專利名稱：：Il-31單克隆抗體及使用方法IL-31單克隆抗體及使用方法
背景技術(shù)：
：免疫系統(tǒng)具有廣泛的包括淋巴細(xì)胞在內(nèi)的特定細(xì)胞類型。淋巴細(xì)胞決定宿主中免疫反應(yīng)的特異性并包括兩種類型作為抗體生成細(xì)胞的前體的B淋巴細(xì)胞，和某些調(diào)節(jié)功能例如特異性免疫應(yīng)答的產(chǎn)生所需的T淋巴細(xì)胞。成熟的T細(xì)胞可以被激活，即通過抗原或其它刺激激活，來產(chǎn)生例如細(xì)胞因子、生物化學(xué)信號分子或受體，它們進(jìn)一步影響T細(xì)胞群的命運(yùn)。B細(xì)胞可通過它們細(xì)胞表面上的受體(包括B細(xì)胞受體)和其它輔助分子(accessorymolecule)激活，來實(shí)施輔佐細(xì)胞(accessorycell)功能，例如細(xì)胞因子的產(chǎn)生。單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞和T-細(xì)胞可通過它們細(xì)胞表面上的受體激活，并通過將抗原遞呈至淋巴細(xì)胞而在免疫應(yīng)答中起重要作用，而且還通過分泌眾多細(xì)胞因子而起淋巴細(xì)胞的輔佐細(xì)胞的作用。天然殺傷(M)細(xì)胞與T細(xì)胞和B細(xì)胞具有共同的祖細(xì)胞(progenitorcell)，并在免疫監(jiān)督中起作用。含有多達(dá)15%血液淋巴細(xì)胞的M細(xì)胞不能表達(dá)抗原受體，并因此不會使用MHC識別作為結(jié)合至靶細(xì)胞的需要。NK細(xì)胞參與識別并殺死某些腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞。在體內(nèi)，NK細(xì)胞被認(rèn)為是需要被激活，然而，在體外，NK細(xì)胞已顯示可殺死一些類型的腫瘤細(xì)胞而無需激活。白細(xì)胞介素是介導(dǎo)免疫應(yīng)答(包括炎癥)的一類細(xì)胞因子。白細(xì)胞介素介導(dǎo)多種炎性病理學(xué)。免疫應(yīng)答的中心是T細(xì)胞，其產(chǎn)生許多細(xì)胞因子和對抗原的適應(yīng)性免疫(adaptiveimmunity)。已經(jīng)將由T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子分為1型和2型(Kelso，A.Immun.CellBiol.21:300-317，1998)。1型細(xì)胞因子包括IL-2、IFN-y、LT-a,并且參與了炎癥應(yīng)答、病毒免疫、胞內(nèi)寄生物免疫和同種異體移植物排斥。2型細(xì)胞因子包括IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13，并且參與了體液應(yīng)答、蠕蟲免疫和變應(yīng)性反應(yīng)。l型和2型之間共有的細(xì)胞因子包括IL-3、GM-CSF和TNF-oc。存在一些證據(jù)顯示，產(chǎn)生1型和2型的T細(xì)胞群優(yōu)先遷移進(jìn)不同類型的發(fā)炎的組織中。皮膚在免疫系統(tǒng)中起著重要的作用并由多層組成。表皮是表面層。表皮下面是真皮，一層結(jié)締組織。真皮下面是皮下組織，一層大量的脂肪組織。循環(huán)T淋巴細(xì)胞在正常和炎性條件下遷移至皮膚。皮膚淋巴細(xì)胞抗原(CLA)被認(rèn)為是一種對皮膚具有趨向性的T細(xì)胞的歸巢受體(homingreceptor)。Santamaria-Babi，L.，Eur.J.Dermatol.14:13-18，2004。已知一些皮膚疾病表達(dá)高水平的CLA+T細(xì)胞，包括特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、藥物誘發(fā)的變應(yīng)性反應(yīng)、與皮膚向性(skin-tropic)病毒和病毒相關(guān)的搔癢癥、白癜風(fēng)、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、斑禿(alopeciaaerata)、紅斑痤齊、普通粉刺、結(jié)節(jié)性癢滲以及大皰性類天皰齊。存在對治療這類皮膚T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的需要。所證實(shí)了的細(xì)胞因子家族的體內(nèi)活性顯示了其它細(xì)胞因子、細(xì)胞因子激動劑和細(xì)胞因子拮抗劑的巨大臨床潛力，以及對它們的需要。IL-31,—種新鑒定的細(xì)胞因子。IL-31當(dāng)在小鼠中過度表達(dá)時，導(dǎo)致皮炎樣癥狀。已經(jīng)將皮膚歸巢T細(xì)胞和表皮角質(zhì)細(xì)胞(kerationcyte)牽連于人類皮膚疾病的病理學(xué)中。本發(fā)明通過提供致炎細(xì)胞因子IL-31的拮抗劑來解決這些需要。本發(fā)明的這種拮抗劑可阻斷、抑制、減少、對抗或中和IL-31的活性，包括可溶性IL-31RA受體和抗-IL-31中和抗體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了在炎性疾病中為此的用途，以及相關(guān)的纟且合物和方法。發(fā)明詳述在詳細(xì)陳述本發(fā)明之前，定義下列術(shù)語可能會有助于對它的理解如在此使用的，術(shù)語"抗體"包括多克隆抗體、親和-純化的多克隆抗體、單克隆抗體，以及抗原-結(jié)合片段，例如F(ab')2和Fab蛋白水解片段。一般而言，工程化的完整抗體或片段，例如嵌合抗體、Fv片段、單鏈抗體等，以及合成的抗原-結(jié)合肽和多肽也包括在內(nèi)。非人抗體可通過移植非人CDR至人的框架區(qū)和恒定區(qū)，或通過整合整個非人的可變結(jié)構(gòu)域(任選通過置換暴露殘基用類似人的表面來"掩飾"它們，其中產(chǎn)物是一種"鑲嵌化的(veneered)"的抗體)來進(jìn)行人源化。在一些情況中，人源化抗體可在人可變區(qū)框架結(jié)構(gòu)域中保留非-人殘基，以增強(qiáng)正常的結(jié)合特性。通過人源化抗體，可延長生物半衰期，并減小在施用給人時不利的免疫反應(yīng)的可能性。術(shù)語"嵌合抗體"指其輕鏈和重鏈基因通常通過遺傳工程，從屬于不同種屬的免疫球蛋白可變區(qū)和恒定區(qū)基因構(gòu)建而來的抗體。例如，可將來自小鼠單克隆抗體的基因的可變區(qū)片段與人恒定區(qū)片段，例如Yl和y3連接。因此，典型的治療性嵌合抗體是一種雜合蛋白，其由來自小鼠抗體的可變或抗原-結(jié)合結(jié)構(gòu)域和來自人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域組成，雖然也可以使用其它哺乳動物物種。如在此使用的，術(shù)語"免疫球蛋白"指由基本上通過免疫球蛋白基因編碼的一種或多種多肽組成的蛋白質(zhì)。一種形式的免疫球蛋白構(gòu)成了抗體的基本結(jié)構(gòu)單位。這種形式是一個四聚體并由相同的兩對免疫球蛋白鏈組成，每對鏈具有一條輕鏈和一條重鏈。在每對鏈中，輕鏈和重鏈的可變區(qū)一起負(fù)責(zé)結(jié)合至抗原，而恒定區(qū)負(fù)責(zé)抗體效應(yīng)子作用。全長的免疫球蛋白"輕鏈"(約25Kd或214個氨基酸)由NH2-末端的可變區(qū)基因(約110個氨基酸)和C00H-末端的k或入恒定區(qū)基因編碼。全長的免疫球蛋白"重鏈"(約50Kd或446個氨基酸)類似地由可變區(qū)基因(約116個氨基酸)和其它上述恒定區(qū)基因之一(約330個氨基酸)編碼。重鏈分為y、m、oc、5或s，并分別定義抗體的同種型為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在輕鏈和重鏈內(nèi)，可變區(qū)和恒定區(qū)由約12個或更多氨基酸的"j"區(qū)連接，且重鏈還包含約io個或更多氨基酸的"D"區(qū)。(通常參見，F(xiàn)undamentalImmunology(Paul,W.，ed.，2nded.RavenPress,N.Y.(1989)，Ch.7(為所有目的通過全文引入作為參考)。免疫球蛋白的輕鏈或重鏈可變區(qū)由通過3個高可變區(qū)中斷的"框架"區(qū)組成。因此，術(shù)語"高可變區(qū)"指負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的抗體的氨基酸殘基。高可變區(qū)含有來自"互補(bǔ)性決定區(qū)"或"CDR"的氨基酸殘基(即，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中的殘基24-34(LI)、50-56(L2)和89-97(L3)以及重鏈可變結(jié)構(gòu)域中的31-35(Hl)、50-65(H2)和95-102(H3))(Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalinterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，Md.(1991))，和/或來自"高可變loop區(qū)"的那些殘基(即，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中的殘基26-32(LI)、50-52(L2)和91-96(L3)以及重鏈可變結(jié)構(gòu)域中的26-32(Hl)、53-55(H2)和96-101(H3);ChothiaandLesk，1987，J.Mol.Biol.196:901—917)(將兩者都在此通過引入作為參考)。"框架區(qū)，，或"FR"殘基是那些可變結(jié)構(gòu)域的殘基，而不是如在此定義的高可變區(qū)的殘基。在一種物種中，不同輕鏈或重鏈的框架區(qū)序列是相對保守的。因此，"人框架區(qū)"是與天然存在的人免疫球蛋白的框架區(qū)基本一致的(約85%或更高，一般為90-95%或更高)。抗體的框架區(qū)，即組成性輕鏈和重鏈的組合框架區(qū)，用來定位和對齊CDR。CDR主要負(fù)責(zé)結(jié)合至抗原表位。因此，術(shù)語"人源化的，，免疫球蛋白指含有人框架區(qū)和來自非人(通常為小鼠或大鼠)免疫球蛋白的一個或多個CDR的免疫球蛋白。提供CDR的非人免疫球蛋白稱為"供體"，而提供框架的人免疫球蛋白稱為"受體"。不需要存在恒定區(qū)，但是如果它們存在，則它們必須與人免疫球蛋白的恒定區(qū)基本一致，即至少約85-90%，優(yōu)選約95。/?；蚋恢?。因此，人源化免疫球蛋白的所有部分(可能除了CDR)基本上與天然的人免疫球蛋白序列的對應(yīng)部分一致。"人源化抗體"指含有人源化輕鏈和人源化重鏈免疫球蛋白的抗體。例如，人源化抗體將不包括如上定義的典型的嵌合抗體，例如，因?yàn)榍逗峡贵w的整個可變區(qū)是非人的。術(shù)語"遺傳改變的抗體，，表示其中氨基酸序列已與天然抗體的氨基酸序列不同的抗體。由于重組DNA技術(shù)在抗體產(chǎn)生中的實(shí)用性，人們不需要受限于在天然抗體中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列；可重新設(shè)計抗體來獲得期望的特性?？赡艿母淖冇性S多，從僅一個或少數(shù)氨基酸的改變到例如可變區(qū)或恒定區(qū)的完全重新設(shè)計。一般而言，將對恒定區(qū)作改變以便提高或改變特性，例如補(bǔ)體結(jié)合、與膜的相互作用以及其它效應(yīng)子作用。將會對可變區(qū)作改變以便提高抗原結(jié)合特性。除了抗體，免疫球蛋白可以多種其它形式存在，包括例如單鏈或Fv、Fab和(Fab')2，以及雙體、線性抗體、多價體或多特異性雜合抗體(如上面描述的以及在Lanzavecchia等，Eur.J.Immunol.17，105(1987)中詳述的)，以及單鏈(例如，Huston等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,85，5879-5883(1988)和Bird等，Science,242，423-426(1988)，將其在此通過引入作為參考)。(通常參見，Hood等，"Immunology"，Benjamin,N.Y.，2nded.(1984),以及Hunkapiller和Hood，Nature,323，15-16(1986)，將其在此通過引入作為參考)。如在此使用的，術(shù)語"單鏈Fv"、"單鏈抗體"、"Fv"或"scFv"指這樣的抗體片段其含有來自重鏈和輕鏈兩者的可變區(qū)，但缺少恒定區(qū)，但位于單個多肽鏈內(nèi)。通常，單鏈抗體另外含有在VH和VL結(jié)構(gòu)域之間的多肽連接物，其使得它能形成將會供抗原結(jié)合用的期望結(jié)構(gòu)。單鏈抗體由Pluckthun在ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,vol.113，Rosenburg和Mooreeds.Springer-Verlag，NewYork,pp.269-315(1994)中詳細(xì)論述；還可參見國際專利申請案出版號WO88/01649和美國專利號4，946,778和5，260，203，將它們的公開內(nèi)容為任何目的通過引入作為參考。在特定的實(shí)施方案中，單鏈抗體也可以是雙特異性的和/或人源化的。"Fab片段"由一條輕鏈和一條重鏈的Cw和可變區(qū)組成。Fab分子的重鏈不能與另一重鏈分子形成二疏鍵。"Fab'片段，，含有一條輕鏈和一條重鏈，該重鏈在Cm和"結(jié)構(gòu)域之間具有多個恒定區(qū)的，這樣可在兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵而形成F(ab')2分子。"F(ab，)2片段"含有兩條輕鏈和兩條重鏈，重鏈在(^和CH2結(jié)構(gòu)域之間具有一部分恒定區(qū)，這樣鏈間二硫鍵在兩條重鏈之間形成。通過不精確的分析法(例如，凝膠電泳)測定的聚合物的分子量和長度應(yīng)該理解為是近似值。當(dāng)這種值表示為"大約"X或"近似"X時，所述的X值將理解為將會精確到±10%。在此引用的所有參考文獻(xiàn)在這里通過全文引入作為參考。本發(fā)明部分是基于抗體用作IL-31的拮抗劑，從而普遍地抑制炎癥，以及皮炎癥狀和搔癢疾病的發(fā)現(xiàn)。如在此進(jìn)一步描述的，本發(fā)明提供了單克隆抗體的用途，用來抑制、減少、防止或使皮炎和搔癢疾病的影響最小化。在一個實(shí)施方案中，皮炎是特應(yīng)性皮炎。在另一個實(shí)施方案中，皮炎是結(jié)節(jié)性癢滲。在另一實(shí)施方案中，皮炎是濕滲。IL-31是一種新發(fā)現(xiàn)的T細(xì)胞細(xì)胞因子，其在小鼠中過度表達(dá)時導(dǎo)致類似皮炎的癥狀。也參見，Dillon等，NatureImmunol.5:752-760，2004。已經(jīng)將皮膚歸巢T細(xì)胞和表皮角質(zhì)細(xì)胞牽連于人類皮膚疾病的病理學(xué)中。在特應(yīng)性皮炎(AD)患者和正常個體兩者中，IL-31mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)只限于皮膚歸巢CLA+T細(xì)胞群，同時通過免疫組織化學(xué)(IHC)對IL-31的受體IL-31RA的分析顯示，與正常個體比較，在急性和慢性AD患者的皮膚活組織檢查中，在皮膚角質(zhì)細(xì)胞上有明顯更高水平的IL-31RA的表達(dá)。L-31是先前已在公開的美國專利申請案中描述為Zcytol7rlig的細(xì)胞因子的HUGO名稱(參見，出版號20030224487，Sprecher，Cindy等，2003，在此將其通過引入作為參考)。也參見，Dillon等，NatureImmunol.，同上。IL-31的異二聚體受體也在20030224487中描述為zcytorl7(HUGO名稱，IL-31RA)，其與OncostatinM受體P(OSMRP)形成異二聚體。IL-31可從由根據(jù)CD3選擇的活化的人外周血細(xì)胞(hPBC)產(chǎn)生的cDNA文庫分離。CD3是淋巴源細(xì)胞，尤其是T細(xì)胞特有的一種細(xì)胞表面標(biāo)記。人IL-31的多聚核苷酸和多肽序列分別在SEQIDNO:1和2中顯示。鼠IL-31的多聚核苷酸和多肽序列分別在SEQIDNO:10和11中顯示。如在此使用的，術(shù)語IL-31表示如在美國專利出版號20030224487中使用的IL-31,如上文中顯示。IL-31的分泌信號序列由氨基酸殘基1(Met)至23(Ala)組成，而成熟的多肽由氨基酸殘基24(Ser)至164(Thr)組成(如在SEQIDNO:2中顯示)。對來自293T細(xì)胞的純化的IL-31的進(jìn)一步N-端序列測定分析顯示，如在SEQIDNO:2中顯示的N-端位于殘基27(Leu)，同時成熟的多肽由氨基酸殘基27(Leu)至164(Thr)組成(如在SEQIDNO:2中顯示)。IL-31RA(IL-31受體)的多肽序列在SEQIDNO:5中顯示，而OncostatinM受體P(OSMRP)的多肽序列在SEQIDNO:7中顯示。IL-31RA和OSMRP受體屬于I型細(xì)胞因子受體亞家族，該亞家族包括，但不限于IL-2、IL-4、IL-7、Lif、IL-12、IL-15、EP0、TP0、GM-CSF和G-CSF的受體(關(guān)于綜述，參見Cosman，"TheHematopoietinReceptorSuperfamily"inCytokine5(2):95-106，1993)。IL-31RA亞基在/>有的PCT專利申請案No.US01/20484(WIP0出版號02/00721)中得以充分描述。對IL-31RA亞基的mRM的組織分布分析顯示了在激活的CD4+和CD8+T細(xì)胞亞類、CD14+單核細(xì)胞中的表達(dá)，以及在CD19+B細(xì)胞中較弱的表達(dá)。此外，mRM存在于休眠或活化的單核細(xì)胞系THP-1(ATCCNo.TIB-202)、U937(ATCCNo.CRL-1593.2)和HL60(ATCCNo.CCL-240)中。通過在此描述的IL-31拮抗劑抑制、中和、阻斷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的大量測定法測量。例如，測量增生減少的測定法包括用于染料例如AlamarBlue(AccuMedInternational公司，Westlake，Ohio)、3-(4，5-二曱基參唑-2-基)-2,5-聯(lián)苯溴化四唑(Mosman，J.Immunol.Meth.65:55-63，1983)、3，(4，5二曱基噻唑-2基)-5-3-羧基甲氧基苯基-2H-四唑、2，3-雙(2-曱氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯基氨基)羰基]-2H-四唑氫氧化物(tetrazoliumhydroxide)，以及氰基聯(lián)甲苯(cyanoditolyl)-氯化四唑(其可從Polysciences公司，Warrington,PA商業(yè)獲得)減少的測定法;有絲分裂發(fā)生測定法(mitogenesisassays)，例如對311-胸苷的整合的測量；使用例如萘黑或錐蟲藍(lán)的染料排除測定法；使用二乙?；俟馑氐娜玖衔辗?；以及鉻釋放法。通常，參見Freshney,CultureofAnimalCells:AManualofBasicTechnique,3rded.，Wiley-Liss，1994，將其在此通過引入作為參考。除了上述的，對于表達(dá)IL-31RA和全長0SMR卩的BaF3細(xì)胞的實(shí)例，參見公開的美國專利出版號20030224487(Sprecher，Cindy等，2003)。通常，預(yù)測細(xì)胞因子具有四-ct螺旋結(jié)構(gòu)，螺旋A、C和D在配體-受體相互作用中最為重要，并且在家族成員之間是更高度保守的。參考SEQIDNO:2中顯示的人IL-31氨基酸序列，比對IL-31、人IL-3和人細(xì)胞因子氨基酸序列，可預(yù)測IL-31螺旋A由氨基酸殘基38-52確定；螺旋B由氨基酸殘基83-98確定；螺旋C由氨基酸殘基104-117確定；而螺旋D由氨基酸殘基137-152確定；如在SEQIDN0:2中顯示的。結(jié)構(gòu)分析顯示A/B環(huán)長，B/C環(huán)短，而C/D環(huán)長。這種環(huán)結(jié)構(gòu)導(dǎo)致上-上-下-下的螺旋結(jié)構(gòu)?；谶@4-螺旋束結(jié)構(gòu)，IL-31中保守的半胱氨酸殘基對應(yīng)在這里描述的SEQIDNO:2的氨基酸殘基72、133和147，以及SEQIDNQ:11的氨基酸殘基74、137和151。一致的半胱氨酸位置是對四-螺旋-束結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步確認(rèn)。在IL-31中也高度保守的是如在SEQIDNO:2中殘基43處顯示的Glu殘基。IL-31的這些螺旋可能是通過在此描述的抗體進(jìn)行抑制、減少或中和，來阻斷IL-31通過其同源受體進(jìn)行信號傳遞的作用的特異性靶標(biāo)。基于人和鼠IL-31的序列比較，發(fā)現(xiàn)保守殘基在預(yù)測編碼a螺旋C和D的區(qū)域內(nèi)。編碼在此描述的人IL-31多肽區(qū)、結(jié)構(gòu)域、基序、殘基和序列的相應(yīng)多聚核苷酸如在SEQIDN0:1中顯示。IL-31的這些螺旋可能是通過在此描述的抗體進(jìn)行抑制、減少或中和，來阻斷IL-31通過其同源受體進(jìn)行信號傳遞的作用的特異性靶標(biāo)。人和鼠IL-31之間螺旋D是相對保守的，而螺旋C是最保守的。雖然這兩種物種在該區(qū)域都具有占優(yōu)勢的酸性氨基酸，但差異可導(dǎo)致IL-31和它的受體IL-31RA(包括單體、異二聚或多聚體受體)之間的相互作用的種特異性。IL-31的環(huán)A/B和螺旋B在邊界上是保守的，并且在物種之間，螺旋C通過環(huán)C/D到螺旋D是最保守的；在該區(qū)域中的保守性暗示了它在功能上是重要的。人和鼠IL-31的D螺旋也是保守的。IL-31RA受體拮抗劑可通過在IL-31螺旋D中的突變來設(shè)計。這些突變可包括從殘基Thrl56(SEQIDNO:2)截短蛋白質(zhì)，或者保留使得配體結(jié)合受體，但減少信號傳遞活性的殘基。用于制備編碼在此描述的抗體的多聚核苷酸(包括DNA和RNA)的方法是本領(lǐng)域熟知的?？刹捎卯惲蚯杷犭姨崛。笸ㄟ^在CsCl梯度中離心分離來制備總RNA(Chirgwin等，Biochemistry18:52-94，1979)?？刹捎肁viv和Leder的方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA!1408-12，1972)，從總RNA制備聚(A)+RNA?；パa(bǔ)DNA(cDNA)用已知的方法從聚(A)+RNA制備。備選地，可分離基因組DNA。隨后，通過例如雜交或PCR來鑒定和分離編碼IL-31抗體的多聚核苷酸。鼠IL-31的直系同源物的多聚核苷酸序列已得以確定并在SEQIDNO:3中顯示。鼠IL-31的成熟序列經(jīng)推斷開始于Met,，如SEQIDNO:4中顯示的，其對應(yīng)人序列中的Met!,如在SEQIDN0:2中顯示的。組織分析顯示，在睪丸、腦、CD90+細(xì)胞、前列腺細(xì)胞、唾液腺和皮膚中發(fā)現(xiàn)了鼠IL-31的表達(dá)。對來自293T細(xì)胞的純化的IL-31的進(jìn)一步N-端序列測定分析顯示，如在SEQIDN0:4中顯示的，N-端位于殘基31(Ala)，同時成熟的多肽由氨基酸殘基31(Ala)至163(Cys)組成(如在SEQIDNO:4中顯示)?？梢援a(chǎn)生如SEQIDNO:2中顯示的IL-31蛋白質(zhì)序列的Hopp/Woods親水性圖(Hopp等，Proc.Natl.Acad.Sci.78:3824-3828，1981、Hopp，J.Immun.Meth.88:1-18,1986和Triquier等，ProteinEngineering11:153-169，1998)。該圖是基于6-殘基窗口。忽略了埋藏的G、S和T殘基以及暴露的H、Y和W殘基。例如，在人IL-31中，親水性區(qū)域包含SEQIDNO:2的氨基酸殘基54-59、SEQIDNO:2的氨基酸殘基129-134、SEQIDNO:2的氨基酸殘基53-58、SEQIDNO:2的氨基酸殘基35-40和SEQIDNO:2的氨基酸殘基33-38。例如，在鼠IL-31中，親水性區(qū)域包含SEQIDNO:11的氨基酸殘基34-39、SEQIDNO:11的氨基酸殘基46-51、SEQIDNO:11的氨基酸殘基131-163、SEQIDNO:11的氨基酸殘基158-163和SEQIDNO:11的氨基酸殘基157-162。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員將會理解，當(dāng)設(shè)計IL-31多肽的氨基酸序列中的修飾時，將會考慮親水性或疏水性，以便不會破壞整個結(jié)構(gòu)和生物學(xué)性質(zhì)。置換的特定目標(biāo)是選自Val、Leu和Ile，或者M(jìn)et、Gly、Ser、Ala、Tyr和Trp的疏水性殘基。例如，容許取代的殘基可包括Val、Leu和Ile,或者M(jìn)et、Gly、Ser、Ala、Tyr和Trp殘基，如SEQIDNO:2中顯示。在SEQIDNO:2和SEQIDNO:11中位置的保守的半胱氨酸殘基將相對不容許置換。本發(fā)明還包括結(jié)合IL-31多肽的功能片段和編碼這種功能片段的核普酸分子的抗體。如在此定義的，"功能性"IL-31或其片段表征為它的增殖或分化活性、它誘導(dǎo)或抑制特定的細(xì)胞功能的能力，或者它特異性結(jié)合至抗-IL-31抗體或IL-31RA或抗體或這些受體的IL-31RA/0SMRP異二聚體(可溶的或固定的)的能力。如先前在這里描述的，IL-31表征為含有螺旋A(氨基酸殘基38-52)、螺旋B(氨基酸殘基83-98)、螺旋C(氨基酸殘基104-117)和螺旋D(氨基酸殘基137-152)的四-螺旋-束結(jié)構(gòu)，如SEQIDNO:2中顯示的。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了融合蛋白，所述的融合蛋白包含(a)含有一個或多個如上描述的螺旋的多肽分子；和(b)含有一個或多個這些螺旋的功能性片段。該融合蛋白的其它多肽部分可由另外的四-螺旋-束細(xì)胞因子，例如IL-15、IL-2、IL-4和GMCSF，或者由促使該融合蛋白分泌的非天然和/或不相關(guān)的分泌信號肽提供。本發(fā)明還提供了結(jié)合至多肽片段或肽的抗體，所述的多肽片段或肽含有在此描述的IL-31多肽的帶有表位的部分。這種片段或肽可含有"免疫原性表位"，其為當(dāng)整個蛋白質(zhì)用作免疫源時，引起抗體應(yīng)答的蛋白質(zhì)的一部分。帶有免疫原性表位的肽可用標(biāo)準(zhǔn)的方法鑒定(參見，例如Geysen等，Proc.Nat'1Acad.Sci.USA81.:3998(1983))?？贵w結(jié)合這些功能性片段導(dǎo)致抑制、阻斷、中和和/或減少了IL-31在其同源受體上的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。比較而言，多肽片段或肽可含有"抗原表位"，其為抗體可特異性與其結(jié)合的蛋白質(zhì)分子的區(qū)域。某些表位由線性或連續(xù)的一段氨基酸組成，并且這種表位的抗原性不會受變性劑破壞。本領(lǐng)域已經(jīng)知道，能模擬蛋白質(zhì)表位的相對短的合成肽可用于刺激產(chǎn)生對抗該蛋白質(zhì)的抗體(參見，例如Sutcliffe等，Science219:660(1983))。因此，的抗體(例如，中和抗體)。Hopp/Woods親水性圖可用于確定具有最大抗原潛力的區(qū)域(Hopp等，1981，同時以及Hopp,l986，同上)。例如，在人IL-31中，親水性區(qū)域包括SEQIDNO:2的氨基酸殘基54-59、SEQIDNO:2的氨基酸殘基129-134、SEQIDNO:2的氨基酸殘基53-58、SEQIDNO:2的氨基酸殘基35-40，以及SEQIDNO:2的氨基酸殘基33-38。例如，在鼠IL-31中，親水性區(qū)域包括SEQIDNO:11的氨基酸殘基34-39、SEQIDNO:11的氨基酸殘基46-51、SEQIDNO:11的氨基酸殘基131-136、SEQIDNO:11的氨基酸殘基158-163，以及SEQIDNO:11的氨基酸殘基157-162。帶有抗原表位的肽和多肽優(yōu)選含有SEQIDNO:2或SEQIDNO:4的至少4至10個氨基酸，至少10至14個氨基酸，或者約14至約30個氨基酸。這種帶有表位的肽和多肽可由IL-31多肽的片段，或通過化學(xué)肽合成產(chǎn)生，如在此描述的。此外，表位可通過隨機(jī)肽文庫的噬菌體展示選擇(參見，例如Lane和Stephen,Curr.Opin.Immunol.^268(1993);以及Cortese等，Curr.Opin.Biotechnol.7:616(1996))。用于鑒定表位和從含有表位的小肽獲得抗體的標(biāo)準(zhǔn)方法例如,由Mole,"EpitopeMapping,，，inMethodsinMolecularBiology,Vol.10，Manson(ed.)，pages105-116(TheHumanaPress公司，1992)、Price,"ProductionandCharacterizationofSyntheticPeptide-DerivedAntibodies,，，inMonoclonalAntibodies:Production,Engineering,andClinicalApplication,Ritter和Ladyman(eds.)，pages60-84(CambridgeUniversityPress1995)，以及Coligan等(eds.)，CurrentProtocolsinImmunology,pages9.3.1—9.3.5和pages9.4.1-9.4.11(JohnWiley&Sons1997)描述。如在此描述的抗體的活性可采用多種測量增殖和/或與表達(dá)IL-31RA受體的細(xì)胞結(jié)合的測定法，通過它們抑制或減少增殖的能力來測量。特別重要的是IL-31-依賴性細(xì)胞的改變。工程化為IL-31-依賴性的合適的細(xì)胞系包括IL-3-依賴性BaF3細(xì)胞系(Palacios和Stei騰tz，Cell41:727-734,1985、Mathey-Prevot等，Mol.Cell.Biol.6:4133-4135，1986)、FDC-P1(Hapel等，Blood64:786-790，1984)和M07e(Kiss等，Leukemia7:235-240，1993)。生長因子-依賴性細(xì)胞系可根據(jù)公開的方法建立(例如，Greenberger等，LeukemiaRes.8:363—375，1984;Dexter等，Baum等編輯，ExperimentalHematologyToday,8thAnn.Mtg.Int.Soc.Exp.H固tol.1979，145-156，1980)。在此描述的抗-IL-31抗體的活性可通過基于硅的生物感受器微生理測量儀測量，該儀器可測量與受體結(jié)合以及隨后的生理細(xì)胞反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞外酸化率(acidificationrate)或質(zhì)子分泌(protonexcretion)。一種示例性裝置是由MolecularDevices,Sunnyvale,CA生產(chǎn)的CytosensorTM孩t生理測量4義測量。多種細(xì)胞反應(yīng)，例如細(xì)胞增殖、離子轉(zhuǎn)移、能量生產(chǎn)、炎癥應(yīng)答、調(diào)節(jié)和受體激活等都可通過本方法測量。參見，例如McConne11，H.M.等，Science257:1906-1912，1992;Pitchford，S.等，Meth.Enzymol.228:84-108，1997;Arimilli，S.等，JImmunol.Meth.212:49-59，1998;VanLiefde，I.等，Eur.J.Pharmacol.346:87-95，1998。拮抗劑還可用作用于鑒定配體-受體相互作用位點(diǎn)的研究試劑。拮抗劑可用于抑制參與調(diào)控紅細(xì)胞生成的細(xì)胞的擴(kuò)增、增殖、激活和/或分化。IL-31活性的抑制劑(IL-31拮抗劑)包括抗-IL-31抗體和可溶性IL-31受體，以及其它肽和非肽制劑(包括核酶)。抑制IL-31的活性可通過多種測定法測量。除了在此公開的那些測定法，可在多種設(shè)計用來測量受體結(jié)合、IL-31-依賴性細(xì)胞反應(yīng)的刺激/抑制或IL-31RA受體-表達(dá)細(xì)胞的增殖的測定法中，檢測樣品對IL-31活性的抑制。IL-31-結(jié)合多肽也可用于配體的純化。將該多肽固定在在使用條件下穩(wěn)定的固體載體，例如瓊脂糖小球、交聯(lián)瓊脂糖、玻璃、纖維素樹脂、基于硅的樹脂(silica-basedresins)、聚苯乙烯、交聯(lián)聚丙烯酰胺或類似的材料上。用于將多肽連接至固體載體的方法是本領(lǐng)域已知的，并包括胺化學(xué)、溴化氰活化、N-羥基琥珀酰亞胺活化、環(huán)氧化物活化、巰基活化和酰肼活化。通常將會使得到的介質(zhì)成形為柱的形式，并且讓含有配體的流體通過該柱一次或多次以使得配體結(jié)合至受體多肽。隨后，改變鹽濃度、促溶劑(鹽酸胍)或pH，用以破壞配體-受體結(jié)合來洗脫出配體。可有利地采用利用配體-結(jié)合受體(或抗體，補(bǔ)體/抗補(bǔ)體對的一個成員)或其結(jié)合片段的檢測系統(tǒng)，以及可商業(yè)獲得的生物感受器裝置(BIAcore，PharmaciaBiosensor,Piscataway，NJ)。將這種受體、抗體、補(bǔ)體/抗補(bǔ)體對的成員或片段固定在受體芯片表面上。該裝置的4吏用由Karlsson，J.Immunol.Methods145:229-40，1991以及Cunningham和Wells，J.Mol.Biol.234:554—63，1993/>開。使用胺或巰基化學(xué)，將受體、抗體、成員或片段共價連接至葡聚糖纖維上，葡聚糖纖維連接流式細(xì)胞儀(flowcell)中的金膜。讓試驗(yàn)樣品通過該儀器。如果樣品中存在配體、表位或補(bǔ)體/抗補(bǔ)體對的相對的成員，則它會分別結(jié)合上述固定的受體、抗體或組成成分，導(dǎo)致介質(zhì)的屈光率改變，其可檢測為金膜的質(zhì)子表面共振的改變。該系統(tǒng)能夠測定結(jié)合速率和解離速率，可從中計算出結(jié)合親合力，并評估結(jié)合的化學(xué)定量關(guān)系。備選地，配體/受體結(jié)合可用SELDI(TM)技術(shù)(Ciphergen公司，PaloAlto，CA)分析。IL-31抗體可用于阻斷致炎性IL-31的生物作用，并可用作如在此描述的多種疾病的抗-炎性治療劑。