一種苦瓜多糖的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于多糖提取【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種苦瓜多糖的提取方法。一種苦瓜多糖的提取方法，包括下述的步驟：將苦瓜清洗干凈并晾干，再粉碎成苦瓜粉，在苦瓜粉中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，在微波條件下酶解，酶解后濃縮并脫色，離心，取上清液濃縮醇沉，再離心，采用乙醇清洗沉淀，冷凍干燥后并粉碎，得苦瓜多糖。采用本發(fā)明的方法從苦瓜中提取多糖，采用酶作用條件溫和，采用各種不同的酶將苦瓜中的脂肪、纖維素酶解，將其中的多糖提取出來，提高了苦瓜的利用率，采用本發(fā)明的方法得到多糖不僅得率高，而且純度也高。
【專利說明】一種苦瓜多糖的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于多糖提取【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種苦瓜多糖的提取方法。
[0002]

【背景技術(shù)】
苦瓜有消暑解熱、明目解毒、舒張血管、抗心率失常、抗癌、增強機體免疫力等作用，苦瓜中的活性成分主要是苦瓜多糖和苦瓜皂苷，苦瓜多糖是一種由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成的雜多糖。苦瓜多糖具有以下的作用:苦瓜多糖及皂苷能通過協(xié)同增加糖貯存、協(xié)同增強抗氧化能力及組織供養(yǎng)能力保護胰島素分泌功能等途徑預(yù)防高血糖；苦瓜多糖能有效的清除自由基、超氧陰離子自由基，體現(xiàn)出顯著的抗氧化性；苦瓜多糖還具有抗腫瘤作用，高中低劑量組均能顯著抑制小鼠腫瘤的生長；苦瓜多糖對某些病原菌有顯著的抑制作用，如金黃色葡萄球菌。
[0003]苦瓜多糖一般通過水溶醇沉法進行提取，提取的工藝流程總體上相差不大。主要的提取方法有常規(guī)法，超聲波提取法，微波萃取法，雙酶水解法等，其目的都是提高浸提效率，獲得更多的苦瓜多糖粗品。
[0004]常規(guī)法主要是使用熱水浸提，浸提的時間、溫度、料水比都與提取的效率有關(guān)，劉金福等利用熱水浸提苦瓜多糖，多糖粗品的提取率為13%左右，多糖含量為38.6% ；
微波萃取技術(shù)是一種新型的萃取技術(shù)，袁媛等采用微波萃取苦瓜多糖，提取率為14.52%，多糖純度為52.3% ；
吳茄笛等將雙酶水解法與常規(guī)法進行了對比，實驗表明雙酶法提取水溶性苦瓜多糖，工藝條件簡單，多糖產(chǎn)率以及含量均有顯著提高，其中與常規(guī)法相比含量提高了 11.5% ；
含多種陽離子的溶液中加入沉淀劑后，數(shù)種離子完全沉淀的方法稱為共沉淀法，在制備單一物質(zhì)時一般采用單相共沉淀法，即沉淀物為單一化合物，如果沉淀物為混合物時，稱為混合物共沉淀法；
近年來超聲波技術(shù)快速發(fā)展其應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、黃酮類等生物活性物質(zhì)的研究已有報道表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點，吳先輝提出用超聲波提取苦瓜多糖，提取率可以達到15.48%，多糖純度為53.76% ;超聲波場的強度由輸出功效和頻率決定，增加超聲波功率可加快水的循環(huán)速度，強化傳質(zhì)，同時使細胞的破碎程度增加，有利于多糖的提取，但功率太大，可能造成多糖分子的降解，破壞多糖的活性。
[0005]上述的幾種方法提取苦瓜多糖，其提取率都不太高，純度也有提升的空間，因此需要針對上述的方法進行改進，設(shè)計一種提取率和純度都較高的苦瓜多糖的提取方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種得率和純度較高的苦瓜多糖的提取方法。
[0007]本發(fā)明苦瓜多糖的提取方法是通過下述的技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
一種苦瓜多糖的提取方法，包括下述的步驟:
將新鮮苦瓜清洗干凈，晾干至其水分含量為1_3%，放入粉碎機中粉碎，將粉碎后的苦瓜過40-80目篩，得苦瓜粉；
將粉碎后的苦瓜粉，加水混勻，苦瓜與水的重量比例為1:6_12，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量為0.2-0.6%，中性蛋白酶的加入量為0.2-0.5%，酶解溫度45°C、pH值6.8-7.2，將上述的原料置于微波提取設(shè)備中提取，微波的功率為400-600W，頻率為800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100_105°C下滅酶5_10min，得酶解液；
