陽離子樹脂可選用HD-2弱酸性陽離子交換樹脂(上海華東理工大學(xué)華震科技貿(mào)易有限公司)，也可選用D151、D152、110等弱酸性陽離子交換樹脂(南開大學(xué)化工廠)。但最好選用HD-2弱酸性陽離子交換樹脂。
樹脂吸附的流速可依據(jù)慶大霉素稀釋液的濃度大小來控制，當(dāng)慶大霉素稀釋液濃度高時，選用低流速，反之，選用高流速。這樣既可使樹脂充分吸附慶大霉素單位，又可提高慶大霉素C1a的品質(zhì)。當(dāng)慶大霉素稀釋液的濃度在3-5.5萬單位/毫升時，樹脂吸附的流速可控制在1/80/分-1/150/分。
將吸附后的飽和樹脂用0.2-0.9M銨鹽溶液洗脫。銨鹽溶液PH值為7.0-9.5，當(dāng)銨鹽溶液PH值過低時，可用氨水調(diào)整，當(dāng)銨鹽溶液PH值過高時，可用稀鹽酸調(diào)整。銨鹽濃度優(yōu)選范圍為0.4M-0.7M。銨鹽溶液可選用氯化銨溶液(為市售產(chǎn)品)，也可選用硫酸銨(為市售產(chǎn)品)溶液。但最好選用氯化銨。洗脫液采用納濾處理，納濾處理得到的濃縮液可用于提取慶大霉素，納濾處理得到的透過液可直接套用下批洗脫工序。
對洗脫后的飽和樹脂用1.5-3.5M氨水進(jìn)行解析；氨水優(yōu)選濃度為2.0-3.0M。解析液經(jīng)過濃縮、脫色、噴霧干燥，制成半成品，再經(jīng)檢驗、包裝即為慶大霉素C1a成品。該步驟中的脫色、濃縮、噴霧干燥方法與現(xiàn)有技術(shù)中制備慶大霉素時的方法相同，如解析液可用薄膜濃縮至25萬單位/毫升以上，所得濃縮液用活性炭脫色(按0.5公斤/百億單位加入活性炭)，脫色液噴霧干燥，得慶大霉素C1a。
該方法是按照慶大霉素各組分與樹脂的吸附力不同，先用銨鹽洗脫劑將部分雜質(zhì)及C1、C2a、C2和約50％的C1a組分洗脫下來，樹脂上剩余的C1a組分，用與C1a竟合力較強(qiáng)的氨水將慶大霉素C1a組分解析下來。
本發(fā)明方法的重要創(chuàng)新之處在于采用慶大霉素發(fā)酵液為原料，并將脫色后的慶大霉素濃縮液在進(jìn)行樹脂吸附、洗脫和解析時，所采用的樹脂為弱酸性陽離子交換樹脂，提高了樹脂吸附選擇性；本發(fā)明方法中采用單一銨鹽進(jìn)行洗脫，單一氨水進(jìn)行解析使洗脫解析經(jīng)過一道工序即可完成，大大縮短了提取時間，并使洗脫劑、解析劑的回收更簡單、更容易，同時節(jié)省了大量回收用蒸汽。同時采用納濾回收洗脫液，又可大大降低原材料成本。
本發(fā)明方法可有效提高慶大霉素C1a的品質(zhì)，其產(chǎn)品含量可達(dá)90％以上。其工作效率比現(xiàn)有技術(shù)提高了4倍，降低了原材料及能源的消耗；其方法中的洗脫液經(jīng)過納濾處理后可循環(huán)套用，又大大降低了生產(chǎn)制造成本。
實施例1慶大霉素發(fā)酵液過濾、脫色、濃縮(即過濾后制得濾液，濾液用732強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂(南開大學(xué)化工廠)吸附，用水洗2-3倍體積，然后用稀鹽酸洗10-15倍體積，最后用純水洗至中性，洗掉一些蛋白類雜質(zhì)。按照慶大霉素類似物與慶大霉素竟和力的不同，先用稀氨水解析掉慶大霉素類似物，再用氨水將慶大霉素全部解析下來，解析液經(jīng)過711強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂(南開大學(xué)化工廠)脫色，脫色液經(jīng)薄膜濃縮得，該濃縮液中慶大霉素的總單位為26-30萬單位/毫升)。用純水將濃縮液稀釋成3-5.5萬單位/毫升，調(diào)pH6.0-7.5，稀釋液以1/80/分-1/150/分的吸附流速通過HD-2弱酸性陽離子交換樹脂柱，用純水洗2-3倍體積后，用0.5M的氯化銨進(jìn)行洗脫(先用氨水調(diào)氯化銨溶液pH值為7.5)，洗脫流速為1/80/分-1/150/分，洗40-50倍樹脂體積，用硅膠TLC檢測至樹脂柱上只吸附有慶大霉素C1a，再用1.5M的氨水解析慶大霉素C1a，所得解析液用薄膜濃縮至27萬單位/毫升，向濃縮液中按0.5公斤/百億單位加入活性炭脫色，壓濾，得到脫色液于75℃-80℃噴霧干燥，得慶大霉素C1a(含量為96.4％)。將氯化銨洗脫液進(jìn)行納濾，透過液氯化銨與下批洗脫劑合并使用，濃縮液轉(zhuǎn)入慶大霉素提取工序用于提取慶大霉素。
