專利名稱：苯乙烯酸衍生物及其在制備血管靶向劑藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一類苯乙烯酸的鹽和酯的衍生物，可被應(yīng)用于制備血管靶向劑藥物。
背景技術(shù)：
康普瑞丁磷酸二鈉(CA4P)是一種二苯乙烯類化合物combretastatin的磷酸二鈉鹽，結(jié)構(gòu)如式A所示。
combretastatin是George R.Pettit，Ph.D.從非洲一種矮柳樹(Combretum Caffrum)中發(fā)現(xiàn)并分離得到的一類化合物。CA4P是OXiGENE公司從其中分離篩選的天然化合物combretastatin A4(CA4)的磷酸酯合成產(chǎn)品。CA4P是目前唯一一種正在開發(fā)的以破壞腫瘤血管系統(tǒng)為機(jī)制，利用其靶向腫瘤內(nèi)不成熟的血管，轉(zhuǎn)換成combretastatin后進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞并破壞其內(nèi)部骨架，改變其形態(tài)和阻塞毛細(xì)血管，斷絕腫瘤的氧供應(yīng)。其所顯示的針對腫瘤血管的特異性靶向和破壞已生成的腫瘤血管的作用，能強(qiáng)效攻擊活體腫瘤，導(dǎo)致腫瘤從內(nèi)到外徹底死亡，可以作為注射劑型抗癌藥，用于治療肺癌、肝癌、宮頸癌等晚期實(shí)體瘤。
US 4,996,237和US 5,561,122，以及J.Org.Chem，2001，66，8135-8138和Journal ofMedicinal Chemistry，1995 Jul 21；38(15)2994等文獻(xiàn)分別對CA4、CA4P及其合成方法等相關(guān)研究有所介紹。其中，在對CA4及其類似物的制備方法中，曾有以相應(yīng)母體結(jié)構(gòu)的苯乙烯酸或其甲酯為中間體經(jīng)還原反應(yīng)得到的報道。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于目前文獻(xiàn)僅報道CA4P具有針對腫瘤血管的特異性靶向性作用，而本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)其某些前體化合物同樣可具有血管靶向性作用。據(jù)此，本發(fā)明首先的目的是提供具有血管靶向性作用的這類苯乙烯酸的鹽類和/或酯類衍生物。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明進(jìn)一步的目的，是提供這些苯乙烯酸衍生物在制備用于治療包括抗腫瘤和抑制眼底血管增生等疾病的血管靶向性藥物方面的應(yīng)用。
本發(fā)明的苯乙烯酸衍生物，包括其相應(yīng)的鹽類衍生物及酯類衍生物。
本發(fā)明所說的苯乙烯酸鹽類衍生物的結(jié)構(gòu)如(I)所示。
式(I)中的M為鈉、鉀、鋰、鎂、鈣、銨、或包括氨基酸、二肽、三肽、多肽等在內(nèi)的含有羧基的有機(jī)胺；R1、R2、R3、R4、R5為氫、甲基、乙基、異丙基、叔丁基等烷基、羥基、甲氧基、乙氧基、丁氧基等烷氧基、氨基、甲胺基、二甲胺基、二乙胺基等胺基、氟、氯或溴等，其中特別是為羥基、甲氧基或胺基。
當(dāng)上述鹽類衍生物中的M為銨鹽的形式時，其結(jié)構(gòu)可如下式(II)所示。
式(II)中的R6、R7、R8、R9可以為氫、甲基、乙基、異丙基、叔丁基等烷基，或帶有氧、氮的羥乙基、羥丙基、胺乙基等烷基，或是甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、精氨酸等氨基酸、AQ、GA、GL等二肽、三肽、多肽等結(jié)構(gòu)中含有羧基的鏈基，或是在R6、R7、R8、R9中的三個基團(tuán)之間形成如哌啶、嗎啉、哌嗪等環(huán)烷基、帶有氧、氮的環(huán)烷基，所說的各烷基或環(huán)烷基還可以進(jìn)一步帶有胺基、三乙醇胺基等取代基，如甲基哌嗪、葡甲胺等。
本發(fā)明所說的苯乙烯酸酯類衍生物的結(jié)構(gòu)如(III)所示
式(III)中的R1、R2、R3、R4、R5為氫、烷基、羥基、烷氧基、胺基、氟、氯、溴取代基，其中同樣特別是為羥基、甲氧基、胺基；R10為羥乙基、甘油烷基、甲基、乙基、異丙基、叔丁基等烷基、包括葡萄糖、阿拉伯糖、木糖醇等糖烷基或包括奎尼酸、葡萄糖酸等多羥基環(huán)烷基。