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會理解，抗原性的、帶有表位的多肽含有至少6個，優(yōu)選至少9個，并且更優(yōu)選至少15至約30個IL-31多肽(例如SEQIDNO:2)的連續(xù)氨基酸殘基。含有更大部分的IL-31多肽，即從30至IOO個殘基直至全長的氨基酸序列的多肽也包括在內(nèi)?？乖蛎庖咴员砦贿€可包括連接的標(biāo)記、佐劑、賦形物和載體，如在此描述的。合適的抗原包括由SEQIDNO:2的氨基酸號24至氨基酸號164,或者其連續(xù)的9-141個氨基酸片段編碼的IL-31多肽。其它合適的抗原包括，全長和成熟的IL-31、如在此描述的IL-31四-螺旋-束結(jié)構(gòu)的螺旋A-D，以及單獨(dú)的或多個螺旋A、B、C和D。優(yōu)選用作抗原的肽是親水性肽，例如本領(lǐng)域技術(shù)人員從如在此描述的疏水性圖預(yù)測的那些親水性肽，如SEQIDNO:2的氨基酸殘基114-119、101-105、126-131、113-118和158-162，以及SEQIDNO:11的氨基酸殘基34-39、46-51、131-136、158-163和157-162。此外，將例如采用DNASTARProtean程序(DNASTAR公司，Madison,WI)，通過Jameson-Wolf圖預(yù)測的IL-31抗原表位用作優(yōu)選的抗原，并且很容易由本領(lǐng)域的技術(shù)人員確定。描述地進(jìn)行分離和純化。用于制備和分離多克隆和單克隆抗體的方法是本領(lǐng)域熟知的。參見,例如CurrentProtocolsinImmunology,Cooligan等，(eds.)，NationalInstitutesofHealth,JohnWileyandSons,Inc.,1995;Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual,SecondEdition,ColdSpringHarbor,NY，1989;以及Hurrell,J.G.R.，Ed.，MonoclonalHybridomaAntibodies:TechniquesandApplications,CRCPress,Inc.，BocaRaton，F(xiàn)L,1982。對本領(lǐng)域一般技術(shù)人員顯而易見的是，多克隆抗體可通過用IL-31多肽或其片段給多種溫血動物例如馬、奶牛、山羊、綿羊、狗、雞、兔、小鼠和大鼠接種來產(chǎn)生。IL-31多肽的免疫原性可通過利用佐劑，例如明礬(氫氧化鋁)或弗氏完全佐劑或不完全佐劑來增強(qiáng)?？捎糜诿庖叩亩嚯倪€包括融合多肽，例如IL-31或其部分與免疫球蛋白多肽或者與麥芽糖-結(jié)合蛋白的融合。多肽免疫源可以是全長的分子或其部分。如果多肽部分是"類半抗原"，則可將該部分有利地結(jié)合或連接至大分子栽體(例如鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)或破傷風(fēng)毒素)來用于免疫。如果1)抗體顯示出閾水平的結(jié)合活性，和2)它們不會與相關(guān)的多肽分子顯著交聯(lián)，則這些抗體認(rèn)為是特異性結(jié)合。如果這里的抗-IL-31抗體以比與對照(非-IL-31)多肽的親合力大至少IO倍的親合力結(jié)合IL-31多肽、肽或表位，則測定了結(jié)合的閥水平。優(yōu)選的是，抗體顯示出106M—i或更大的親合力(Ka)，優(yōu)選107M—i或更大，更優(yōu)選1(TM—!或更大，并且最優(yōu)選109NT或更大?？贵w的親合力可例如通過Scatchard分析(Scatchard，G.,Aim.NYAcad.Sci.51:660-672，1949),由本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員容易地測定。例如通過檢測IL-31多肽而不是已知的相關(guān)多肽的抗體，用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白印跡分析(Ausubel等，ibid.)來顯示抗-IL-31抗體是否不會與相關(guān)的多肽分子顯著交聯(lián)。已知的相關(guān)多肽的實(shí)例是在當(dāng)前領(lǐng)域中公開的那些，例如已知的直系同源物，和paralog，以及蛋白質(zhì)家族中類似的已知成員。篩選也可采用非人IL-31和IL-31突變型多肽完成。此外，抗體可"相對已知的相關(guān)多肽來篩選"，以分離出特異性結(jié)合IL-31多肽的群體。例如，讓產(chǎn)生來對抗IL-31的抗體吸附至粘附在不溶解基質(zhì)上的相關(guān)多肽；對IL-31特異性的抗體將會在適當(dāng)?shù)木彌_條件下流過基質(zhì)。篩選使得能分離不與已知的密切相關(guān)多肽發(fā)生交叉反應(yīng)的多克隆和單克隆抗體(Antibodies:ALaboratoryManual,Harlow和Lane(eds.)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988;CurrentProtocolsinImmunology,Cooligan，等(eds.)，NationalInstitutesofHealth,JohnWileyandSons,Inc.,1995)。特異性抗體的篩選和分離是本領(lǐng)域熟知的。參見，F(xiàn)undamentalImmunology,Paul(eds.)，RavenPress,1993;Getzoff等，Adv.inImmunol.1—98，1988;MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice，Goding,J.W.(eds.),AcademicPressLtd.，1996;Benjamin等，Ann.Rev.Immunol.2:67-101，1984。特異性結(jié)合的抗-IL-31抗體可通過本領(lǐng)域中，以及在下文中公開的許多方法檢測。單克隆抗體可例如通過用純化的成熟重組人IL-31多肽(SEQIN0:2的氨基酸殘基27(Leu)至167(Thr))，或這里列出的表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生的鼠直系同源物，來免疫斯普拉-道來氏大鼠(CharlesRiverLaboratories,Wilmington,MA)而制備。將每只大鼠給予初次的腹膜內(nèi)(IP)注射，注射弗氏完全佐劑(Pierce,Rockford，IL)中的100jag純化的人重組IL-31蛋白質(zhì)，之后每兩周加強(qiáng)IP注射弗氏不完全佐劑中的50Mg純化的重組蛋白質(zhì)。在實(shí)施第三次加強(qiáng)注射后7至10天，將動物放血并收集血清。通過ELISA鑒定人IL-31-特異性大鼠血清樣品中靶向生物素化的人IL-31的特異性抗體的滴定度。從2只高滴度的大鼠中采集脾細(xì)胞和淋巴節(jié)細(xì)胞，并將其用PEG1500,在兩個獨(dú)立的融合步驟中融合至SP2/0(鼠)骨髓瘤細(xì)胞(脾細(xì)胞對骨髓瘤細(xì)胞為4:1的融合比率，"AntibodiesALaboratoryManual,E.Harlow和D.Lane,ColdSpringHarborPress)。在融合后生長10天后，通過ELISA鑒定產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤群。進(jìn)一步分析在兩種ELISA方法中都為陽性的雜交瘤群，分析它們阻斷或減少純化的重組IL-31的受體結(jié)合活性的能力("中和測定")。將只通過ELISA或者通過ELISA和"中和測定"產(chǎn)生陽性結(jié)果的雜交瘤群體通過有限稀釋來克隆至少兩次。對從組織培養(yǎng)基中純化的單克隆抗體進(jìn)行鑒定，鑒定它們在ELISA中定量測定重組和天然人IL-31的效用。選擇抗體并進(jìn)行定量分析。對從組織培養(yǎng)基中純化的單克隆抗體進(jìn)行鑒定，鑒定它們阻斷或減少BaF3/MPL-IL-31細(xì)胞上的純化的重組huIL-31的受體結(jié)合活性("中和測定")的能力。以這種方式確定了大量"中和性"單克隆抗體。然后，可將所描述的表達(dá)人IL-31的中和性單克隆抗體的雜交瘤作為原始的保藏物在布達(dá)佩斯條約下，交托給美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC;ManassasVA)專利保藏。單克隆抗體可通過用經(jīng)裂解和純化的IL-31重組融合蛋白免疫路易鼠(RocklandImmunochemicals,Gilbertsvi1le，PA)而制備。對每只大鼠給予初次腹膜內(nèi)(IP)注射，注射弗氏完全佐劑(Pierce,Rockford，IL)中的IOOjug純化的重組融合蛋白，之后每兩周加強(qiáng)IP注射弗氏不完全佐劑中的50Mg純化的重組蛋白質(zhì)，進(jìn)行四周。在最初的四周免疫后，每兩周實(shí)施加強(qiáng)IP注射弗氏不完全佐劑中的50Mg經(jīng)裂解純化的重組蛋白質(zhì)，實(shí)施四周，所述的重組蛋白質(zhì)偶聯(lián)至載體蛋白鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH，Pierce,Rockford,IL)。在實(shí)施第四次加強(qiáng)注射后7至10天，將動物放血并收集血清。采用500ng/ml純化的重組融合蛋白IL-31-Fc作為特異性抗體靶標(biāo)，并將不相關(guān)的融合蛋白用作非-特異性抗體靶標(biāo)，通過ELISA來鑒定IL-31-特異性的大鼠血清樣品。從一只或多只高滴度的大鼠中釆集脾細(xì)胞，并在優(yōu)化的PEG-介導(dǎo)的融合方法(RocklandImmunochemicals)中將其融合至SP2/0(鼠)骨髓瘤細(xì)胞。在融合后生長12天后，采用500ng/ml每種純化的IL-31重組融合蛋白作為特異性抗體靶標(biāo)，并將不相關(guān)的融合蛋白用作非-特異性抗體靶標(biāo)，通過ELISA來鑒定產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤群體。對只對特異性抗體靶標(biāo)呈陽性的雜交瘤群進(jìn)行進(jìn)一步分析，分析它們阻斷或減少BaF3/MPL-IL-31細(xì)胞上的重組huIL-31的受體結(jié)合活性的能力("中和測定")，以及通過FACS分析結(jié)合抗體靶標(biāo)的能力。將在ELISA測定中產(chǎn)生特異性陽性結(jié)果，以及在FACS或"中和測定"中產(chǎn)生陽性結(jié)果的雜交瘤群通過有限稀釋來克隆至少兩次。以類似的方式產(chǎn)生五只大鼠的抗-小鼠雜交瘤，并分別給定下列克隆名稱克隆271.9.4.2.6、克隆271.26.6.6.1、克隆271.33.1.2.2、克隆271.33.3.2.1和克隆271.39.4.6.5。見實(shí)施例1。由這些克隆產(chǎn)生的單克隆抗體可通過多種方式鑒定，所述的方式包括分類法(Miming)(即測定是否每種抗體能抑制任何其它結(jié)合物的結(jié)合)、相對親合力，以及中和作用。單克隆抗體顯示屬于兩種獨(dú)立的表位類(bin),克隆271.33.3.2.1結(jié)合至與一個獨(dú)立的表位，而其它四種結(jié)合至另一表位。這四種單克隆抗體的相對親合力在實(shí)施例14中描述?？梢援a(chǎn)生單克隆抗體的結(jié)合親合力。將山羊-抗-大鼠IgG-Fcy特異性抗體(Jackson)固定在CM5Biacore芯片上。優(yōu)化該測定法以使每個mAb結(jié)合至抗-大鼠捕獲表面上，并隨后將一濃度系列的IL-31注射通過mAb來觀察結(jié)合常數(shù)(Ka)和解離常數(shù)(Kd)。在每次運(yùn)行后，通過2次注射20mMHCl來使表面再生為抗-大鼠抗體。產(chǎn)生了每種抗體的數(shù)據(jù)，并采用評估軟件(BIAevaluationsoftwareversion3.2，PharmaciaBlAcore，Uppsala,Sweden)來評估抗-IL-31抗體結(jié)合IL-31蛋白質(zhì)的動力學(xué)。鼠的抗-人IL-31mAb可如下產(chǎn)生。將6至12周大的敲除了IL-31基因的小鼠以每兩周一次方案，通過腹膜內(nèi)注射25-50ug與Ribi佐劑(Sigma)以1:1(V:V)混合的可溶性人IL-31-tnuFc蛋白質(zhì)來免疫。在第三次免疫后7至1G天，通過眶后放血來獲取血液樣品，采集血清并評估其在中和測定法(例如，在這里所描述的)中抑制IL-31結(jié)合的能力，以及在FACS染色測定法中使IL-31轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞染色(相對于未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞)的能力。按如上描述的繼續(xù)免疫小鼠并提取和評估血液樣品直到中和滴定度達(dá)到穩(wěn)定水平。在這時，對具有最高中和滴定度的小鼠血管內(nèi)注射25-50ugPBS中的可溶性IL-31-Fc蛋白質(zhì)。3天后，采集這些小鼠的脾和淋巴結(jié)，并采用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法，用本領(lǐng)域中的小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)細(xì)胞或其它合適的細(xì)胞系，來將它們用于雜交瘤的產(chǎn)生(例如，參見Kearney,J.F.等,JImmunol.123:1548-50，1979;和Lane,R.D.JImmunolMethods81:223-8，1985)?？稍谌诤?-IO天后，采用HRP綴合的山羊抗-小鼠K和抗-入輕鏈的第二步驟制劑，通過ELISA，根據(jù)它們結(jié)合IL-31-muFc蛋白質(zhì)的能力來對雜交瘤上清液進(jìn)行初次篩選，以鑒定結(jié)合的小鼠抗體。生物化學(xué)確認(rèn)推定的抗-IL-31mAb識別的靶分子(IL-31)的確是IL-31可通過標(biāo)準(zhǔn)的免疫沉淀，之后通過SDS-PAGE分析或蛋白質(zhì)印法來完成，這兩種方法都采用來自IL-31轉(zhuǎn)染的對未經(jīng)轉(zhuǎn)染的Baf3細(xì)胞的可溶性膜制劑。對mAb進(jìn)行檢測，檢測它們特異性免疫沉淀或蛋白質(zhì)印跡可溶性IL-31-muFc蛋白質(zhì)的能力。對從組織培養(yǎng)基中純化的單克隆抗體進(jìn)行鑒定，鑒定它們在中和測定法中阻斷或抑制IL-31結(jié)合其受體的能力。以這種方式確定了20種"中和性"單克隆抗體。在第一輪克隆后已確定這20種的IO種為"好的中和劑"克隆292.72.3、克隆292.118.6、克隆292.63.5、克隆292.64.6、克隆292.84.1、克隆292.109.4、克隆292.12.3、克隆292.51.5、克隆292.39.5和克隆292.105.4。在第一輪克隆后，其它的IO種具有下列克隆名稱克隆294.35.2、克隆294.146.5、克隆292.152.4、克隆292.154.4、克隆294.154.5、克隆294.35.3、克隆291.78.4、克隆294.155.6、克隆294.158.5、克隆294.163.2和克隆294.144.3。將特異性的單克隆抗體通過第二輪克隆，并且再次鑒定它們在中和測定法中阻斷或抑制IL-31結(jié)合其受體的能力。在第二輪克隆后，"好的中和劑"的克隆名稱是克隆292.12.3.1、克隆292.63.5.3、克隆292.72.3.1、克隆292.84.1.6、克隆292.118.6.4、克隆292.64.6.5.5、克隆292.39.5.3、克隆292.51.5.2、克隆292.109.4.4和克隆292.105.4.1。其它10種中的6種具有下列克隆名稱克隆292.152.4.1、克隆294.158.5.2、克隆294.32.2.6.3、克隆294.144.3.5、克隆294.154.5.3和克隆294.163.2.1。在布達(dá)佩斯條約下，將上述表達(dá)人IL-31的中和性單克隆抗體的雜交瘤作為原始存放物交托給美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC;ManassasVA)patentdepository,并且給予下歹'JATCC登i己號克隆292.12.3.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6815)、克隆292.72.3.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6816)、克隆292.63.5.3(ATCC專利保藏名稱PTA-6829)、克隆292.118.6.4(ATCC專利保藏名稱PTA-6830)、克隆294.163.2.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6831)、克隆292.84.1.6(ATCC專利保藏名稱PTA-6871)、克隆294.35.2.6.3(ATCC專利保藏名稱PTA-6872)、克隆294.154.5.6(ATCC專利保藏名稱PTA-6875)和克隆294.144.3.5(ATCC專利保藏名稱PTA-6873)。在布達(dá)佩斯條約下，將在此描述的表達(dá)小鼠IL-31的中和單克隆抗體的一種雜交瘤作為原始存放物交托給美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC;ManassasVA)patentdepository,并給予下歹寸ATCC登^己號克隆271.26.6.6.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6874)。由這些雜交瘤克隆產(chǎn)生的單克隆抗體可在含有2mML-谷氨酰胺、100jng/mL青霉素和100Mg/mL硫酸鏈霉素，以及10%FetalCloneISerum(HycloneLaboratories)的90%Iscove，sModifiedDulbecco，s培養(yǎng)基的生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)。可通過在37'C和5-6%的CO下，以2x1()5個細(xì)胞/ml起始培養(yǎng)并維持在1x105和5x105個細(xì)胞/ml之間來使克隆增殖?？稍陔S后的轉(zhuǎn)移后讓細(xì)胞適應(yīng)無血清條件。將冷凍的細(xì)胞存儲于90%的血清、10%的DMSO中并存儲于液氮冷藏箱內(nèi)的氣相中。對組織培養(yǎng)基中的單克隆抗體進(jìn)行鑒定，鑒定它們在有純化的重組蛋白人IL-31的情況下生長時，阻斷、抑制、防止或減少受體結(jié)合的能力。例如，由這些克隆產(chǎn)生的單克隆抗體可通過多種方式鑒定，所述的方法包括分類法(即測定是否每種抗體能抑制任何其它結(jié)合物的結(jié)合)、相對親合力，以及中和作用。IO種好的中和抗體顯示處于相同的表位類中，其它單克隆抗體則歸為三個不同的表位類。另外，所述好的中和抗體中的8種是IgGl同種型，而其它兩種是IgG2a同種型。用山羊抗鼠FcpAb捕獲來自雜交瘤上清液的單克隆抗體，并測量生物素化的IL-31的表觀結(jié)合親合力(EC50)。在這些測定條件下，好的中和劑具有最低且相當(dāng)?shù)腅C50值~4ng/mLBt-IL31。弱的中和劑的表觀親合力的范圍是~10ng/mL至236ng/mLBt-IL31?？赏ㄟ^多種方法來檢測通過在此描述的方法產(chǎn)生的單克隆抗體的中和作用。例如，可采用如在公開的美國專利申請(參見出版號20030224487,Sprecher，Cindy等，2003)中描述的熒光素酶測定法。另外，中和作用可通過測量在存在配體和單克隆抗體時，角質(zhì)細(xì)月包培養(yǎng)物中致炎趨化因子例如TARC和MDC的產(chǎn)生的減少來檢測。中和作用還可通過在此描述的體內(nèi)模型測量。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體是本發(fā)明的人抗原-結(jié)合抗體片段，并且包括但不限于，F(xiàn)ab、Fab，和F(ab，)2、Fd、單鏈Fvs(scFv)、單鏈抗體、二硫鍵-連接的Fvs(sdFv)和含有VL或VH結(jié)構(gòu)域的片段。抗原-結(jié)合抗體片段(包括單鏈抗體)可以只含有可變區(qū)，或者含有可變區(qū)與全部或部分以下區(qū)域絞鏈區(qū)、CH1、Cm和ch3結(jié)構(gòu)域的組合。還包含于本發(fā)明內(nèi)的是也含有可變區(qū)與絞鏈區(qū)、CH1、Ch2和結(jié)構(gòu)域的任意組合的抗原-結(jié)合片段。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體可以是單一特異性的、雙特異性的、三特異性的或有更多的多特異性。多特異性抗體可以是對本發(fā)明多肽的不同表位有特異性，或者可以是對本發(fā)明多肽以及異源表位，例如異源多肽或固體載體物質(zhì)兩者都有特異性。參見，例如PCT出版物W093/17715、W092/08802、W091/00360、WO92/05793、Tutt等，J.Immunol.147:60-69(1991)、美國專利號4,474,893、4，714，681、4，925，648、5,573,920、5,601,819、Kostelny等，J.I隨no1.148:1547-1553(1992)。本發(fā)明還包括功能上等價于上述抗體的經(jīng)遺傳改變的抗體。優(yōu)選提供增強(qiáng)的穩(wěn)定性和/或治療效果的經(jīng)修飾的抗體。經(jīng)修飾的抗體的實(shí)例包括，具有氨基酸殘基的保守置換，以及一個或多個不會顯著有害改變抗原結(jié)合效用的氨基酸的缺失或添加的那些抗體。置換可從改變或修飾一個或多個氨基酸殘基到完全重新設(shè)計一個區(qū)域，只要治療效果得以維持?？煞g后修飾(例如，乙?；土姿峄?或合成修飾(例如，連接標(biāo)記基團(tuán))本發(fā)明的抗體。遺傳改變的抗體還包括源于抗IL-31抗體的嵌合抗體。嵌合抗體含有源自小鼠或大鼠的可變區(qū)以及源自人的恒定區(qū)，這樣在施用給人受試者時，該嵌合抗體具有更長的半衰期并且是較低免疫原性的。制備嵌合抗體的方法是本領(lǐng)域已知的?？蓪⑦@些抗體的可變區(qū)與人IgG的恒定區(qū)連接，以形成期望的嵌合抗體。本發(fā)明中使用的遺傳改變的抗-IL-31抗體包括在此描述的人源化形式的抗體。人源化抗體含有小鼠供體免疫球蛋白的CDR以及人受體免疫球蛋白的重鏈和輕鏈框架區(qū)。制備人源化抗體的方法公開于美國專利號5301101、5585089、5693762和6180370中(將它們每一篇通過全文引入作為參考)。然后，可將這些抗體的CDR移植到任意選擇的人框架區(qū)內(nèi)，這是本領(lǐng)域已知的，以便產(chǎn)生期望的人源化抗體。本發(fā)明的抗體可用它們識別或特異性結(jié)合的本發(fā)明的表位或多肽部分來描述和說明。表位或多肽部分可以如在此描述的，例如通過N-端和C-端位置，通過連續(xù)氨基酸殘基的大小，或在表和圖中列出的來說明。特異性結(jié)合本發(fā)明的任意表位或多肽的抗體也可排除在外。因此，本發(fā)明包括特異性結(jié)合本發(fā)明多肽的抗體，并允許排除特異性結(jié)合本發(fā)明多肽的抗體。本發(fā)明還提供了竟?fàn)幮砸种茊慰寺】贵w結(jié)合至本發(fā)明的多肽，優(yōu)選SEQIDNO:2或SEQIDN0:4的多肽的抗體。竟?fàn)幮砸种瓶赏ㄟ^本領(lǐng)域的任何已知方法測定，例如，釆用在此描述的竟?fàn)幮越Y(jié)合測定法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的抗體至少90%、至少80%、至少70%、至60°/?；蛑辽?0°/。地竟?fàn)幮砸种票景l(fā)明的單克隆抗體結(jié)合至SEQIDNO:2或SEQIDNO:4的多肽。本發(fā)明還提供了竟?fàn)幮砸种瓶贵w結(jié)合至本發(fā)明的表位的抗體，如通過本領(lǐng)域中用于測定竟?fàn)幮越Y(jié)合的任意已知方法，例如在此描述的免疫測定法測定。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體至少90%、至少80%、至少70%、至60%或至少50%地竟?fàn)幮砸种屏伺c表位的結(jié)合。本發(fā)明的抗體包括經(jīng)修飾的衍生物，即通過將任何類型的分子共因型應(yīng)答。例如，但不作為限制，抗體衍生物包括已例如通過糖基化、乙?；⒕垡叶蓟?、磷酸化、酰胺化、通過已知的保護(hù)基團(tuán)/阻斷基團(tuán)的衍生、溶蛋白性裂解、連接至細(xì)胞配體或其它蛋白質(zhì)等修飾的抗體。眾多化學(xué)修飾的任意一種可通過已知的技術(shù)完成，包括，但不限于特異性化學(xué)裂解、乙?；?、曱?；⒁旅顾氐拇x合成等。另外，衍生物可含有一種或多種非-典型的氨基酸。本發(fā)明抗體也包括在哺乳動物，優(yōu)選人中具有長于15天，優(yōu)選長于20天、長于25天、長于30天、長于35天、長于40天、長于45天、長于2個月、長于3個月、長于4個月或長于5個月的半衰期(例如，血清半衰期)的抗體或其片段。在哺乳動物，優(yōu)選人中，本發(fā)明的抗體或其片段增加的半衰期導(dǎo)致哺乳動物中所述抗體或抗體片段的血清滴定度更高，并從而減少了所述抗體或抗體片段的施用頻率和/或降低了要施用的上述抗體或抗體片段的濃度。具有增加的體內(nèi)半衰期的抗體或其片段可通過本領(lǐng)域中那些技術(shù)人員已知的技術(shù)產(chǎn)生。例如，具有增加的體內(nèi)半衰期的抗體或其片段可通過修飾(例如，取代、刪除或添加)已確定為參與Fc結(jié)構(gòu)域和FcRn受體之間的相互作用的氨基酸殘基來產(chǎn)生(參見，例如國際出版物號W097/34631和W002/060919，將其在此通過全文引入作為參考)。具有增加的體內(nèi)半衰期的抗體或其片段可通過將聚合物分子，例如高分子量的聚乙二醇(PEG)連接至所述的抗體或抗體片段來產(chǎn)生?？梢杂没虿挥枚喙δ苓B接物，通過將PEG位點(diǎn)-專一性綴合至所述抗體或抗體片段的N-或C-端，或者通過存在于賴氨酸殘基上的s-氨基基團(tuán)，將PEG連接至所述的抗體或抗體片段上。將會使用導(dǎo)致生物活性損失最小化的線性或分支聚合物。綴合水平將會通過SDS-PAGE和質(zhì)鐠法密切監(jiān)控，以確保PEG分子適當(dāng)?shù)鼐Y合至抗體。未反應(yīng)的PEG可通過，例如分子排阻色譜或離子交換色譜來與抗體-PEG綴合物分離。基酸置換，其基本上不會影響抗原結(jié)合i其它的i疫球蛋白功能。保守置換意指組合例如gly，ala;val，ile，leu;asp，glu;asn，gln;ser，thr;lys，arg;以及phe，tyr。用于使非-人抗體人源化的方法是本領(lǐng)域中所熟知的。通常，人源化免疫球蛋白，包括人源化抗體，已通過基因工程構(gòu)建。先前已描述的大多數(shù)人源化免疫球蛋白(Jones等，如前述所引用的；Verhoeyen等，如前述所引用的；Riechmann等，如前述所引用的)含有與特殊的人免疫球蛋白鏈(受體)的框架區(qū)一致的框架區(qū)、以及來自非-人供體免疫球蛋白鏈的三個CDR。特別地，人源化抗體是來自結(jié)合期望的抗原的非-人種抗體的、具有來自非-人種的一個或多個互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)和來自人免疫球蛋白分子的框架區(qū)的抗體分子。本發(fā)明包括這樣的標(biāo)準(zhǔn)，通過該標(biāo)準(zhǔn)，選擇人源化免疫球蛋白鏈的框架中的有限數(shù)量氨基酸，使其與供體而不是受體中那些位置處的氨基酸相同，以便增加含有人源化免疫球蛋白鏈的抗體的親合力。本發(fā)明的抗體部分是基于這樣的模式產(chǎn)生在先前產(chǎn)生人源化抗體(例如，用小鼠抗體作為CDR的來源)的方法中導(dǎo)致親合力喪失的兩個起作用的原因是(1)當(dāng)小鼠CDR與人框架結(jié)合時，靠近CDR的框架區(qū)中的氨基酸變成是人的而不是小鼠的。盡管不愿受理論束縛，這些改變的氨基酸可能使CDR稍微變形，因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生了與供體小鼠抗體中不同的靜電力或疏水性力，并且變形的CDR可能不會與抗原產(chǎn)生與CDR在供體抗體中進(jìn)行的一樣有效的接觸；以及(2)靠近CDR，但不是它的一部分(即，仍然是框架區(qū)的一部分)的初始小鼠抗體中的氨基酸可與抗原進(jìn)行有助于親合性的接觸。當(dāng)抗體進(jìn)行人源化時喪失了這些氨基酸，因?yàn)樗械目蚣馨被岫际侨说?。為了避免這些問題，并且為了產(chǎn)生對期望的抗原具有非常強(qiáng)的親合力的人源化抗體，本發(fā)明釆用了一條或多條下列原則用于設(shè)計人源化免疫球蛋白。同樣，所述標(biāo)準(zhǔn)可單獨(dú)使用，或者當(dāng)需要時組合使用，來獲得期望的親合力或其它特性。一條原則是，作為受體，釆用來自與要進(jìn)行人源化的供體免疫球蛋白顯著同源的特殊的人免疫球蛋白的框架區(qū)，或者采用來自許多人抗體的共有框架區(qū)。例如，比較數(shù)據(jù)庫(例如，NationalBiomedicalResearchFoundationProteinIdentificationResource)中的小鼠重鏈(或輕鏈)可變區(qū)與人重鏈(或輕鏈)可變區(qū)的序列顯示，對于不同的人區(qū)域，同源性程度變化很大，通常約40%至約60-70%。通過選擇與供體免疫球蛋白的重鏈(各自的輕鏈)可變區(qū)最同源的人重鏈(各自的輕鏈)可變區(qū)作為受體免疫球蛋白，在從供體免疫球蛋白變成人源化免疫球蛋白中將會改變較少的氨基酸。因此，盡管再次不愿受理論束綽，據(jù)信僅存在更小的可能性來改變CDR附近的氨基酸而使它們的構(gòu)象變形。此外，含有人源化免疫球蛋白鏈的人源化抗體的精確的總體形狀可更接近類似于供體抗體的形狀，這也減少了使CDR變形的可能性。通常，將會選擇代表性收集的至少約10至20種不同的人重鏈中的，3-5個最同源的重鏈可變區(qū)序列之一來作為受體，以提供重鏈框架，并且對輕鏈也類似操作。優(yōu)選地，將會使用l-3個最同源的可變區(qū)中的一種。所選擇的受體免疫球蛋白鏈將最優(yōu)選在框架區(qū)與供體免疫球蛋白具有至少約65%的同源性。在許多情形中，將來自相同人抗體的輕鏈和重鏈用作受體序列可認(rèn)為是優(yōu)選的，以確保人源化的輕鏈和重鏈將會彼此發(fā)生有利的接觸。在該情況下，供體的輕鏈和重鏈將會只與來自其整個序列已知的人抗體，，J:i口Eu、Lay、Pom、Wol、Sie、Gal、0u和WEA抗體的鏈進(jìn)4亍比較(Kabat等，如前述所引用的；有時候，人鏈的最后幾個氨基酸是未知的并且必須根據(jù)與其它人抗體的同源性來推斷)。將會選擇其中輕鏈和重鏈可變區(qū)序列(一并考慮)整體與供體的輕鏈和重鏈可變區(qū)序列最同源的人抗體。有時，將會更偏重于重鏈序列。所選擇的人抗體則將會提供輕鏈和重鏈?zhǔn)荏w序列。實(shí)際上，經(jīng)常發(fā)現(xiàn)人Eu抗體會起到該作用。根據(jù)所謂的"最佳-匹配，，方法，相對于已知的人可變-結(jié)構(gòu)域序列的整個庫，篩選嚙齒動物抗體的可變結(jié)構(gòu)域序列。然后，把與嚙齒動物的序列最接近的人序列用作人源化抗體的人框架(FR)(Sims等，J.Immunol.，151:2296(1993);Chothia等，J.Mol.Biol.，196:901(1987))。另一種方法采用了一種特殊框架，該框架源自特殊輕鏈或重鏈亞組的所有人抗體的共有序列。相同的框架可用于多種不同的人源化抗體(Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992);Presta等，J.Immnol.，151:2623(1993))。不管怎樣選擇受體(acceptor)免疫球蛋白，更高的親合力可通過選擇人源化免疫球蛋白鏈框架中的少量氨基酸，使其與供體而不是受體中那些位置的氨基酸一樣來實(shí)現(xiàn)。通常，人框架區(qū)中的框架殘基將會用來自CDR供體抗體的相應(yīng)殘基取代，以改變，優(yōu)選提高抗原結(jié)合。這些框架取代可通過本領(lǐng)域熟知的方法確定，例如通過模擬CDR和框架殘基的相互作用來確定對抗原結(jié)合重要的框架殘基，并通過序列比較來確定在特殊位置的特殊框架殘基。(參見，例如Queen等，美國專利號5，585，089;Riechmann等，Nature332:323(1988)，其在此通過全文引入作為參考)。可釆用多種本領(lǐng)于已知的技術(shù)來使抗體人源化，例如CDR-嫁接(EP239,400、PCT出版物WO91/09967、美國專利5，225，539、5，530，101和5，585，089)、鑲嵌術(shù)(veneering)或表面重建(resurfacing)(EP592,106;EP519,596;Padlan，MolecularImmunology28(4/5):489-498(1991);Studnicka等，ProteinEngineering7(6):805-814(1994);Roguska.等，PNAS91:969-973(1994))，以及鏈替換(美國專利號5565332)。因此，這種"人源化"抗體是其中基本上少于完整的人可變結(jié)構(gòu)域已由非-人種的相應(yīng)序列取代的嵌合抗體(美國專利號4816567)。第二條原則是，下列類型確定了什么氨基酸可從供體選擇。優(yōu)選地，在一種這些類型中的許多或所有氨基酸位置，實(shí)際上將會選擇供體氨基酸。類型1:CDR中的氨基酸位置由Kabat等(如前述所引用的)確定。類型2:如果人受體免疫球蛋白框架中的氨基酸是特殊的(即，"稀有的"，如在此使用的，其表示在典型的數(shù)據(jù)庫中，在少于約20%，但通常少于約10%的人重鏈(各自的輕鏈)V區(qū)域序列中的該位置存在的氨基酸)，并且如果在該位置的供體氨基酸對于人序列而言是典型的(即"普通的"，如在此使用的，其表示在典型的數(shù)據(jù)庫中，在大于約25%，但通常大于約50%的序列中存在的氨基酸)，那么可選擇供體氨基酸而不是受體氨基酸。該標(biāo)準(zhǔn)有助于確保人框架中的非典型氨基酸不會破壞抗體結(jié)構(gòu)。此外，通過用來自供體抗體的，對于人抗體是典型的氨基酸取代特殊的氨基酸，可以使人源化抗體具有更低的免疫原性。將所有的人輕鏈和重鏈可變區(qū)序列分別分成彼此特別同源并且在一些關(guān)鍵性位置具有相同的氨基酸的序列"亞組，，(Kabat等，如前引用的)。當(dāng)確定人受體序列中的氨基酸序列在人序列中是是"稀有，，還是"普通，，時，通常將優(yōu)選僅考慮在相同亞組中的那些人序列作為受體序列。類型3:在人源化免疫球蛋白鏈一級序列中直接與一個或多個3CDR鄰接的位置中，可選擇供體氨基酸而不是受體氨基酸。如果從受體中選擇，這些氨基酸特別容易與CDR中的氨基酸相互作用，并且容易使供體CDR變形并減小親合力。