專利名稱：苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法。
背景技術(shù)：
近年來，有關(guān)苦瓜的研究正方興未艾，國(guó)內(nèi)外對(duì)于苦瓜的藥用價(jià)值研究已經(jīng)取得了重要的進(jìn)展，初步證實(shí)苦瓜具有降血糖、抗菌、提高免疫力、抗生育、抗腫瘤、抗氧化等功效?？喙隙嗵呛涂喙显磉笆强喙系膬蓚€(gè)主要有效成分?？喙显磉暗奶崛》椒ㄖ饕幸掖继崛》ā⒋冀n法、索氏抽提法、回流熱提取法、熱水提取、微波提取法等。崔恒林等人(崔恒林，徐斌，董英.苦瓜皂甙的提取過程研究.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2004，25(5)372-375)以提取溫度、浸泡時(shí)間、乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和料液比為考察因素，采用單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)對(duì)苦瓜中皂甙進(jìn)行了提取條件優(yōu)化試驗(yàn)，確定最佳提取條件為浸提溫度60℃，浸提時(shí)間6h，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70％及料液比1∶5。高文等人(高文，朱曉韻，劉麗君，陶玉梅.微波技術(shù)在苦瓜甙提取中的應(yīng)用.廣西輕工業(yè)，2004，513-15.)采用平行對(duì)照試驗(yàn)比較了常規(guī)水煮法、60％乙醇提取法、微波提取法在鮮苦瓜中所提取苦瓜皂甙的總量，結(jié)果證明微波提取法明顯優(yōu)于常規(guī)水煮法，即投料物液比為1∶5，微波輸出功率為750W，提取時(shí)間為10min時(shí)為最佳。侶麗紅等人(侶麗紅，趙余慶.苦瓜中降血糖活性成分的提取分離與鑒定.中藥材，2004，27(12)922-923.)對(duì)苦瓜70％乙醇提取物氯仿萃取部分進(jìn)行硅膠柱層析分離純化，獲得3個(gè)化合物，確定它們的結(jié)構(gòu)分別為二十三烷酸、B-谷甾醇、苦瓜苷。
苦瓜多糖的研究比較少。吳笳笛等人(吳笳笛，闞國(guó)仕，陳紅漫等.雙酶水解法提取水溶性苦瓜多糖的研究.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33(1)73-74.)采用水提醇沉法從苦瓜中提取出水溶性多糖，經(jīng)除小分子物質(zhì)、除色素、脫蛋白后，通過DEAE-32柱的進(jìn)一步純化，得到單一組分。對(duì)其進(jìn)行理化性質(zhì)檢測(cè)，證實(shí)其為多糖，并命名為PMCI。繼而在苦瓜水溶性多糖的浸提及脫蛋白過程中分別加入纖維素酶和中性蛋白酶，通過正交實(shí)驗(yàn)確定其最佳水解條件分別為纖維素酶，提取溫度50℃，pH值6.0，酶用量5％；中性蛋白酶，水解時(shí)間48h，pH值7.0，酶用量10％。程霜等人(程霜，崔慶新，王勇.水溶性苦瓜多糖的提取與測(cè)定.鄭州糧食學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，21(2)53-56.)通過沸水提取、醇析、脫蛋白和透析，從鮮苦瓜中分離出多糖粗品，粗品經(jīng)sephadexG-100柱層析純化，得一苦瓜多糖樣品，分子量約8000，并利用薄層色譜和氣相色譜對(duì)該多糖中的成分單糖進(jìn)行了定性和定量分析，結(jié)果表明，苦瓜水溶性多糖是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成的雜多糖。