包括上述各種結(jié)構(gòu)形式化合物在內(nèi)的本發(fā)明苯乙烯酸鹽類和酯類衍生物的結(jié)構(gòu)，可如通式(IV)所示。其中R1、R2、R3、R4、R5為上述的氫、烷基、羥基、烷氧基、胺基、氟、氯或溴，其中特別是為羥基、甲氧基、胺基；R11為鈉、鉀、鋰、鎂、鈣、銨或包括氨基酸或肽在內(nèi)的含有羧基的有機(jī)胺，或者是羥乙基、甘油基、包括甲基在內(nèi)的烷氧基、包括葡萄糖在內(nèi)的糖基、包括奎尼酸在內(nèi)的多羥基環(huán)烷基。
以式(IV)結(jié)構(gòu)的苯乙烯酸衍生物為有效活性成分，與藥物中可以接受的相應(yīng)藥用輔料或載體等輔助添加成分組合，并按相應(yīng)的常規(guī)制藥方法加工處理后，可以制備成為口服、注射或外用型等相應(yīng)形式的血管靶向劑藥物。例如，與口服藥物制劑中可以被接受的崩解劑、賦形劑、潤滑劑、粘合劑、填充劑等常用的輔助添加成份混合后，按相應(yīng)的常規(guī)工藝方法處理，即可制成為片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊劑或適當(dāng)形式的緩釋劑、控釋劑等固體制劑形式的口服藥物；按注射藥物制劑中允許使用的適當(dāng)溶劑和附加劑配合及相應(yīng)的工藝操作處理后，可以制備成相應(yīng)的水針或粉針等肌肉或靜脈形式的注射制劑藥物；與常用的溶劑、穩(wěn)定激或聚丙烯酸鈉、聚乙烯醇、聚乙二醇、甘油、植物油、凡士林、羊毛脂等親油性基質(zhì)和/或水溶性基質(zhì)混合，按相應(yīng)的外用藥物制劑處理，即可制成為滴眼液或貼膏劑、膏藥、凝膠劑、軟膏劑、搽劑、涂膜劑等。這些注射液、無菌粉針、無菌凍干粉針等注射制劑，片劑、膠囊、各種緩控釋制劑等口服制劑，以及如滴眼液、軟膏等外用制劑形式藥物等，可分別供治療包括抗腫瘤藥物和抑制眼底血管增生等類疾病使用。
以下通過實(shí)施例的具體實(shí)施方式
再對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(E)-3-(3′-羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸(簡稱CA4S)的合成將3，4，5-三甲氧基苯乙酸140g(610mmol)，異香草醛110g(724mmol)，醋酸酐200ml和NEt3100ml(717mmol)加入到1000ml的圓底燒瓶中，在外溫于150℃攪拌回流2.5小時，減壓蒸盡溶劑，得油狀物，加入1N鹽酸約300毫升，室溫攪拌過夜，得黃色固體，用乙醇400mL重結(jié)晶得淡黃色固體125g，收率56％。mp.228℃～232℃。
TLC檢測展開劑PE∶EA＝1∶1，(加冰乙酸2滴)Rf＝0.45。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ3.686(s，6H，3′，5′-OCH3)，3.712(s，3H，4′-OCH3)，3.731(s，3H，4-OCH3)，6.436(s，2H，2′，6′-ArH)，6.485(d，J＝2.0Hz，2-ArH)，6.603(dd，J＝2.0，8.4Hz，1H，5-ArH)，6.806(d，J＝8.4Hz，1H，6-ArH)，7.757(s，1H，C＝CH)，8.962(s，1H，OH)，12.435(s，1H，COOH)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ55.659，56.148，60.299，107.055，111.743，117.391，123.098，127.255，132.276，137.262，139.254，146.059，149.064，153.257，168.727共16組碳，與產(chǎn)物結(jié)構(gòu)相符。ESI-MS358.9(M-H，100)。
實(shí)施例2(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸的合成將3，4，5-三甲氧基苯乙酸140g(610mmol)，2，3-二羥基-4-甲氧基苯甲醛724mmol，醋酸酐200ml和NEt3100ml(717mmol)加入到1000ml的圓底燒瓶中，在外溫150℃下攪拌回流2.5小時，減壓蒸盡溶劑，得油狀物，加入1N鹽酸約300ml，室溫攪拌過夜，得黃色固體，用乙醇400ml重結(jié)晶得淡黃色固體。