而且，鄰近的氨基酸可能直接與抗原相互作用(Amit等，Science,233，747-753(1986)，將其在此通過引入作為參考)，從供體選擇這些氨基酸可能對于保留在原始抗體中提供親合力的所有抗原接觸是理想的。類型4:代表性的初始供體抗體的一個3維模型顯示，在CDR外的一些氨基酸接近CDR，并很有可能通過氫鍵、范德華力、疏水性相互作用等與CDR內(nèi)的氨基酸相互作用。在那些氨基酸位置處，可選擇供體免疫球蛋白氨基酸而不是受體免疫球蛋白氨基酸。根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)的氨基酸將將在CDR中的一些原子約3埃單位內(nèi)具有側(cè)鏈原子，并且一定含有可根據(jù)確定的化學(xué)力，例如上面列出的那些與CDR原子相互作用的原子。在可形成氫鍵的原子的情況下，3埃是在它們的原子核之間測量，但是對于不形成鍵的原子，3埃是在它們的范德華表面之間測量。因此，在后一種情況中，對于認(rèn)為能夠相互作用的原子，原子核必須在約6埃(3+范德華半徑)內(nèi)。在許多情況下，原子核將相距4或5至6埃。在確定氨基酸是否能與CDR相互作用中，優(yōu)選不將重鏈CDR2的最后8個氨基酸考慮為CDR的一部分，因?yàn)閺慕Y(jié)構(gòu)觀點(diǎn)來看，這8個氨基酸更表現(xiàn)為框架部分。能夠與CDR內(nèi)的氨基酸相互作用，并因此其屬于類型4的、框架中的氨基酸可以另外的方式區(qū)分。每個框架氨基酸的溶劑可接近表面積以以下兩種方式計算(l)在完整的抗體中，以及(2)在由已去除其CDR的抗體組成的假定分子中。約10平方?；蚋蟮倪@些數(shù)值間的顯著差異顯示，溶劑可接近的框架氨基酸至少部分受CDR阻擋，并因此顯示，該氨基酸與CDR接觸。氨基酸的溶劑可接近表面積可基于抗體的3維模型，用本領(lǐng)域已知的算法計算(例如，Connolly，J.Appl.Cryst.16，548(1983)以及Lee和Richards,J.Mol.Biol.55，379(1971),將兩者在此通過引入作為參考)?？蚣馨被嵊袝r候還可以通過影響另一個框架氨基酸的構(gòu)象，使其接著與CDR接觸，從而間接與CDR相互作用。已知框架中多個位置處的氨基酸能夠與許多抗體中的CDR相互作用(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196，901(1987)，Chothia等，Nature342，877(1989)，以及Tramontane)等，J.Mol.Biol.215，175(1990)，所有這些都在這里通過引入作為參考)，值得注意的是輕鏈的位置2、48、64和71和重鏈的位置26-30、71和94(根據(jù)Kabat，如前述所引用的，編號)，并且因此這些氨基酸通常會在類型4中。通常，除了這些之外本發(fā)明的人源化免疫球蛋白將會包括類型4中的供體氨基酸(其中有所不同)。在輕鏈的位置35處以及重鏈的位置93-103處的氨基酸也可能會與CDR相互作用。在所有這些編號的位置上，優(yōu)選選擇供體氨基酸而不是受體氨基酸(當(dāng)它們不同時)進(jìn)人源化免疫球蛋白中。在另一方面，可能是類型4中的某些位置例如輕鏈的第5個氨基酸有時可選自受體免疫球蛋白，而不喪失人源化免疫球蛋白中的親合力。Chothia和Lesk(如前述所引用的)與Kabat等(如前述所引用的)不同地定義了CDR。值得注意的是，將CDR1定義為包含殘基26-32。因此，Riechmann等(如前述所引用的)從供體免疫球蛋白中選擇這些氨基酸。同樣重要的是，對抗體進(jìn)行人源化而保留對抗原的高親和性以及其它有利的生物學(xué)特性。為了達(dá)到這個目的，根據(jù)優(yōu)選的方法，通過利用親本序列和人源化序列的三維模型分析親本序列和多種概念化的人源化產(chǎn)品的方法制備人源化抗體。說明和顯示所選擇的候選免疫球蛋白序列的可能三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)的計算機(jī)程序是可利用的。觀察這些顯示結(jié)果使得能分析殘基在候選免疫球蛋白序列的功能中可能起到的作用，即分析影響候選免疫球蛋白結(jié)合其抗原的能力的殘基。以這種方式，可從受體和重要的序列中選擇并組合FR殘基而使得獲得期望的抗體特性，例如增加的對靶標(biāo)抗原的親合力。一般而言，CDR殘基直接并最充分涉及影響抗原結(jié)合。用于產(chǎn)生蛋白質(zhì)例如抗體的模型的計算機(jī)程序通常是可獲得的，并且是本領(lǐng)域那些技術(shù)人員熟知的(參見，Levy等，Biochemistry,28，7168-7175(1989);Bruccoleri等，Nature,335，564-568(1988);Chothia等，Science,233，755-758(1986)，將所有這些文獻(xiàn)在此通過引入作為參考)。這些不構(gòu)成本發(fā)明的部分。的確，因?yàn)樗锌贵w都具有類似的結(jié)構(gòu)，如果需要，可將可從BrookhavenProteinDataBank獲得的已知抗體結(jié)構(gòu)用作其它抗體的粗的模型?？缮虡I(yè)獲得的計算機(jī)程序可用于在計算機(jī)屏幕上顯示這些模型，用以計算原子間的距離，并用來估計不同氨基酸相互作用的可能性(參見，F(xiàn)errin等,J.Mol.Graphics,6，13-27(1988))。除了描述人源化免疫球蛋白中的氨基酸在什么時候可取自供體的上述類型外，人源化免疫球蛋白中的某些氨基酸可既不取自供體又不取自受體，只要它們屬于類型5:如果供體免疫球蛋白中給定位置處的氨基酸是人序列所"稀有的，，，并且受體免疫球蛋白中該位置的氨基酸也是人序列"稀有的，，，如上述定義的，則人源化免疫球蛋白中該位置的氨基酸可以選擇為一些人序列的"典型"氨基酸。一種優(yōu)選的選擇是，在與受體序列屬于相同亞組的已知人序列中的該位置最經(jīng)常出現(xiàn)的氨基酸。對于人治療中的使用，人源化抗體通常具有優(yōu)于小鼠或在某些情況下優(yōu)于嵌合抗體的至少3個潛在優(yōu)勢(1)由于效應(yīng)子部分是人的，它可與人免疫系統(tǒng)中的其它部分更好的相互作用(例如，通過補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)或抗體-依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)來更有效地破壞耙細(xì)胞)。(2)人免疫系統(tǒng)將不會將人源化抗體的框架或恒定區(qū)識別成外來鼠抗體或部分外源的嵌合抗體的抗體反應(yīng)弱。(3)已報道注入的小鼠抗體在人循環(huán)中具有比一般抗體的半衰期短許多的半衰期(D.Shaw等，J.Immunol.,138，4534-4538(1987))。使得能施用更少以及較少頻率的劑量。在一個方面，本發(fā)明旨在設(shè)計通過表達(dá)連接至編碼受體人框架區(qū)的DM片段的重組DNA片段產(chǎn)生的人源化抗體，所述的重組DNA片段編碼能夠結(jié)合至期望抗原，例如IL-31的供體免疫球蛋白的重鏈和輕鏈CDR。DNA片段通常將會進(jìn)一步含有可操作性地連接至人源化免疫球蛋白編碼序列的表達(dá)控制DNA序列，包括天然-相關(guān)的或異源的啟動子區(qū)。該表達(dá)控制序列將會是能夠轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染真核宿主細(xì)胞的載體中的真核啟動子系統(tǒng)，但是也可使用用于原核宿主的控制序列。一旦栽體已整合進(jìn)合適的宿主中，將該宿主保持在適合高水平表達(dá)所述核苷酸序列的條件下，并且，根據(jù)需要，之后可收集和純化人源化的輕鏈、重鏈、輕鏈/重鏈二聚體或完整的抗體、結(jié)合片段或其它免疫球蛋白形式(參見，S.Beychok，CellsofImmunoglobulinSynthesis,AcademicPress,N.Y.，(1979),將其在此通過引入作為參考)。人恒定區(qū)DNA序列可按照熟知的方法，從多種人細(xì)胞，但優(yōu)選從永生化B-細(xì)胞中分離(參見，Kabat(如前述所引用的)和WP87/02671)。用于產(chǎn)生本發(fā)明免疫球蛋白的CDR將會類似地源自能夠結(jié)合預(yù)定抗原，例如IL-31的單克隆抗體，并通過熟知的方法在能夠產(chǎn)生抗體的任何合適的哺乳動物源(包括小鼠、大鼠或其它脊推動物)中產(chǎn)生。恒定區(qū)和框架DNA序列的合適的源細(xì)胞，以及用于免疫球蛋白表達(dá)和分泌的宿主細(xì)胞可從許多來源，例如美國典型培養(yǎng)物保藏中心獲得("CatalogueofCel1LinesandHybridomas，，，sixthedition(1988)Rockville，Md.U.S.A.,將其在此通過引入作為參考)。除了特別在此描述的人源化免疫球蛋白外，其它與天然序列"充分同源"的經(jīng)修飾的免疫球蛋白可釆用本領(lǐng)域那些技術(shù)人員熟知的多種重組DNA技術(shù)容易設(shè)計和產(chǎn)生。多種不同的人框架區(qū)可單獨(dú)或組合使用，用作本發(fā)明的人源化免疫球蛋白的基礎(chǔ)。一般而言，基因的修飾可容易通過多種熟知的技術(shù)，例如定位誘變完成(參見，Gillman和Smith,Gene,8,81-97(1979)以及S.Roberts等，Nature,328，731-734(1987)，將兩者在在此通過引入作為參考)。本發(fā)明的人源化抗體包括片段以及完整的抗體。通常，這些片段與它們源自的完整抗體竟?fàn)幗Y(jié)合抗原。片段通常以至少107M.—1，并且通常以108或109M.^的親合力結(jié)合(即在與完整的抗體相同的范圍內(nèi))。人源化的抗體片段包括單獨(dú)的重鏈、輕鏈Fab、Fab，F(xiàn)(ab，)2和Fv。片段通過重組DM技術(shù)，或者通過完整的免疫球蛋白的酶學(xué)性或化學(xué)性分裂產(chǎn)生。對于人源化抗體的進(jìn)一步詳細(xì)的內(nèi)容，可參見歐洲專利No.EP239400、EP592106和EP519596;國際出版物No.W091/09967和W093/17105;美國專利No.5225539、5530101、5565332、5585089、5766886和6407213;以及Padlan，1991，MolecularImmunology28(4/5):489498;Studnicka等，1994,ProteinEngineering7(6):805814;Roguska等，1994，PNAS91:969973;Tan等，2002，J.Immunol.169:111925;Caldas等，2000，ProteinEng.13:35360;Morea等，2000，Methods20:26779;Baca等，1997，J.Biol.Chem.272:1067884;Roguska等，1996，ProteinEng.9:895904;Couto等，1995，CancerRes.55(23Supp):5973s5977s;Couto等，1995，CancerRes.55:171722;Sandhu，1994，Gene150:40910;Pedersen等，1994，J.Mol.Biol.235:95973;Jones等，1986，Nature321:522-525;Reichmann等，1988，Nature332:323-329;以及Presta，1992,Curr.Op.Struct.Biol.2:593—596。已經(jīng)發(fā)展了多種技術(shù)來用于產(chǎn)生抗體片段。傳統(tǒng)上，這些片段通過蛋白水解消化完整的抗體產(chǎn)生(參見，例如Morimoto等，JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24:107-117(1992)和Brennan等，Science,229:81(1985))。然而，這些片段目前可直接由重組宿主細(xì)胞產(chǎn)生。例如，抗體片段可從如上討論的抗體噬菌體文庫中分離。備選地，F(xiàn)ab，-SH片段可從大腸桿菌直接回收并經(jīng)化學(xué)偶聯(lián)而形成F(ab，)2片段(Carter等,Bio/Technology10:163-167(1992))。根據(jù)另一種方法，F(xiàn)(ab，)2片段可從直接重組宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中分離。用于產(chǎn)生抗體片段的其它技術(shù)對熟練從業(yè)人員來說將是顯而易見的。此外，可用于產(chǎn)生單鏈Fv和抗體的技術(shù)的實(shí)例包括在美國專利4946778和5258498、Huston等，MethodsinEnzymology203:46-88(1991)、Shu等，PNAS90:7995-7999(1993),以及Skerra等，Science240:1038-1040(1988)中描述的那些。本發(fā)明包括重組融合或化學(xué)綴合(包括共價和非共價綴合)至本發(fā)明的多肽(或其部分，優(yōu)選該多肽的至少10、20或50個氨基酸)來產(chǎn)生融合蛋白的抗體。因此，本發(fā)明還涉及含有在此描述的抗體的免疫綴合物，其中所述抗體綴合至細(xì)胞毒素劑，例如化學(xué)治療劑、毒素(例如細(xì)菌、真菌、植物或動物源的酶促活性毒素，或其片段)或放射性同位素(即，放射綴合物)。本發(fā)明包括重組融合或化學(xué)綴合(包括共價和非共價綴合)至本發(fā)明的多肽(或其部分，優(yōu)選該多肽的至少IO、20或50個氨基酸)來產(chǎn)生融合蛋白的抗體。融合不一定是直接的，而是可通過連接序列發(fā)生。抗體可以是對不同于本發(fā)明的多肽(或其部分，優(yōu)選多肽的至少10、20或50個氨基酸)特異性的。例如，抗體可通過融合或綴合本發(fā)明多肽至對特殊的細(xì)胞表面受體特異性的抗體，用于體外或體內(nèi)靶向本發(fā)明多肽至特殊的細(xì)胞類型。融合或綴合至本發(fā)明多肽的抗體也可釆用本領(lǐng)域已知的方法，用于體外免疫測定法和提純方法。參見，例如Harbor等，同上，以及PCT出版物WO93/21232、EP439,095、Naramura等，Immunol.Lett.39:91-99(1994)、美國專利5，474，981、Gillies等，PNAS89:1428-1432(1992)、Fell等，J.Immunol.146:2446-2452(1991)，將其通過全文引入作為參考。本發(fā)明進(jìn)一步包括含有融合或綴合至異源多肽序列(例如，不是可變區(qū)的抗體的結(jié)構(gòu)域)的本發(fā)明多肽(例如，含有免疫原性表位或抗原表位的那些多肽)的組合物。例如，本發(fā)明的多肽可融合或綴合至抗體的Fc區(qū)，或其部分。例如，本發(fā)明的多肽(包括其片段或變體)可與免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定結(jié)構(gòu)域，或其部分(Cw、CH2、ch3或它們以及其部分的任意組合)融合，產(chǎn)生嵌合多肽。融合至本發(fā)明多肽的抗體部分可包括恒定區(qū)、絞鏈區(qū)、C^結(jié)構(gòu)域、CK2結(jié)構(gòu)域和Ch3結(jié)枸域，或者全部結(jié)構(gòu)域或其部分的任意組合。多肽也可融合或綴合至上述抗體部分而形成多聚體。例如，與本發(fā)明多肽融合的Fc部分可通過Fc部分之間的二硫鍵形成二聚體。更高的多聚體形式可通過將多肽與IgA和IgM部分融合而產(chǎn)生。用于融合或綴合本發(fā)明的多肽至抗體部分的方法是本領(lǐng)域已知的。參見，例如美國專利號5,336,603、5,622,929、5,359,046、5，349，053、5，447，851、5，112，946、EP307,434、EP367,166、PCT出版物WO96/04388、WO91/06570、Ashkenazi等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:10535-10539(1991)、Zheng等，J.Immunol.154:5590-5600(1995)，以及Vil等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:11337-11341(1992)(將所述的參考文獻(xiàn)通過全文引入作為參考)。作為另一個非限制性實(shí)例，本發(fā)明的多肽和/或抗體(包括其片段或變體)可與白蛋白(包括但不限于重組的人血清白蛋白或其片段或變體(參見，例如美國專利5，876，969，出版于1999年3月2日，EP專利0413622,以及美國專利5，766，883，出版于1998年6月16日，將其在這此通過全文引入作為參考))融合。本發(fā)明的多肽和/或抗體(包括其片段或變體)可融合至異源蛋白質(zhì)(例如免疫球蛋白Fc多肽或人血清白蛋白多肽)的N-或C-末端。編碼本發(fā)明的融合蛋白的多聚核苷酸也包括在本發(fā)明內(nèi)。如上討論的，本發(fā)明的多肽可采用本領(lǐng)域已知的方法，與上迷抗體部分融合或綴合以延長該多肽的體內(nèi)半衰期或用于免疫測定。此外，可將本發(fā)明的多肽融合或綴合至上述抗體部分以促進(jìn)純化。一個^jf的實(shí)例描述了由人CD4-多肽的前兩個結(jié)構(gòu)域和哺乳動物免疫球蛋白的重鏈或輕鏈恒定區(qū)的多個結(jié)構(gòu)域組成的嵌合蛋白質(zhì)。(參見，例如EP394,827;Tra畫cker等，Nature331:84-86(1988))。已證實(shí)了關(guān)于與FcRn結(jié)合伴侶例如IgG或Fc片段綴合的抗原(例如，胰島素)具有增強(qiáng)的遞送抗原穿過上皮屏障到達(dá)免疫系統(tǒng)的能力(參見，例如PCT出版物WO96/22024和W099/04813)。與具有二硫鍵-連接的二聚體結(jié)構(gòu)(由于IgG)的抗體融合或綴合的本發(fā)明多肽也比單獨(dú)的單體分泌性蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段更有效地結(jié)合和中和其它分子。(Fountoulakis等，J.Biochem.270:3958-3964(1995))。在許多情形中，融合蛋白中的Fc部分在治療和診斷中是有利的，并因此可導(dǎo)致，例如改善的藥代動力學(xué)特性。(EPA232,262)。備選地，在融合蛋白已經(jīng)表達(dá)、檢測和純化后除去Fc部分將是期望的。例如，如果融合蛋白用作用于免疫接種的抗原，則Fc部分可能妨礙治療和診斷。在藥物發(fā)現(xiàn)中，例如，已將人蛋白質(zhì)，例如hIL-5與Fc部分融合，以用于鑒定hlL-5的拮抗劑的高通量篩選測定法。(參見，D.Bennett等，J.MolecularRecognition8:52-58(1995);K.Johanson等，J.Biol.Chem.270:9459-9471(1995)0)。該技術(shù)還包括(但不限于)利用雙功能綴合劑(參見例如，U.S.Pat.Nos.5,756,065、5,714,631、5,696,239、5，652，361、5,505,931、5,489,425、5，435，990、5，428，139、5,342,604、5,274,119、4,994,560和5，808，003，特此將它們每一個的內(nèi)容通過全文引入作為參考)。此外，可將本發(fā)明的多肽(例如抗體或其片段)融合至標(biāo)記序列，例如肽來幫助它們的純化。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，編碼本發(fā)明多肽的核酸(包括，但不限于編碼免疫原和/或抗原表位的核酸)也可與作為表位標(biāo)簽的目標(biāo)基因(例如，血凝素標(biāo)簽"HA"或flag標(biāo)簽)重組，來幫助檢測和純化所表達(dá)的多肽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，標(biāo)記氨基酸序列是六-組氨酸肽，例如pQE載體(QIAGEN,Inc.,9259EtonAvenue,Chatsworth，Calif.，91311)中提供的標(biāo)記，其中，多數(shù)可商業(yè)獲得。如Gentz等，Proc.Natl.Acad.Sci，USA86:821-824(1989)中所描述的，例如，將六-組氨酸用于方便純化融合蛋白?？捎糜诩兓钠渌臉?biāo)簽包括，但不限于對應(yīng)源于流感血凝素蛋白質(zhì)的表位的"HA"標(biāo)記(Wilson等，Cell37:767(1984)),以及"flag"標(biāo)簽。本發(fā)明進(jìn)一步包括綴合至診斷劑或治療劑的抗體或其片段。該抗體可在診斷上用于，例如，監(jiān)控肺瘤的發(fā)生或進(jìn)展(作為臨床檢測程序的部分)，來例如測定所提供的治療、診斷、檢測和/或預(yù)防方案的效力?？赏ㄟ^將該抗體偶聯(lián)至可檢測物質(zhì)來方便檢測?？蓹z測物質(zhì)的實(shí)例包括多種酶、輔基、焚光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)、生物發(fā)光物質(zhì)、放射性物質(zhì)、使用多種正電子發(fā)射斷層掃描術(shù)的正電子發(fā)射金屬，以及非放射性順磁性金屬離子。關(guān)于可與抗體綴合而用作根據(jù)本發(fā)明的診斷劑的金屬離子，參見，例如美國專利4741900。合適的酶的實(shí)例包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、P-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基復(fù)合物的實(shí)例包括抗生蛋白鏈菌素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合適的熒光物質(zhì)的實(shí)例包括7-羥基香豆素、熒光素、異硫氰酸熒光素、若丹明、二氯三溱基氨基熒光素、丹磺酰氯或藻紅蛋白；發(fā)光物質(zhì)的實(shí)例包括魯米諾；生物發(fā)光物質(zhì)的實(shí)例包括熒光素酶、熒光素和水母發(fā)光蛋白；并且合適的放射性物質(zhì)的實(shí)例包括1251、131I、mIn或"Tc。此外，抗體或其片段可與治療性部分例如細(xì)胞毒素，例如細(xì)胞抑制劑或殺細(xì)胞劑、治療劑或放射性金屬離子綴合。細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒素劑包括對細(xì)胞有害的任何制劑。實(shí)例包括紫杉醇(paclitaxol)，細(xì)胞松弛素B、D短桿菌肽、溴化乙錠、依米丁(emetine)、絲裂霉素、依托泊香(etoposide)、替尼泊戒(tenoposide)、長春新械、長春花堿、秋水仙堿、阿霉素、紅比霉素、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxyanthracindione)、米托蒽酉昆(mitoxantrone)、光輝霉素、放線菌素D、l-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)和嘌呤霉素(puromycin)及其類似物或同系物。治療劑包括，但不限于抗代i射物(例如，曱氨喋呤、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧咬氨烯咪胺)、烷化劑(例如氮芥、瘤可寧(thioepachlorambucil)、美法蘭(melphalan)、卡氮芥(carmustine)(BSNU)和羅氮芥(lomustine)(CCNU)、環(huán)磷酰胺(cyclothosphamide)、白消安、二溴甘露醇、鏈唑霉素、絲裂霉素C，以及順二氯二氨鉑(II)(DDP)順鉑)、蒽環(huán)類抗生素(例如，紅比霉素(以前叫道諾霉素(daunomycin))和阿霉素)、抗生素(例如》文線菌素(dactinomycin)(以前叫更生霉素(actinomycin))、博來霉素、光輝霉素和安曲霉素(AMC)),以及抗有絲分裂制劑(例如，長春新堿和長春花堿)。本發(fā)明的綴合物可用于調(diào)節(jié)給定的生物應(yīng)答，不能把治療劑或藥物部分理解為限于傳統(tǒng)的化學(xué)治療劑。例如，藥物部分可以是具有期望的生物活性的蛋白質(zhì)或多肽。這種蛋白質(zhì)可包括，例如，毒素如相思豆毒素、篦麻毒素A、假單胞菌外毒素或白喉毒素；蛋白質(zhì)例如腫瘤壞死因子、ct-干擾素、干擾素、神經(jīng)生長因子、血小板衍生的生長因子、組織纖維蛋白溶酶原激活劑、血栓形成制劑(thromboticagent)或抗-血栓形成劑，例如血管他丁或內(nèi)皮他?。换蛘呱飸?yīng)答調(diào)節(jié)劑例如，淋巴因子、白細(xì)胞介素-1("IL-1")、白細(xì)胞介素-2("IL-2")、白細(xì)胞介素-6("IL-6")、粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子("GM-CSF")、粒細(xì)胞集落刺激因子("G-CSF")，或其它生長因子。抗體還可連接至固體載體，其尤其可用于靶標(biāo)抗原的免疫測定或純化。這種固體載體包括，但不限于玻璃、纖維素、聚丙烯酰胺、尼龍、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。用于將這種治療劑部分與抗體綴合的技術(shù)是熟知的，參見，例如Arnon等，"MonoclonalAntibodiesForImmunotargetingOfDrugsInCancerTherapy"，inMonoclonalAntibodiesAndCancerTherapy,Reisfeld等，(eds.)，pp.243-56(AlanR.Liss，Inc.1985);Hellstrom等，"AntibodiesForDrugDelivery"，inControlledDrugDelivery(2ndEd.),Robinson等，(eds.)，pp.623-53(MarcelDekker，Inc.1987)5Thorpe,"AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapy:AReview"，inMonoclonalAntibodies"84:BiologicalAndCIinicalApplications,Pinchera等,(eds.)，pp.475-506(1985);"Analysis,Results,AndFutureProspectiveOfTheTherapeuticUseOfRadiolabeledAntibodyInCancerTherapy"，inMonoclonalAntibodiesForCancerDetectionAndTherapy,Baldwin等，(eds.)，pp.303-16(AcademicPress1985)，以及Thorpe等，"ThePreparationAndCytotoxicPropertiesOfAntibody-ToxinConjugates",Immunol.Rev.62:119-58(1982)。備選地，如由Segal在美國專利467698G中描述的，抗體可與另一種抗體綴合而形成抗體異綴合物(heteroconjugate)，將其在在此通過全文引入作為參考。可將單獨(dú)施用或與細(xì)胞毒素因子和/或細(xì)胞因子組合施用的、與或不與治療劑部分綴合的抗體用作治療劑。在另一實(shí)施方案中，可將抗體綴合至"受體(receptor)"(例如抗生蛋白鏈菌素)用于腫瘤預(yù)靶向(pretargeting)，其中將該抗體-受體綴合物施用給患者，隨后用清除劑將未結(jié)合的綴合物從循環(huán)中去除，然后施用與細(xì)胞毒素劑(例如放射性核素)綴合的"配體"(例如卵白素)。蛋白質(zhì)或多肽的抗體。示例性的測定法在Antibodies:ALaboratoryManual,HarlowandLane(Eds.)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988中詳細(xì)描述。這種測定法的代表性實(shí)例包括并行免疫電泳(concurrentimmunoelectrophoresis)、放射免疫測定法、放射免疫沉淀法、酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)、斑點(diǎn)印跡或蛋白質(zhì)印跡測定法、抑制或竟?fàn)帨y定法，以及夾心測定法。另外，可根據(jù)結(jié)合野生型對突變型IL-31蛋白質(zhì)或多肽篩選抗體。IL-31抗體可用于對表達(dá)IL-31的細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)簽；用于通過親和提純來分離IL-31;用于測定IL-31多肽的循環(huán)水平的診斷測定；用于測定或定量可溶性IL-31作為潛在的病理或疾病的標(biāo)志；用于釆用FACS的分析方法；用于篩選表達(dá)庫；用于產(chǎn)生抗-個體基因型抗體；以及用作中和抗體或用作拮抗劑來阻斷體外和體內(nèi)的IL-31活性。合適的直接標(biāo)簽或標(biāo)記包括放射性核素、酶、底物、輔助因子、抑制因子、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、磁性顆粒等；間接標(biāo)簽或標(biāo)記可特征性地使用生物素-親和素或其它補(bǔ)體/抗補(bǔ)體對作為媒介物。在這里，還可以直接或間接地將抗體與藥物、毒素、放射性核素等綴合，并且這些綴合物用于體內(nèi)診斷或治療應(yīng)用。而且，IL-31的抗體或其片段可在測定法，例如本領(lǐng)域已知的蛋白質(zhì)印跡或其它測定法中，用于體外檢測變性的IL-31或其片段。合適的可檢測分子可直接或間接連接至多肽或抗體，并且包括放射性核素、酶、底物、輔助因子、抑制因子、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、磁性顆粒等。合適的細(xì)胞毒素分子可直接或間接連接至多肽或抗體，并且包括細(xì)菌或植物毒素(例如白喉毒素、皂草素、假單胞菌外毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素等)，以及治療性放射性核素，例如碘-131、錸-188或釔-90(可直接連接至多肽或抗體，或者通過利用例如螯合部分來間接連接)。多肽或抗體還可以與細(xì)胞毒類藥物，例如阿霉素綴合。為了間接連接可檢測分子或細(xì)胞毒素分子，可將可檢測分子或細(xì)胞毒素分子與補(bǔ)體/抗補(bǔ)體對的一個成員綴合，而另一個成員則與多肽或抗體部分結(jié)合。為此目的，生物素/抗生蛋白鏈菌素是一種示例性的補(bǔ)體/抗補(bǔ)體對。結(jié)合多肽還可用作IL-31"拮抗劑"來體外和體內(nèi)阻斷IL-31結(jié)合以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。這些抗-IL-31結(jié)合多肽應(yīng)該可用于抑制IL-31活性或蛋白質(zhì)-結(jié)合。多肽-毒素融合蛋白或抗體-毒素融合蛋白可用于靶向的細(xì)胞或組織的抑制或切除(例如，來治療癌細(xì)胞或組織)。備選地，如果所述的多肽具有多個功能結(jié)構(gòu)域(即，活化結(jié)構(gòu)域或受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，加上靶向結(jié)構(gòu)域)，則僅包含靶向結(jié)構(gòu)域的融合蛋白可適合用于引導(dǎo)可檢測分子、細(xì)胞毒素分子或補(bǔ)體分子至目標(biāo)細(xì)胞或組織類型中。在其中僅有該結(jié)構(gòu)域的融合蛋白包括補(bǔ)體分子的情況下，可將抗-補(bǔ)體分子與可檢測分子或細(xì)胞毒素分子綴合。這種結(jié)構(gòu)域-補(bǔ)體分子融合蛋白因而代表了用于細(xì)胞/組織-特異性遞送通用的抗-補(bǔ)體-可檢測/細(xì)胞毒素分子綴合物的通用靼向栽體或媒介物。在另一個實(shí)施方案中，IL-31抗體-細(xì)胞因子融合蛋白可用于體內(nèi)殺死靶組織(例如白血病、淋巴瘤、肺癌、結(jié)腸癌、黑素瘤、胰腺癌、卵巢癌、皮膚癌、血和骨髓癌，或其中表達(dá)IL-31受體的其它癌)(通常參見，Hornick等，Blood89:4437-47，1997)。所描述的融合蛋白能夠使抗體靶向至期望的作用位點(diǎn)，從而提供提高了局部濃度的抗體。合適的IL-31多肽或抗-IL-31抗體靶向不希望有的細(xì)胞或組織(即胂瘤或白血病)，并且融合的細(xì)胞因子介導(dǎo)了提高的由效應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行的革巴細(xì)胞溶解。用于此目的的合適的細(xì)胞因子包括，例如白細(xì)胞介素2和粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)。在又一個實(shí)施方案中，如果IL-31多肽或抗-IL-31抗體靶向血管細(xì)胞或組織，則該多肽或抗體可與放射性核素，并且尤其與發(fā)射放射性核素綴合來減少再狹窄?？蓽y量本發(fā)明的單克隆抗體抑制、阻斷或中和IL-31配體的能力，如通過本領(lǐng)域已知的和在此描述的多種體內(nèi)模型，包括但不限于NC/Nga才莫型、Ova上表皮才莫型(epicutaneousmodel)、慢性過敏反應(yīng)模型和慢性半抗原才莫型(chronichaptenmodel)測定。已經(jīng)將皮膚歸巢T細(xì)胞(skin-homingTCell)和表皮角質(zhì)細(xì)胞牽連于人類皮膚疾病的病理學(xué)中。在人中，IL-31mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)局限于皮膚-歸巢CLA+T細(xì)胞群。因而，IL-31的拮抗劑，包括抗體或受體拮抗劑將可用于治療具有CU+T細(xì)胞表達(dá)的皮膚和表皮疾病。這種疾病包括，例如特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、藥物誘發(fā)的變應(yīng)性反應(yīng)、與皮膚向性病毒和病毒相關(guān)的搔癢癥、白癜風(fēng)、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、斑禿、紅斑痤瘡、普通粉刺、結(jié)節(jié)性癢疹以及大皰性類天皰瘡。趨化因子標(biāo)記例如TARC和MDC可用于測量中和性單克隆抗體對IL-31的效力。如實(shí)施例15中顯示的，用在此描述的抗-IL31抗體治療的抑制效果可通過監(jiān)控TARC和MDC的水平測量。接觸性皮炎過敏性接觸性皮炎可定義為T細(xì)胞介導(dǎo)的對與皮膚接觸的抗原的免疫反應(yīng)。由于變應(yīng)原依賴性T細(xì)胞應(yīng)答很大程度上限于CLA+細(xì)胞群(參見Santamaria-Babi，L.F.，等，JExpMed:181，1935，(1995))，CLA+T細(xì)胞群被認(rèn)為涉及皮炎的引發(fā)。