將上述的酶解液置于真空濃縮器中濃縮，減壓低溫濃縮至酶解液至原體積的1/3，得苦瓜粗多糖濃縮液；
在苦瓜粗多糖的濃縮液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖濃縮液重量的2-6%，攪拌0.2-0.5h，過濾濾出活性炭；
離心10-20 min，離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm，將上清液與沉淀分別收集；
取上清液過濾去渣，過濾后得到的濾液在60-70°C下濃縮，濃縮至其濃度為60-70%，濃縮液按1:4比例加入95%乙醇沉淀靜置10-20小時、離心10-20 min，離心轉(zhuǎn)速為4500rpm，收集沉淀并用乙醇反復(fù)清洗2-3次，冷凍干燥至水分含量為4_6%后，再在_1_4°C下進行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均為酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
[0008]優(yōu)選的，苦瓜與水的重量比例為1:9 ；
優(yōu)選的，木瓜蛋白酶的用量是0.45% ；
中性蛋白酶的添加量為0.4%。
[0009]優(yōu)選的，一種苦瓜多糖的提取方法，該方法包括下述的步驟:
將新鮮苦瓜清洗干凈，晾干至其水分含量為1_3%，放入粉碎機中粉碎，將粉碎后的苦瓜過40-80目篩，得苦瓜粉；
將粉碎后的苦瓜粉，加水混勻，苦瓜與水的重量比例為1:9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量為0.45%，中性蛋白酶的加入量為0.4%，酶解溫度45°C、pH值7.0，將上述的原料置于微波提取設(shè)備中提取，微波的功率為500W，頻率為800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100°C下滅酶6min，得酶解液；
將上述的酶解液置于真空濃縮器中濃縮，減壓低溫濃縮至酶解液至原體積的1/3，得苦瓜粗多糖濃縮液；
在苦瓜粗多糖的濃縮液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖濃縮液重量的4%，攪拌0.3h,過濾濾出活性炭；
離心15 min ,離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm,將上清液與沉淀分別收集；
取上清液過濾去渣，過濾后得到的濾液在65°C下濃縮，濃縮至其濃度為65%，濃縮液按I:4比例加入95%乙醇沉淀靜置10-20小時、離心15 min，離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反復(fù)清洗2-3次，冷凍干燥至水分含量為5%后，再在-1-4°C下進行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均為酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
[0010]本發(fā)明中采用雙酶酶解與微波相結(jié)合的方法，提高了苦瓜多糖的提取率和純度。
[0011]本發(fā)明的有益效果在于，采用酶作用條件溫和，采用各種不同的酶將苦瓜中的脂肪、纖維素酶解，同時從苦瓜中提取多糖，最大限度的利用苦瓜，而且采用本發(fā)明的方法得到的多糖，其得率和純度高。

【具體實施方式】
[0012]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作更進一步的說明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解本發(fā)明，但并不因此限制本發(fā)明。
[0013]以下的檢測方法，如無特殊說明，采用苯酚-硫酸法測多糖的含量。
[0014]實施例1
一種苦瓜多糖的提取方法，該方法包括下述的步驟:
將新鮮苦瓜清洗干凈，晾干至其水分含量為2%左右，放入粉碎機中粉碎，將粉碎后的苦瓜過60目篩，得苦瓜粉；
將粉碎后的苦瓜粉，加水混勻，苦瓜與水的重量比例為1:9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量為0.45%，中性蛋白酶的加入量為0.4%，酶解溫度45 °C、pH值7.0，將上述的原料置于微波提取設(shè)備中提取，微波的功率為500W，頻率為800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100°C下滅酶6min，得酶解液；