實(shí)施例3(E)-3-(3′-胺基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸的合成將3，4，5-三甲氧基苯乙酸140g(610mmol)，3-胺基-4-甲氧基苯甲醛724mmol，醋酸酐200ml和NEt3100ml(717mmol)加入到1000ml的圓底燒瓶中，在外溫150℃下攪拌回流2.5小時，減壓蒸盡溶劑，得油狀物，加入1N鹽酸約300ml，室溫攪拌過夜，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)pH為5-6，得黃色固體，用乙醇400ml重結(jié)晶得淡黃色固體。
實(shí)施例4(E)-3-(3′-氯-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸的合成將3，4，5-三甲氧基苯乙酸140g(610mmol)，3-氯-4-甲氧基苯甲醛724mmol，醋酸酐200ml和NEt3100ml(717mmol)加入到1000ml的圓底燒瓶中，在外溫150℃下攪拌回流2.5小時，減壓蒸盡溶劑，得油狀物，加入1N鹽酸約300ml，室溫攪拌過夜，得淺黃色固體，用乙醇400ml重結(jié)晶得類白色固體。
實(shí)施例5(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸的合成將3，4，5-三甲氧基苯乙酸140g(610mmol)，3，5-二羥基苯甲醛724mmol，醋酸酐200ml和NEt3100ml(717mmol)加入到1000ml的圓底燒瓶中，在外溫150℃下攪拌回流2.5小時，減壓蒸盡溶劑，得油狀物，加入1N鹽酸約300ml，室溫攪拌過夜，得黃色固體，用乙醇400ml重結(jié)晶得淡黃色固體。
實(shí)施例6CA4S鈉鹽的合成將上述的各CA4S 5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入無水乙醇20ml，二氧化碳-丙酮冷卻到-50℃，于-50～-20℃在氬氣的保護(hù)下，攪拌并滴加等當(dāng)量乙醇鈉的乙醇溶液，約20min滴加完畢，再升溫至20℃反應(yīng)1小時。然后冷卻到-20℃，過濾并干燥，得相應(yīng)CA4S的鈉鹽結(jié)晶產(chǎn)物。
實(shí)施例7CA4S鈣鹽的合成將上述的各CA4S 5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入無水乙醇20ml，冷卻到-20℃，于-20℃在氬氣的保護(hù)下，攪拌并滴加等當(dāng)量氫氧化鈣的水溶液，約20min滴加完畢，升溫至20℃反應(yīng)1小時。然后冷卻到-20℃，過濾并干燥，得到相應(yīng)CA4S的鈣鹽結(jié)晶。
實(shí)施例8一種CA4S亮氨酸鹽的合成將上述的各CA4S 5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入丙酮20ml，冷卻到-20℃，在氬氣的保護(hù)下攪拌并滴加等當(dāng)量亮氨酸的丙酮溶液，約20min滴加完畢，升溫至60℃反應(yīng)1小時。然后減壓濃縮，加入20ml乙酸乙酯，加熱至80℃回流，冷卻至0℃，過濾并干燥，得到相應(yīng)CA4S的亮氨酸鹽結(jié)晶。
實(shí)施例9CA4S三乙醇胺鹽的合成將上述的各CA4S 5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入丙酮20ml，冷卻到-20℃，于-20℃在氬氣的保護(hù)下，攪拌并滴加等當(dāng)量三乙醇胺的丙酮溶液，約20min滴加完畢，然后升溫至60℃反應(yīng)1小時。然后減壓濃縮，加入20ml乙酸乙酯，加熱至80℃回流，冷卻至0℃，過濾并干燥，得到相應(yīng)CA4S的三乙醇胺鹽結(jié)晶。
實(shí)施例10CA4S葡甲胺鹽的合成將上述的各CA4S 5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入丙酮20ml，冷卻到-20℃，在氬氣的保護(hù)下攪拌并滴加等當(dāng)量葡甲胺的丙酮溶液，約20min滴加完畢，升溫至60℃反應(yīng)1小時。然后減壓濃縮，加入20ml乙酸乙酯，加熱至80℃回流，冷卻至0℃，過濾并干燥，得到相應(yīng)CA4S的葡甲胺鹽結(jié)晶。