最近的數(shù)據(jù)已發(fā)現(xiàn)，只有記憶性(CD45R0+)CD4+CLA+而不是CD8+T細(xì)胞在響應(yīng)鎳(一種普通的接觸性過敏變應(yīng)原)時增殖并產(chǎn)生了1型(IFN-)和2-型(IL-5)細(xì)胞因子。此外，表達(dá)CLA與CD4、CD45R0(記憶)或CD69組合的細(xì)胞在鎳-特異性刺激后增加，并表達(dá)了趨化因子受體CXCR3、CCR4、CCR10而不是CCR6。參見MoedH.，等，BrJDermatol:51，32，(2004)。在動物模型中，已證明過敏性接觸性皮炎是T-細(xì)胞依賴性的，而且過敏性-應(yīng)答T細(xì)胞遷移到了變應(yīng)原作用位點(diǎn)。一般參見EngemanT.M.,等，JImmunol:164，5207，(2000)、FergusonT.A.&KupperT.S.JImmunol:150，1172，(1993)，以及GorbachevA.V.&FairchildR.L.CritRevImmunol:21,451(2001)。由于CLA+T細(xì)胞產(chǎn)生IL-31并且IL-31刺激皮膚角質(zhì)細(xì)胞可誘發(fā)炎癥促進(jìn)趨化因子，例如TARC和MDC,IL-31可能涉及接觸性皮炎的病理生理學(xué)。在接觸性過敏反應(yīng)的小鼠模型中使用中和性IL-31抗體。參見實(shí)施例8。因此，通過在此描述的抗體中和IL-31可用于通過抑制、減少、中和、防止或阻斷炎癥和/或與疾病相關(guān)的搔抓，來改善接觸性過敏反應(yīng)的臨床效果。特應(yīng)性皮炎特應(yīng)性皮炎(AD)是一種近十年來具有顯著增加的發(fā)病率的、慢性復(fù)發(fā)性炎性皮膚病。臨床上AD表征為高搔癢性的、通常為顯示一個慢性復(fù)發(fā)性病程的表皮剝脫斑和丘滲。AD的診斷主要基于重大的及較小的臨床發(fā)現(xiàn)。參見HanifinJ.M.，ArchDermatol;135，1551(1999)。，組織病理學(xué)顯示為急性病患中的棘細(xì)胞層水腫、過度不全角化和灶性角化不全，然而伴隨有過度不全角化和灶性角化不全、棘皮癥/顆粒層增厚的明顯的表皮超常增生，以及淋巴細(xì)胞和大量肥大細(xì)胞在真皮的血管周圍浸潤是慢性病患的標(biāo)志。T細(xì)胞在組織的局部免疫應(yīng)答的引發(fā)中起著重要的作用，并且有證據(jù)顯示，皮膚-浸潤性T細(xì)胞尤其在皮膚的失調(diào)的免疫應(yīng)答的引發(fā)和維持中起關(guān)鍵作用。在表皮的炎性位點(diǎn)中，約90。/。的浸潤性T細(xì)胞表達(dá)結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞選擇素(在內(nèi)皮上的一種誘導(dǎo)性黏附分子)的皮膚淋巴細(xì)胞-相關(guān)的Ag(CLA+)(在Santamaria-BabiL.F.等，EurJDermatol.14，13，(2004)中綜述)。與對照個體比較，在AD患者中循環(huán)CLA+T細(xì)胞的顯著增加已得以證明(參見，TerakiY.等，BrJDermatol:143，373(2000))，同時其它研究已證明，與CLA-群比較，AD患者的記憶CLA+T細(xì)胞優(yōu)先相應(yīng)變應(yīng)原浸出物(參見Santamaria-Babi,L.F.等，JExpMed:181，1935，(1995))。在人中，已將皮膚特應(yīng)性疾病的發(fā)病機(jī)理與表達(dá)增加水平的Th-2-型細(xì)胞因子，如IL-5和IL-139、10的CLA+T細(xì)胞的增加聯(lián)系起來。參見，AkdisM等，EurJImmunol:30，3533(2000)，以及HamidQ等，JAllergyClinImmunol:98，225(1996)。約6-8周大的NC/Nga小鼠在無非特異性病原體的(非-SPF)條件下圏養(yǎng)時，會自發(fā)地產(chǎn)生類似AD的損傷，其在許多方面類似人AD，包括臨床過程和征兆、組織病理學(xué)和免疫病理學(xué)。相反，保持在SPF條件下的NC/Nga小鼠不會發(fā)生皮膚病損。然而，可通過每周皮內(nèi)注射粗的粉塵螨抗原，來使在SPF實(shí)驗(yàn)室中圏養(yǎng)的NC/Nga小鼠同步發(fā)生自發(fā)性皮膚病損和搔抓行為。參見MatsuokaH等，Allergy:58，139(2003)。因此，NC/Nga中AD的發(fā)生是用于評估用于治療AD的新治療劑的有用模型。除了自發(fā)性AD的NC/Nga模型，使用OVA的小鼠的上表皮致敏作用也可用作模型來在致敏的小鼠的皮膚中，誘導(dǎo)抗原-依賴性表皮和真皮增厚，同時單核細(xì)胞侵潤其中。這通常與總的和特異性IgE的血清水平升高同時發(fā)生，然而，在該模型中一般不會發(fā)生皮膚屏障機(jī)能障礙或搔癢癥。參見SpergelJ.M等，JClinInvest,101:1614，(1998)?？梢孕薷谋痉椒ㄒ员阃ㄟ^用0VA使D011.10OVATCR轉(zhuǎn)基因小鼠致敏來誘導(dǎo)皮膚屏障失調(diào)和搔癢癥。增加能夠識別致敏性抗原的抗原-特異性T細(xì)胞的數(shù)量可增加皮膚的炎癥水平而誘導(dǎo)明顯的皮膚搔抓行為和皮膚苔褲化/鱗屑化。NC/Nga自發(fā)性AD模型和0VA表皮D011.IO模型都可用于研究AD中IL-31和IL-31RA的表達(dá)，以及在此描述的抗體抑制、減少或中和IL-31的效果的能力。見這里的實(shí)施例9和10。在一個使用NC/Nga體內(nèi)模型的研究(實(shí)施例10)中，施用大鼠抗-小鼠IL-31抗體顯示了搔抓行為的減少，但未減少皮炎。在此描述的抗體可用于抑制與皮炎和搔癢性疾病，包括特應(yīng)性皮炎、結(jié)節(jié)性癢滲和濕滲相關(guān)的騷抓行為。單獨(dú)抑制、減少或防止搔抓行為可有效地治療搔癢性疾病，包括但不限于特應(yīng)性皮炎、結(jié)節(jié)性癢滲和濕疹，因?yàn)樯ψバ袨榈耐Ｖ箤蛊ぱ淄Ｖ拱l(fā)展，皮炎的發(fā)生依賴于搔抓行為。用于測量在此描述的抗-IL-31抗體的抑制效果的另外的模型由Umeuchi，H.等，EuropeanJournalofPharmacology,518:133-139，2005,以及由Yoo，J等，J.ExperimentalMedicine,202:541-549，2005描述。因此，通過在此描述的抗體中和IL-31可用于通過抑制、減少、防止或阻斷炎癥和/或與疾病相關(guān)的搔抓行為，來改善皮炎和搔癢性疾病，包括特應(yīng)性皮炎、結(jié)節(jié)性癢滲和濕疹的臨床結(jié)果。藥物-誘導(dǎo)的遲發(fā)型皮膚變應(yīng)性反應(yīng)藥物-引發(fā)的遲發(fā)型皮膚變應(yīng)性反應(yīng)是十分異質(zhì)性的，并且可反映出許多特殊的病理生理事件。參見BrockowK等，Allergy:57，45(2002)。涉及這些反應(yīng)的免疫機(jī)理已顯示為抗體或細(xì)胞介導(dǎo)的。在即發(fā)型藥物過敏中，IgE-介導(dǎo)的抗體反應(yīng)可通過陽性皮膚穿刺和/或皮內(nèi)試驗(yàn)在20分鐘后證明，而對藥物的非-即刻反應(yīng)可在最后用藥長于1小時后發(fā)生，并且通常是T-細(xì)胞介導(dǎo)的。非-即刻T-細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型反應(yīng)可例如在對青霉素類產(chǎn)生有害的藥物反應(yīng)的患者中發(fā)生。已顯示，對青霉素類的增殖性T細(xì)胞反應(yīng)局限于來自青霉素過敏患者的T細(xì)胞的記憶(CD45R0+)CLA+亞群，而CD45R0+CLA-亞群未顯示增殖反應(yīng)。參見BlancaM.，LeyvaL等，BloodCellsMolDis:31，75(2003)。遲發(fā)型過敏(DTH)反應(yīng)可在小鼠中人為地再現(xiàn)，使得能評估可參與DTH反應(yīng)的起始和維持的因子。11-31中和抗體在遲發(fā)型變應(yīng)性反應(yīng)中是有效的。參見實(shí)施例51。中毒性表皮壞死溶解(TEN)是一種非常罕見但非常嚴(yán)重的藥物反應(yīng)，其特征在于伴隨有大量水皰的大范圍表皮細(xì)胞調(diào)亡。研究已經(jīng)顯示，浸潤水皰的淋巴細(xì)胞是CLA+T細(xì)胞并且可顯示出對表皮角質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞毒性。參見LeyvaL等，JAllergyClinImmunol:105，157(2000)，以及NassifA.，Be證ssanA等，JAllergyClinImmunol:114:12092004。已產(chǎn)生了一種轉(zhuǎn)基因小鼠系統(tǒng)來建立TEN的動物模型，所述的轉(zhuǎn)基因小鼠系統(tǒng)中，OVA在角蛋白-5(K5)啟動子的控制下在小鼠的表皮和毛嚢的角質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)。OVA特異性CD8+T細(xì)胞在獲得性地轉(zhuǎn)移進(jìn)K5-0VA小鼠中時，在皮膚-引流淋巴結(jié)中得到激活和增殖并耙向K5-0VA小鼠的皮膚，導(dǎo)致表明TEN的皮膚病損產(chǎn)生。參見AzukizawaH等，EurJImmunol:33，1879(2003)。因此，通過在此描述的抗體中和IL-31,可用于通過抑制、減少、防止或阻斷炎癥和/或與疾病相關(guān)的搔抓行為，來改善TEN的臨床結(jié)果。大皰性類天皰瘡大皰性類天皰瘡是一種表皮下障礙，其表現(xiàn)為表皮下的水皰，伴隨有中性粒細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞的皮膚浸潤。診斷的特征是，對抗表皮和真皮-表皮交界部的特異性黏著蛋白的抗原-特異性抗體的存在。參見JordonR.E等，JAMA:200，751(1967)。通過分析PBL和皮膚水泡T細(xì)胞，來分析T細(xì)胞在大皰性類天皰瘡的發(fā)病機(jī)理中的作用的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了占優(yōu)勢的CLA+T細(xì)胞，其表達(dá)增加水平的Th2-細(xì)胞因子，例如IL-4和IL-13。參見TerakiY等，JInvestDermatol:117，1097(2001)。在全身性皮質(zhì)類固醇治療后的大皰性類天皰瘡患者中，產(chǎn)生白細(xì)胞介素-13的CLA+細(xì)胞而不是CLA-細(xì)胞的頻率顯著減少。皮質(zhì)類固醇治療后CLA+細(xì)胞的減少與臨床改善有關(guān)。參見Teraki，同上。因此，通過在此描述的抗體中和IL-31,可用于通過抑制、減少、防止或阻斷炎癥和/或與疾病相關(guān)的搔抓行為，來改善大皰性類天皰齊的臨床結(jié)果。斑殼(Alopeciaareata)斑禿(AA)認(rèn)為是一種毛嚢的組織-限制性自身免疫性疾病，其中毛嚢活性由于持續(xù)的淋巴細(xì)胞性浸潤活性而受到抑制。AA導(dǎo)致身體任何部位塊狀的全部毛發(fā)脫落，可是不發(fā)生實(shí)際上的毛嚢的喪失，甚至是在無毛病變處。雖然不存在炎癥的臨床征兆，但是活動性疾病位置的皮膚活組織檢查顯示出毛嚢周圍的原發(fā)性CD4+細(xì)胞的淋巴細(xì)胞性炎癥，伴隨有CD8+毛嚢內(nèi)的浸潤。參見KalishR.S.&GilharA.JInvestigDermatolSympProc:8，164(2003)。研究已顯示，頭皮皮膚浸潤性CD4+或CD8+淋巴細(xì)胞表達(dá)CLA并且，在患有AA的個體的外周血液中，CLA+CD4+或CD8+淋巴細(xì)胞的百分比明顯高于正常對照的百分比。此外，患有嚴(yán)重或進(jìn)行性AA的患者與該疾病痊愈的患者比較，顯示出高得多的CLA-陽性，并且CLA+細(xì)胞百分比的;咸少與良好的臨床過禾呈一致。參見YanoS等，ActaDermVenereol:82，82(2002)。因此這些研究表明，CLA+淋巴細(xì)胞可能在AA中起重要作用。異種移植模型已證實(shí)，活化的T細(xì)胞可能在AA的發(fā)病機(jī)理中起作用。移植在棵小鼠上的、來自AA患者的病患處的頭皮再生長了毛發(fā)，同時伴隨有移植物的浸潤性淋巴細(xì)胞的消失并且，將活化的病患處的T細(xì)胞轉(zhuǎn)移至SCID小鼠可使SCID小鼠上的人頭皮移植物毛發(fā)脫落。參見KalishR.S.&GilharA.JInvestigDermatolSympProc:8，164(2003)。多種免疫調(diào)節(jié)療法是對這種疾病的常見治療的一部分，可是這些治療的效力都不一致。參見TangL等，JInvestDermatol:120，400(2003);TangL等，(2004)，以及TangL等，JAmAcadDermatol:49，1013(2003)。然而，它們在有效的動物模型中的使用提供了剖析治療效果的分子機(jī)理的工具。參見ShapiroJ等，JInvestigDermatolSympProc:4，239(1999);TangL等，Oldwineinnewbottles:revivingoldtherapiesforalopeciaareatausingrodentmodels(2003)，以及VermaD.D等，EurJDerinatol:14，332(2004)。因此，通過在此描述的抗體中和IL-31，可用于通過抑制、減少、防止或阻斷炎癥和/或與疾病相關(guān)的搔抓行為，來改善斑禿的臨床結(jié)果。紅斑痤癡(AcneRosacea)/普通粉刺(Acnevulgaris)普通粉刺是一種毛嚢皮脂腺器障礙，為最常見的青春期皮膚問題。毛嚢角質(zhì)化異常認(rèn)為會引起痤瘡病患。紅斑痤瘡?fù)ㄟ^存在有紅色丘疹、膿皰、嚢腫和大面積毛細(xì)管擴(kuò)張，但沒有粉刺(粟粒疹)來同普通粉刺區(qū)分。在普通粉刺的病理生理學(xué)中，皮脂腺增加的皮脂分泌是主要因素。其它的皮脂腺功能也與痤瘡的發(fā)生有關(guān)，包括皮脂的促炎癥反應(yīng)脂類；局部產(chǎn)生的不同的細(xì)胞因子；腺周圍肽和神經(jīng)肽，例如促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素，其通過皮脂細(xì)胞(sebocyte)產(chǎn)生；以及P物質(zhì)，其在痤瘡患者看似健康的腺附近的神經(jīng)末梢中表達(dá)。參見ZouboulisC.C.ClinDermatol:22，360(2004)。雖然尚未知道普通粉刺和紅斑痤瘡的病理生理學(xué)，但臨床觀察和組織病理學(xué)研究表明，毛皮脂腺嚢炎癥可能對紅斑痤瘡和普通粉刺的發(fā)病機(jī)理來說是重要的。對T細(xì)胞亞群浸潤紅斑痤瘡病患處分析的早期研究表明，大多數(shù)T細(xì)胞表達(dá)CD4。參見RufliT.&BuchnerS.A.De皿tologica:169，1(1984)。CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生IL-31并且對皮膚的IL-31表達(dá)的IHC分析顯示，IL-31在皮脂腺和汗腺中表達(dá)。IL-31刺激表皮角質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)了可能導(dǎo)致細(xì)胞浸潤的趨化因子的表達(dá)，表明IL-31可能有助于皮膚中的促炎癥反應(yīng)。參見DillonS.R等，NatImmunol:5，752(2004)。從而，IL-31可能有參與紅斑痤瘡和普通粉刺的病理生理學(xué)。因此，通過在此描述的抗體中和IL-31,可用于通過抑制、減少、防止或阻斷炎癥和/或與疾病相關(guān)的搔抓行為，來改善普通粉刺的臨床結(jié)果。結(jié)節(jié)性癢滲(Prurigonodularis)結(jié)節(jié)性癢疹是由難治療的頑固性搔癢癥引起的、苔蘚化或表皮剝脫的結(jié)節(jié)的滲。當(dāng)長期摩擦導(dǎo)致莒蘚化，而搔抓導(dǎo)致線狀的表皮脫落，在他們發(fā)癢的、受刺激的皮膚處挖擠和摩擦的個體易于產(chǎn)生稱為癢瘆結(jié)節(jié)的明顯增厚的丘疹。雖然結(jié)節(jié)性癢滲不是特應(yīng)性皮炎特異性的，但許多具有這些結(jié)節(jié)的患者也具有特應(yīng)性反應(yīng)，其表現(xiàn)為變應(yīng)性鼻炎、哮喘或食物過敏。T細(xì)胞代表了癢療病患中的大多數(shù)浸潤細(xì)胞，并且這些病患常常代表了特應(yīng)性患者中的多數(shù)搔癢性皮膚病患。用辣椒堿(capsaicin)對結(jié)節(jié)性癢滲的局部治療已證明是一種導(dǎo)致皮膚病患消除的有效且安全的方案，所述辣椒堿是一種在小的感覺皮神經(jīng)中，通過耗盡神經(jīng)肽像P物質(zhì)來千擾對搔癢和疼痛的感覺的抗-搔癢生物堿。參見StanderS等，JAmAcadDermatol:44，471(2001)。用辣椒堿處理來研究NC/Nga小鼠中的搔癢反應(yīng)顯示，幾乎完全阻止了皮炎損傷的自發(fā)性發(fā)展。而且，血清IgE水平的升高受到明顯抑制，并且在辣椒堿治療的小鼠的受損皮膚中，浸潤性嗜酸性細(xì)胞和肥大細(xì)胞的數(shù)量減少。參見MiharaK等，BrJDermatol:151，335(2004)。對該群體的觀察表明，騷抓行為可通過增強(qiáng)多種免疫應(yīng)答來促進(jìn)皮炎的發(fā)展，從而意味著，阻止搔癢感覺和/或搔癢-相關(guān)的搔抓行為可能會是一種對AD的有效治療。參見MiharaK等，BrJDermatol:151，335(2004)。因此，在這里描述的抗-11-31抗體將可用于使AD、結(jié)節(jié)性癢瘆和其它搔癢性疾病的影響最小化，因?yàn)樗鼈冊谶@里顯示能減少NC/Nga小鼠中的搔抓次數(shù)。IL-31的緩慢遞送可在小鼠中誘發(fā)搔癢癥和脫毛癥，之后發(fā)展類似皮炎的皮膚病患，表明IL-31可能誘發(fā)搔癢。參見DillonS.R等，NatImmunol:5，752(2004)。IL-31參與誘導(dǎo)搔癢反應(yīng)可通過兩種方法檢測(i)對用IL-31-處理的小鼠進(jìn)行辣椒堿治療和(ii)用IL-31處理敲除了Tacl基因小鼠，其中所述的敲除了Tacl基因小鼠由于缺乏實(shí)施例52中的神經(jīng)肽的表達(dá)而明顯減少了傷害性疼痛反應(yīng)。另外，中和IL-31在用IL-31處理的小鼠中是否能預(yù)防搔癢癥和脫毛癥已在實(shí)施例12中檢驗(yàn)。因此，通過在此描述的抗體中和IL-31,可用于通過抑制、減少、防止或阻斷炎癥和/或與疾病相關(guān)的搔抓行為，來改善結(jié)節(jié)性癢滲的臨床結(jié)果。與皮膚向性病毒和病毒相關(guān)的搔癢癥外周血液中的單純皰療病毒(HSV)-特異性CD8+T細(xì)胞和從皰療病患處回收的HSV-特異性CD8+T細(xì)胞表達(dá)高水平的CLA,而非-皮膚向性皰滲病毒-特異性的CD8+T細(xì)胞缺少CLA表達(dá)。參見KoelleD.M等，JClinInvest:110，537(2002)。HSV-2反應(yīng)性CD4+T'淋巴細(xì)胞也表達(dá)CLA，但以低于先前觀察到的關(guān)于CD8+T淋巴細(xì)胞的水平表達(dá)。參見GonzalezJ.C等，JInfectDis:191，243(2005)。搔癢癥還與皰疹病毒感染有關(guān)(參見HungK.Y等，BloodPurif16，147(1998))?？墒瞧渌《静±鏗IV也與搔癢性皮膚病患有關(guān)。通常與紅斑丘滲性(erythematopapular)皮膚病患以及嗜伊紅細(xì)胞增多癥有關(guān)的、嚴(yán)重的頑固性搔癢癥是一種在一些非特應(yīng)性、HIV-感染的患者36中觀察到的病狀。參見SinghF.&RudikoffD，AmJClinDermatol;4，177(2003),以及MilazzoF.，PiconiS等，Allergy:54,266(1999)。皮膚-向性病毒與搔癢癥以及CLA+T細(xì)胞之間的關(guān)聯(lián)表明，產(chǎn)生IL-31的T細(xì)胞可能涉及病毒感染的病理生理學(xué)。因此，通過在此描述的抗體中和IL-31,可用于通過抑制、減少、防止或阻斷炎癥和/或與疾病相關(guān)的搔抓行為，來改善與皮膚-向性病毒相關(guān)的搔癢癥的臨床結(jié)果。此外，炎癥是生物體避開侵入物的保護(hù)性應(yīng)答。炎癥是涉及許多細(xì)胞和體液性介質(zhì)的級聯(lián)事件。在一個方面，對炎癥應(yīng)答的抑制可使宿主免疫妥協(xié)；然而，如果讓其未加抑制，炎癥可導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥，包括慢性炎性疾病(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、炎性腸病等)、敗血癥性休克和多器官衰竭。重要地是，這些不同的疾病狀態(tài)擁有共同的炎癥介質(zhì)。表征為炎癥的全體疾病對人的發(fā)病率和死亡率有巨大影響。因此顯然，抗-炎性抗體和結(jié)合多肽，例如在此描述的抗-IL-31抗體和結(jié)合多肽可具有對大量人和動物疾病(從哞喘和變態(tài)反應(yīng)到自身免疫和敗血癥性休克)的重大治療潛力。因而，在此描述的抗-炎性抗IL-31抗體和結(jié)合多肽可在治療上尤其在疾病例如關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒素血癥、炎性腸病、銀屑病、相關(guān)疾病等中，用作在此描述的IL-31拮抗劑。1.關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)炎，包括骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、由損傷引起的關(guān)節(jié)炎性連接(arthriticjoint)等，是普通的炎性病癥，其將會受益于抗-炎性抗體和結(jié)合多肽，例如本發(fā)明的抗IL-31抗體和結(jié)合多肽的治療用途。例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是影響整個身體的全身性疾病，并且是一種最常見形式的關(guān)節(jié)炎。它表征為關(guān)節(jié)處的膜的炎癥，其引起疼痛、僵硬、發(fā)熱(warmth)、發(fā)紅和腫脹。炎癥細(xì)胞釋放出可消化骨和軟骨的酶。作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的結(jié)果，發(fā)炎的關(guān)節(jié)襯里(滑膜)可侵入和損傷骨和軟骨，導(dǎo)致其它生理效應(yīng)中的關(guān)節(jié)變壞和重度疼痛。所涉及的關(guān)節(jié)可能會喪失它的形狀和對準(zhǔn)，導(dǎo)致疼痛和喪失運(yùn)動能力。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種免疫-介導(dǎo)的疾病，特別是表征為炎癥和隨后的組織損傷，導(dǎo)致嚴(yán)重的殘疾和增加死亡率。多種細(xì)胞因子在患風(fēng)濕性關(guān)節(jié)中局部產(chǎn)生。許多研究已證明，IL-1和TNF-a這兩種原型的致炎性細(xì)胞因子，在涉及滑液炎癥和進(jìn)行性關(guān)節(jié)破壞的機(jī)制中起重要作用。的確，在RA患者中施用TNF-a和IL-1抑制劑已導(dǎo)致炎癥的臨床和生物學(xué)病征顯著改善，以及骨質(zhì)侵蝕和軟骨破壞的放射性信號減少。然而，盡管有這些鼓舞人心的結(jié)果，但顯著比例的患者對這些制劑不響應(yīng)，表明其它介質(zhì)也涉及關(guān)節(jié)炎的病理生理學(xué)(Gabay，Expert.Opin.Biol.Ther.2(2):135-149，2002)。那些介質(zhì)之一可能是IL-31,并因而結(jié)合或抑制IL-31的分子，例如抗IL-31抗體或結(jié)合伴侶，可作為有用的治療劑來減少類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，以及其它關(guān)節(jié)炎疾病中的炎癥。在本領(lǐng)域中存在多個已知的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的動物模型。例如，在膠原-誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型中，小鼠產(chǎn)生了非常類似于人風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的慢性炎性關(guān)節(jié)炎。由于CIA具有與RA類似的免疫學(xué)和病理學(xué)特征，這使得它成為用于篩選潛在的人抗-炎癥化合物的理想模型。CIA模型是一種熟知的小鼠模型，其依賴于免疫反應(yīng)和炎癥應(yīng)答以便發(fā)生。免疫應(yīng)答包括B-細(xì)胞和CD4+T-細(xì)I包響應(yīng)作為抗原的膠原的相互作用，并導(dǎo)致抗-膠原抗體的產(chǎn)生。炎癥階段是炎癥介質(zhì)的組織反應(yīng)的結(jié)果，是由于這些抗體中的一些與小鼠的天然膠原交叉-反應(yīng)并激活了補(bǔ)體級聯(lián)。利用CIA模型的一個優(yōu)勢是，發(fā)病機(jī)理的基礎(chǔ)機(jī)制是已知的。已經(jīng)鑒定II型膠原上的相關(guān)T-細(xì)胞和B-細(xì)胞表位，并且已確定與免疫-介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎相關(guān)的多種免疫學(xué)參數(shù)(例如，遲發(fā)型超敏反應(yīng)和抗-膠原抗體)和炎性參數(shù)(例如，細(xì)胞因子、趨化因子和基質(zhì)-降解酶)，并因此可用于在CIA模型中評估試驗(yàn)化合物的效力(Wooley，Curr.Opin.Rheum.3:407-20，1999;Williams等，Immunol.!9784-788，1992;Myers等，LifeSci.61:1861-78，1997，以及Wang等，Immunol.92:8955-959，1995)。將含有可溶性IL-31RA的多肽(包括在此描述的異二聚受體和多聚受體)，例如IL-31RA-Fc4或其它IL-31RA可溶蛋白和融合蛋白施用至這些CIA模型小鼠，可用來評估IL-31RA對改善癥狀和改變病程的用途。作為調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答和炎癥應(yīng)答的分子，IL-31可誘導(dǎo)涉及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)理的SAA的產(chǎn)生，IL-31拮抗劑可減少SAA的體外和體內(nèi)活性，全身或局部施用IL-31拮抗劑，例如抗-IL-31抗體或結(jié)合伴侶、含有IL-31RA的多肽(包括在此描述的異二聚受體和多聚受體)，例如IL-31RA-Fc4或其它IL-31RA可溶蛋白和融合蛋白，可潛在地抑制RA中的炎癥應(yīng)答。其它可能的治療劑包括本發(fā)明的IL-31RA多肽、可溶性異二聚受體多肽和多聚受體多肽，或者抗IL-31抗體或結(jié)合伴倡等。2.內(nèi)毒素血癥內(nèi)毒素血癥是一種通常由傳染原(例如細(xì)菌以及其它傳染性疾病媒介物)、膿毒癥、中毒性休克綜合征，或者在受機(jī)會性感染的免疫妥協(xié)的患者等中產(chǎn)生的嚴(yán)重病癥?？?炎癥抗體和結(jié)合多肽，例如本發(fā)明的抗-IL-31抗體和結(jié)合多肽的治療用途可幫助預(yù)防和治療人和動物中的內(nèi)毒素血癥。其它潛在的治療劑包括本發(fā)明的IL-31RA多肽、可溶性異二聚受體多肽和多聚受體多肽，或抗IL-31抗體或結(jié)合伴侶等，可作為用于減輕內(nèi)毒素血癥中的炎癥和病理學(xué)影響的有用治療劑。脂多糖(LPS)誘發(fā)的內(nèi)毒素血癥涉及許多在傳染病中產(chǎn)生病理學(xué)效果的促炎介質(zhì)，并且嚙齒類中LPS誘發(fā)的內(nèi)毒素血癥是一種廣泛使用且可接受的模型，用于研究潛在的致炎劑或免疫調(diào)度劑的藥理學(xué)作用。革蘭氏陰性細(xì)菌中產(chǎn)生的LPS是敗血癥性休克的發(fā)病機(jī)理中主要的致病因子(Glausner等，La腦t338:732.1991)。通過單次注射LPS進(jìn)動物中的確可在實(shí)驗(yàn)上誘導(dǎo)類似休克的狀態(tài)。由細(xì)胞相應(yīng)LPS而產(chǎn)生的分子可直接或間接地靶向病原體。雖然這些生物反應(yīng)可保護(hù)宿主對抗侵入的病原體，但它們也可導(dǎo)致傷害。因此，由于嚴(yán)重的革蘭氏陰性細(xì)菌感染而發(fā)生的先天免疫的大量刺激，導(dǎo)致細(xì)胞因子和其它分子的過量產(chǎn)生，以及致命性的綜合征即敗血癥性休克綜合征的發(fā)生，其表征為發(fā)熱、低血壓、播散性血管內(nèi)凝血和多器官衰竭(Dumitru等，Cell103:1071-1083，2000)。LPS的這些毒性作用通常與導(dǎo)致多種炎癥介質(zhì)釋放的巨噬細(xì)胞活化相關(guān)。在這些介質(zhì)中，TNF顯示起了重要作用，如通過施用中和性抗-TNF抗體來預(yù)防LPS毒性所說明的(Beutler等，Science229:869，1985)。已很好地確定了，將大腸桿菌的LPS肺部注射進(jìn)C57B1/6小鼠中將會導(dǎo)致循環(huán)IL-6、TNF-oc、IL-1以及急性期蛋白質(zhì)(例如，SAA)在注射約2小時后顯著增加。由于對抗這些介質(zhì)的被動免疫可導(dǎo)致死亡率減小，LPS的毒性顯示可通過這些細(xì)胞因子調(diào)節(jié)(Beutler等，Science229:869,1985)。用于預(yù)防和/或治療敗血癥性休克的可能的免疫干擾方案包括抗-TNFmAb、IL-1受體拮抗劑、LIF、IL-10和G-CSF。由于LPS誘導(dǎo)可能有助于內(nèi)毒素血癥病理學(xué)的促炎因子的產(chǎn)生，通過對抗IL-31多肽來中和IL-31活性、SAA或其它促炎因子可用于減輕內(nèi)毒素血癥的癥狀，例如在內(nèi)毒素性休克中觀察到的癥狀。其它潛在的治療劑包括本發(fā)明的IL-31RA多肽、可溶性異二聚受體多肽和多聚受體多肽，或者抗IL-31抗體或結(jié)合伴侶等。3.炎性腸病IBD在美國，約500000人患有炎性腸病(IBD)，其可影響結(jié)腸和直腸(潰瘍性結(jié)腸炎)或兩者、小腸和大腸(克隆氏病)。這些疾病的發(fā)病機(jī)理尚未清楚，但它們伴隨有受影響組織的慢性炎癥。潛在的治療劑包括本發(fā)明的IL-31RA多肽、可溶性異二聚受體多肽和多聚受體多肽，或抗IL-31抗體或結(jié)合伴侶等，可作為用于減輕IBD和相關(guān)疾病中的炎癥和病理學(xué)影響的有用治療劑。潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種大腸(通常稱為結(jié)腸)炎性疾病，表征為結(jié)腸的粘膜或最內(nèi)層膜發(fā)炎和潰爛。該炎癥導(dǎo)致結(jié)腸頻繁地排空，導(dǎo)致腹瀉。癥狀包括糞便松散以及伴隨的腹部絞痛、發(fā)熱和體重減輕。雖然尚未知道UC的準(zhǔn)確原因，但最近的研究顯示，身體的自然防御對抗身體認(rèn)為是外來物的體內(nèi)蛋白質(zhì)("自身免疫反應(yīng)")?？赡芤?yàn)樗鼈冾愃颇c內(nèi)的細(xì)菌蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)可激起或刺激炎性過程，開始破壞結(jié)腸內(nèi)膜。由于結(jié)腸的內(nèi)膜受損，潰瘍形成，釋放出粘液、膿液和血液。該疾病通常開始于直腸區(qū)域并可最終延伸到整個大腸。炎癥的反復(fù)發(fā)作導(dǎo)致具有瘢痕組織的腸和直腸的壁增厚。嚴(yán)重的疾病可發(fā)生結(jié)腸組織的死亡或膿毒癥。潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀在嚴(yán)重性程度不同，并且它們的發(fā)作可以是逐漸發(fā)生的或突然發(fā)作的。發(fā)作可由許多因素引起，包括呼吸道感染或壓力。雖然目前不能獲得對UC的治愈，但治療集中于抑制結(jié)腸內(nèi)膜中的異常炎性過程。包括皮質(zhì)激素免疫抑制劑(例如，硫唑嘌呤、巰噪呤和曱氨喋呤)和氨基水楊酸鹽的治療劑可用于治療該疾病。然而，免疫抑制劑例如皮質(zhì)激素和硫唑噤呤的長期使用可產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，包括使骨變薄、白內(nèi)障、感染，以及肝和骨髓效應(yīng)。在當(dāng)前治療不起作用的患者中，手術(shù)是一種選擇。手術(shù)包括整個結(jié)腸和直腸的切除。存在多個可部分模擬慢性潰瘍性結(jié)腸炎的動物模型。最廣泛使用的模型是2，4，6-三硝基苯磺酸/乙醇(TNBS)誘發(fā)的結(jié)腸炎模型，其在結(jié)腸內(nèi)誘導(dǎo)了慢性炎癥和潰瘍。當(dāng)將TNBS通過直腸內(nèi)滴注引入易感小鼠的結(jié)場內(nèi)時，它在結(jié)腸粘膜中誘發(fā)了T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，在該情況中導(dǎo)致大塊的粘膜炎癥，表征為T-細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的密集浸潤整個大腸壁。此外，該組織病理學(xué)現(xiàn)象伴隨有體重逐漸減輕(消瘦)、血性腹瀉、直腸脫出以及大腸壁增厚的臨床現(xiàn)象(Neurath等，Intern.Rev.Immunol.19:51-62，2000)。另一結(jié)腸炎模型使用葡聚糖硫酸鈉(DSS)，其可誘導(dǎo)通過血性腹瀉、體重減輕、結(jié)腸縮短以及有中性粒細(xì)胞浸潤的粘膜潰瘍形成為征候的急性結(jié)腸炎。DSS-誘導(dǎo)的結(jié)腸炎在組織學(xué)上表征為炎癥細(xì)胞浸潤進(jìn)固有層中，伴隨有淋巴樣增生、病灶性隱窩損傷和上皮潰瘍。這些變化認(rèn)為是由于DSS對上皮組織的毒性作用，并通過對固有層細(xì)胞的吞噬作用以及TNF-cc和IFN-Y的產(chǎn)生而發(fā)生。盡管它的普遍使用，有關(guān)DSS的機(jī)制與人疾病的相關(guān)性的多個問題仍然未得到解決。DSS被認(rèn)為是一種T細(xì)胞-非依賴性模型，因?yàn)樗稍赥細(xì)胞-缺陷的動物例如SCID小鼠中觀察到。將抗-IL-31抗體或結(jié)合伴侶、含有可溶性IL-31RA的多肽(包括異二聚受體和多聚受體)，例如IL-31RA-Fc4或其它IL-31RA可溶蛋白和融合蛋白施用至這些TNBS或DSS模型，可用于評估IL-31拮抗劑改善癥狀并改變胃腸道病癥的病程的用途。