專利名稱：一種富集孕婦血漿中胎兒游離dna的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的試劑及使用該試劑富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的方法。
背景技術：
目前，產前診斷主要是利用胎兒的組織來檢測一些遺傳性疾病，這對于預防及控制新生兒發(fā)病率及死亡率具有十分重要的臨床意義。然而，損傷性的診斷如羊水和絨毛膜穿刺等方法都有機會對胎兒和孕婦造成一定的危害。因此，這些方法通常僅用于那些懷疑懷有遺傳性疾病胎兒的高風險孕婦。鑒于損傷性產前診斷的局限性，故非損傷產前性診斷的方法，具有極大的發(fā)展空間和潛力。其中，母親與胎兒之間存在細胞相互滲透的現(xiàn)象已為研究所證實，而孕婦血液中的胎兒細胞為有效地進行非損傷性診斷，提供了有價值的遺傳物質。然而孕婦血液中的胎兒細胞數(shù)量極少，使其在臨床應用中受到一定的限制。后又在孕婦的血漿和血清中發(fā)現(xiàn)了游離胎兒DNA，檢測這類胎兒DNA，無疑是一種既安全又準確的非損傷性診斷方法為產前診斷開創(chuàng)了一個新的領域。但母血中胎兒DNA含量較低，而且受到母親強大DNA背景的影響使目前的基于胎兒游離DNA的進行產前診斷方面的研究大多局限在父系遺傳病方面。從孕婦血漿中提取高濃度的胎兒DNA，是一項有利于臨床意義深遠的工作。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的試劑及使用該試劑富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的方法，它涉及DNA富集試劑的組分及使用該試劑富集胎兒DNA的方法。本發(fā)明富集胎兒DNA的試劑價格低廉，易獲得，富集方法操作簡便、快捷，經(jīng)過該方法處理后明顯提高了孕婦血漿中胎兒DNA的提取含量。本發(fā)明胎兒DNA富集試劑包括0.5M EDTA(pH＝8.0)和分析純甲醛。用該試劑富集胎兒游離DNA的具體操作方法為取孕婦外周血3-5ml，加入EDTA和分析純甲醛，使其終濃度分別為0.5M和1ml/L。在24小時內，室溫下1600g離心10分鐘。將血漿轉移至一新的離心管中，重復上述步驟，該血漿可用于后續(xù)試驗或-80度凍存保存隨時使用。經(jīng)過上述處理后的樣品可直接用于各種品牌或是實驗室常規(guī)方法的DNA提取。
具體實施例選取2005年1月到2005年10月孕中期產婦30例，分別取外周血6ml。其中3ml，用本發(fā)明的方法處理后使用qiagen全血DNA提取試劑盒提取DNA.取孕婦外周血3-5ml，加入EDTA和分析純甲醛，使其終濃度分別為0.5M和1ml/L。在24小時內，室溫下1600g離心10分鐘。將血漿轉移至一新的離心管中，重復上述步驟，該血漿用qiagen提取試劑盒提取DNA.另3ml直接使用qiagen提取試劑盒提取DNA。
采用熒光定量PCR方法，擴增SRY基因，以獲得胎兒DNA在孕婦血漿中總DNA的相對濃度。未經(jīng)富集DNA處理組，相對濃度為6.10％。處理組，相對濃度為18.54％。
我們的處理方法，明顯的提高了孕婦血漿中胎兒DNA的提取濃度。
權利要求
1.一種富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的試劑包括0.5M EDTA(pH＝8.0)和分析純甲醛。
2.使用該試劑富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的方法，具體操作方法為取孕婦外周血3-5ml，加入EDTA和分析純甲醛，使其終濃度分別為0.5M和1ml/L。在24小時內，室溫下1600g離心10分鐘。將血漿轉移至一新的離心管中，重復上述步驟，該血漿可用于后續(xù)試驗或-80度凍存保存隨時使用。經(jīng)過上述處理后的樣品可直接用于各種品牌或是實驗室常規(guī)方法的DNA提取。
全文摘要
富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的試劑及使用該試劑富集孕婦血漿中胎兒游離DNA的方法，它涉及DNA富集試劑的組分及使用該試劑富集胎兒DNA的方法。本發(fā)明胎兒DNA富集試劑包括0.5M EDTA(pH＝8.0)和分析純甲醛。用該試劑富集胎兒游離DNA的具體操作方法為取孕婦外周血3－5ml，加入EDTA和分析純甲醛，使其終濃度分別為0.5M和1ml/L。在24小時內，室溫下1600g離心10分鐘。將血漿轉移至一新的離心管中，重復上述步驟，該血漿可用于后續(xù)試驗或－80度凍存保存隨時使用。經(jīng)過上述處理后的樣品可直接用于各種品牌或是實驗室常規(guī)方法的DNA提取。本發(fā)明富集胎兒DNA的試劑價格低廉，易獲得，富集方法操作簡便、快捷，經(jīng)過該方法處理后明顯提高了孕婦血漿中胎兒DNA的提取含量。
文檔編號C07H21/00GK101016562SQ20061001315
公開日2007年8月15日 申請日期2006年2月8日 優(yōu)先權日2006年2月8日
發(fā)明者陳熹 申請人:陳熹