實(shí)施例11(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸三乙胺鹽的合成將實(shí)施例2得到的(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入丙酮20ml，冷卻到0℃，于0℃在氬氣的保護(hù)下攪拌并滴加等當(dāng)量三乙胺的丙酮溶液，約20min滴加完畢，升溫至20℃反應(yīng)1小時。然后減壓濃縮，加入20ml乙酸乙酯，加熱至80℃回流，冷卻至0℃，過濾并干燥，得(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸三乙胺鹽的白色結(jié)晶。
實(shí)施例12(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸哌嗪鹽的合成將實(shí)施例2得到的(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入丙酮20ml，冷卻到0℃，于0℃在氬氣的保護(hù)下攪拌并滴加等當(dāng)量哌嗪的丙酮溶液，約20min滴加完畢，然后升溫至20℃反應(yīng)1小時。減壓濃縮，加入20ml乙酸乙酯，加熱至80℃回流，冷卻至0℃，過濾并干燥，得(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸哌嗪鹽的白色結(jié)晶。
實(shí)施例13(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸異丙胺鹽的合成將實(shí)施例2得到的(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3′，4′，5′-三甲氧苯基)-2-丙烯酸5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入丙酮20ml，冷卻到0℃，于0℃在氬氣的保護(hù)下攪拌并滴加等當(dāng)量異丙胺的丙酮溶液，約20min滴加完畢，然后升溫至20℃反應(yīng)1小時。減壓濃縮，加入20ml乙酸乙酯，加熱至80℃回流，冷卻至0℃，過濾并干燥，得(E)-3-(2′，3′-二羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸異丙胺鹽的白色結(jié)晶。
實(shí)施例14(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸羥乙酯的合成將(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入乙二醇20ml，冷卻到0℃，于0℃在氬氣的保護(hù)下攪拌并滴加1ml濃硫酸，在氬氣的保護(hù)下升溫至100℃反應(yīng)1小時。然后減壓濃縮，加入20ml乙酸乙酯，水洗至中性，用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮除去溶劑，得(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸羥乙酯的白色結(jié)晶。
實(shí)施例15(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-奎尼酸酯的合成將(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸5.00g加入100ml反應(yīng)瓶中，加入2-奎尼酸10g，冷卻到0℃，乙酸乙酯50ml，于0℃在氬氣的保護(hù)下攪拌并加入DCC 6g，在氬氣的保護(hù)下升溫至室溫反應(yīng)1小時。過濾掉不溶性固體物，再加入20ml乙酸乙酯，水洗至中性，用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮除去溶劑，得產(chǎn)品用柱層析分離，得(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-奎尼酸酯的白色結(jié)晶。