IL-31可在結(jié)腸炎的炎癥應(yīng)答中起作用，并且通過施用IL-31拮抗劑中和IL-31活性是IBD的潛在治療方法。其它潛在的治療劑包括本發(fā)明的IL-31RA多肽、可溶性異二聚受體多肽和多聚受體多肽，或者抗IL-31抗體或結(jié)合伴侶等。4.銀屑病銀屑病是一種影響7百萬以上的美國人的慢性皮膚病。當(dāng)新皮膚細(xì)胞異常生長，導(dǎo)致在老皮膚還未足夠迅速脫落處的皮膚的發(fā)炎、腫脹且呈鱗狀的斑塊時發(fā)生銀屑病。斑塊狀銀屑病(最常見的形式)的特征是覆蓋有銀白色鱗片的發(fā)炎的皮膚斑塊("損傷")。銀屑病可以限于一些斑塊或涉及中度至大面積范圍的皮膚，最普遍出現(xiàn)在頭皮、膝、肘和軀干上。雖然它是非常明顯的，但銀屑病不是一種接觸性傳染病。該疾病的發(fā)病機(jī)理涉及受影響組織的慢性炎癥。本發(fā)明的IL-31RA多肽、可溶性異二聚受體多肽和多聚受體多肽，或抗IL-31抗體或結(jié)合伴侶等可作為用于減輕銀屑病、其它炎性皮膚病、皮膚和粘膜變態(tài)反應(yīng)以及相關(guān)疾病中的炎癥和病理學(xué)影響的有用治療劑。銀屑病是一種T-細(xì)胞介導(dǎo)的炎性皮膚障礙，其可以引起相當(dāng)?shù)牟贿m。它是一種不可治愈且侵襲所有年齡段的人的疾病。銀屑病影響了約百分之二的歐洲和美國人口。雖然患有輕度銀屑病的個體通常可用局部用藥劑來控制他們的疾病，但世界范圍內(nèi)多于一百萬的患者需要紫外線或全身性免疫抑制治療。不幸的是，紫外線照射的不便和風(fēng)險以及許多療法的毒性限制了對它們的長期使用。而且，在一些情況下，患者通常會復(fù)發(fā)銀屑病。從已知具有重要免疫生物學(xué)功能以及含有在免疫系統(tǒng)中起作用的細(xì)胞的組織中分離IL-31。IL-31在CD3+選擇的，活化的外周血細(xì)胞中表達(dá)，并且已顯示，IL-31的表達(dá)在T細(xì)胞活化后增強(qiáng)。此外，在這里的實(shí)施例部分描述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的多肽可影響單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、T-細(xì)胞、B-細(xì)胞、NK細(xì)胞和/或分化狀態(tài)的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、T-細(xì)胞、B-細(xì)胞、NK細(xì)胞或這些細(xì)胞的祖細(xì)胞的生長/擴(kuò)張。既刺激造血祖細(xì)胞的增殖又活化成熟細(xì)胞的因子通常已知，可是，增殖和激活還需要另外的生長因子。例如，研究已顯示，IL-7和青灰因子(SteelFactor)(c-kit配體)是NK祖細(xì)胞集落形成所需的。IL-15+IL-2與IL-7和青灰因子組合是更有效的(Mr6zek等，Blood^2632-2640，1996)。然而，未鑒定的細(xì)胞因子可能是NK細(xì)胞和/或NK祖細(xì)胞的特異性亞群的增殖所需的(Robertson等，Blood!2451-2438，1990)。同樣，IL-31可單獨(dú)或與其它細(xì)胞因子一致或者協(xié)同作用，來提高單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、T-細(xì)胞、B-細(xì)胞或NK細(xì)胞分化的生長、增殖擴(kuò)張和修飾。單核細(xì)胞是不完全分化的細(xì)胞，其遷移至它們成熟和變成巨噬細(xì)胞的多種組織中。巨噬細(xì)胞通過遞呈抗原至淋巴細(xì)胞來在免疫應(yīng)答中起重要作用，并且通過分泌許多細(xì)胞因子來作為淋巴細(xì)胞的輔助細(xì)胞而起支持性作用。巨噬細(xì)胞可內(nèi)化細(xì)胞外的分子，并且一旦激活就具有增強(qiáng)的殺死細(xì)胞內(nèi)微生物和腫瘤細(xì)胞的能力?；罨木奘杉?xì)胞還參與刺激急性或局部性炎癥。給定細(xì)胞因子的受體的組織分布為該細(xì)胞因子的可能作用位點(diǎn)提供了強(qiáng)的指示。IL-31RA的表達(dá)可在單核細(xì)胞和B-細(xì)胞中觀察到，一旦激活CD3+、CD4+和CD8+T-細(xì)胞，表達(dá)就會顯著增加。另外，兩種單核細(xì)胞系，THP-1(Tsuchiya等，Int.J.Cancer26:171-176，1980)和U937(Sundstrom等，Int.J.Cancer17:565-577，1976)也對IL-31RA表達(dá)呈陽性。據(jù)報道0SMR的表達(dá)是非常廣泛的(Mosley等，1^271:32635-32643，1996)。IL-31RA和0SM受體的這種分布支持IL-31在免疫應(yīng)答，尤其是T-細(xì)胞在激活時的擴(kuò)張中的作用，或者支持它在免疫系統(tǒng)的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞武裝中的作用。因此，本發(fā)明特別的實(shí)施方案集中于將可溶性IL-31RA/0SMR異二聚體在炎性和免疫性疾病或病癥，例如胰腺炎、I型糖尿病(IDDM)、胰腺癌、胰腺炎、格雷夫斯病(GravesDisease)、炎性腸病(IBD)、克隆氏病、結(jié)腸癌和腸癌、憩室病、自身免疫性疾病、膿毒癥、器官或骨髓移植、由損傷、手術(shù)或感染引起的炎癥、淀粉樣變性病、脾大、移植物抗宿主病中用作拮抗劑；并且其中抑制炎癥、抑制免疫、減少造血細(xì)月包、免疫細(xì)月包、炎癥細(xì)月包或、淋巴細(xì)月包、巨噬細(xì)月包、T-細(xì)月包(包括Thl和Th2細(xì)胞，CD4+和CD8+細(xì)胞)的增殖，抑制病原體或抗原的免疫應(yīng)答。此外，IL-31RA表達(dá)在活化的免疫細(xì)胞例如活化的CD4+和CD19+細(xì)胞中的存在說明，IL-31RA受體可能參與對抗外來侵入物例如微生物和細(xì)胞碎片的身體免疫防御反應(yīng)，并且能夠在炎癥和癌癥形成中的免疫應(yīng)答中起作用。這樣，對抗或拮抗IL-31RA受體功能的本發(fā)明抗體和結(jié)合伴侶，例如IL-31可用于調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答和炎癥。IL-31可能可用于免疫系統(tǒng)的抑制，例如用于治療在自身免疫性疾病，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、糖尿病、炎性腸病、克隆氏病等。免疫抑制還可用來減小對組織或器官移植物和嫁接物的排斥，并用于通過抑制受影響的細(xì)胞類型的增殖來治療T-細(xì)胞、B-細(xì)胞或單核細(xì)胞-特異性白血病或淋巴瘤，以及其它癌。此外，IL-31可用來檢測單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和活化的T-細(xì)胞，并幫助診斷這種自身免疫性疾病，尤其是其中單核細(xì)胞升高或活化的疾病狀態(tài)。IL-31多肽、肽、抗體等還可在用于檢測循環(huán)的IL-31水平的i貪斷系統(tǒng)中使用。在相關(guān)的實(shí)施方案中，特異性結(jié)合IL-31多肽的抗體或其它制劑可用來檢測循環(huán)的IL-31多肽。升高或降低水平的配體多肽可指示病理狀態(tài)，包括癌。IL-31多肽可能有助于病理過程，并可作為潛在疾病的間接標(biāo)記。而且，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該會認(rèn)識到IL-31的拮抗劑是有用的。例如，在動脈粥樣硬化病患中，異常之一是單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞定位于上皮細(xì)胞。這些病患可以通過利用IL-31拮抗劑預(yù)防?？?IL-31抗體(例如，IL-31中和抗體)、IL-31RA可溶性受體、異二聚體和多聚體，以及IL-31結(jié)合伴侶也可用作IL-31的拮抗劑。此外，單核母細(xì)胞白血病與多種臨床異常有關(guān)，所述的臨床異常反應(yīng)了巨噬細(xì)胞的生物產(chǎn)物的釋放，實(shí)例包括血清和尿液中高水平的溶菌酶以及高熱。而且，這種白血病表現(xiàn)出單核細(xì)胞的異常增加。這些效應(yīng)可能可通過IL-31拮抗劑，例如在此描述的IL-31拮抗劑預(yù)防。此外，如在此描述的，抗IL-31可與分子例如毒性部分和細(xì)胞因子綴合，來引導(dǎo)殺死白血病的單核細(xì)胞。由于IL-31以T-細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞-特異性的方式表達(dá)，并且這些疾病涉及單核細(xì)胞異常，例如細(xì)胞增殖、功能、定位和激活，本發(fā)明的多核苷酸、多肽和抗體可用作診斷劑來檢測這種單核細(xì)胞的異常，并指示疾病的存在。該方法包括從患者中提取生物樣品，例如血液、唾液或活組織檢查，并將其與正常的對照樣品比較。組織學(xué)方法、細(xì)胞學(xué)方法、流式細(xì)胞計數(shù)方法、生物化學(xué)方法和其它方法可用于測定與正常對照比較的患者樣品中IL-31，或表達(dá)IL-31的細(xì)胞即單核細(xì)胞的相應(yīng)水平或位置。與對照比較，IL-31表達(dá)水平的變化(增加或減少)或單核細(xì)胞的數(shù)量或位置的變化(例如，單核細(xì)胞在它們通常不存在的組織中增加或浸潤)將指示疾病。這種診斷方法還可包括使用連接至本發(fā)明的多聚核苷酸、多肽或抗體的放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記以及比色標(biāo)記。這些方法是本領(lǐng)域熟知的并在這里公開。已經(jīng)顯示IL-31在活化的單核細(xì)胞中表達(dá)，并且可能參與調(diào)節(jié)炎癥。這樣，可以檢測和利用本發(fā)明的多肽調(diào)節(jié)炎癥的能力，或可用作炎癥標(biāo)記。用于測定IL-31的促炎癥反應(yīng)和抗炎性質(zhì)的方法是本領(lǐng)域已知的，并在此討論。此外，它可參與上調(diào)急性期反應(yīng)物，例如血清淀粉樣蛋白A(SAA)、ccl-抗糜蛋白酶和結(jié)合珠蛋白的產(chǎn)生，而且一旦體內(nèi)注入?yún)⑴c炎癥應(yīng)答的脂多糖(LPS)，IL-31RA受體配體的表達(dá)可增加(Dumoutier，L等，Proc.Nat'1.Acad.Sci.97:10144-10149,2000)。急性期蛋白質(zhì)例如SAA的產(chǎn)生被認(rèn)為是其中炎癥是有利的短期幸存機(jī)制；然而，急性期蛋白質(zhì)保持更長時間促進(jìn)慢性炎癥并對人健康有害。綜述可參見Uhlar，CM和Whitehead,AS,Eur.J.Biochem.1^:501-523，1999,以及Ba畫nnH.和Gauldie，J.ImmunologyToday15:74-80，1994。此外，急性期蛋白質(zhì)SAA涉及一些慢性炎性疾病的發(fā)病機(jī)理，涉及動脈粥樣硬化和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，并且是淀粉樣變性病中沉積的淀粉樣A蛋白的前體(Uhlar，CM和Whitehead,同上)。因此，如果配體例如IL-31用作促炎分子并誘發(fā)SAA的產(chǎn)生，拮抗劑可用于治療與由該配體誘導(dǎo)的急性期反應(yīng)蛋白質(zhì)相關(guān)的炎性疾病和其它疾病。這種拮抗劑由本發(fā)明提供。例如，減輕炎癥的方法包括，施用給患有炎癥的哺乳動物足以減輕炎癥的量的IL-31,或抗-IL-31抗體(例如中和抗體)的組合物。此外，抑制患有炎癥的哺乳動物中的炎癥應(yīng)答的方法可包括(1)測定血清淀粉樣A蛋白的水平；(2)施用可藥用載體中的含有如在此描述的IL-31多肽或抗-IL-31抗體的組合物；(3)測定施用后的血清淀粉樣A蛋白水平；(4)將步驟(1)中的血清淀粉樣A蛋白水平與步驟(3)中的血清淀粉樣A蛋白水平比較，其中血清淀粉樣A蛋白水平未增加或減少表明抑制了炎癥應(yīng)答。像IL-31,分析對應(yīng)其IL-31RA受體cDM的mRNA的組織分布顯示，mRNA水平在單核細(xì)胞和前列腺細(xì)胞中最高，并且在活化的單核細(xì)胞，以及活化的CD4+、活化的CD8+，和活化的CD3+細(xì)胞中升高。因此，IL-31RA受體還涉及誘導(dǎo)炎癥應(yīng)答和免疫應(yīng)答。因此，本發(fā)明特定的實(shí)施方案指向于IL-31-抗體和IL-31，以及可溶性IL-31RA受體異二聚體在炎性和免疫性疾病或病癥，例如胰腺炎、I型糖尿病(IDDM)、胰腺癌、胰腺炎、格雷夫斯病(GravesDisease)、炎性腸病(IBD)、克隆氏病、結(jié)腸癌和腸癌、憩室病、自身免疫性疾病、膿毒癥、器官或骨髓移植、由損傷、手術(shù)或感染引起的炎癥、淀粉樣變性病、脾大、移植物抗宿主病中用作拮抗劑；并且其中抑制炎癥、抑制免疫、減少造血細(xì)胞、免疫細(xì)l包、炎癥細(xì)月包或、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T-細(xì)胞(包括Thl和Th2細(xì)胞，CD4+和CD8+細(xì)胞)的增殖，抑制病原體或抗原的免疫應(yīng)答。此外，IL-31RA受體和IL-31表達(dá)在活化的免疫細(xì)胞例如活化的CD3+、單核細(xì)胞、CD4+和CD19+細(xì)胞中的存在說明，IL-31RA受體可參與對抗外來4曼入物例如孩t生物和細(xì)月包碎片的身體免疫防御反應(yīng)，并且能夠在炎癥和癌形成過程中的免疫應(yīng)答中起作用。這樣，對抗或拮抗IL-31RA受體功能的本發(fā)明IL-31和IL-31-抗體可用于調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答和炎癥。結(jié)合IL-31RA受體多肽的IL-31多肽，以及IL-31RA受體的抗體可用于l)在治療急性炎、由創(chuàng)傷、組織損傷、手術(shù)、膿毒癥或感染引發(fā)的炎癥，以及慢性炎性疾病例如哮喘、炎性腸病(IBD)、慢性結(jié)腸炎、脾大、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、復(fù)發(fā)性急性炎性發(fā)作(例如結(jié)核病)，以及治療淀粉樣變性病和動脈粥樣硬化、卡斯?fàn)柭喜?、哮喘，以及其它與誘導(dǎo)急性期反應(yīng)相關(guān)的疾病中，對抗或阻斷經(jīng)由含有IL-31RA的受體的信號傳導(dǎo)。2)在治療自身免疫性疾病例如IDDM、多發(fā)性硬化癥(MS)、全身性紅斑狼瘡(SLE)、重癥肌無力、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和IBD中，對抗或阻斷經(jīng)由IL-31RA受體的信號傳導(dǎo)預(yù)防或抑制免疫細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、白細(xì)胞)中的信號傳導(dǎo)(HughesC等，J.Immunol153:3319-3325,1994)。備選地，抗體例如IL-31的單克隆抗體(MAb)也可用作拮抗劑來消滅不希望有的免疫細(xì)胞，用以治療自身免疫性疾病。哮喘、變態(tài)反應(yīng)和其它特應(yīng)性疾病可用對抗IL-31的MAb,例如抗IL-31抗體、可溶性IL-31RA受體或IL-31RA/CRF2-4異二聚體治療，來抑制免疫應(yīng)答或清空攻擊性細(xì)胞。使用本發(fā)明的多肽和抗體阻斷或抑制經(jīng)由IL-31RA的信號傳導(dǎo)，也可有益于胰腺、腎、垂體和神經(jīng)細(xì)胞的疾病。IDDM、NIDDM、胰腺炎和胰腺癌可能受益。IL-31RA可用作癌的MAb治療的靶標(biāo)，其中對抗性MAb抑制了癌生長并耙向免疫-介導(dǎo)殺死。(HolligerP.和Hoogenboom，H:NatureBiotech.16:1015-1016，1998)?？扇苄訧L-31RA受體單體、同型二聚體、異二聚體和多聚體的Mab也可用于治療腎病，例如腎小球硬化癥、膜性神經(jīng)病變(membranousneuropathy)、淀粉樣變性病(其在其它組織中也影響腎)、腎動脈硬化癥、多種起因的腎小球炎、腎的纖維增生性疾病，以及與SLE、IDDM、II型糖尿病(NIDDM)、腎腫瘤和其它疾病相關(guān)的腎機(jī)能障礙。3)在治療自身免疫性疾病例如IDDM、MS、SLE、重癥肌無力、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和IBD中，激動或激發(fā)經(jīng)由IL-31RA受體的信號傳導(dǎo)。IL-31可傳遞信號給淋巴細(xì)胞或其它免疫細(xì)胞進(jìn)行分化、改變增殖或改變改善自身免疫的細(xì)胞因子或細(xì)胞表面蛋白的生產(chǎn)。特別是，調(diào)節(jié)T-輔助細(xì)胞對改變模式的細(xì)胞因子分泌的響應(yīng)可以偏離自身免疫應(yīng)答，來改善疾病(SmithJA等，J.Immunol.160:4841-4849,1998)。同樣，IL-31可用來傳遞信號、排除和偏離涉及哮喘、變態(tài)反應(yīng)和特應(yīng)性疾病的免疫細(xì)胞。經(jīng)由IL-31RA受體的信號傳導(dǎo)也可有益于胰腺、腎、垂體和神經(jīng)細(xì)胞疾病。IDDM、NIDDM、胰腺炎和胰腺癌可能受益。IL-31RA可以用作胰腺癌的MAb治療的靶標(biāo)，其中信號MAb抑制了癌生長并靶向免疫-介導(dǎo)的殺傷(Tutt，AL等，JImmunol161:3175-3185，1998)。同樣，T-細(xì)胞特異性的白血病、淋巴瘤、漿細(xì)胞惡性增生(例如多發(fā)性骨髓痛)以及癌瘤可用本發(fā)明的，含有IL-31RA的可溶性受體的單克隆抗體(例如，中和抗體)治療。在如上描述的自身免疫性疾病、特應(yīng)性疾病、NIDDM、胰腺炎和腎機(jī)能障礙的治療中，在此描述的抗-IL-31抗體、可溶性IL-31RA受體單體、同型二聚體、異二聚體和多聚體的多肽可用來中和/阻斷IL-31RA受體配體活性。抗IL-31抗體和含有可溶性IL-31RA的受體可用作IL-31的拮抗劑。這種拮抗作用可通過直接中和或結(jié)合它的天然配體來實(shí)現(xiàn)。除了拮抗效用，可溶性受體可結(jié)合IL-31并作為載體或載體蛋白，以便運(yùn)輸IL-31到體內(nèi)的不同組織、器官和細(xì)胞。同樣，可溶性受體可與引導(dǎo)可溶性受體-配體復(fù)合物至特定位點(diǎn)，例如組織、特定免疫細(xì)胞、單核細(xì)胞或腫瘤的分子、多肽或化學(xué)部分融合或偶聯(lián)。例如，在急性感染或一些癌中，炎癥和局部急性期反應(yīng)蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)可產(chǎn)生益處。因此，在此描述的可溶性受體或本發(fā)明抗體可用于特異性地引導(dǎo)促炎IL-31配體的作用。參見，Cosman，D.Cytokine5:95-106，1993，以及Fernandez-Botran，R.Exp.Opin.Invest.Drugs9:497-513,2000。通常，施用的IL-31多肽(或IL-31RA類似物或融合蛋白)的劑量將會不同，其取決于這些因素患者的年齡、體重、身高、性別、一般的醫(yī)學(xué)狀態(tài)和既往病史。通常，期望提供給受試者約1pg/kg至10mg/kg(劑量/患者的體重)范圍的IL-31多肽劑量，但也可按詳情所指示的施用更低或更高的劑量。本領(lǐng)域中的技術(shù)人員可采用本領(lǐng)域已知的方法，容易地確定這種劑量以及對它的調(diào)整。施用IL-31多肽給受試者可以是局部、吸入、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、胸膜內(nèi)、鞘內(nèi)、通過局部導(dǎo)管灌注，或通過直接病患處注射。當(dāng)通過注射施用治療用蛋白質(zhì)時，施用可以是通過連續(xù)輸注或通過單次或多次推注。另外的施用途徑包括經(jīng)口、經(jīng)粘膜、經(jīng)肺和經(jīng)皮。經(jīng)口遞送適合于聚酯微球、玉米醇溶蛋白微球、類蛋白微球體、聚腈基丙烯酸酯微球，以及基于脂質(zhì)的系統(tǒng)(參見，例如DiBase和Morrel，"OralDeliveryofMicroencapsulatedProteins,，，inProteinDelivery:PhysicalSystems,Sanders和Hendren(eds.)，pages255—288(PlenumPress1997))。鼻內(nèi)遞送的可行性通過胰島素施用的這樣一種模式來舉例說明(參見，例如Hinchcliffe和Ilium,Adv.DrugDeliv.Rev35:199(1999))?？芍苽浜蠭L-31的干的或流體顆粒并借助于干粉分散劑、液體煙霧發(fā)生器或噴霧器吸入(例如Pettit和Gombotz，TIBTECH16:343(1998);Patton等，Adv.DrugDeliv.Rev.35:235(1999))。這種方法可通過AERX糖尿病治療系統(tǒng)來舉例說明，其為遞送霧化的胰島素進(jìn)入肺中的手持電動吸入器。研究已顯示，48000kDa大小的蛋白質(zhì)已借助于低頻率的超聲以治療用濃度遞送穿過皮膚，這說明了經(jīng)皮施用的可行性(Mitragotri等，Science269:850(1995))。采用電穿孔的經(jīng)皮服遞送提供了另一種施用具有IL-31結(jié)合活性的分子的方法(Potts等，Pharm.Biotechnol.10:213(1997))。含有具有IL-31結(jié)合活性的蛋白質(zhì)、多肽或肽的藥物組合物可根據(jù)制備可藥用組合物的已知方法配制，從而將治療用蛋白質(zhì)與可藥用載體組合進(jìn)混合物中。如果組合物的施用是受試患者耐受的，則該組合物稱為"可藥用載體"。無菌磷酸鹽緩沖鹽水是可藥用載體的一個實(shí)例。其它合適的載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。參見，例如Gennaro(ed.)，Remington'sPharmaceuticalSciences,19thEdition(MackPublishingCompany1995)。為治療目的，將具有IL-31結(jié)合活性的分子和可藥用栽體以治療有效量施用給患者。如果施用的劑量是生理學(xué)上有效的，則具有IL-31結(jié)合活性的蛋白質(zhì)、多肽或肽以及可藥用載體的組合稱為以"治療有效量"施用。如果制劑的存在導(dǎo)致受試患者的生理發(fā)生可檢測的變化，則該制劑是生理學(xué)上有效的。例如，如果用于治療炎癥的制劑的存在緩和了至少一部分炎癥應(yīng)答，則該制劑是生理學(xué)有效的。含有IL-31(或IL-31類似物或融合蛋白)的藥物組合物可以流體形式、氣溶膠或固體形式提供。流體形式通過可注射溶液、氣溶膠、小滴、局部溶液劑(topologicalsolution)和口服混懸劑來舉例"i兌明。示例性的固體形式包括膠嚢劑、片劑和控釋劑型。后面的形式通過樣吏滲透果(miniosmoticpump)和:t里才直齊寸舉例"i兌明(Bremer等，Pharm.Biotechnol.10:239(1997);Ranade，"ImplantsinDrugDelivery,"inDrugDeliverySystems,RanadeandHollinger(eds.),pages95-123(CRCPress1995);Bremer等，"ProteinDeliverywithInfusionPumps,，，inProteinDelivery:PhysicalSystems,Sanders和Hendren(eds.)，pages239-254(PlenumPress1997);Yewey等,"DeliveryofProteinsfromaControlledReleaseInjectableImplant,"inProteinDelivery:PhysicalSystems,Sanders和Hendren(eds.)，pages93—117(PlenumPress1997))。其它固體形式包括乳劑、糊劑、其它局部用敷貼劑(topologicalapplications)等。在此公開的抗IL-31抗體還可制備成免疫脂質(zhì)體。含有抗體的脂質(zhì)體可通過本領(lǐng)域已知的方法，例如在Epstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82:3688(1985)、Hwang等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77:4030(1980),以及美國專利4485045和4544545中描述的方法制備。具有延長的循環(huán)時間的脂質(zhì)體在美國專利5013556中公開。特別有用的脂質(zhì)體可用含有磷脂酰膽堿、膽固醇和PEG-衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂質(zhì)組合物，通過反相蒸發(fā)法制備。將脂質(zhì)體擠出通過確定孔徑的過濾器來獲得具有期望直徑的脂質(zhì)體。本發(fā)明抗體的Fab，片段可通過二硫互換反應(yīng)，如Martin等，J.Biol.Chem.257:286-288(1982)中描述的，與脂質(zhì)體綴合?；瘜W(xué)治療劑(例如阿霉素)可任選包含于脂質(zhì)體中。參見Gabizon等，J.NationalCancerInst.81(19)1484(1989)?？贵w的治療用制劑通過將具有期望純度的抗體與任選生理可接受載體、賦形劑或穩(wěn)定劑混合，以凍干制劑或含水溶液劑形式制備用于儲存(Remington'sPharmaceuticalSciences16thedition,Osol，A.Ed.(1980))。所采用的量和濃度的可接受載體、賦形劑或穩(wěn)定劑是對受試者無毒性的，并且包括緩沖劑例如磷酸、檸檬酸和其它有機(jī)酸；包括抗壞血酸和曱硫氨酸的抗氧化劑；防腐劑(例如十八烷基二甲基芐基氯化銨、氯己雙銨、氯化苯甲烴銨、氯化千乙銨、苯酚、丁醇或苯曱醇、烷基對羥苯甲酸酯例如對幾基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯、鄰苯二酚、間苯二酚、環(huán)己醇、3-戊醇和間曱酚)；低分子量(少于約IO個殘基)的多肽；蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物例如聚乙烯吡咯酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它糖類包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑例如EDTA;糖例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽平衡離子例如鈉；金屬絡(luò)合物(例如Zn-蛋白質(zhì)絡(luò)合物)；和/或非離子型表面活性劑例如Tween、Pluronics或聚乙二醇(PEG)。根據(jù)接受治療的特殊適應(yīng)癥的需要，這里的制劑還可包含多于一種的活性化合物，優(yōu)選具有不會彼此不利影響的互補(bǔ)活性的那些活性化合物。例如，在一種制劑中另外提供結(jié)合IL-31的抗體可能是期望的。備選地，或此外，組合物可含有化學(xué)治療劑或細(xì)胞因子。該分子適合以有效用于期望目的的量組合。也可將活性成分圏閉(entrap)于分別通過，例如凝聚技術(shù)或通過界面縮聚法制備的微膠嚢，例如羥甲基纖維素或明膠-微膠嚢以及聚合(曱基丙烯酸甲脂)微膠囊中，或圏閉于膠質(zhì)藥物遞送系統(tǒng)(如，脂質(zhì)體、白蛋白微球體、微乳液、納米粒和納米膠嚢)中或巨乳液中。這類技術(shù)在Remington'sPharmaceuticalSciences16thedition,Osol，A.Ed.(1980)中公開。用于體內(nèi)施用的制劑必須是無菌的。這容易通過濾過無菌濾膜完成?？芍苽渚忈屩苿?。緩釋制劑的合適實(shí)例包括，含有抗體的固體疏水性聚合物的半透性基質(zhì)，該基質(zhì)是成形的商品形式，例如薄膜或微膠嚢劑。緩釋基質(zhì)的實(shí)例包括聚酯、水凝膠(如聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利號3773919，在此將其通過全文引入作為參考)、l-谷氨酸和y乙基-l-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯、可降解的乳酸-羥基乙酸共聚物如LupronDepot(由乳酸-羥基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球體)和聚-D-(-)3-羥基丁酸。聚合物例如乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-羥基乙酸能夠使分子釋放超過100天，而某些水凝膠在較短時間段內(nèi)釋放蛋白質(zhì)。當(dāng)膠嚢包封的抗體長時間保留在體內(nèi)時，它們由于暴露于37t:的潮濕中而可能變性或聚集，導(dǎo)致生物活性喪失并可能使免疫原性改變。取決于所涉及的機(jī)理，可設(shè)計合理的策略來穩(wěn)定。例如，如果發(fā)現(xiàn)聚集機(jī)理是通過硫-二硫化物互換而形成分子間的S--S鍵，則穩(wěn)定可通過修飾巰基殘基、從酸性溶液中低壓凍干、控制濕度、采用合適的添加劑，以及研發(fā)出特殊的聚合物基質(zhì)組合物來實(shí)現(xiàn)。脂質(zhì)體提供了一種靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、肌內(nèi)、皮下，或通過經(jīng)口施用、吸入或鼻內(nèi)施用遞送治療多肽給受試者的方法。脂質(zhì)體是由圍繞含水小室的一個或多個脂質(zhì)雙層膜組成的微小嚢泡(通常，參見Bakker-Woudenberg等，Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis.12(Suppl.1):S61(1993)，Kim，Drugs46:618(1993)，和Ranade，"Site—SpecificDrugDeliveryUsingLiposomesasCarriers,"inDrugDeliverySystems,Ranade和Hoi1inger(eds.)，pages3-24(CRCPress1995))。脂質(zhì)體在組成上與細(xì)胞膜類似并因此，脂質(zhì)體可安全地施用并且是可生物降解的。取決于制備方法，脂質(zhì)體可以是單層或多層的，并且脂質(zhì)體可在大小方面不同，直徑范圍是O.02Mm至大于IOjum。多種制劑可包被于脂質(zhì)體中疏水性制劑分配于雙分子層中，而親水性制劑分配于內(nèi)部的含水空間內(nèi)(參見，例如Machy等,LiposomesInCellBiologyAndPharmacology(JohnLibbey1987)，以及Ostro等，AmericanJ.Hosp.Pharm.46:1576(1989))。此外，有可能通過改變脂質(zhì)體大小、雙分子層數(shù)量、脂質(zhì)組分，以及脂質(zhì)體的電荷和表面特性來控制所包被的制劑的治療可用性。脂質(zhì)體幾乎可吸附至任何類型的細(xì)胞并隨后緩慢釋放所包被的制劑。備選地，吸附的脂質(zhì)體可通過吞噬性的細(xì)胞內(nèi)吞。內(nèi)吞作用后，進(jìn)行脂質(zhì)體脂質(zhì)的溶酶體內(nèi)降解并釋放所包被的制劑(Scherphof等，Ann.N.Y.Acad.Sci.446:368(1985))。在靜脈內(nèi)施用后，小脂質(zhì)體(0.1至1.0jam)通常被主要位于肝和脾中的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞吸收，而大于3.0jum的脂質(zhì)體則沉積于肺中。網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞對較小脂質(zhì)體的優(yōu)先吸收已用于遞送化學(xué)治療劑至巨噬細(xì)胞以及遞送至肝的腫瘤中?？赏ㄟ^多種方法，包括用大劑量的脂質(zhì)體顆粒飽和，或通過藥理學(xué)方法進(jìn)行選擇性的巨噬細(xì)胞失活來避開網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(Claassen等，Biochim.Biophys.Acta802:428(1984))。另外，將糖脂-或聚乙二醇-衍生的磷脂整合進(jìn)脂質(zhì)體膜中已顯示導(dǎo)致網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吸收明顯減少(Allen等，Biochim.Biophys.Acta1068:133(1991)、Allen等，Biochim.Biophys.Acta1150:9(1993))。脂質(zhì)體還可通過改變磷脂成分或通過插入受體或配體進(jìn)脂質(zhì)體中來制備成靶向特定的細(xì)胞或器官。例如，用高含量的非離子型表面活性劑制備的脂質(zhì)體已用于乾向肝臟(Hayakawa等，JapanesePatent04-244,018、Kato等，Biol.Pharm.Bull.16:960(1993))。這些制劑通過這樣制備將大豆磷脂酰膽堿、維生素E和乙氧基化的氫化蓖麻油(HC0-60)在甲醇中混合，真空下濃縮該混合物，并隨后用水重構(gòu)該混合物。二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)與源于大豆的甾基糖苷混合物(SG)和膽固醇(Ch)的脂質(zhì)體制劑也顯示耙向肝臟(Shimizu等，Biol.Pharm.Bull.20:881(1997))。備選地，多種耙向配體(targeting1igand)可結(jié)合至脂質(zhì)體的表面，例如抗體、抗體片段、糖類、維生素和運(yùn)輸?shù)鞍?。例如，脂質(zhì)體可用分支型的半乳糖苷脂衍生物修飾，以靶向?qū)Ｒ坏卦诟渭?xì)胞表面上表達(dá)的去唾液酸糖蛋白(半乳糖)受體(Kato和Sugiyaraa，Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.14:287(1997)、Murahashi等，Biol.Pharm.Bull.20:259(1997))。同樣，Wu等，Hepatology27:772(1998)已顯示，用無唾液酸基胎球蛋白標(biāo)記脂質(zhì)體導(dǎo)致脂質(zhì)體的血漿半衰期縮短，并顯著提高了肝細(xì)胞對無唾液酸基胎球蛋白-標(biāo)記的脂質(zhì)體的吸收。在另一方面，含有分支型半乳糖脂衍生物的脂質(zhì)體的肝積聚可通過預(yù)先注入無唾液酸基胎球蛋白來抑制(Murahashi等，Biol.Pharm.Bull.20:259(1997))。