現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料中都是單一提取苦瓜皂甙或苦瓜多糖，還沒有綜合提取這兩種物質(zhì)的報(bào)道，單一提取苦瓜皂甙或苦瓜多糖資源浪費(fèi)較多并且成本很高另外，大量使用有機(jī)溶劑，產(chǎn)生的廢液廢渣嚴(yán)重污染環(huán)境，且溶劑殘留會(huì)影響產(chǎn)物的質(zhì)量和穩(wěn)定性；同時(shí)，還存在提取溫度高，所需時(shí)間長(zhǎng)的不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種低成本，并且對(duì)環(huán)境污染較小的苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，包括如下步驟(1)將洗凈切碎的鮮苦瓜加入其重量5％～20％的蒸餾水，勻漿，在300w～3000w微波處理10min～60min，過濾；(2)取上清液，過0.1μm～0.2μm的中空纖維膜，壓力為0.05Mpa～0.15Mpa，取透過液，過截留分子量6000的中空纖維膜，壓力為0.05Mpa～0.15Mpa，取濃縮液經(jīng)真空干燥得到苦瓜多糖；取所述過截留分子量6000的中空纖維膜的透過液，上大孔樹脂柱，用60％～80％乙醇洗脫，減壓回收乙醇至無醇味，經(jīng)真空濃縮得苦瓜皂甙。
所述經(jīng)步驟(1)得到的殘?jiān)€可以再加入5％～20％的蒸餾水，勻漿，在300w～3000w微波處理10min～60min，過濾，將濾液與步驟(1)得到的濾液合并后進(jìn)行步驟(2)。
加入蒸餾水的重量最好是鮮苦瓜重量的10％。
所述微波處理的瓦數(shù)為500w，時(shí)間為25min。
取上清液，過中空纖維膜的壓力最好選為0.1Mpa。
所述大孔樹脂柱可以選用各種型號(hào)，例如D101、AB-8、NKA，最好為AB-8型大孔樹脂柱。
本發(fā)明一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，用水作為浸提劑，與以往有機(jī)溶劑浸提相比，可以節(jié)省大量的有機(jī)溶劑，大大降低有機(jī)溶劑對(duì)苦瓜皂甙和苦瓜多糖生理活性的破壞作用，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量，減少對(duì)環(huán)境的污染，同時(shí)，本發(fā)明可同時(shí)提取苦瓜皂甙和苦瓜多糖，可有效利用苦瓜資源，節(jié)約成本。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明實(shí)施例1一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是由包括如下步驟(1)將洗凈切碎的鮮苦瓜加入其重量10％的蒸餾水，組織搗碎勻漿機(jī)勻漿，在500w微波處理25min，4層濾布擠汁過濾；(2)取上清液，過0.1μm的中空纖維膜，壓力為0.1Mpa，用于除去上清液中的大顆粒物質(zhì)，取透過液，過截留分子量6000的中空纖維膜，壓力為0.1Mpa，取濃縮液經(jīng)真空干燥得到苦瓜多糖；取所述過截留分子量6000的中空纖維膜的透過液，上D101型大孔樹脂柱，用80％乙醇洗脫，減壓回收乙醇至無醇味，經(jīng)真空濃縮得苦瓜皂甙。
過截留分子量6000的中空纖維膜是因?yàn)榭喙显磉暗姆肿恿吭?000以下，苦瓜多糖的分子量在6000以上，所以取透過液提取苦瓜皂甙，取濃縮液提取苦瓜多糖。
實(shí)施例2一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是由包括如下步驟(1)將洗凈切碎的鮮苦瓜加入其重量10％的蒸餾水，組織搗碎勻漿機(jī)勻漿，在500w微波處理25min，4層濾布擠汁過濾；過濾后的濾渣再加入10％的蒸餾水，組織搗碎勻漿機(jī)勻漿，在500w微波處理25min，4層濾布擠汁過濾，將濾液合并；(2)取上清液，過0.1μm的中空纖維膜，壓力為0.1Mpa，用于除去上清液中的大顆粒物質(zhì)，取透過液，過截留分子量6000的中空纖維膜，壓力為0.1Mpa，取濃縮液經(jīng)真空干燥得到苦瓜多糖；取所述過截留分子量6000的中空纖維膜的透過液，上AB-8型大孔樹脂柱，用80％乙醇洗脫，減壓回收乙醇至無醇味，經(jīng)真空濃縮得苦瓜皂甙。