實(shí)施例16含苯乙烯酸鈉鹽和0.9％氯化鈉的靜脈注射藥物注射劑1CA4S鈉鹽1500g氯化鈉 180g注射用水20000ml按注射劑的常規(guī)操作共制成20ml的注射劑1000支，每支含CA4S鈉鹽1.5克。
注射劑2CA4S葡甲胺鹽3000g氯化鈉 2250g注射用水2000,000ml按注射劑的常規(guī)操作共制成1000ml的注射劑1000瓶，每瓶含CA4S葡甲胺鹽3克。
注射劑3CA4S鉀鹽1.0g枸櫞酸 1.0g枸櫞酸鈉0.5g葡萄糖 100g注射用水2,000ml按注射劑的常規(guī)操作共制成2ml的注射劑1000支，每支含CA4S鉀鹽1毫克。
注射劑4CA4S葡甲胺鹽1500g葡萄糖 1000g注射用水20,000ml按注射劑的常規(guī)操作共制成20ml的注射劑1000支，每支含CA4S葡甲胺鹽1.5克。
注射劑5CA4S三乙醇氨鹽 3000g葡萄糖 10,000g注射用水2,000,000ml按注射劑的常規(guī)操作共制成1000ml的注射劑1000瓶，每瓶含CA4S三乙醇氨鹽3克。
上述的各處方中，為提高CA4S的穩(wěn)定性，還可以分別加入藥物中常用的穩(wěn)定劑，如環(huán)糊精包合物、聚乙烯吡咯烷酮等；抗氧化劑，如亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、抗壞血酸、半胱氨酸等；pH值調(diào)節(jié)劑可選用如檸檬酸、富馬酸、谷氨酸、L-天冬氨酸、乳酸、乳糖酸、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、抗壞血酸、鹽酸、醋酸等。
實(shí)施例17 含苯乙烯酸鈉鹽和0.9％氯化鈉的滴眼液藥物CA4S鈉鹽 1.0g枸櫞酸1.0g枸櫞酸鈉 0.5g氯化鈉18g注射用水 2000ml。
按滴眼液的常規(guī)制備方式制劑，共制成2ml的注射劑1000支，每支含CA4S鈉1毫克。
為提高CA4S的穩(wěn)定性，還可以分別加入如上述注射劑藥物所用形式穩(wěn)定劑，抗氧化劑，pH值調(diào)節(jié)劑等常用輔助性成分。
實(shí)施例18 含CA4S的無菌粉針劑處方1CA4S亮氨酸鹽無菌粉 1g氯化鈉無菌粉18g按無菌粉針劑的常規(guī)操作共制成2ml粉針劑1000支，每支含CA4S亮氨酸鹽1毫克。
處方2CA4S甘氨酸鹽無菌粉 1500g氯化鈉無菌粉180g按無菌粉針劑的常規(guī)操作共制成20ml粉針劑1000支，每支含CA4S甘氨酸鹽1.2克。
處方3CA4S葡甲胺鹽無菌粉3000g按無菌粉針劑的常規(guī)操作共制成5ml粉針劑1000支，每支含CA4S葡甲胺鹽3克。
處方4CA4S甘氨酸鹽1g葡萄糖無菌粉100g按無菌粉針劑的常規(guī)操作共制成2ml粉針劑1000支，每支含CA4S甘氨酸鹽1毫克。
處方5CA4S亮氨酸鹽無菌粉1500g葡萄糖無菌粉 1000g按無菌粉針劑的常規(guī)操作共制成20ml粉針劑1000支，每支含CA4S亮氨酸鹽1.2克。
實(shí)施例19 CA4S的無菌凍干粉針劑將實(shí)施例16中各配方產(chǎn)品經(jīng)凍干設(shè)備冷凍干燥制得CA4S氯化鈉的無菌凍干粉針劑。
實(shí)施例20 CA4S片劑(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸羥乙酯1.00g淀粉 184.00g聚乙烯吡咯烷酮5.00g
硬脂酸鎂(120目)10.00g共計 200.00g其中的填充劑可選用如淀粉、糊精、糖粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纖維素、碳酸鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈣等；黏合劑可選用如羥丙甲纖維素、聚維酮、淀粉漿、糊精漿、糖漿、膠漿、海藻酸鈉、聚乙二醇、桃膠、阿拉伯膠等；崩解劑可選用常用的如交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉、羥丙基淀粉、低取代羥丙基纖維素檸檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氫鈉、碳酸鈉等。