聚氰化的(Polyaconitylated)的人血清白蛋白脂質(zhì)體提供了用于靶向脂質(zhì)體至肝細(xì)胞的另一種方法(Kamps等，Proc.Nat'1Acad.Sci.USA94:11681(1997))。此外，Geho等，U.S.PatentNo.4，603，044描述了定向肝細(xì)胞的脂質(zhì)體小嚢泡遞送系統(tǒng)，其對與肝臟專門的代謝細(xì)胞有關(guān)的肝膽受體具有特異性。具有IL-31結(jié)合活性的多肽可用蛋白質(zhì)微膠嚢化的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)包被于脂質(zhì)體中(參見，例如Anderson等，Infect.Immun.31:1099(1981)、Anderson等，CancerRes.50:1853(1990)，以及Cohen等，Biochim.Biophys.Acta1063:95(1991)、Alving等，"PreparationandUseofLiposomesinImmunologicalStudies,，，inLiposomeTechnology,2ndEdition,Vol.III，Gregoriadis(ed.)，page317(CRCPress1993)、Wassef等，Meth.Enzymol.149:124(1987))。如上提到的，在治療上有用的脂質(zhì)體可含有多種成分。例如，脂質(zhì)體可含有聚(乙二醇)的脂質(zhì)衍生物(Allen等，Biochim.Biophys.Acta1150:9(1993))。已經(jīng)設(shè)計了可降解的聚合物微球來保持高系統(tǒng)性水平的治療性蛋白質(zhì)。微球從可降解的聚合物例如聚乙丙交酯(PLG)、聚酐、聚(原酸酯)、非生物可降解的乙基乙烯基醋酸酯聚合物制備，其中蛋白質(zhì)被圏閉于聚合物中(Gombotz和Pettit，BioconjugateChem.6:332(1995);Ranade，"RoleofPolymersinDrugDelivery，，，inDrugDeliverySystems,Ranade和Hoi1inger(eds.),pages51-93(CRCPress1995);Roskos和Maskiewicz，"DegradableControlledReleaseSystemsUsefulforProteinDelivery,，，inProteinDelivery:PhysicalSystems,Sanders和Hendren(eds.)，pages45-92(PlenumPress1997);Bartus等，Science281:1161(1998);Putney和Burke，NatureBiotechnology16:153(1998);Putney,Curr.Opin.Chem.Biol.2:548(1998))。聚乙二醇(PEG)-包#皮的毫微球還可提供用于靜脈內(nèi)施用治療用蛋白質(zhì)的載體(參見，例如Gref等，Pharm.Biotechnol10:167(1997))。其它劑型可由本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員設(shè)計，如例如由Ansel和Popovich，PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems,5thEdition(Lea&Febiger1990)，Gennaro(ed.)，Remington'sPharmaceuticalSciences,19thEdition(MackPublishingCompany1995)，以及由Ranade和Hollinger，DrugDeliverySystems(CRCPress1996)所顯示的。作為一個示例性說明，藥物組合物可作為試劑盒提供，所述試劑盒包括含有IL-31多肽或IL-31拮抗劑(例如結(jié)合IL-31多肽的抗體或抗體片段)的容器。治療用多肽可以單次劑量或倍劑量的可注射溶液劑的形式提供，或作為將在注射前重構(gòu)的無菌粉劑提供。備選地，這種試劑盒可包含用于施用治療用多肽的干粉擴(kuò)散器、液體煙霧發(fā)生器或噴霧器。在一個方面，本發(fā)明提供了一種單克隆抗體，所述的單克隆抗體包括特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述的雜交瘤由美國典型菌種保藏中心儲存，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA-6816、c)ATCC專利保藏名稱PTA-6829、d)ATCC專利保藏名稱PTA-6830、e)ATCC專利保藏名稱PTA-6831、f)ATCC專利保藏名稱PTA-6871、g)ATCC專利保藏名稱PTA-6872、h)ATCC專利保藏名稱PTA-6875,以及i)ATCC專利保藏名稱PTA-6873。在一實(shí)施方案中，該抗體中和了IL-31(SEQIDNO:2)與IL-31RA(SEQIDNO:5)的相互作用。在另一個實(shí)施方案中，抗體是(a)鼠單克隆抗體、(b)源自(a)的人源化抗體，或(c)抗體片段，或(d)人單克隆抗體。在另一實(shí)施方案中，抗體進(jìn)一步含有放射性核素、酶、底物、輔助因子、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、肽標(biāo)簽、磁性顆?；蚨舅亍Ｔ诹硪粚?shí)施方案中，抗體另外包含聚乙二醇化。在另一實(shí)施方案中，抗體是中和抗體。在另一實(shí)施方案中，施用抗體至哺乳動物抑制、防止、減少或阻斷了多肽的促炎活性。在另一實(shí)施方案中，施用抗體至哺乳動物抑制、防止、減少或阻斷了與所述多肽的促炎活性相關(guān)的騷抓行為和皮炎。在另一方面，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述的雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA-6816、c)ATCC專利保藏名稱PTA-6871、d)ATCC專利4呆藏名稱PTA-6829和e)ATCC專利保藏名稱PTA-6830。在另一方面，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述的雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA-6816和c)ATCC專利保藏名稱PTA-6871。在另一方面，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述的雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6829和b)ATCC專利保藏名稱PTA-6830。在另一方面，提供了特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述的雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6872和b)ATCC專利保藏名稱PTA-6875。在另一方面，提供了特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:11的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述的雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6874。在一個實(shí)施方案中，所述抗體是中和抗體。在一個實(shí)施方案中，施用所述抗體至哺乳動物抑制、防止、減少或破壞了所述多肽的促炎活性。在一個實(shí)施方案中，施用所述抗體至哺乳動物抑制、防止、減少或破壞了與所述多肽的促炎活性相關(guān)的騷抓行為和皮炎。在另一方面，本發(fā)明提供了減輕哺乳動物中的炎癥的方法，所述方法包括施用給哺乳動物一定量的在此描述的IL-31抗體，借此減輕炎癥。在另一方面，本發(fā)明提供了治療受其中IL-31起作用的炎性疾病折磨的哺乳動物的方法，所述的方法包括施用IL-31拮抗劑給該哺乳動物，這樣炎癥得以減輕，其中所述拮抗劑包括(i)特異性結(jié)合IL-31RA的多肽或多肽片段的抗體、抗體片段或結(jié)合多肽，或者(ii)IL-31RA的多肽或多肽片段；并且其中IL-31的炎性活性得以減少。在一個實(shí)施方案中，所述的疾病是炎性疾病，包括搔癢性疾病。在一個實(shí)施方案中，所述的疾病是特應(yīng)性皮炎。在一個實(shí)施方案中，所述的疾病是結(jié)節(jié)性癢滲。在另一方面，本發(fā)明提供了在哺乳動物中減小、抑制或防止其中IL-31起作用的搔癢癥的影響的方法，所述的方法包括施用IL-31拮抗劑給哺乳動物，這樣搔癢癥得以減輕，其中所述的拮抗劑包括(i)特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2或其片段的多肽的多肽或多肽片段的抗體、抗體片段或結(jié)合多肽，并且其中IL-31的騷癢行為得以減少。在一個實(shí)施方案中，哺乳動物的疾病是特應(yīng)性皮炎。在一個實(shí)施方案中，哺乳動物的疾病是皮炎。在一個實(shí)施方案中，抗體是如在此描述的抗體。在另一方面，本發(fā)明提供了在哺乳動物中減小、抑制或防止其中IL-31起作用的搔癢癥的影響的方法，所述的方法包括施用IL-31拮抗劑給哺乳動物，這樣使得哺乳動物中的騷癢得以減輕，其中所述的拮抗劑包括(i)特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2，或其片段的多肽的多肽或多肽片段的抗體、抗體片段或結(jié)合多肽，并由此IL-31的搔抓活性得以減少。在一個實(shí)施方案中，哺乳動物的疾病是特應(yīng)性皮炎。在一個實(shí)施方案中，哺乳動物的疾病是皮炎。在一個實(shí)施方案中，抗體是如在此描述的抗體。在另一方面，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由選自以下雜交瘤克隆名稱號產(chǎn)生的單克隆抗體a)克隆292.12.3.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6815)、b)克隆292.63.5.3(ATCC專利保藏名稱PTA-6829)、c)克隆292.72.3.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6816)、d)克隆292.84.1.6(ATCC專利保藏名稱PTA-6871)和e)克隆292.118.6.4(ATCC專利保藏名稱PTA-6830)。在另一方面，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由選自以下雜交瘤克隆名稱號產(chǎn)生的單克隆抗體a)克隆294.35.2.6.3(ATCC專利保藏名稱PTA-6872)、b)克294.144.3.5(ATCC專利保藏名稱PTA-6873)、c)克隆294.154.5.6(ATCC專利保藏名稱PTA-6875)和d)克隆294.163.2.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6831)。在另一方面，本發(fā)明提供了一種單克隆抗體，所述的單克隆抗體包括能夠竟?fàn)幗Y(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中所述的多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述的雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA-6816、c)ATCC專利保藏名稱PTA-6829、d)ATCC專利保藏名稱PTA-6830、e)ATCC專利保藏名稱PTA-6831、f)ATCC專利保藏名稱PTA-6871、g)ATCC專利保藏名稱PTA-6872、h)ATCC專利保藏名稱PTA-6875，以及i)ATCC專利保藏名稱PTA-6873。在另一方面提供了雜交瘤，其中該雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自以下的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA-6816、c)ATCC專利保藏名稱PTA-6829、d)ATCC專利保藏名稱PTA-6830、e)ATCC專利保藏名稱PTA-6831、f)ATCC專利保藏名稱PTA-6871、g)ATCC專利保藏名稱PTA-6872、h)ATCC專利保藏名稱PTA-6875,以及i)ATCC專利保藏名稱PTA-6873。在另一方面，本發(fā)明提供了產(chǎn)生IL-31多肽的抗體的方法，所述的方法包括用選自下列的多肽給動物接種(a)由9-141個氨基酸組成的多肽，其中該多肽與SEQIDNO:2中從氨基酸號24(Ser)到氨基酸號164(Thr)的氨基酸殘基的連續(xù)序列一致(b)如上面公開的多肽；(c)含有SEQIDNO:2的氨基酸序列(氨基酸號38-52)的多肽；(d)含有SEQIDNO:2的氨基酸序列(氨基酸號83-98)的多肽；(e)含有SEQIDNO:2的氨基酸序列(氨基酸號104-117)的多肽；(f)含有SEQIDNO:2的氨基酸序列(氨基酸號137-152)的多肽；(g)含有SEQIDNO:2的氨基酸序列(氨基酸號38-152)的多肽；(h)含有SEQIDNO:2的氨基酸序列(氨基酸號24-164)的多肽；(c)含有SEQIDNO:11的氨基酸序列(氨基酸號38-52)的多肽；(d)含有SEQIDNO11的氨基酸序列(氨基酸號85-98)的多肽；(e)含有SEQIDNO11的氨基酸序列(氨基酸號104-118)的多肽；(f)含有SEQIDNO11的氨基酸序列(氨基酸號141-157)的多肽；(g)含有SEQIDNO11的氨基酸序列(氨基酸號38-157)的多肽；(h)含有SEQIDNOll的氨基酸序列(氨基酸號24-163)的多肽；(i)含有根據(jù)SEQIDNO:2或SEQINO11的Hopp/Woods親水性圖的抗原表^f立的多肽，其中該圖是基于6-殘基窗口，忽略了埋藏的G、S和T殘基以及暴露的H、Y和W殘基；并且其中該多肽在動物中引發(fā)免疫應(yīng)答來產(chǎn)生抗體；以及從動物體內(nèi)分離出抗體。在另一方面，本發(fā)明提供了通過如上公開的方法產(chǎn)生的抗體(例如中和抗體)，其中該抗體結(jié)合SEQIDN0:2或SEQIDNO:11的多肽。在一個實(shí)施方案中，如上公開的抗體特異性結(jié)合在SEQIDNO:2或SEQIDNO:ll中顯示的多肽。在另一方面，本發(fā)明提供了檢測生物樣品中IL-31的存在的方法，所述的方法包括步驟(a)將生物樣品與如上公開的抗體，或抗體片段接觸，其中所述的接觸是在允許抗體或抗體片段結(jié)合生物樣品的條件下完成，以及(b)檢測任意的結(jié)合的抗體或結(jié)合的抗體片段。在另一方面，本發(fā)明提供了殺死癌細(xì)胞的方法，方法包括從患者獲取含有癌細(xì)胞的離體組織或生物樣品，或鑒定體內(nèi)的癌細(xì)胞；通過如在此公開的方法生產(chǎn)多肽；將該多肽配制進(jìn)可藥用載體中；以及將該多肽施用給患者或讓癌細(xì)胞暴露于該多肽；其中所述的多肽殺死癌細(xì)胞。在一個實(shí)施方案中，殺死癌細(xì)胞的方法是如上文中公開的，其中所述的多肽進(jìn)一步與毒素綴合。在一個實(shí)施方案中，抗體是如上文中公開的，其中抗體選自(a)多克隆抗體、(b)鼠單克隆抗體、(c)源自(b)的人源化抗體、(d)抗體片段，和(e)人單克隆抗體。在另一方面，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合含有選自下列氨基酸殘基序列的多肽的抗體或抗體片段(a)如在SEQIDN0:2中顯示的，殘基38(Val)至152(Leu)顯示的多肽、(b)如在SEQIDNO:2中顯示的，殘基27(Leu)至164(Thr)顯示的多肽、(c)如在SEQIDNO:2中顯示的，殘基24(Thr)至164(Thr)顯示的多肽，以及(d)如在SEQIDN0:2中顯示的，殘基1(Met)至164(Thr)顯示的多肽。在另一實(shí)施方案中，抗體是如上文中公開的，其中所述抗體另外含有放射性核素、酶、底物、輔助因子、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、肽標(biāo)簽、》茲性顆粒、藥物或毒素。在另一方面，本發(fā)明提供了用于用一種組合物來抑制IL-31-誘導(dǎo)的造血細(xì)胞及造血細(xì)胞祖細(xì)胞(包括培養(yǎng)的骨髓細(xì)胞或外周血細(xì)胞)的增殖和分化的方法，其中所述的組合物含有一定量的如在此描述的抗體，與缺少可溶性細(xì)胞因子受體時培養(yǎng)的骨髓細(xì)胞或外周血細(xì)胞比化。在一個實(shí)施方案中，用于抑制IL-31-誘導(dǎo)的造血細(xì)胞和造血細(xì)胞祖細(xì)胞的增殖或分化的方法是如上面公開的，其中所述的造血細(xì)月包和造血細(xì)胞祖細(xì)胞是淋巴樣細(xì)胞。在另一個實(shí)施方案中，用于抑制IL-31-誘導(dǎo)的造血細(xì)胞和造血細(xì)胞祖細(xì)胞的增殖或分化的方法是如上面公開的，其中淋巴樣細(xì)胞是巨噬細(xì)胞或T細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供了減輕IL-31-誘導(dǎo)的炎癥的方法，該方法包括施用給患有炎癥的哺乳動物足以減輕炎癥的量的如在此公開的抗體組合物。在另一方面，本發(fā)明提供了抑制患有炎癥的哺乳動物中的炎癥應(yīng)答的方法，該方法包括(1)測定炎性分子的水平；(2)施用含有在可藥用載體中的如在此公開的抗體的組合物；(3)測定施用后的炎性分子的水平；(4)將步驟(1)中的炎性分子水平與步驟(3)中的炎性分子水平比較，其中炎性分子水平?jīng)]有增加或炎性分子水平減小指示抑制了炎癥應(yīng)答。在一個實(shí)施方案中，抗體是如上面公開的，其中所述抗體另外含有放射性核素、酶、底物、輔助因子、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、肽標(biāo)簽、磁性顆粒、藥物或毒素。在另一方面，本發(fā)明提供了用于用一種組合物來抑制IL-31-誘導(dǎo)的造血細(xì)胞及造血細(xì)胞祖細(xì)胞(包括培養(yǎng)的骨髓細(xì)胞或外周血細(xì)胞)的增殖或分化的方法，所述的組合物含有一定量的如在此公開的抗體，與缺少可溶性細(xì)胞因子受體時培養(yǎng)的骨髓細(xì)胞或外周血細(xì)胞比較，所述的抗體足以減少骨髓細(xì)胞或外周血細(xì)胞中造血細(xì)胞的增殖或分化。在一個實(shí)施方案中，用于抑制IL-31-誘導(dǎo)的造血細(xì)胞和造血細(xì)胞祖細(xì)胞的增殖或分化的方法是如上面/>開的，其中造血細(xì)胞和造血細(xì)胞祖細(xì)胞是淋巴樣細(xì)胞。在另一個實(shí)施方案中，用于抑制IL-31-誘導(dǎo)的造血細(xì)胞和造血細(xì)胞祖細(xì)胞的增殖或分化的方法是如上面7>開的，其中淋巴樣細(xì)胞是巨噬細(xì)胞或T細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供了減輕IL-31-誘導(dǎo)的炎癥的方法，該方法包括施用給患有炎癥的哺乳動物足以減輕炎癥的量的如在此公開的抗體組合物。在另一方面，本發(fā)明提供了抑制患有炎癥的哺乳動物中的炎癥應(yīng)答的方法，該方法包括(1)測定炎性分子的水平；(2)施用舍有可藥用載體中的如在此公開的抗體的組合物；(3)測定施用后的炎性水平比較，、其中炎性分子水平?jīng)]有增加或炎'^分子水平減小^示抑制了炎癥應(yīng)答。在另一方面，本發(fā)明提供了治療受其中IL-31起作用的炎性疾病折磨的哺乳動物的方法，所述的方法包括施用IL-31拮抗劑給哺乳動物，這樣炎癥得以減輕，其中所述的拮抗劑選自特異性結(jié)合IL-31(SEQIDN0:2)的多肽或多肽片段的抗體或結(jié)合多肽。在一個實(shí)施方案中，治療受炎性疾病折磨的哺乳動物的方法是如上面公開的，其中所述的疾病是慢性炎性疾病。在另一個實(shí)施方案中，治療受炎性疾病折磨的哺乳動物的方法是如上面公開的，其中所述的疾病選自炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、克隆氏病、特應(yīng)性皮炎、濕疹和銀屑病的慢性炎性疾病。在另一個實(shí)施方案中，治療受炎性疾病折磨的哺乳動物的方法是如上面公開的，其中所述的疾病是急性炎性疾病。在另一個實(shí)施方案中，治療受炎性疾病折磨的哺乳動物的方法是如上面公開的，其中該疾病選自內(nèi)毒素血癥、敗血病、中毒性休克綜合征和傳染性疾病的急性炎性疾病。在另一實(shí)施方案中，治療受炎性疾病折磨的哺乳動物的方法是如上面公開的，其中所述抗體另外含有放射性核素、酶、底物、輔助因子、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、肽標(biāo)簽、磁性顆粒、藥物或毒素。在另一方面，本發(fā)明提供了用于檢測患者中的炎癥的方法，該方法包括從患者體內(nèi)獲取組織或生物樣品；在其中抗體可結(jié)合組織或生物樣品中它的互補(bǔ)性多肽的條件下，將該組織或生物樣品與如在此公開的抗體一起孵育；顯影組織或生物樣品中結(jié)合的抗體；以及將來自患者的組織或生物樣品中結(jié)合的抗體的水平與正常對照組織或生物樣品中結(jié)合的抗體的水平比較，其中相對于正常的對照組織或生物樣品，結(jié)合患者的組織或生物樣品的抗體水平增加指示患者中的炎癥。在另一方面，本發(fā)明提供了用于檢測患者中的炎癥的方法，該方法包括從患者體內(nèi)獲取組織或生物樣品；標(biāo)記含有SEQIDNO:1或SEQIDNO:1的補(bǔ)體的至少14個連續(xù)核苷酸的多聚核苷酸；在其中該多聚核苷酸將會與互補(bǔ)的多聚核苷酸序列雜交的條件下，將該組織或生物樣品與如在此公開的多聚核苷酸一起孵育；顯影組織或生物樣品中標(biāo)記的多聚核苷酸；以及將來自患者的組織或生物樣品中標(biāo)記的多聚核苷酸的雜交水平與正常對照組織或生物樣品中的雜交水平比較，其中相對于正常的對照組織或生物樣品，患者的組織或生物樣品中標(biāo)記的多聚核苷酸的雜交增加指示患者中的炎癥。本發(fā)明進(jìn)一步通過下面的非限制性實(shí)例來說明。實(shí)施例實(shí)施例1大鼠抗-小鼠IL-31MAb的產(chǎn)生A.大鼠的免疫和血清篩選將四只3個月大的雌性斯普拉-道來氏大鼠(CharlesRiverLaboratories,Wilmington,MA)用小鼠IL-31免疫。按照每個產(chǎn)商的說明書，通過腹膜內(nèi)注入與完全弗氏佐劑(Pierce,Rockford，IL)組合的~290經(jīng)純化的重組小鼠IL-31(BHK細(xì)胞中產(chǎn)生的)來初次免疫大鼠，所述的重組小鼠IL-31在C-端處與由序列EYMPME(SEQIDNO:7)組成的肽融合(在下文中稱為mlL31-CEE)。在初次免疫接種后，在6周期間，每只大鼠每兩周通過腹膜內(nèi)途徑接受另外的完全弗氏佐劑中的150mIL-31-CEE。在第三次和第四次免疫接種7天后，將大鼠經(jīng)由眶后叢放血并將血清從血液中分離，用于分析它結(jié)合溶液中的mIL-31-CEE的能力，以及其抑制(通過中和測量)mIL-31-CEE對用小鼠IL-31RA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系的刺激活性的能力?？寡逯械拇笫罂?小鼠IL-31抗體結(jié)合mIL-31-CEE的能力可釆用"捕獲"型ELISA測定法檢測。在該測定法中，將96孔聚苯乙烯ELISA平板的孔首先用100pL/孔的、在0.1MNa2C03，pH9.6中濃度為500ng/mL的山羊抗-大鼠IgG，F(xiàn)c特異性抗體(JacksonImmunoresearch)包被。將平板在4。C下孵育過夜，之后吸出未結(jié)合的抗體，并用300pL/孔的PBS-Tween(0.137MNaCl、0.0027MKC1、0.0072MNa2HP04、0.0015MKH2P04、0.05%v/v吐溫20，pH7.2)洗滌平板兩次。在室溫(RT)下用200jliL/孑L的SuperBlock(Pierce,Rockford,IL)封閉孔5分鐘，將SuperBlock從平板中彈去并再一次重復(fù)封閉，之后用PBS-Tween洗滌平板兩次。血清的系列10-倍稀釋物(PBS-Tween加上1%w/v牛血清白蛋白(BSA)和0.05%v/vProclin300，pH7.2=稀釋緩沖液中)從1:1000的最次稀釋開始到1:1000000來制備。隨后，將三份每種稀釋物樣品轉(zhuǎn)移至測定平板(100jaL/孔)，以便通過分子的Fc部分來結(jié)合血清中的大鼠IgG至測定平板上。正常的大鼠血清用作陰性對照。在RT下孵育1小時后，如上描述的將孔吸空并洗滌平板兩次。然后將濃度為500ng/mL的生物素化的mlL-31-CEE(12:1的生物素蛋白質(zhì)摩爾比率)加入孔中，100mL/孔。在RT下孵育1小時后，將未結(jié)合的生物素化的niIL-31-CEE從孔中吸出，并將平板洗滌兩次。隨后加入500ng/mL濃度的辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗生蛋白鏈菌素(Pierce,Rockford，IL)以100juL/孔加入至每個孔中，并在RT下孵育平板1小時。在除去未結(jié)合的HRP-SA后，將平板洗滌5次，將10QuL/孔的四曱基聯(lián)苯胺(TMB)(BioFXLaboratories,0wingsMills,MD)力口入至每孑L中，并在RT下孵育平板5分鐘。通過添加100jjL/孔的450nmTMB終止試劑(BioFXLaboratories,OwingsMills,MD)來終止顯色，并在MolecularDevicesSpectraMAX340儀器中于450謹(jǐn)下讀取孑L的吸光度值?？寡逯械拇笫罂?小鼠IL-31抗體抑制(通過中和測量)小鼠IL-31通過其同源受體的刺激活性的能力用基于細(xì)胞的中和測定法評估，所述中和測定法采用具有螢光素酶報告系統(tǒng)(Baf3/KZ134/mcytorl7/mOSMRP)的mlL-31RA/0SMR0轉(zhuǎn)染的Baf3細(xì)胞系，該報告系統(tǒng)可以通過小鼠IL-31對細(xì)胞的刺激來激活。對于該檢測法，制備每種抗血清的檢測培養(yǎng)基(RPMI1640、10°/。FBS、2mML-谷氨酰胺、lmM丙酮酸鈉、lx青毒素-鏈霉素-新霉素(Invitrogen，Carlsbad,CA))中的最初1:250稀釋物，然后將這些稀釋物的每一種連續(xù)2-倍稀釋成1:32000的最終稀釋物。加入等體積的mIL-31-CEE至孔中的每種抗血清稀釋物，總體積為100mL，所述的mIL-31-CEE在檢測緩沖液中稀釋成4ng/mL。將該抗體/細(xì)胞因子混合物在RT下孵育0.5小時，之后將靶細(xì)胞從它們的生長培養(yǎng)基中洗出，調(diào)節(jié)至300000個細(xì)胞/mL的密度，并以100mL/孔加入抗體/細(xì)胞因子混合物中。含有2ng/mLmIL-31且不含抗血清的檢測培養(yǎng)基用作陰性對照，表示在測定中可達(dá)到的最大刺激。在37。C，5%的。2下孵育16-24小時后，將平板在1500RPM下離心5分鐘，小心地彈去培養(yǎng)基并加入25juL的lx細(xì)胞溶解緩沖液(Promega，Madison，WI)至每個孔中。將平板在RT下輕微搖動10分鐘以使細(xì)胞完全溶解，然后將該細(xì)胞溶解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至固體白色96孔平板(Corning/Costar3917，Acton，MA)中。加入40jaL熒光素酶檢測底物(Promega)至每孔中。然后，采用5秒的積分間隔(integrationinterval),在光度計上評估孔的熒光素酶活性(表示STAT報告構(gòu)建體的IL-31活性)。"捕獲"型ELISA測定法以及基于細(xì)胞的中和測定法都表明，所有這四只大鼠都發(fā)生了明顯的對mIL-31的抗體應(yīng)答，但是一只小鼠明顯產(chǎn)生了比其它小鼠更強(qiáng)的反應(yīng)?？偟膩碚f，通過"捕獲"ELISA測量的反應(yīng)與基于細(xì)胞的中和測定法中觀察到的反應(yīng)非常一致，表明IgG型抗體是造成對mIL-31的抑制的主要原因。B.融合在最后的腹膜內(nèi)免疫接種4周后，將具有最顯著的mIL-31中和滴定度的大鼠用約15GugPBS中的mIL-31-CEE，通過覆膜內(nèi)注射來進(jìn)行最后一次免疫。5天后，采集該小鼠的脾和淋巴結(jié)，制備成單一的細(xì)胞懸液并采用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法(Harlow,E.和Lane,D.1988."AntibodiesALaboratoryManual，，，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY),用PEG1500將其與以Sp2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞系(Shulman，M等，Nature276:269-270，1976)以4:1的淋巴樣細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞比率融合。將該融合混合物與作為祠養(yǎng)層的BALB/c胸腺細(xì)胞一道分配進(jìn)一系列的96孔平底平板中(0i，V.T.和Herzenberg，L.A…1980."SelectedMethodsinCellularImmunology"，B.B.Mishell和S.M.Shiigi，eds.，pp.351-372，F(xiàn)reeman,SanFrancisco)。在4天后，通過替換70%的培養(yǎng)基和胸腺細(xì)胞給融合平板加料一次，并在兩天后再次只提供培養(yǎng)基。在接種平板融合細(xì)部8天后檢測孔。C.融合細(xì)胞的篩選將如上描述的用于mIL-31的"捕獲"ELISA用于初步篩選，只是將雜交瘤上清液未經(jīng)稀釋檢測，并相同地將其從培養(yǎng)平板接種到檢測平板上。鑒定了約170個陽性的孔。然后，在先前描述的基于細(xì)胞的中和測定法中，評估來自每個這些孔以及一些陰性孔的上清液抑制mIL-31的能力。每種上清液在檢測培養(yǎng)基中以l:8終稀釋度檢測。在后面的稀釋物中，雜交瘤上清液中的非-特異性刺激成分明顯減少，這樣它們對觀察到的刺激指數(shù)起最小的作用。多數(shù)上清液顯示在某種程度上中和了mIL-31，它們中約十種表現(xiàn)出基本上完全中和，而剩余的上清液顯示出抑制持續(xù)，一直到其中約另外十種上清液顯示出具有非常小(如果有的話)的中和潛能。將約150個"捕獲"ELISA陽性孔中的雜交瘤細(xì)胞成功地擴(kuò)展到24孔平板的培養(yǎng)基中。當(dāng)24孔培養(yǎng)物的密度是約4-6xl(T細(xì)胞/mL時，分別收集并儲存每孔中的上清液(約1.5mL)并將每個孔的細(xì)胞冷凍保存。將每種24孔上清液在融合篩選中采用的"捕獲"ELISA和基于細(xì)胞的IL-31中和測定法兩者中再次分析。另外，將這些上清液也在使用人IL-31同系物的"捕獲"ELISA中檢測，所述的人IL-31同系物也用融合至IL-31分子C-端的EYMPME(SEQIDNO:7)標(biāo)簽構(gòu)建，并也在BHK細(xì)胞中產(chǎn)生。結(jié)果表明，在擴(kuò)增后，多數(shù)孔的上清液保留了它們識別溶液中的小鼠IL-31的能力。在這些"捕獲"測定陽性孔中，mIL-31的抑制活性從約20種上清液的完全抑制到10-15種上清液的基本無抑制作用。在捕獲測定中未觀察到人IL-31-CEE的交叉反應(yīng)性表明，大鼠抗-mlL-31抗體都不與人IL-31同系物交叉反應(yīng)或都不識別融合至mIL-31-CEE分子C-端的CEE標(biāo)記。D.產(chǎn)生中和抗-mlL31MAb的雜交瘤的選擇和克隆將最高的10個IL-31中和性原版孔(masterwell)的7個(271.5.7、271.9.4、271.26.6、271.27.4、271.33.1、271.33.3和271.39.4)中的細(xì)胞克隆，以便分離出產(chǎn)生中和的目標(biāo)mAb的克隆雜交瘤。采用標(biāo)準(zhǔn)的低密度稀釋(少于每孔1個細(xì)胞)法，在存在胸腺細(xì)胞的96孔微量滴定細(xì)胞培養(yǎng)平板中克隆上述細(xì)胞，并在檢測前通過顯微鏡檢查孔來評估單個生長灶的單克隆性。在接種6天后，通過"捕獲，，ELISA篩選平板上的所有孔的mIL-31特異性的IgG。從每個克隆組收集6-10個對特定mAb呈陽性且源自只有單克隆雜交瘤生長的孔的上清液，并在"捕獲"ELISA以及基于細(xì)胞的中和測定法中，在多種稀釋度時對其進(jìn)行再次篩選，以鑒定"最好的"產(chǎn)生中和mAb的克隆。這些試驗(yàn)的結(jié)果表明，產(chǎn)生適合的中和性mAb的雜交瘤克隆只在組271.9.4、271.26.6、271.33.1、271.33.3和271.39.4中獲得。將這些組的每組中"最好的"克隆再次克隆，并按所描述的篩選亞克隆以獲得最終的雜交瘤系271.9.4.2.6、271.26.6.6.1、271.33.1.2.2、271.33.3.2.1和271.39.4.6.5。通過每種這些雜交瘤產(chǎn)生的大鼠IgG同種型mAb用ELISA測定，所述ELISA采用生物素化的小鼠抗-大鼠IgG同種型特異性mAb。發(fā)現(xiàn)所有這5種mAb都屬于IgGl亞型。在布達(dá)佩斯條約下，將雜交瘤271.26.6.6.1作為原始保藏物保藏于美國典型組織培養(yǎng)物保藏中心(ATCC，Manassas，VA)專利保藏所，并給予ATCC登記號PTA-6874。讓每種完全克隆的，產(chǎn)生抗-小鼠IL-31mAb的雜交瘤適應(yīng)無雜交瘤血清的培養(yǎng)基(雜交瘤-SFM，Invitrogen)中生長。將來自在雜交瘤-SFM中生長的高細(xì)胞密度培養(yǎng)物的上清液離心，以除去細(xì)胞和細(xì)胞碎片，將其通過0.2iam的過濾器過濾并使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法，通過G蛋白色譜來純化mAb。E.MAb的體外特異性中和活性的排序?yàn)榱伺判蜻@5種大鼠抗-小鼠IL-31mAb的每種的體外特異性中和活性，將每種純化的mAb在先前描述的基于細(xì)胞的中和測定法中再次檢測，除了將mIL-31首先加入細(xì)胞中并隨后將該混合物加入至抗體外。除了對抗mlL-31-CEE的中和活性，還對mAb對抗另一種形式的小鼠IL-31(稱為cl08smIL-31)進(jìn)行了評估，所述的cl08smlL-31中，位置108的半胱氨酸殘基已轉(zhuǎn)化為絲氨酸殘基。后面的物質(zhì)在大腸桿菌中產(chǎn)生，沒有C-EE肽。這兩種形式的mIL-31都以1和5ng/mL的終濃度使用。