實施例2慶大霉素發(fā)酵液過濾、脫色、濃縮(具體方法同實施例1)。制備成的慶大霉素濃縮液的總單位為30萬單位/毫升，用純水將濃縮液稀釋成5.5萬單位/毫升，調(diào)pH6.0-7.5，稀釋液以1/150/分的吸附流速通過D152弱酸性陽離子交換樹脂柱，用純化水洗3倍體積后，用0.70M的硫酸銨洗脫(先用氨水調(diào)硫酸銨溶液pH值為9.5)，洗脫流速為1/150/分，洗40-50倍樹脂體積，用硅膠TLC檢測至樹脂柱上只吸附有慶大霉素C1a，再用2M的氨水解析慶大霉素C1a，所得解析液用薄膜濃縮至26萬單位/毫升，向濃縮液中按0.5公斤/百億單位加入活性炭脫色，壓濾，得到脫色液于75℃-80℃噴霧干燥，得慶大霉素C1a(含量95％)。將硫酸銨洗脫液進(jìn)行納濾，透過液硫酸銨與下批洗脫劑合并使用，濃縮液轉(zhuǎn)入慶大霉素提取工序用于提取慶大霉素。
實施例3慶大霉素發(fā)酵液過濾、脫色、濃縮(具體方法同實施例1)。制備成的慶大霉素濃縮液的總單位為30萬/毫升單位，用純化水將濃縮液稀釋成4.5萬單位/毫升，用氨水調(diào)pH6.0-7.5，稀釋液以1/100/分的吸附流速通過110弱酸性陽離子交換樹脂柱，用純水洗2.5倍體積后，換0.6M的硫酸銨洗脫(先用氨水調(diào)硫酸銨溶液pH值為8.5)，洗脫流速為1/100/分，洗40-50倍樹脂體積，用硅膠TLC檢測至樹脂柱上只吸附有慶大霉素C1a，再用3M的氨水解析慶大霉素C1a，所得解析液用薄膜濃縮至28萬單位/毫升以上，向濃縮液中按0.5公斤/百億單位加入活性炭脫色，壓濾，得到脫色液于75℃噴霧干燥，得慶大霉素C1a(含量92％)。將硫酸銨洗脫液進(jìn)行納濾，透過液硫酸銨與下批洗脫劑合并使用，濃縮液轉(zhuǎn)入慶大霉素提取工序用于提取慶大霉素。
權(quán)利要求
1.一種慶大霉素C1a的制備方法，其特征在于它包括以下步驟a、將慶大霉素發(fā)酵液過濾、脫色、濃縮；b、將慶大霉素濃縮液加水稀釋，調(diào)PH值到6.0-7.5，經(jīng)弱酸性陽離子交換，樹脂吸附后，水洗；c、將吸附后的飽和樹脂用0.2-0.9M銨鹽溶液洗脫，銨鹽溶液PH值為7.0-9.5，洗脫液納濾回收；d、用1.5-3.5M氨水對洗脫后的飽和樹脂進(jìn)行解析；e、對解析液進(jìn)行脫色、濃縮、噴霧干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的慶大霉素C1a的制備方法，其特征在于所說的弱酸性陽離子交換樹脂為HD-2弱酸性陽離子交換樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的慶大霉素C1a的制備方法，其特征在于所說的銨鹽為氯化銨。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的慶大霉素C1a的制備方法，其特征在于所說的銨鹽濃度為0.4M-0.7M。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的慶大霉素C1a的制備方法，其特征在于所說的氨水濃度為2.0-3.0M。
全文摘要
本發(fā)明公開一種慶大霉素C1a的制備方法，它包括以下步驟a、將慶大霉素發(fā)酵液過濾、脫色、濃縮；b、將慶大霉素濃縮液加水稀釋，調(diào)pH值到6.0－7.5，經(jīng)弱酸性陽離子交換樹脂吸附后，水洗；c、將吸附后的飽和樹脂用0.2－0.9M銨鹽溶液洗脫，洗脫液納濾回收；d、用1.5－3.5M氨水對洗脫后的飽和樹脂進(jìn)行解析；e、對解析液進(jìn)行濃縮、脫色、噴霧干燥。本發(fā)明可有效提高慶大霉素C1a的品質(zhì)，降低了原材料及能源的消耗。
文檔編號C07H1/00GK1511839SQ0215902
公開日2004年7月14日 申請日期2002年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月27日
發(fā)明者周佩艷, 孫海遠(yuǎn), 段修禮, 成青山, 宋義林, 魯敬肖 申請人:華北制藥集團(tuán)有限責(zé)任公司