共制成1000片，每片(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸羥乙酯1mg。
實(shí)施例21 CA4S膠囊劑(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-奎尼酸酯100.00g淀粉 85.00g聚乙烯吡咯烷酮5.00g硬脂酸鎂(120目) 10.00g共計200.00g其中的填充劑可選用如淀粉、糊精、糖粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纖維素、碳酸鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈣等；黏合劑可選用如羥丙甲纖維素、聚維酮、淀粉漿、糊精漿、糖漿、膠漿、海藻酸鈉、聚乙二醇、桃膠、阿拉伯膠等。
共制成1000膠囊，每粒膠囊含(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-奎尼酸酯100mg。
對本發(fā)明上述的苯乙烯酸衍生物進(jìn)行的抗腫瘤作用的試驗(yàn)結(jié)果材料與方法細(xì)胞系與細(xì)胞培養(yǎng) A549細(xì)胞株為人肺癌細(xì)胞，貼壁生長于RPMI1640(GIBCO公司)培養(yǎng)液中，內(nèi)含10％小牛血清(成都哈里生物工程有限公司)，1mmol/L谷胺酰胺及100μg/ml鏈霉素。于37℃，5％CO2的飽和濕度孵箱中培養(yǎng)，每2-3天換液傳代一次。
藥物處理 用PBS溶解配成母液，再用1640完全培養(yǎng)液稀釋，過濾除菌。
儀器 Heraeus CO2孵箱，Olympus倒置顯微鏡，BioRAO Model 550酶聯(lián)免疫檢測儀。
實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞形態(tài)觀察 取對數(shù)生長期A549細(xì)胞以培養(yǎng)液調(diào)至細(xì)胞濃度為2×105個/ml，分為未加藥陰性組及給藥組，不同濃度藥物處理24小時后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。
細(xì)胞生長狀況觀察 對數(shù)生長期細(xì)胞以細(xì)胞濃度2×105個/ml接種于培養(yǎng)瓶中，待細(xì)胞完全貼壁后再分組。分為未加藥組、藥物處理組(5、10、40μg/ml等濃度的藥物加入細(xì)胞刺激)，加藥后逐日取藥物處理組和未加藥組細(xì)胞各三瓶，胰酶消化細(xì)胞，臺盼蘭染色，光鏡下計活細(xì)胞數(shù)，以三瓶細(xì)胞數(shù)均值，計算生長抑制率。
MTT法測抑制率 取對數(shù)生長期細(xì)胞制成1.5×105，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100μl，設(shè)三個復(fù)孔。加藥物濃度為0，1，2，4，8，16，32，64μg/ml及MTX0.5μg/ml對照孔及調(diào)零孔加100μl培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，于結(jié)束前4h，加10μl MTT，調(diào)零組不加MTT(5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，吸去全部上清液，僅留少量殘液，每孔加100μlDMSO搖勻振蕩。使結(jié)晶充分溶解，于酶聯(lián)免疫檢測儀上測各孔吸光值，波長490nm。按下列公式計算抑制率抑制率＝(1-給藥孔吸收光度值/對照孔吸收光度值)×100％實(shí)驗(yàn)結(jié)果細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察光鏡下形態(tài)A549細(xì)胞與CA4-P，(E)-3-(3′-羥基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸甘氨酸鹽(簡稱CAG)，(E)-3-(3′-氨基-4′-甲氧苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-丙烯酸三乙醇胺鹽(簡稱CAS)，(E)-3-(3′，5′-二羥基苯基)-2-(3″，4″，5″-三甲氧苯基)-2-奎尼酸酯(簡稱CAK)共同孵育24-48小時。在光鏡下不少細(xì)胞懸浮死亡，以及細(xì)胞變形，細(xì)胞變圓，與鄰近細(xì)胞脫離，胞漿濃縮，瘤巨細(xì)胞不明顯，部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，有些細(xì)胞體積縮小，胞膜皺縮，細(xì)胞核固縮，破碎，并有調(diào)亡小體形成等。