將mAb在檢測培養(yǎng)基中調(diào)節(jié)至濃度為20pg/mL,并作為檢測混合物中IOjug/mL至0.00001mg/mL終濃度范圍的連續(xù)10-倍稀釋物進(jìn)行一式兩份的檢測。IC50值用Softmax軟件(MolecularDevices)測定。結(jié)果在表1中顯示，并表明，mAb271.26.6.6.1、271.33.1.2.2和271.39.4.6.5是最有效的中和性mAb,并且在這種體外試驗(yàn)中具有相似的效力。有趣地是，mAb271.33.3.2.1比其它mAb效力小得多地對抗cl08smlL-31型的mIL-31，這支持了表位分類法(epitopebinning)研究得出的結(jié)論這種抗體可能性很大的具有與其它四種mAb不同的表位特異性。與對抗mIL-31-CEE型mIL-31比較，這種mAb也效力小得多地對抗cl08smIL-31型的mIL-31這一事實(shí)表明，271.33.3.2.1識別的表位可能部分包括IL-31分子上的糖基化位點(diǎn)。表.l:大鼠抗-小鼠IL-31MAb的體外基于細(xì)胞的中和活性<table>tableseeoriginaldocumentpage87</column></row><table>實(shí)施例2小鼠抗-人IL-31mAb的產(chǎn)生A.V、農(nóng)的^建和^^,謬逸將兩組6至8周大的雌性BALB/c小鼠(每組5只動物)用人IL-31免疫。按照每個產(chǎn)商的說明書，通過腹膜內(nèi)注射與RiM佐劑組合的純化的重組人IL-31免疫組1中的小鼠，所述的人IL-31在C-端與由序列EYMPME(SEQIDNO:7)組成的肽融合(在下文中稱為IL-31-CEE)。該蛋白質(zhì)在BHK細(xì)胞中產(chǎn)生。同樣地，將組2中的小鼠用純化的、重組的、突變形式的人IL-31免疫，在所述的人IL-31中，位置108的半胱氨酸殘基已轉(zhuǎn)化為絲氨酸殘基(在下文中稱為cl08sIL-31)。這種材料在大腸桿菌中產(chǎn)生，沒有C-EE肽。所有小鼠在10周期間每兩周接受50jag的蛋白質(zhì)。在第三次和第四次免疫接種7至10天后，將小鼠眶后叢放血并將血清從血液中分離，用于分析它抑制人IL-31結(jié)合用人IL-RA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系并隨后對其的刺激活性的能力。單獨(dú)的抗血清抑制人IL-31的能力用基于熒光素酶的中和測定法評估，所述的中和測定法使用IL-31-CEE或cl08sIL-31以及BaF3/KZ134/IL-31RA/OSMRP細(xì)胞(見實(shí)施例3和4)，具有下列改變。將單獨(dú)的抗血清(一式兩份)通過在96孔、平底的白色聚苯乙烯平板(Corning/Costar3917)上的連續(xù)4-倍稀釋物來滴定，所述稀釋從最初的l:250的檢測緩沖液(RPMI1640、10%FBS、1raM丙酮酸鈉、2mML-谷氨酰胺、100U/mL青霉素G鈉、100pg/mL硫酸鏈霉素)中的抗血清稀釋物開始。為了使該測定法中小鼠血清的刺激效應(yīng)稍微標(biāo)準(zhǔn)化，除了最初的l:250稀釋，所有稀釋物都在加上G.2%正常的BALB/c小鼠血清的檢測緩沖液中進(jìn)行。每個孔中稀釋的抗血清的體積是100juL。將細(xì)胞在檢測緩沖液中洗涂1.5次，調(diào)節(jié)至3x106/mL的濃度，將其與IL-31-CEE(100pg/mL)或cl08sIL-31(30pg/mL)混合，并將該混合物隨后以100jaL/孔加入至平板中?？偟臏y定量為200juL/孔，由30，000個細(xì)胞、終濃度為50pg/mL(IL-31-CEE)或15pg/mL(cl08sIL-31)的IL-31以及以1:500、1:2000、1:8000、1:32000、1:128000、1:512000、1:2048000和1:8192000的最終稀釋度的抗血清組成。在37。C，5%的0)2下孵育平板16-24小時，之后將平板在1250RPM下離心5分鐘，小心地彈去培養(yǎng)基并加入25mL的1x細(xì)胞溶解緩沖液至每個孔中。將平板輕微搖動10分鐘以使細(xì)胞溶解，之后加入40jnL焚光素酶檢測底物至每個孔中。然后，采用4秒的積分間隔，在光度計上評估孔的熒光素酶活性(表示STAT報告構(gòu)建體的IL-31活性)?？偟膩碚f，在該測定法中，發(fā)現(xiàn)來自用IL-31-CEE免疫的小鼠的抗血清有效地抑制了IL-31-CEE和c108sIL-31的刺激活性，反之亦然。為此目的，通常只用IL-31-CEE來實(shí)施進(jìn)一步的中和測定法。將具有最強(qiáng)中和滴定度的那些小鼠用于一系列的三次融合，旨在得到產(chǎn)生能非常有效地中和IL-31與其同源受體相互作用的單克隆抗體的雜交瘤。B.融合細(xì)月包融合細(xì)力包291第一次融合釆用來自一只用IL-31-CEE免疫的小鼠以及一只用cl08sIL-31免疫的小鼠的淋巴結(jié)細(xì)胞。每只這些動物用15Mg在PBS中稀釋的各種免疫原進(jìn)行第六次免疫，并在它們最后一次免疫3周后通過血管內(nèi)注射施用。三天后，采集這些小鼠的脾和淋巴結(jié)，將其合并、加工成單一的細(xì)胞懸液(總共4.69xl()8個細(xì)胞)，并隨后采用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法(Lane,R.D.JImmunolMethods81:223-8，1985)，用3mLPEG1500將其與小鼠骨髓瘤細(xì)胞系克隆P3-X63-Ag8.653(Kearney,J.F.等,JImmunol.123:1548-50，1979)(稱為P3-X63-Ag8.653.3.12.11)以2.3:1淋巴樣細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞比率融合2分鐘55秒，將該融合混合物分配到一系列的96孔平底平板中，在4天后通過替換70。/。的培養(yǎng)基來加料一次，并在6天后檢測。融合細(xì)力包292第二次融合用來自一只用IL-31-CEE免疫的小鼠的淋巴樣細(xì)胞。除了上面提及的五次腹膜內(nèi)免疫接種，該小鼠在最后一次腹膜內(nèi)注射3周后接受血管內(nèi)注射15ngPBS中的IL-31-CEE，并在笫一次血管內(nèi)免疫3周后接受類似的注射。3天后，處理脾和淋巴結(jié)(總共為2.27xl()8個細(xì)胞)，并如上描述的用1.8mLPEG1500將其與P3-X63-Ag8.653.3.12.11以2:1的淋巴樣細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞比率融合2分鐘55秒。將該融合混合物分配到一系列的96孔平底平板中，在4天后通過替換70%的培養(yǎng)基來加料一次，并在5天后檢測。融合細(xì)胞294最后一次融合使用來自一只僅用cl08sIL-31免疫的小鼠的淋巴樣細(xì)胞。除了用先前描述的這種抗原進(jìn)行的5次腹膜內(nèi)免疫接種，該小鼠在最后一次腹膜內(nèi)注射6周后接受血管內(nèi)注射15|agPBS中的cl08sIL-31，然后在第一次血管內(nèi)注射2周后再次接受血管內(nèi)注射。3天后，處理脾和淋巴結(jié)(總量為1.586xl(T個細(xì)胞)，并如上描述的，用1.5mLPEG1500將其與P3-X63-Ag8.653.3.12.11以2:1的淋巴樣細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞比率融合2分鐘55秒。將該融合混合物分配到一系列的96孔平底平板中，在4和6天后通過替換70%的培養(yǎng)基加料兩次，并在最后一次加料3天后進(jìn)行檢測。C.融合細(xì)胞的篩選使用有兩處改變的如上描述的基于細(xì)胞的IL-31中和測定法篩選所有這三種融合細(xì)胞。第一處改變是，取代檢測平板中的稀釋的抗血清，將融合平板上每個孔中的100ML上清液拷貝接種到檢測平板上。笫二處改變是，檢測混合物中IL-31-CEE的終濃度是150pg/mL。除了中和測定，對來自每次融合的多個平板(隨機(jī)選擇)進(jìn)行篩選，篩選出能結(jié)合預(yù)先已吸附至聚苯乙烯ELISA平板上的IL-31-CEE的IgG抗體。該測定法的目的是，確定含有產(chǎn)生很差地中和IL-31或完全不中和該細(xì)胞因子的抗-IL31抗體的雜交瘤的原版孔。在該測定法中，將96孔聚苯乙烯ELISA平板的孔最初用50yL/孔的0.1MNa2C03，pH9.6中濃度為200ng/mL的IL31-CEE包被。將平板在4。C下孵育過夜，之后，吸出未結(jié)合的抗原并將平板用300jnL/孔的PBS-Tween(0.137MNaCl、0.0027MKC1、0.0072MNa2HP04、0.0015MKH2P04、0.05%v/v聚山梨醇酯20，pH7.2)洗滌兩次。用200juL/孔的PBS-Tween+1%BSA在室溫(RT)下封閉孔1小時。然后彈去平板中的封閉溶液，并將融合平板每個孔中的50ML條件培養(yǎng)基拷貝接種到檢測平板的孔中。將平板在RT下孵育l小時，之后，吸出未結(jié)合的抗體并用300jaL/孔的PBS-Tween洗滌平板兩次。將HRP綴合的山羊抗-小鼠IgGFc特異性抗血清(JacksonImmunoresearch)在PES-Tween+1%BSA中以1:5000稀釋，并加入至檢測平板的孔中(100ML/孔)。在RT下孵育1小時后，將未結(jié)合的第二步驟的抗體從孔中吸出，并將平板洗滌5次。然后加入100jaL/孔的四甲基聯(lián)苯胺(TMB)(BioFXLaboratories,OwingsMills,MD)至每個孔中，并在RT下孵育平板5分鐘。通過添加100juL/孑L的450nmTMBStopReagent(BioFXLaboratories,OwingsMills,MD)來終止顯色，在MolecularDevicesSpectraMAX340儀器上于450nm下讀取孔的吸光度值。中和測定法的結(jié)果顯示，在融合細(xì)胞291和292中分別有52和139個孔含有抑制至少40%的IL-31刺激活性的抗體。對融合細(xì)胞294進(jìn)行更嚴(yán)格的陽性定義，其中觀察到131個孔含有抑制至少70%的IL-31活性的抗體。檢測結(jié)合至IL-31-CEE的mAb的ELISA測定結(jié)果表明，在多數(shù)情況下，如果發(fā)現(xiàn)原版孔含有結(jié)合IL-31-CEE的IgG抗體，則其還含有在基于細(xì)胞的中和測定法中抑制IL-31-CEE的抗體。然而，存在一些孔，其在ELISA測定中為陽性但其在基于細(xì)胞的中和測定中則顯示相對弱的抑制能力，并將它們保留用于如下面描述的后面的分析。將在陽性的原版孔中生長的雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)增到24孔平板的培養(yǎng)基中。當(dāng)24孔培養(yǎng)物的密度為約4-6xl()5個細(xì)胞/mL時，分別收集并保存每個孔中的上清液(約1.5mL),并將每個孔的細(xì)胞冷凍保存。D.選擇和克隆原版孔來分離產(chǎn)生有效的IL-31中和MAb的雜交瘤使用在融合細(xì)胞篩選中釆用的基于細(xì)胞的IL-31中和測定法，來再次分析每種新的24孔上清液的IL-31中和能力。每種上清液未經(jīng)稀釋且一式兩份的進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，在擴(kuò)展后，多數(shù)原版孔的上清液保留了與在初始的原來的篩選中觀察到的相等或更好的抑制活性。為了更好地確定新的原版孔的上清液中哪種具有最強(qiáng)的抑制能力，將在該測定法中表現(xiàn)出大約90°/?；蚋玫匾种艻L-31-CEE的那些上清液通過在基于細(xì)胞的中和測定中檢測這些上清液的稀釋物來再次分析。將上清液通過連續(xù)-3倍稀釋滴定進(jìn)檢測平板上的融合介質(zhì)中，來使下列稀釋度的每個孔中達(dá)到100純的、1:3、1:9、1:27、1:81和1:243，并且如上面描述用于融合細(xì)胞的篩選中完成檢測。雖然這種檢測清楚地確定了最具抑制性的上清液，但其不能確定哪種上清液具有最高的特異性活性，因?yàn)樯锨逡褐锌笽L-31的濃度是未知的。為了解決特異性抗體濃度問題，在上述的直接ELISA測定中，采用連續(xù)2-倍或4-倍稀釋，用IL-31-CEE以滴定的形式檢測每種上清液。在MicrosoftEXCEL中數(shù)據(jù)繪圖后，確定了該測定中觀察到的產(chǎn)生半數(shù)最大光密度(0D)的上清液稀釋度，其接下來提供了一些有關(guān)上清液中抗-IL-31抗體的相對濃度的指示。通過合并來自中和測定法的數(shù)據(jù)和來自ELISA測定法的數(shù)據(jù)，確定了每種上清液的相對特異性活性，并確定了含有最高的抗-IL-31中和特異性活性的20個原版孔。有趣地是，所有最有效的中和抗IL-31的原版孔源自融合細(xì)胞292。從這些原版孔的中和數(shù)據(jù)注意到，雖然最大的IL-31抑制在純的和1:3稀釋度的每種上清液中獲得，但一些上清液的絕對中和程度只稍微高于其它上清液，如在稍微較低的相對熒光素酶單位計數(shù)中反映的。這可解釋為稍微不同的程度的"完全"IL-31中和。通過將有關(guān)每個原版孔的該觀察結(jié)果和相對中和特異性活性結(jié)合，20個最有效中和的原版孔的個數(shù)減少為明顯最好的10個。這包括292.12、292.39、292.51、292.63、292.64、292.72、292.84、292.105、292.109和292.118?？寺∵@最好的IO個中和IL-31的原版孔的每個孔中的細(xì)胞，以便分離產(chǎn)生目標(biāo)中和mAb的克隆雜交瘤。使用標(biāo)準(zhǔn)的低密度稀釋(少于每孔l個細(xì)胞)法，在96孔微量滴定細(xì)胞培養(yǎng)平板中克隆細(xì)胞，并在測定前通過顯微鏡檢查孔來評估單個生長灶的單克隆性?？寺∨囵B(yǎng)基由缺少HAT成分的融合培養(yǎng)基(IMDM、10%FC1血清、2mML-谷氨酰胺、IX青霉素/鏈霉素、10%雜交瘤克隆因子(RocheAppliedScience))組成。在接種6-8天后，通過ELISA在結(jié)合有IL-31-CEE的平板上篩選所有孔中的上清液。將來自每個組中4-6個孔的細(xì)胞擴(kuò)展到24孔培養(yǎng)基中，并且通過ELISA在結(jié)合有IL-31-CEE的平板上，以及通過基于細(xì)胞的IL-31中和測定來再次檢驗(yàn)得到的上清液，其中所述的組中，上清液是對特異性mAb強(qiáng)陽性的并且顯示只存在單個雜交瘤生長集落。基于這些結(jié)果，將每組中明顯最有效的中和克隆再次克隆并通過如上描述的ELISA篩選。如果95%或更多的生長陽性孔也是特異性mAb陽性的，則認(rèn)為不需要進(jìn)行進(jìn)一步的亞克隆，并表明該雜交瘤為無性系的。在獲得的克隆中，只有一個原版孔292.64是需要第二輪亞克隆來達(dá)到期望的特定mAb陽性百分比。將來自其中上清液是特異性mAb強(qiáng)陽性的，并且顯示只存在單個雜交瘤生長集落的每個最終亞克隆組中5-6個孔中的細(xì)胞擴(kuò)展到24孔培養(yǎng)基中。然后讓這些雜交瘤克隆的每種適應(yīng)于在沒有雜交瘤克隆因子的培養(yǎng)基(IMDM、10%FC1血清、2mML-谷氨酰胺、IX青霉素/鏈霉素)中生長，這通過在細(xì)胞密度合適時將細(xì)胞分盤進(jìn)后面的培養(yǎng)基中完成。在適應(yīng)后，從每組中的亞克隆收集上清液，并通過ELISA在結(jié)合有IL-31-CEE的平板上篩選?；谙鄬τ谠谏锨逡菏占瘯r的細(xì)胞密度的滴定度，選擇"最好的"最終克隆，導(dǎo)致選擇了下列組的最終克隆292.12.3.1、292.39.5.3、292.51.5.2、292.63.5.3、292.64.6.5.5、292.72.3.1、292.84.1.6、292.105.4.1、292.109.4.4和292.118.6.4。由每種這些雜交瘤產(chǎn)生的小鼠IgG同種型mAb用MouseMonoclonalAntibodyIsoStriptest(RocheAppliedScience)測定。發(fā)現(xiàn)292.72.3.1和292.84.1.6除外，所有mAb都屬于IgGl亞型，292.72.3.1和292.84.1.6顯示屬于IgG2a亞類。A才效的"-J7哞和船6哞和活^的#淨(jìng)為了對這IO種有效的小鼠抗人IL-31mAb的體外特異性中和活性進(jìn)行排序，將每種第一輪克隆的用過的上清液在先前描述的基于細(xì)胞的中和測定中再次檢測。首先，將已知濃度的mAb用作標(biāo)準(zhǔn)，在G蛋白柱上通過HPLC分析測定每種上清液中IgG的量。然后，將每種上清液在用于產(chǎn)生用過的上清液的相同培養(yǎng)基中稀釋至1|ag/mL的IgG濃度。然后將所述稀釋的上清液通過在培養(yǎng)基中10-倍連續(xù)稀釋達(dá)到1yg/mL至0.0001|ag/mL的濃度范圍滴定，并且在IL-31-CEE終濃度設(shè)置為300pg/mL(18.27pM)的先前描述的基于細(xì)胞的中和測定中進(jìn)行一式三份檢測。檢測結(jié)果在表2中顯示，mAb以從最有效到有效性最小的順序列出。MAb292.84.1和292.12.3是最有效的中和劑，之后依次為mAb292.72.3和292.63.5,其顯示為約前兩種Mab—半有效。剩余的mAb顯示比最好的兩種mAb的有效性約低6-9倍。表2.通過體外特異性中和活性對有效的抗IL31中和MAb的排序<table>tableseeoriginaldocumentpage94</column></row><table>*采用的抗體的分子量=150000道爾頓基于上面的結(jié)果，選擇雜交瘤292.84.1.6、292.12.3.1、292.72.3.1、292.63.5.3和292.118.6.4作為不同水平的特異性中和能力的代表，它們將會在在布達(dá)佩斯條約下，作為原始保藏物交托給美國典型組織培養(yǎng)物保藏中心(ATCC，Manassas,VA)專利保藏所，并賦予下列ATCC登記號克隆292.12.3.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6815)、克隆292.72.3.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6816)、克隆292.63.5.3.(ATCC專利保藏名稱PTA-6829)、克隆292.118.6.4(ATCC專利保藏名稱PTA-6830)和克隆292.84.1.6(ATCC專利保藏名稱PTA-6871)。尸.逸#^^謦#^^以為、庠/^弱的/Z-W尹和#時殺Jt膚產(chǎn)生抗人IL-31mAb的目的是分離出riiAb對，該mAb對可用于夾心測定法以定量不同流體中IL-31的量。這些mAb對通常對靶分子上的不同表位具有特異性，并優(yōu)選不會交叉竟?fàn)幗Y(jié)合至該分子。為了分離候選的這種mAb對，選擇一種策略來將一種極好的IL-31中和性mAb與一種具有很少(如果有的話)中和效力的mAb配對，假定這兩種不同的功能性抗體很可能會與不-重疊(空間上分離的)表位結(jié)合。如先前融合篩選中注意到的，將來自每次融合的多個平板在結(jié)合有IL-31-CEE的平板上通過ELISA篩選來鑒定抗IL-31抗體陽性的原版孔中的上清液。將ELISA結(jié)果與基于細(xì)胞的中和測定的那些結(jié)果比較表明，存在這樣的原版孔，其含有很好結(jié)合IL-31-CEE但在基于細(xì)胞的中和測定中不會很好地中和該分子的抗體。如用更有效的中和性原版孔進(jìn)行的，將在這些原版孔中生長的雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)展到24孔平板中的培養(yǎng)基中。當(dāng)24孔培養(yǎng)物的密度是約4-6x1()5個細(xì)胞/raL時，單獨(dú)收集并保存每個孔中的上清液(約1.5mL)并將每個孔的細(xì)胞冷凍保存。這些新的上清液采用基于細(xì)胞的中和測定法(連續(xù)3-倍稀釋，從純的上清液開始并進(jìn)行到最終的l:243稀釋)以及類似于在產(chǎn)生大鼠抗-鼠IL-31mAb中使用的"捕獲"型ELISA測定法來檢測，所述方法具有下列不同l)山羊抗-小鼠IgGFc特異性抗體(JacksonImmunoresearch)(1|ag/mL)作為包^皮平板的抗體；2)平板用PBS-Tween+1%BSA封閉一次，封閉1小時；3)將單個滴定的每種上清液加入孔中(連續(xù)3-倍稀釋，從純上清液開始進(jìn)行到最終的1:2187稀釋)，和4)加入200ng/mL的生物素化的IL-31-CEE(3:1的生物素蛋白質(zhì)摩爾比)。感覺該檢測比抗體結(jié)合至結(jié)合有IL-31-CEE的平板更恰當(dāng)，因?yàn)樗u估了抗體結(jié)合溶液中的IL-31-CEE的能力，這是夾心型ELISA中好的抗體必備的特性。實(shí)際上觀察到，許多原版孔中含有很好地結(jié)合至結(jié)合平板的IL-31-CEE的抗體的上清液在溶液中較弱地識別該分子。為了選擇從中克隆合適的分泌抗體的雜交瘤的孔，確定了10個孔(291.78、292.152、292.154、294.35、294.144、294.146、294.154、294.155、294.158和294.163)，它們的上清液在中和測定法中很弱地中和IL-31-CEE(低于50%但優(yōu)選只有1-20%)，并且還相對好地結(jié)合溶液中的IL-31-CEE(如通過純濃度的上清液中大于2.0的0D表明)。對于有效中和的孔，克隆的克隆、篩選，以及最好的第一輪克隆的選擇可如上描述的完成。為了減少需進(jìn)行進(jìn)一步亞克隆的雜交瘤的數(shù)目，用來自每種選擇的第一輪克隆的用過的上清液進(jìn)行兩次新的測定。第一次評估是使用Biacore3000表面等離子共振儀，基于表位特異性("分類法，，)來試圖給mAb分組。將其中一種好的中和性mAb上清液(292.64.6)與10種較弱的中和性第一輪克隆的上清液彼此進(jìn)行上述評估，導(dǎo)致確定了4個明顯的"類(bin)"。類1只由好的中和性抗體組成。類2由292.152.4、292.154.4、29435.2、294.146.5和294.154.5組成。類3包括291.78.4、294.155.6、294.158.5和294.163.2。類4只包括294.144.3。第二次測定涉及這一次只重復(fù)"捕獲"型ELISA，由于與最初的原版24孔的培養(yǎng)上清液比較，該上清液中有更高的特異性抗體濃度，從而獲得了更完整的滴定曲線并使得能測定結(jié)合至IL-31-CEE的抗體的EC50。結(jié)杲在表3中顯示(連同分類法結(jié)果和基于細(xì)胞的中和測定法中IL-31-CEE活性的。/。抑制)，并表明對于不同的mAb，存在廣范圍的EC50值(以及通過推斷得到mAb對IL-31-CEE的親和力)。表3.來自低效力的中和IL-31的雜交瘤的第一輪克隆培養(yǎng)上清液的總結(jié)數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table>由于著重于選擇產(chǎn)生這樣的mAb的雜交瘤l)其處于不同于好的中和性mAb(292.64.6)的表位類中，以及2)具有如在捕獲型測定中通過EC50表示的最高的親和力，只有第一輪克隆294.35.2、294.144.3、294.154.5和294.163.2進(jìn)入如上面描述的更有效的中和mAb的最終克隆階段。這種進(jìn)一步的亞克隆產(chǎn)生了對下列組的最終克隆的選擇294.35.2.6.3、294.144.3.5、294.154.5.6和294.163.2.1。由每種上述雜交瘤產(chǎn)生的小鼠IgG同種型mAb用小鼠單克隆抗體分離條帶檢測儀(RocheAppliedScience)測定。發(fā)現(xiàn)所有這4種mAb都屬于IgGl亞型。將這四種雜交瘤的每種的樣品在布達(dá)佩斯條約下作為原始保藏物交托給美國典型組織培養(yǎng)物保藏中心(ATCC,Manassas,VA)專利保藏所，并賦予下列ATCC登記號克隆294.163.2.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6831)、克隆294.35.2.6.3(ATCC專利保藏名稱PTA-6872)、克隆294.154.5.6ATCC專利保藏名稱PTA-6875)和克隆294.144.3.5(ATCC專利保藏名稱PTA-6873)。&V、虞拔-入4V、/K^Jt叉^A將來自lO種有效的中和性mAb以及10種低效的中和性mAb的所有第一輪克隆上清液通過ELISA，在結(jié)合有mIL-31-CEE的平板上進(jìn)行檢測，檢測它們識別小鼠IL-31的能力。未觀察到任何mAb的交叉反應(yīng)，說明這些mAb顯示對人IL-31具有特異性。此外，這些結(jié)果顯示，沒有抗體識別為這些研究中使用的人和小鼠IL-31重組分子兩者的C-末端所共有的CEE肽標(biāo)簽，該測定結(jié)果在初始的原版孔的上清液中未獲得。實(shí)施例3IL-31RA/0SMR0受體熒光素酶測定法KZ134質(zhì)粒用含有來自4種基因的STAT轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合元件的互補(bǔ)寡核苷酸構(gòu)建，其包括經(jīng)修飾的c-fosSis誘導(dǎo)元件(m67SIE或hSIE)(Sadowski，H.等，Science261:1739-1744，1993)、來自p21WAF1基因的p21SIE1(Chin,Y.等，Science272:719-722，1996)、(3-酪蛋白基因的乳腺反應(yīng)元件(Schmitt-Ney，M.等，Mol.Cell.Biol.Hi_3745-3755，1991)，以及FcgRI基因的STAT誘導(dǎo)元件(Seidel，H.等，Proc.Natl.Acad.Sci.92:304卜3045,1995)。這些寡核苷酸含有Asp718-Xho1兼容性末端，并采用標(biāo)準(zhǔn)方法，用經(jīng)相同的酶消化且含有新霉素可選標(biāo)記的c-fos啟動子(Poulsen，L.K.etal.，J.Biol.Chem.273:6229-6232，1998)連接進(jìn)可接受的熒火蟲熒光素酶報告載體中。采用標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染和選擇方法，將KZ134質(zhì)粒用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BaF3細(xì)胞以產(chǎn)生BaF3/KZ134細(xì)胞系。構(gòu)建表達(dá)全長IL-31RA或IL-31RA/0SMRP受體的穩(wěn)定的BaF3/KZ134指示細(xì)胞系。釆用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)稀釋、接種和選擇克隆。用人IL-31條件培養(yǎng)基或純化的IL-31蛋白質(zhì)作為誘導(dǎo)物，通過熒光素酶測定法(見B，下文中)篩選克隆。選擇具有最高焚光素酶反應(yīng)(通過STAT熒光素酶)和最低背景的克隆。選擇穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染子細(xì)胞系。該細(xì)胞系稱為BaF3/KZ134/IL-31RA或BaF3/KZl34/IL-31RA/0SMRP，這取決于轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞系的受體。類似地，還釆用在這里描述的方法構(gòu)建BHK細(xì)胞系，并用于在此描述的焚光素酶測定法。該細(xì)胞系稱為BHK/KZ134/IL-31RA或BHK/KZ134/IL-31RA/OSMRP,這取決于轉(zhuǎn)染進(jìn)該細(xì)胞系的受體。將BaF3/KZl34/IL-31RA和BaF3/KZl34/IL-31RA/0SMRP細(xì)胞離心并在無mlL-3的培養(yǎng)基中洗滌。將細(xì)胞離心并洗滌3次以確保除去mlL-3。然后在血細(xì)胞計數(shù)器中對細(xì)胞計數(shù)。采用無mlL-3的培養(yǎng)基，將細(xì)胞以每孔約30000個細(xì)胞(體積為每孔100ju1)接種至96孔型板中。對未轉(zhuǎn)染的BaF3/KZ134細(xì)胞實(shí)施相同的步驟以在隨后的檢測中用作對照。將BHK/KZ134/IL-31RA或BHK/KZ134/IL-31RA/0SMRP細(xì)胞以每孔15000個細(xì)胞接種至96孔板中的100|a1培養(yǎng)基中。將親代BHK/KZ134細(xì)胞用作對照。BaF3/KZ134/IL-31RA、BaF3/KZl34/IL-31RA/0SMRP、BHK/KZ134/IL-31RA或BHK/KZ134/IL-31RA/0SMRP細(xì)胞的STAT激活用條件培養(yǎng)基或純化的蛋白質(zhì)評估。將IOO微升稀釋的條件培養(yǎng)基或蛋白質(zhì)加入至BaF3/KZ134/IL-31RA、BaF3/KZl34/IL-31RA/0SMRP、BHK/KZ134/IL-31RA或BHK/KZ134/IL-31RA/OSMRP細(xì)胞中。在作為對照的未轉(zhuǎn)染的BaF3/KZ134或BHK/KZ134細(xì)胞上平行進(jìn)行使用條件培養(yǎng)基的測定?？倷z測體積為200m1。將檢測平板在37'c、5%(:02下孵育24小時，同時將BaF3細(xì)胞通過以2000rpm離心IO分鐘來沉淀，并且吸出培養(yǎng)基并加入25ja1的溶解緩沖液(Promega)。對于BHK細(xì)胞系，不需要離心步驟，因?yàn)樵摷?xì)胞是粘附合的。在室溫下IO分鐘后，以5秒積分間隔，在光度計(LabsystemsLumi廳kan，modelRS)上讀取力口入了40y1熒光素酶檢測底物(Promega)的STAT報告構(gòu)建體來測量平板的STAT報告構(gòu)建體的激活。實(shí)施例4通過用腺病毒性STAT/SRE報道基因瞬時感染對人轉(zhuǎn)化的上皮細(xì)胞系進(jìn)行熒光素酶測定對IL-31活性的抑制、減少和/或中和可通過熒光素酶測定來測量。例如，可將人轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系以10，000個細(xì)胞/孔接種在96孔平底平板中的、對每種細(xì)胞類型指定的合適生長培養(yǎng)基中。第二天，將細(xì)胞用腺病毒報告構(gòu)建體KZ136，以5000的多重性感染來感染。除了血清效應(yīng)元件，KZ136報告構(gòu)建體含有STAT元件。使用補(bǔ)充有2mML-谷氨酰胺(GibcoBRL)、1mM丙酮酸鈉(GibcoBRL)和1x胰島素-轉(zhuǎn)纟失蛋白-硒添加劑(GibcoBRL)的DMEM(下文中稱為無血清培養(yǎng)基)，總體積為100jaL/孔。將細(xì)胞培養(yǎng)過夜。第二天，除去培養(yǎng)基并替換成100jal的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。誘導(dǎo)培養(yǎng)基是IOOng/ml、50ng/ml、25ng/ml、12.5ng/ml、6.25ng/ml、3.125ng/ml和1.56ng/ml的稀釋于無血清培養(yǎng)基中的人IL-31。將20%FBS的陽性對照用來驗(yàn)證該檢測并確保腺病毒的感染是成功的。將細(xì)胞誘導(dǎo)5小時，那時吸出培養(yǎng)基。然后，將細(xì)胞在50pl/孔的PBS中洗滌，并隨后在30jal/孔的lx細(xì)胞溶解緩沖液(Promega)中溶解。在室溫下孵育10分鐘后，將25ju1/孔的溶解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至不透明的白色96孔平板中。然后，采用5-秒積分間隔，以40jal/孔注射熒光素酶底物(Promega)在光度計上讀取平板。實(shí)施例5IL-31抗體抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生已顯示IL-31能刺激DU145(病變的和正常的細(xì)胞系)中的IL-6產(chǎn)生，以及刺激A549細(xì)胞系(病變的和正常的)來刺激IL-8產(chǎn)生，并能減少U20S細(xì)胞系(病變的和正常的)中IL-8的生產(chǎn)。參見公開的美國專利申請(見公開號20030224487，Sprecher，Cindy等，2003)因而，在此描述的IL-31單克隆抗體的活性可通過對這些人疾病-狀態(tài)的上皮細(xì)胞系中的IL-31活性的抑制、減少和/或中和來測量。A.對與人IL-31—起培養(yǎng)的人疾病-狀態(tài)的上皮細(xì)胞系的細(xì)胞因子產(chǎn)生的抑制將細(xì)胞以每孔4.5x105個細(xì)胞的密度接種到6孔平板(Costar)中并在各自的生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將細(xì)胞與檢測試劑100ng/mLIL-31(用和不用抗體刺激)、10ng/mL干擾素y(IFNy)(R&DSystems，Minneapolis,MN)、10ng/mL腫瘤壞死因子cc(TNFa)(R&DSystems,Minneapolis,MN)、10ng/mLIL-1P(R&DSystems,Minneapolis,MN)或100|ug/mL脂多糖(LPS)(Sigma)—起培養(yǎng)。在24和48小時時采集上清液并檢測其細(xì)胞因子、GM-CSF(粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落-刺激因素)、IL-lb、IL-6、IL-8、MCP-1(巨噬細(xì)胞趨化蛋白-l)和TNFa。將來自BioSourceInternational(Camarillo,CA)的MultiplexAntibodyBead試劑盒用于測量樣品中的細(xì)胞因子。在Luminex-100儀(Luminex，Austin,TX)讀取檢觀'J并用MasterPlex軟件(MiraiBio,Alameda,CA)分析數(shù)據(jù)。測量24-小時中每種細(xì)胞系的細(xì)胞因子產(chǎn)生(pg/mL)。B.對與人IL-31—起培養(yǎng)的正常人上皮細(xì)胞系的細(xì)胞因子產(chǎn)生的抑制。將細(xì)胞以每孔lx105個細(xì)胞的密度接種于24孔平板中，并與檢測試劑1000ng/mL、100ng/mL和10ng/mL的IL-31(用和不用抗體刺激)、10ng/mLTNFa、10ng/mLOSM、10ng/mLIFNa、10ng/mLTGFb或lOng/mL淋巴細(xì)胞趨化因子一起培養(yǎng)。在24小時和48小時時采集上清液并檢測其細(xì)胞因子IL-6、IL-8、MCP-l、MIP-la、RANTES和嗜酸細(xì)胞活化趨化因子。細(xì)胞因子如先前描述的檢測。測量48-小時中每種細(xì)胞系的細(xì)胞因子產(chǎn)生(pg/mL)。C.