將上述的酶解液置于真空濃縮器中濃縮，減壓低溫濃縮至酶解液至原體積的1/3，得苦瓜粗多糖濃縮液；
在苦瓜粗多糖的濃縮液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖濃縮液重量的4%，攪拌0.3h,過濾濾出活性炭；
離心15 min ,離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm,將上清液與沉淀分別收集；
取上清液過濾去渣，過濾后得到的濾液在65°C下濃縮，濃縮至其濃度為65%，濃縮液按I:4比例加入95%乙醇沉淀靜置10-20小時、離心15 min，離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反復(fù)清洗2-3次，冷凍干燥至水分含量為5%后，再在-1-4°C下進行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均為酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
[0015]采用苯酚-硫酸法測得所得的多糖提取率為:18.92%，純度為68.21%。
[0016]實施例2
一種苦瓜多糖的提取方法，該方法包括下述的步驟:
將新鮮苦瓜清洗干凈，晾干至其水分含量為1%，放入粉碎機中粉碎，將粉碎后的苦瓜過40目篩，得苦瓜粉；
將粉碎后的苦瓜粉，加水混勻，苦瓜與水的重量比例為1:9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量為0.2%，中性蛋白酶的加入量為0.2%，酶解溫度45°〇、？!1值6.8，將上述的原料置于微波提取設(shè)備中提取，微波的功率為400W，頻率為800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100°C下滅酶5min，得酶解液；
將上述的酶解液置于真空濃縮器中濃縮，減壓低溫濃縮至酶解液至原體積的1/3，得苦瓜粗多糖濃縮液；
在苦瓜粗多糖的濃縮液中加入活性炭，活性炭占苦瓜粗多糖濃縮液重量的4%，攪拌0.3h，過濾濾出活性炭；
離心15 min ,離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm,將上清液與沉淀分別收集；
取上清液過濾去渣，過濾后得到的濾液在65°C下濃縮，濃縮至其濃度為65%，濃縮液按I:4比例加入95%乙醇沉淀靜置10小時、離心15 min，離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反復(fù)清洗2-3次，冷凍干燥至水分含量為5%后，再在-1-4°C下進行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均為酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
[0017]采用苯酚-硫酸法測得所得的多糖提取率為:18.01%，純度為67.79%。
[0018]實施例3
一種苦瓜多糖的提取方法，該方法包括下述的步驟:
將新鮮苦瓜清洗干凈，晾干至其水分含量為3%，放入粉碎機中粉碎，將粉碎后的苦瓜過40-80目篩，得苦瓜粉；
將粉碎后的苦瓜粉，加水混勻，苦瓜與水的重量比例為1:9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量為0.6%，中性蛋白酶的加入量為0.5%，酶解溫度45°C、pH值7.2，將上述的原料置于微波提取設(shè)備中提取，微波的功率為500W，頻率為800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100°C下滅酶6min，得酶解液；
將上述的酶解液置于真空濃縮器中濃縮，減壓低溫濃縮至酶解液至原體積的1/3，得苦瓜粗多糖濃縮液；
在苦瓜粗多糖的濃縮液中加入活性炭，活性炭占苦瓜粗多糖濃縮液重量的4%，攪拌0.3h，過濾濾出活性炭；
離心15 min ,離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm,將上清液與沉淀分別收集；
取上清液過濾去渣，過濾后得到的濾液在65°C下濃縮，濃縮至其濃度為65%，濃縮液按I:4比例加入95%乙醇沉淀靜置20小時、離心15 min，離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反復(fù)清洗2-3次，冷凍干燥至水分含量為5%左右后，再在-1-4°C下進行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均為酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