細(xì)胞生長增殖觀察 表明CA4-P，CAG，CAS，CAK均能明顯抑制A549細(xì)胞的增殖，抑制效應(yīng)隨濃度增加而有增加。
表1 幾種化合物對A549細(xì)胞增殖抑制作用(24h)

MTT法測抑制率 藥物對A549細(xì)胞的生長抑制率與藥物的濃度有明顯的依賴關(guān)系，隨著藥物濃度增加，生長抑制率增加。CA4P，CAG，CAS，CAK作用于A549細(xì)胞48h的IC50均約小于16μg/ml。
上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提出的苯乙烯酸衍生物CAG，CAS，CAK，能具有與CA4P基本一致的血管靶向作用，明顯抑制A549細(xì)胞的增殖，抑制效應(yīng)隨濃度增加而有增加。因此，本發(fā)明提出的苯乙烯酸衍生物具有與CA4P基本一致的滿意的血管靶向作用，在用于制備血管靶向劑藥物，例如包括抗腫瘤藥物和抑制眼底血管增生藥物等方面，具有積極的意義和前景。
權(quán)利要求
1.苯乙烯酸衍生物，結(jié)構(gòu)如(I)所示 式中M為鈉、鉀、鋰、鎂、鈣、銨，或包括氨基酸或肽在內(nèi)的含有羧基的有機(jī)胺；R1、R2、R3、R4、R5為氫、烷基、羥基、烷氧基、胺基、氟、氯或溴。
2.如權(quán)利要求1所述的苯乙烯酸衍生物，其特征是所說的R1、R2、R3、R4、R5為羥基、甲氧基或胺基。
3.如權(quán)利要求1所述的苯乙烯酸衍生物，其特征是所說的M為銨時的結(jié)構(gòu)如式(II)所示 式中R6、R7、R8、R9為氫、烷基，或帶有氧、硫、磷的烷基，或是在R6、R7、R8、R9中的三個基團(tuán)之間形成的包括哌嗪基、哌啶基、嗎啉基在內(nèi)的環(huán)烷基、帶有氧、硫、磷的環(huán)烷基，或是進(jìn)一步帶有包括胺基、三乙醇胺基在內(nèi)的取代基的所說各環(huán)烷基。
4.苯乙烯酸衍生物，結(jié)構(gòu)如(III)所示 式中R1、R2、R3、R4、R5為氫、烷基、羥基、烷氧基、胺基、氟、氯、溴取代基，R10為羥乙基、甘油烷基、除甲基外的烷基、糖烷基或多羥基環(huán)烷基。
5.如權(quán)利要求4所述的苯乙烯酸衍生物，其特征是所說的R1、R2、R3、R4、R5為羥基、甲氧基、胺基。
6.如權(quán)利要求4所述的苯乙烯酸衍生物，其特征是所說的糖基為葡萄糖。
7.如權(quán)利要求4所述的苯乙烯酸衍生物，其特征是所說的多羥基環(huán)烷酸基為奎尼酸。
8.如式(IV)結(jié)構(gòu)的苯乙烯酸衍生物在制備血管靶向劑藥物中的應(yīng)用，所說的血管靶向劑藥物包括抗腫瘤藥物和抑制眼底血管增生藥物 式中R1、R2、R3、R4、R5為氫、烷基、羥基、烷氧基、胺基、氟、氯或溴，R11為鈉、鉀、鋰、鎂、鈣、銨，或包括氨基酸或肽在內(nèi)的含有羧基的有機(jī)胺，還可以是甘油基、烷氧基、包括葡萄糖在內(nèi)的糖基、包括奎尼酸在內(nèi)的多羥基環(huán)烷基。
9.如權(quán)利要求8所述的在制備血管靶向劑藥物中的應(yīng)用，其特征是所說的R1、R2、R3、R4、R5為羥基、甲氧基、胺基。
10.如權(quán)利要求8所述的在制備血管靶向劑藥物中的應(yīng)用，其特征是所說的血管靶向劑藥物包括注射型制劑的藥物、口服型制劑的藥物和外用型制劑的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種如式(IV)結(jié)構(gòu)的苯乙烯酸衍生物，式中R
文檔編號C07C69/618GK101074189SQ200610020818
公開日2007年11月21日 申請日期2006年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月15日
發(fā)明者雍智全, 徐小平 申請人:雍智全, 徐小平