實(shí)施例3一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是由包括如下步驟(1)將洗凈切碎的鮮苦瓜加入其重量5％的蒸餾水，勻漿，在300w微波處理60min，板框壓濾機(jī)過濾；(2)取上清液，過0.2μm的中空纖維膜，壓力為0.05Mpa，用于除去上清液中的大顆粒物質(zhì)，取透過液，過截留分子量6000的中空纖維膜，壓力為0.05Mpa，取濃縮液經(jīng)真空干燥得到苦瓜多糖；取所述過截留分子量6000的中空纖維膜的透過液，上AB-8型大孔樹脂柱，用60％乙醇洗脫，減壓回收乙醇至無醇味，經(jīng)真空濃縮得苦瓜皂甙。
實(shí)施例4一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是由包括如下步驟(1)將洗凈切碎的鮮苦瓜加入其重量20％的蒸餾水，組織勻漿器勻漿，在3000w微波處理10min，過濾；過濾后的濾渣再加入20％的蒸餾水，組織勻漿器勻漿，在3000w微波處理10min，過濾，將濾液合并；(2)取上清液，過0.1μm的中空纖維膜，壓力為0.15Mpa，用于除去上清液中的大顆粒物質(zhì)，取透過液，過截留分子量6000的中空纖維膜，壓力為0.15Mpa，取濃縮液經(jīng)真空干燥得到苦瓜多糖；取所述過截留分子量6000的中空纖維膜的透過液，上NKA型大孔樹脂柱，用70％乙醇洗脫，減壓回收乙醇至無醇味，經(jīng)真空濃縮得苦瓜皂甙。
實(shí)施例5一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是由包括如下步驟(1)將洗凈切碎的鮮苦瓜加入其重量15％的蒸餾水，超細(xì)勻漿器勻漿，在2500w微波處理15min，過濾；過濾后的濾渣再加入15％的蒸餾水，勻漿，在2500w微波處理15min，過濾，將濾液合并；(2)取上清液，過0.1μm的中空纖維膜，壓力為0.1Mpa，用于除去上清液中的大顆粒物質(zhì)，取透過液，過截留分子量6000的中空纖維膜，壓力為0.1Mpa，取濃縮液經(jīng)真空干燥得到苦瓜多糖；取所述過截留分子量6000的中空纖維膜的透過液，上D101型大孔樹脂柱，用75％乙醇洗脫，減壓回收乙醇至無醇味，經(jīng)真空濃縮得苦瓜皂甙。
實(shí)施例6苦瓜多糖含量測(cè)定(蒽酮-硫酸法)標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖曲線的制作準(zhǔn)確稱量100mg干燥恒重的分析純D-葡萄糖，加蒸餾水溶解定溶在容量瓶中至1000mL。蒽酮試劑1g溶于20mL乙酸乙酯中，貯于棕色瓶中。取6支試管(10mL以上)，依次加入葡萄糖原液(100μg/mL)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，然后再依次加入蒸餾水2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0mL，在每支試管中加入葸酮試劑0.5mL，再用酸式滴定管加入濃硫酸5mL，搖勻，放置10min，在620nm波長(zhǎng)下比色，以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度作橫坐標(biāo)，以吸光度作縱坐標(biāo)，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
準(zhǔn)確稱取1mg待測(cè)樣品，加蒸餾水溶解稀釋至200μg/mL，取0.1ml此溶液，立即加入蒽酮試劑0.5mL，再用酸式滴定管加入濃硫酸5mL，搖勻，放置10min，在波長(zhǎng)620nm處測(cè)定吸光度。以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算苦瓜多糖的含量。
本發(fā)明的實(shí)施例1得到的苦瓜多糖粗品用葸酮-硫酸法測(cè)得提取率為苦瓜鮮重的3.02％，其中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為31.6％。