[0019]采用苯酚-硫酸法測得所得的多糖提取率為:18.46%，純度為68.37%。
【權(quán)利要求】
1.一種苦瓜多糖的提取方法，包括下述的步驟: 將新鮮苦瓜清洗干凈，晾干至其水分含量為1-3%，放入粉碎機中粉碎，將粉碎后的苦瓜過40-80目篩，得苦瓜粉； 將粉碎后的苦瓜粉，加水混勻，苦瓜與水的重量比例為1:6_12，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量為0.2-0.6%，中性蛋白酶的加入量為0.2-0.5%，酶解溫度.45°C、pH值6.8-7.2，將上述的原料置于微波提取設(shè)備中提取，微波的功率為400-600W，頻率為800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100_105°C下滅酶5_10min，得酶解液； 將上述的酶解液置于真空濃縮器中濃縮，減壓低溫濃縮至酶解液至原體積的1/3，得苦瓜粗多糖濃縮液； 在苦瓜粗多糖的濃縮液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖濃縮液重量的.2-6%，攪拌0.2-0.5h，過濾濾出活性炭； 離心10-20 min，離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm，將上清液與沉淀分別收集； 取上清液過濾去渣，過濾后得到的濾液在60-70°C下濃縮，濃縮至其濃度為60-70%，濃縮液按1:4比例加入95%乙醇沉淀靜置10-20小時、離心10-20 min，離心轉(zhuǎn)速為4500rpm，收集沉淀并用乙醇反復(fù)清洗2-3次，冷凍干燥至水分含量為4_6%后，再在_1_4°C下進行粉碎，得可溶性多糖； 上述的加酶量均為酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
2.如權(quán)利要求1所述一種苦瓜多糖的提取方法，其特征在于，所述的苦瓜與水的重量比例為1:9。
3.如權(quán)利要求1所述的一種苦瓜多糖的提取方法，其特征在于，所述的木瓜蛋白酶的用量是0.45%。
4.如權(quán)利要求1所述的一種苦瓜多糖的提取方法，其特征在于，所述的中性蛋白酶的添加量為0.4%。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的一種苦瓜多糖的提取方法,其特征在于,所述的方法包括下述的步驟: 將新鮮苦瓜清洗干凈，晾干至其水分含量為1_3%，放入粉碎機中粉碎，將粉碎后的苦瓜過40-80目篩，得苦瓜粉； 將粉碎后的苦瓜粉，加水混勻，苦瓜與水的重量比例為1:9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量為0.45%，中性蛋白酶的加入量為0.4%，酶解溫度45°C、pH值7.0，將上述的原料置于微波提取設(shè)備中提取，微波的功率為500W，頻率為800MHZ，酶解.0.3h，酶解后在100°C下滅酶6min，得酶解液； 將上述的酶解液置于真空濃縮器中濃縮，減壓低溫濃縮至酶解液至原體積的1/3，得苦瓜粗多糖濃縮液； 在苦瓜粗多糖的濃縮液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖濃縮液重量的4%，攪拌0.3h，過濾濾出活性炭； 離心15 min ,離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm,將上清液與沉淀分別收集； 取上清液過濾去渣，過濾后得到的濾液在65°C下濃縮，濃縮至其濃度為65%，濃縮液按I:4比例加入95%乙醇沉淀靜置10-20小時、離心15 min，離心轉(zhuǎn)速為4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反復(fù)清洗2-3次，冷凍干燥至水分含量為5%后，再在-1-4°C下進行粉碎，得可溶性多糖；上述的加酶量均為酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
【文檔編號】C08B37/00GK104311691SQ201410628576
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年11月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月11日
【發(fā)明者】遲宗磊, 藏偉功, 丁振洋 申請人:濟南凱因生物科技有限公司