苦瓜皂甙的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取苦瓜皂甙粗品1g溶于3ml甲醇，取0.1ml此溶液水浴揮去溶劑，即得供試品溶液。分別精密吸取人參皂甙Rg1對(duì)照品溶液30，60，90，120，150，180μL于具塞試管中，水浴揮去溶劑，加入新配制的5％香草醛—冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，在60℃水浴中加熱15min，流水冷卻，加冰醋酸5ml，搖勻，放置15min至不退色，在波長(zhǎng)468nm處測(cè)定吸光度，甲醇溶液隨行空白對(duì)照，以吸光度為縱坐標(biāo)，人參皂甙取樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣品含量測(cè)定準(zhǔn)確稱取苦瓜皂甙粗品1g溶于3ml甲醇，取0.1ml此溶液水浴揮去溶劑，加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，在60℃水浴中加熱15min，流水冷卻，加冰醋酸5ml，搖勻，放置15min至不褪色，在波長(zhǎng)468nm處測(cè)定吸光度，線性回歸計(jì)算供試品苦瓜皂甙的含量。
本發(fā)明實(shí)施例1提取的苦瓜皂甙通過測(cè)定提取率為苦瓜鮮重的0.116％，其中皂甙的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35.7％。
權(quán)利要求
1.一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是包括如下步驟(1)將洗凈切碎的鮮苦瓜加入其重量5％～20％的蒸餾水，勻漿，在300w～3000w微波處理10～60min，過濾；(2)取上清液，過0.1μm～0.2μm的中空纖維膜，壓力為0.05Mpa～0.15Mpa，取透過液，過截留分子量6000的中空纖維膜，壓力為0.05Mpa～0.15Mpa，取濃縮液經(jīng)真空干燥得到苦瓜多糖；取所述過截留分子量6000的中空纖維膜的透過液，上大孔樹脂柱，用60％～80％乙醇洗脫，減壓回收乙醇至無醇味，經(jīng)真空濃縮得苦瓜皂甙。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是所述經(jīng)步驟(1)得到的殘?jiān)偌尤?％～20％的蒸餾水，勻漿，在300w～3000w微波處理10min～60min，過濾，將濾液與步驟(1)得到的濾液合并。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是所述加入蒸餾水的重量為鮮苦瓜重量的10％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是所述微波處理的瓦數(shù)為500w，時(shí)間為25min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是所述過中空纖維膜的壓力為0.1Mpa。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，其特征是所述大孔樹脂柱為AB-8型大孔樹脂柱。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種苦瓜皂甙和苦瓜多糖的綜合提取方法，包括如下步驟將洗凈切碎的鮮苦瓜加入蒸餾水，勻漿，微波處理，過濾；取上清液，過中空纖維膜，取透過液，過截留分子量6000的中空纖維膜，壓力為0.05Mpa～0.15Mpa，取濃縮液經(jīng)真空干燥得到苦瓜多糖；取所述過截留分子量6000的中空纖維膜的透過液，上大孔樹脂柱，用乙醇洗脫，減壓回收乙醇至無醇味，經(jīng)真空濃縮得苦瓜皂甙，本發(fā)明用水作為浸提劑，與現(xiàn)有技術(shù)相比，可以節(jié)省大量的有機(jī)溶劑，降低有機(jī)溶劑對(duì)苦瓜皂甙和苦瓜多糖生理活性的破壞作用，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量，減少對(duì)環(huán)境的污染，同時(shí)，本發(fā)明可同時(shí)提取苦瓜皂甙和苦瓜多糖，可有效利用苦瓜資源，節(jié)約成本。
文檔編號(hào)C07G3/00GK1709900SQ200510014268
公開日2005年12月21日 申請(qǐng)日期2005年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月30日
發(fā)明者劉金福, 張平平, 韓慧 申請(qǐng)人:天津農(nóng)學(xué)院