對與人IL-31和IFNy共培養(yǎng)的人疾病-狀態(tài)的上皮細(xì)胞系的細(xì)胞因子產(chǎn)生的抑制將細(xì)胞以每孔2xl()5個細(xì)胞的密度接種于24孔平板中，并與10ng/mLIFNy+/-100ng/mL、10ng/mL或1ng/mL的IL-31共培養(yǎng)。在24和48小時時采集上清液并檢測f(用和不用抗體刺激)或IL-8及MCP-1。測量24-小時的樣品中每種細(xì)胞系的細(xì)胞因子產(chǎn)量(pg/mL)。實(shí)施例6IL-31對粘附至轉(zhuǎn)化的骨髓上皮細(xì)胞(TRBMEC)單層的U937單核細(xì)胞的影響的抑制研究已顯示，IL-31可起增效劑作用，可影響U937細(xì)胞基底粘附至上皮細(xì)胞單層。特別是，IL-31與TNFa起增效作用并進(jìn)一步增強(qiáng)U937的粘附。參見公開的美國專利申請(見公開號20030224487，Sprecher，Cindy等，2003)。因此，通過在此描述的抗-IL-31抗體對IL-31的抑制可用下列測定法測量。將轉(zhuǎn)化的骨髓上皮細(xì)胞(TRBMEC)以25000/孔的密度接種于96孔組織集群(Falcon)中的、補(bǔ)充有孩t血管生長添加劑(MVGS)(CascadeBiologies)的培養(yǎng)基M131(CascadeBiologies)中。在匯合時(24小時后)，將該細(xì)胞轉(zhuǎn)到補(bǔ)充有1%胎牛血清(Hyclone)的M199(Gibco-LifeTechnologies)中。加入經(jīng)和未經(jīng)抗體刺激的不同濃度(0.4至10ng/raL)的人重組IL-31(試驗(yàn)試劑)，用以檢測該蛋白質(zhì)對導(dǎo)致粘附的免疫細(xì)胞-上皮細(xì)胞相互作用的影響。除了IL-31，讓一些孔接受0.3ng/ml的腫瘤壞死因子(TNFocR&DSystems,—種已知的致炎細(xì)胞因子)，用以檢測蛋白質(zhì)在炎性條件下對上皮細(xì)胞的影響。將單獨(dú)的0.3ng/ml的TNFa用作陽性對照，并且該使用濃度代表約70%的在該系統(tǒng)中最大TNFoc效果，即它不會誘導(dǎo)U937細(xì)胞(人單核細(xì)胞類細(xì)胞系)最大粘附至上皮細(xì)胞。為此，這種設(shè)計能檢測TNFa作用的上調(diào)和下調(diào)兩者。將有和無TNFot的粘附的基礎(chǔ)水平用作評估試驗(yàn)試劑的影響的基線。在上皮細(xì)胞與試驗(yàn)試劑、用5jLiMCalcein-AM熒光標(biāo)記(分子探針)染色的U937細(xì)胞過夜孵育后，將細(xì)胞懸浮于補(bǔ)充有1%FBS的RPMI1640(無酚紅)中，并以100，000細(xì)胞/孔接種于經(jīng)沖洗的TRBMEC單層上。在30分鐘后，在用溫的RPMI1640(無酚紅)沖洗孔3次以除去未粘附的U937之前和之后，測量激發(fā)/發(fā)射波長為485/538nm(MolecularDevicesmicro-platereader,CytoFluorapplication)時的焚光水平。將沖洗前(總的)和沖洗后(粘附特異性的)的熒光水平用于測定粘附百分比(凈粘附值/凈總值x100=%粘附)。實(shí)施例7IL-31的生物鑒定方法讓用hzCYT0R17(IL-31RA)、hOSMRB和KZ134轉(zhuǎn)染的BAF3細(xì)胞<生長達(dá)到5xl()5和lx106個細(xì)胞/mL。將該細(xì)胞用檢測培養(yǎng)基(RPMI1640、10%FBS、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉和青霉素/鏈霉素(都來自Gibco))洗滌并以3xl()5細(xì)胞/mL再懸浮于檢測培養(yǎng)基中。在96孔不透明平板中，將通過1:2連續(xù)稀釋的在檢測培養(yǎng)基中的600pg/mL至9.38pg/mL的hIL-31標(biāo)準(zhǔn)樣品，以100juL/孔進(jìn)行滴定，一式兩份。將質(zhì)量對照標(biāo)準(zhǔn)樣品(Qualitycontrolstandard)以100pL350pg/mL和35pg/mL加入該平板中，一式兩份。試驗(yàn)樣品通常以1:2或1:4稀釋并一式兩份加入樣品孔中。加入100jiL經(jīng)洗滌的BAF3細(xì)胞進(jìn)每個孔中，終濃度為3xl(T細(xì)胞/孔。將平板在+37t:下于5%c02培養(yǎng)箱中孵育16-24小時。將平板以1200RPM離心5分鐘，除去培養(yǎng)基并加入25mL/孔的溶解緩沖液(Promega)進(jìn)每個孔中。10分鐘后，在光度計(Berthold)上讀取平板。光度計添加40juL/孔的熒光素酶底物混合物(Promega)并積分4秒時間內(nèi)的熒光值。將熒光值導(dǎo)出至電子表格，在那里對它們進(jìn)行分析并換成每mL體積每106個細(xì)胞的IL-31皮克值。實(shí)施例8IL-31參與體內(nèi)起始和維持接觸性過敏反應(yīng)方法I采用吸管操縱器，用溶解于丙酮橄欖油(4:1)溶液中的25yL0.5%的DNFB(2，4，二硝基-氟-苯，Sigma，St.LouisM0)涂于BALB/c小鼠的剃了毛的背部中部。載體對照組只接受25uL的丙酮橄欖油。5天后，將小鼠在吸入室中用異氟烷(isofluorane)麻醉，并用工程測;微計(Mitutoyo)測量實(shí)驗(yàn)動物和對照動物兩側(cè)耳廓以獲得基線測量值。然后，通過施用丙酮橄欖油(4:1)中10mLO.25%的DNFB至所有小鼠每只耳朵的兩側(cè)來攻擊小鼠。在24小時和48小時后測量接觸性過敏反應(yīng)作為右耳(受刺激)和左耳(未受刺激)之間的不同。所有的測量用工程測微計完成。通過首次接受試驗(yàn)的小鼠的受攻擊和未受攻擊的耳之間的耳腫脹的不同來測定背景值。用于FACS和/或ELISA分析的全部血液和血清在處死小鼠之前采集并且采集耳用于組織學(xué)。方法II(誘導(dǎo)Th2應(yīng)答)在第1天第二天和第8天，用吸管操縱器將1:1丙酮/酞酸丁酯(MSDS可獲得)溶液中的100jliL0.5%的FITC(異硫氰酸熒光素)涂于BALB/c小鼠的剃了毛的背部中部。在第13天，將小鼠在吸入室中用異氟烷麻醉，并用工程測微計(Mitutoyo)測量實(shí)驗(yàn)動物和對照動物的兩個耳廓以獲得基線測量值。通過施用25jiL0.5%的FITC(在l:1的丙酮/酞酸二丁酯中)至每只耳朵的背側(cè)來攻擊小鼠。在24小時和48小時后測量接觸性過敏反應(yīng)作為右耳(受刺激)和左耳(未受剌激)之間的不同。所有的測量用工程測微計完成。通過首次接受試驗(yàn)的小鼠的受刺激和未受刺激的耳之間的耳腫脹的不同來測定背景值。用于FACS和/或ELISA分析的全部血液和血清在處死小鼠之前采集并且采集耳用于組織學(xué)。方法III(誘發(fā)Thl應(yīng)答)用吸管操縱器將25jliL2%的oxazalone(在4:1的丙酮/橄欖油中)涂于BALB/c小鼠的剃了毛的背部中部。在第7天，將小鼠在吸入室中用異氟烷麻醉，并用工程測微計(Mitutoyo)測量實(shí)驗(yàn)動物和對照動物的兩邊耳廓以獲得基線測量值。通過施用8JULoxazalone至每只耳朵的背側(cè)來攻擊小鼠。在24小時和48小時后測量接觸性過敏反應(yīng)作為右耳(受刺激)和左耳(未受刺激)之間的不同。所有的測量用工程測微計完成。通過首次接受試驗(yàn)的小鼠的受攻擊和未受攻擊的耳之間的耳腫脹的不同來測定背景值。用于FACS和/或ELISA分析的全部血液和血清在處死小鼠之前釆集并且采集耳用于組織學(xué)。在實(shí)驗(yàn)的致敏階段和攻擊階段，用在此描述的對抗IL-31的抗體檢測了起始和永存化接觸性過敏反應(yīng)中IL-31的參與。實(shí)施例9體內(nèi)特應(yīng)性皮炎中IL-31的參與方法I(NC/Nga小鼠的致敏)從曰本CRL購買雄性NC/Nga小鼠。小鼠在到達(dá)時為4周大，并在SPF檢疫條件下圏養(yǎng)4周以適應(yīng)新環(huán)境。在抗原致敏開始時小鼠約10-11周大。將小鼠用異氟烷麻醉并用電動剪給背部剃毛。在5至6周內(nèi)，每周3次在頸部背面皮內(nèi)注射約10jag的屋塵螨(Dp)(IndoorBiotechnologies,特別訂購)提取物直到小鼠發(fā)生了皮膚病患。對照動物每周接受10MLPBS皮內(nèi)注入3次。所述Dp提取物根據(jù)Matsuoka及其同事(MatsuokaH.，等，Allergy:58，139(2003))的方法制備。簡而言之，將595mg低壓凍干的Dp耗盡培養(yǎng)提取物(pentcultureextract)溶解于12mL的無菌PBS(Gibco)中。將Dp在振蕩器上的50mLFalcon試管中混合30分鐘。將該提取物以2000rpm離心10分鐘，收集上清液并等分進(jìn)lmL的冷凍管中并在-20'C下保存。方法II(D011.10小鼠的致敏)D011.10轉(zhuǎn)基因小鼠由室內(nèi)群體繁殖并在抗原致敏開始時為9.5至14周大。在表皮致敏前24小時，將小鼠用異氟烷麻醉并用電動剪給小鼠的整個軀干(背部和腹部)剃毛。然后用Elastin外科帶(Johnson和Johnson)在小鼠的背部進(jìn)行膠帶剝脫。將lcm'無菌紗布片用500jag卵清蛋白(Calbiochem32467)或無菌PBS(Gibco)弄f顯，并用DuoDermExtraThin敷料(ConvaTec187932)將其砵占貝占在小鼠的背部左側(cè)。然后，讓布片和敷料覆蓋于Elastin外科帶的軀體包裹中以便小鼠不會移動或破壞該布片。讓布片粘貼7天并除去。讓小鼠在進(jìn)行另一輪表皮致敏之前休息2周。小鼠受到總共為三次一周的致敏。結(jié)果免疫組織化學(xué)分析粉塵螨致敏的NC/Nga和0VA致敏的D011.10動物的病患皮膚和非-病患皮膚中IL-31RA表達(dá)顯示，IL-31RA由小鼠中的表皮角質(zhì)細(xì)胞表達(dá)，然而在抗原致敏的動物與PBS致敏的動物之間未發(fā)現(xiàn)表達(dá)水平的顯著不同。實(shí)施例10通過施用大鼠抗-小鼠IL-31抗體對搔癢的抑制在另一個NC/Nga小鼠試驗(yàn)中，將4周大的雄性NC/Nga小鼠(SLC，Tokyo)暴露于已顯示出輕微至中度皮炎的NC/Nga小鼠。在7周時間內(nèi)，將小鼠分為3組并接受下列處理。在7周中每第5天，給予一組中的小鼠10mg/kg的IL-31大鼠-抗-小鼠注射劑；一組小鼠提供給血清白蛋白注射劑；而第三組不接受任何處理。對小鼠進(jìn)行每周兩次的臨床評估，評估皮膚病患的嚴(yán)重性。特別是，涉及的皮膚(0=未涉及、1=涉及背部、2=背部和面部、3=背部、面部和耳部)以及病患的嚴(yán)重性(0-正常皮膚、1-鱗狀且干燥的、2=結(jié)節(jié)性病患、3=血性病患)。此外，還評估搔抓行為。小鼠用它們的后趾的搔抓行為用MicroAct(Neuroscience，Tokyo,Japan)自動檢觀'J并客5見地評<古。在Ketalar/Xylazine麻醉下，將小的包#_特氟隆的磁體皮下植入小鼠兩只后爪的背面。將具有磁體的小鼠置于圓形線圏環(huán)繞的觀察室中。放大并記錄通過磁體移動在線圏中誘導(dǎo)的電流。分析程序使用下列設(shè)置來記錄騷抓事件閾值(V)0.1，事件間隔(秒)0.2,最大Freg(HZ)20.0，最小Freg(Hz)2.0;以及最小持續(xù)時間(秒)1.5。注意在NC/Nga小鼠模型中，長時間持續(xù)(>1.5秒)，而不是短時間持續(xù)的搔抓行為(0.3-1.5秒)與小鼠中皮炎-特異性搔癢感覺相關(guān)。測量的總體基礎(chǔ)終點(diǎn)(primaryendopoint)是搔抓行為、皮炎和體重。結(jié)果在整個階段，用大鼠-抗-小鼠IL-31抗體的處理不符合基礎(chǔ)終點(diǎn)。然而，另外的分析顯示，通過抗IL-31抗體處理，在22-43天的時段內(nèi)搔抓行為顯著減少。在該時間段內(nèi)，就整個階段而論，用抗-11-31抗體處理不會影響特應(yīng)性皮炎樣病患的發(fā)展，并且不會使患病動物的重量增加正?；赡苁怯捎谂R床表現(xiàn)的延緩發(fā)生或由于在處理結(jié)束時中和了自身抗體。在該試驗(yàn)中，搔抓行為，但不是皮炎，在開始用抗體處理時已在大多數(shù)動物中增加。實(shí)施例11IL-31在體內(nèi)DTH中的參與方法為了產(chǎn)生DTH反應(yīng)，在第0天，通過用弗氏完全佐劑(CFA,50-100ML總?cè)莘e)中的IOOMg卵清蛋白(0VA)在小鼠尾的基部進(jìn)行皮下免疫接種，來使小鼠對抗原致敏。一周后，將小鼠在吸入室中用異氟烷麻醉，并用工程測孩吏計(Mitutoyo)測量實(shí)驗(yàn)動物和對照動物的兩個耳廓以獲得基線測量值。用總體積10jliL的PBS中的10jag0VA通過皮內(nèi)攻擊小鼠，該溶液進(jìn)入左側(cè)耳廓，剛好在皮膚下面而不碰到任何靜脈。作為對照，小鼠還在右側(cè)耳廓接受IOnLPBS注射。在一些情形中，將在耳部給予皮內(nèi)注射0VA的單獨(dú)的對照組也用局部用皮質(zhì)甾類處理來作為抑制該反應(yīng)的陽性對照。在刺激后24和48小時時，將小鼠麻醉并測量耳朵的厚度。結(jié)果表示為特異性耳腫脹-試驗(yàn)耳朵的(24小時時的測量值-0小時時的測量值)-陰性對照耳朵的(24小時測量值-0小時測量值)。硬結(jié)(DTH的標(biāo)志)在注射致敏抗原18小時時可檢測到，并且在24-48小時為最大值?？捎|及的硬結(jié)的發(fā)作滯后是稱該反應(yīng)為"遲發(fā)型"的原因。結(jié)果對IL-31轉(zhuǎn)基因小鼠的DTH進(jìn)行了試驗(yàn)，然而，由于未受攻擊的IL-31轉(zhuǎn)基因動物的耳朵厚度增加，在IL-31Tg動物與野生型對照之間不能確定DTH在統(tǒng)計上有顯著差別。也在DTH反應(yīng)中試驗(yàn)了IL-31受體敲除了的動物，并且在受體敲除的動物和野生型動物之間未能觀察到DTH反應(yīng)的顯著不同。實(shí)施例12IL-31參與搔癢反應(yīng)的誘導(dǎo)方法I(辣椒堿治療IL-31處理的小鼠)將IO周大的BALB/c動物(CRL)麻醉，并在皮下注入鹽水中10%乙醇+10%吐溫-80中的0.25ml4mg/ml的辣椒堿溶液進(jìn)頸背之前，皮下注入O.1mg/kg的長效止痛劑鹽酸丁丙諾啡。讓動物在神經(jīng)毒素治療之后保持麻醉至少30分鐘。48小時后，皮下植入14天滲透泵用于持續(xù)遞送20yg/天的IL-31，遞送14天。采用下列標(biāo)準(zhǔn)0=無搔抓行為，動物表現(xiàn)正常；1-小范圍內(nèi)毛發(fā)變稀疏，觀察到搔抓行為；2=不嚴(yán)重的脫毛(一小部分)，搔抓行為；3=中度脫毛，搔抓行為；以及4=嚴(yán)重脫毛，過度的搔抓行為，每天監(jiān)控小鼠的脫毛和搔癢，監(jiān)控6天。結(jié)果表明，不用辣椒堿治療的小鼠在遞送IL-313天后顯示出2.625的平均的搔抓/脫發(fā)打分，而辣椒堿治療的小鼠顯示出顯著低的打分l。因此，在IL-31遞送之前用辣椒堿處理的小鼠在實(shí)驗(yàn)6天中既顯示出搔抓行為和脫毛發(fā)生的延遲，又顯示出較低的搔抓行為和脫毛的強(qiáng)度的打分。這些數(shù)據(jù)表明，IL-31的確誘導(dǎo)了有助于IL-31誘發(fā)的脫毛和搔癢的一些神經(jīng)元成分。因此，IL-31的中和可以減少患有涉及搔癢的皮膚障礙的患者中搔癢的發(fā)生和強(qiáng)度，并從而減少皮炎的發(fā)生和強(qiáng)度。方法IITac1基因純合無效的小鼠不表達(dá)可檢測的P物質(zhì)或神經(jīng)激肽A。這些小鼠顯著減小了對中度至劇烈刺激的傷害性疼痛反應(yīng)，并因此是將12周大的，Tac1敲除的小鼠植入遞送1jag/天的IL-31蛋白質(zhì)的14-天滲透泵，并采用下列標(biāo)準(zhǔn)每天觀察脫毛和搔癢0-無搔癢行為，動物表現(xiàn)正常；1=小范圍內(nèi)毛發(fā)變稀疏，觀察到搔抓行為；2=不嚴(yán)重的脫毛(小塊)，搔抓行為；3-中度脫毛，搔抓行為；以及4=嚴(yán)重脫毛，過度的搔抓行為。該研究結(jié)果顯示，與野生型對照小鼠比較，Tacl缺陷小鼠不易受IL-31誘發(fā)的搔抓/脫毛的影響。100%(10/10)的野生型小鼠在IL-31處理6天后已發(fā)生搔抓和脫毛跡象，而只有33.3%(2/6)的Tacl缺陷小鼠在相同的時間點(diǎn)表現(xiàn)出搔抓和脫毛現(xiàn)象。這些數(shù)據(jù)顯示，IL-31誘導(dǎo)了有助于IL-31-處理的小鼠中搔抓/脫毛表現(xiàn)型的神經(jīng)元成分，并且IL-31的中和可減少有關(guān)皮炎中的搔抓行為的發(fā)生和強(qiáng)度。方法III(IL-31中和抗體的施用)將約8-12周大的正常雌性BALB/c小鼠(CRL)皮下植入遞送1yg/天的mIL-31的14-天滲透泵(Alzet，#2002)。從IL-31遞送前1周開始，小鼠組每周兩次接受腹膜內(nèi)(i.p.)注射10mg/kg(200jig/小鼠)的大鼠抗-小鼠IL-31單克隆抗體。小鼠對照組以相同給藥方案，接受i.p.注射的載體(PBS/0.1%BSA)。釆用下列標(biāo)準(zhǔn)每天給小鼠的脫毛和搔癢打分0-無搔癢行為，動物表現(xiàn)正常；1-小范圍內(nèi)毛發(fā)變稀疏，觀察到搔抓行為；2=不嚴(yán)重的脫毛(小塊)，搔抓行為；3-中度脫毛，搔抓行為；以及4=嚴(yán)重脫毛，過度的搔抓行為。在所有試驗(yàn)中，用大鼠抗-mIL-31iiiAb處理的小鼠的癥狀發(fā)作延遲了約5至7天，并具有較低的脫毛和搔癢的總體打分。通過13天的試驗(yàn)，所有mAb處理的小鼠組(不考慮給藥頻率或濃度)發(fā)生了與對照小鼠類似的脫毛和搔癢。這些數(shù)據(jù)表明，IL-31的中和可延緩由IL-31誘導(dǎo)的搔抓/脫毛反應(yīng)的發(fā)作。實(shí)施例13小鼠-抗-人IL-31單克隆抗體的鑒定將一組21個產(chǎn)生(重組)人白細(xì)胞介素31(IL31)特異性單克隆抗體(mAb)的無性系雜交瘤分離。將10種產(chǎn)生強(qiáng)中和性mAb的雜交瘤分離。將這些雜交瘤基于竟?fàn)幮越Y(jié)合試驗(yàn)分配給兩個亞-類(sub-bin)。將11種產(chǎn)生弱中和性mAb的雜交瘤分離。將這些雜交瘤基于竟?fàn)幮越Y(jié)合試驗(yàn)分配給4個另外的類。一種raAb適用于蛋白質(zhì)印跡，并且它同樣適用于免疫組織化學(xué)。確定了三種適合用作竟?fàn)幮赞卓箘┑膍Ab。還確定了適合用于夾心免疫測定法的單克隆抗體。A.通過Biacore進(jìn)行表位分類法材料捕獲抗體是山羊-抗-小鼠IgG-Fcv特異性的(Jackson#115-005-071);封閉抗體是多克隆IgGFc片段(JacksonLabs.);抗原在BHK中產(chǎn)生的具有CEE親和標(biāo)簽的rlL31;Biacore1000;BiacoreCM5NHS-激化的芯片(Biacore，PNBR-1000-14)。方法該試驗(yàn)在Biacorel00()TM系統(tǒng)中進(jìn)^f亍。BIAloguev.1.2用于程序控制運(yùn)行方法。將山羊-抗-小鼠Fc抗體通過賴氨酸殘基共價地固定在BiacoreCM5芯片上以形成用于試驗(yàn)的活性結(jié)合表面。首先將21種小鼠抗-huIL31mAb克隆條件培養(yǎng)基上清液的每種注射至山羊-抗-小鼠Fc表面上，以便將要檢測的第一種mAb能以有利方向結(jié)合至抗-小鼠抗體表面。然后，將剩余的結(jié)合位點(diǎn)通過注射無關(guān)的多克隆IgGFc片段封閉。隨后注入抗原(rlL31)并捕獲于所述的第一種抗體表面。在這之后，另外注入21種小鼠抗-huIL31mAb克隆條件培養(yǎng)基上清液的其中一種來檢測第二種的結(jié)合。如果第一種和第二種mAb竟?fàn)幙乖舷嗤慕Y(jié)合位點(diǎn)，則第二種mAb不會結(jié)合，如果兩種mAb不竟?fàn)幙乖系南嗤Y(jié)合位點(diǎn)，則第二種mAb會結(jié)合。將每種上清液作為作為第一種mAb與整組的raAb組合來檢測。實(shí)施對照循環(huán)來說明在沒有第一種mAb或抗原時缺少第二種mAb反應(yīng)。將每種mAb相對于自身進(jìn)行檢測用作陰性對照來確定本底信號水平。采用BioEvaluation3.2RCI軟件編輯數(shù)據(jù)，然后下載至ExceT用于數(shù)據(jù)處理。在檢測單克隆抗體對的每次循環(huán)之間，山羊-抗-小鼠Fc表面用50mMHC1進(jìn)行2x30秒的洗滌來再生。將強(qiáng)中和性mAb(IO種)和弱中和性mAb(11種)在兩個分離的組中研究，除了在研究弱中和性mAb時，將來自雜交瘤292.64.6的mAb包括在內(nèi)作為強(qiáng)中和性mAb的代表。另外，在評價了開始的兩個分類法組的關(guān)于表位類的相對親合力測量值和中和數(shù)據(jù)后，將第三板分類法在包括強(qiáng)和弱中和性mAb的8種"選擇的"mAb上實(shí)施。Mil—完成檢測單克隆抗體配對的三個組用于分析強(qiáng)中和性和弱中和性niAb。第一組相對于彼此地檢測所有強(qiáng)中和性mAb，而第二組相對于.彼此地檢測所有弱中和性mAb(以及來自雜交瘤292.64.6的代表性的強(qiáng)中和性mAb)。完成第三組用以明確評估選擇用于進(jìn)一步評估的一亞組強(qiáng)和弱中和性mAb的配對。除了測量到的不同mAb對的絕對反應(yīng)(RU)差異，當(dāng)對的次序(orientation)改變時(即抗體對的一種mAb用作第一種mAb而另一種用作第二種mAb)，多種mAb對表現(xiàn)不同。這種行為經(jīng)常觀察到，并且一般歸因于涉及的mAb具有重疊的表位。從對最初的兩個完整組的分析獲得了總共4個不同的類。對于第一組，所有強(qiáng)中和性抗體分組在一起而確定了單個類(類1:292.12.3、292.39.5、292.51.5、292.63.5、292.64.6、292.72.3、292.84.1、292.105.4、292.109.4、292.118.6)。在第二組中，弱中和性抗體分組成3個不同于類#1的單個代表(292.64.6)的另外的主要類(類2:294.35.2、294.146.5、292.152.4、292.152.4、294.154.5;類3:294.35.3、291.78.4、294.158.5、294.155.6、294.163.2;類4:294.144.3)。另外，在組2中評價的許多的mAb配對表明，反應(yīng)的明顯不對稱取決于其中檢測mAb的次序，表明了結(jié)合位點(diǎn)的一些重疊。來自類3的兩種mAb，294.35.3和291.78.4在作為第二種mAb檢測時，顯示出與類2中的mAb明顯竟?fàn)?。同樣在組2中，強(qiáng)中和性抗體292.64.6(類1)在作為第一種抗體檢測時顯示與類3中的mAb竟?fàn)?。在完成最初的兩個分類法平板后，選擇一組最強(qiáng)中和性raAb和最高親合力的弱中和性mAb用于進(jìn)一步評估，并在組3中相對于彼此進(jìn)行檢測。第三組的結(jié)果與先前的試驗(yàn)完全一致，顯示強(qiáng)中和性抗體在相同的類內(nèi)，而弱中和性抗體分進(jìn)已確定的多個類內(nèi)。另外，第三組表明，來自類2的兩種mAb(294.35.2和292.154.4)與屬于類1的一亞組mAb(292.12.3、292.72.3、292.84)的結(jié)合部分重疊。這導(dǎo)致在類1中分為亞-類1A和1B。在組3中，來自雜交瘤292.163.2(類3)和292.144.3(類4)的mAb單獨(dú)地成類(binned)。B.微量滴定板(無標(biāo)記的竟?fàn)幮訣LISA)表位分類法材料捕獲抗體是山羊-抗-小鼠IgG(FcY特異性的)Jackson#115-005-071;封閉抗體是小鼠IgGl(ZymoGenetics);雜交瘤的條件培養(yǎng)基上清液用于該試驗(yàn)；抗原是采用Sulfo-NHS-Biotin試劑盒(Pierce,Rockford，IL)生物素化的具有CEE親和標(biāo)簽的、在BHK中產(chǎn)生的rlL31;NuncMaxisorp96孑L平板(NalgeN畫，Rochester,NY);ELISAB(PBS、0.1%吐溫20、1%BSA);抗生蛋白鏈菌素-HRP(Pierce,Rockford，IL);TMB底物(BioFXLaboratories,0wingsMills,MD)。方法該方法類似于由Nagata等(2004)描述的無標(biāo)記的竟?fàn)幮訣LISA(LFC-ELISA)。用于表位類并的該方法利用生物素化的rIL31。將微量滴定板用在ELISAB(PBS、0.1%吐溫20、1%BSA)中稀釋的1jig/mL山羊抗一小鼠IgGFc-y特異'l"生抗體(JacksonImmunoResearch#115-005-071)以100jiL/孔包纟皮。在環(huán)境溫度下結(jié)合這種包^皮抗體3小時后，將含有每種mAb的條件培養(yǎng)基在ELISAB中稀釋以獲得約0.5ng/mL的mAb濃度，并讓其在4°C下結(jié)合至山羊抗-小鼠IgG包被的平板過夜(mAb#l)。平行地，將第二組條件培養(yǎng)基(mAb#2)在聚笨乙烯試管中稀釋達(dá)到在ELISAB中約0.5Mg/mL，將其與50ng/mL生物素化的rIL31抗原混合，并在4°C下孵育過夜。在將mAb#l與包被抗體孵育后，用無關(guān)的抗體封閉該平板用以飽和平板上空著的結(jié)合位點(diǎn)。將mAb纟2-生物素-rIL31混合物加入平板并讓其結(jié)合。作為該檢測中的對照(無竟?fàn)?，將50ng/mL生物素化的rIL31直接加入(沒有與mAb#2預(yù)孵育)至含有固定化的mAb#l的孔中。在與生物素化IL31-mAb#2復(fù)合物孵育后，將抗生蛋白鏈菌素-HRP(Pierce,Rockford,IL)以0.5yg/mL加入平板中。將平板用TMB底物(BioFXLaboratories,OwingsMills,MD)顯影,并用酶標(biāo)儀(MolecularDevicesSpectraMax340，Sunnyvale,CA)測量450nm時單個孑L的吸光度。如果mAb"識別與mAb#2不同的表位，則生物素-rIL31-mAb#2復(fù)合物結(jié)合至平板導(dǎo)致高的吸光度讀數(shù)。如果mAb#l識別與mAb#2相同的表位，則生物素-rIL31-mAb#2復(fù)合物不會結(jié)合至平板導(dǎo)致低的吸光度讀數(shù)。結(jié)果將整組的21種mAb在一系列的6個96孔微量滴定板中相對于它們自己同時檢測。記錄每種組合和次序在450nm時的吸光度值(A450認(rèn))并將其編輯。在所有情形中，獲得自身-自身組合的低吸光度值。除了自身-自身對照，將50ng/mLrlL31-生物素(沒有竟?fàn)幮缘膍Ab#2)的陽性對照用每個平板上的每種第一種mAb檢測。獲得了每種第一種mAb的兩種陽性對照樣品，并且成對的樣品的值相似。從陽性對照孔(無raAb并2)獲得的ll種弱中和性mAb中的9種(來自類2、3或4)的吸光度值比測量得到的剩余mAb的對照樣品的吸光度值低。據(jù)推測這是由于那些mAb較低的親合力(更高的EC50)所致。為了有助于理解結(jié)果，將吸光度值標(biāo)準(zhǔn)化以便將測量的一整排的mAb的任意組合(捕獲mAb(mAb#l)保持不變)的最大吸光度賦予值100%。標(biāo)準(zhǔn)化的值分成兩個截然不同的組屬于值32%以下的一大簇值對應(yīng)竟?fàn)帲鴮儆?2y。以上的笫二大簇值對應(yīng)缺少竟?fàn)帯?2%的閾值用于將mAb的每種組合及次序歸屬于兩種獨(dú)立類型(無竟?fàn)幒途範(fàn)?中一種。利用分類的數(shù)據(jù)，基于系統(tǒng)聚類算法自動完成了分類法。如在采用Biacore的分類法實(shí)驗(yàn)過程中觀察到的，取決于哪種mAb用作第一種mAb，一些mAb對可不同地分類。高水平的嚴(yán)格性(兩種次序中都需要竟?fàn)?用于將mAb分配給一級類。隨后將較低的嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)(只有一種次序中需要竟?fàn)?用來幫助將mAb基于行為的微小不同歸類為亞-類。將標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)根據(jù)基于高嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)的5個一級類分配進(jìn)行分組。另外，mAb的組合和次序是用顏色編碼的(白色為竟?fàn)幎谏珵榉蔷範(fàn)?，用以幫助肉眼觀察導(dǎo)致mAb歸屬于亞-類的相互作用。通過竟?fàn)幮訣LISA進(jìn)行的分類法的結(jié)果與基于采用Biacore的研究結(jié)果的類分配一致。采用嚴(yán)格的分類法標(biāo)準(zhǔn)，確定了下列類類#1(含有所有強(qiáng)中和性mAb):292.72.3、292.64.6、292.63.5、292.51.5、292.39.5、292.12.3、292.118.6、292.109.4、292.105.4、292.84.1類#2:294.35.2、294.154.5、294.146.5、292.154.4、292.152.4類#3:294.35.3、294.163.2、294.158.5、294.155.6類#4:294.144.3類#5:291.78.4對于類#1,來自類#1中3種雜交瘤的mAb(292.72.3、292.12.3、"2.84.1)在用作第二種mAb(mAb#2)時表明與3種來自類#2的mAb竟?fàn)??；谠撔袨椋瑢㈩恖分為兩個亞-類，即"A和并1B，類"B含有與類2mAb竟?fàn)幗Y(jié)合的mAb。類井lA含有292.64.6、292.63.5、292.51.5、292.39.5、292.118.6、292.109.4、292.105.4。類并1B含有292.72.3、292.12.3和292.84.1。對于類#2，用于將類#2分為3個亞-類的三種截然不同的相互作用是顯而易見的。類并2A含有來自雜交瘤294.146.5的mAb,其與類#1和類#2兩者的所有mAb竟?fàn)?。類?B含有來自雜交瘤294.35.2和294.154.5的mAb,其與來自類#1的(第二種)mAb竟?fàn)?。類?C含有來自雜交瘤292.154.4和292.152.4的mAb，其在用作第二種mAb時與來自類#4的mAb竟?fàn)?。對于?3、類#4和類#5:類#3中的mAb(來自雜交瘤294.35.3、294.163.2.1和294.155.6)在它們用作第二種mAb時與來自類#4和類#5的mAb竟?fàn)?。?4(來自雜交瘤294.144.3.5)和類#5中的mAb主要通過它們與亞-類并2C的mAb相互作用(以及在蛋白質(zhì)印跡上雜交瘤294.144.3的mAb的特殊結(jié)合特性)區(qū)分。當(dāng)整組的21種mAb用LFC-ELISA方法同時檢測時，類1和亞類并1A和弁1B可明顯確定。在同時檢測整組mAb時也可確了類#2和類#3的部分重疊，并且將類#2分為3個亞-類。與基于Biacore數(shù)據(jù)的類分配的一個主要偏差是，當(dāng)LFC-ELISA數(shù)據(jù)采用嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)時，來自雜交瘤291.78,4和294.144.3的mAb^皮分配給兩個截然不同的類。基于Biacore研究，已經(jīng)將來自雜交瘤291.78.4的mAb已分配給類#3。C.基于平板的親合力測量材料捕獲多克隆抗體是山羊-抗-小鼠IgG(FcY特異性的)(JacksonImmunoResearchWestGrove,Pennsylvania#115-005-071);封閉多克隆抗體是小鼠抗-人IgG(JacksonJmmunoResearch，#209-005-082);雜交瘤的條件培養(yǎng)基上清液用于該試驗(yàn)；抗原是用Sulfo-NHS-Biotin試劑盒(Pierce，Rockford,IL)生物素化的、在BHK中產(chǎn)生的具有CEE親和標(biāo)簽的rlL31;NuncMaxisorp96孑L平板(NalgeN薩，Rochester,NY);EUSAB(PBS、0.1%吐溫20、1%BSA);抗生蛋白鏈菌素-HRP(Pierce,Rockford,IL);TMB底物(BioFXLaboratories,OwingsMills,MD)。方法該方法類似于vanHeyningen(1986)描述的方法。將孩t量滴定板用在ELISAB(PBS、0.1%吐溫20、1%BSA)中稀釋的1mg/mL山羊抗-小鼠IgGFc-y特異性抗體(JacksonImmunoResearch#115-005-071)以100mL/孔包被。在環(huán)境溫度下結(jié)合該包被抗體3小時后，將每種純化的單克隆抗體上清液在ELISAB中稀釋以獲得約1jig/mL的mAb濃度，并讓其在環(huán)境溫度下結(jié)合至平板l小時。500ng/mL至0ng/mL的生物素化的rIL31抗原的連續(xù)稀釋物在ELISAB中制備并加入孔中。在與生物素化抗原孵育后，將抗生蛋白鏈菌素-HRP(Pierce,Rockford，IL)以O(shè).5jag/mL加入平板中。將平板用TMB底物(BioFXLaboratories,OwingsMills,MD)顯影，并用酶標(biāo)儀(MolecularDevicesSpectraMax340，Sunnyvale,CA)觀'J量450nm時單個孔的吸光度。將重復(fù)點(diǎn)的讀數(shù)平均并用4-參數(shù)擬合分析數(shù)據(jù)。將4參數(shù)擬合的"C"值報告為表觀EC50(ng/mL)，其為在該檢測中產(chǎn)生半數(shù)最大反應(yīng)的生物素-rlL31濃度。結(jié)果4-參數(shù)擬合從所有21種mAb的試驗(yàn)曲線獲得。在該檢測中產(chǎn)生半數(shù)最大反應(yīng)的生物素-rIL31的濃度(EC50)為3.3至236ng/mL范圍，所有10種強(qiáng)中和性mAb顯示出低的且類似的EC50值(3.3-4.4ng/mL)。D.蛋白質(zhì)印跡材料抗原是在BHK中產(chǎn)生的具有CEE親合性標(biāo)簽的rlL31;4-12%NuPAGEBis-Tris凝膠(InvUrogen，Carlsbad,CA);非還原性樣品緩沖液(Invitrogen，Carlsbad,CA);分子量標(biāo)準(zhǔn)是SeeBlue(Invitrogen);lxMES電泳緩沖液(Invitrogen);WesternA緩沖液(50mMTrispH7.4、5mMEDTA、150raMNaCl、0.05%Igepal、0.25%明膠)；0.2jum硝酸纖維素膜(Invitrogen);綿羊抗-小鼠IgG-HRP(Amersham，Piscataway，NJ);親和提純的對rIL31特異性的兔pAb(ZymoGenetics);驢抗-兔Ig-HRP(Amersham);Lumi-LightPlus4匕學(xué)發(fā)光制劑(Roche，Mannheim,Germany);Lumi—Imager(Mannheim-Boehringer)。方法在該試驗(yàn)中檢驗(yàn)mAb在蛋白質(zhì)印跡上檢測變性的和變性的/還原的rIL31的能力。將rIL31抗原與還原性或非還原性的樣品緩沖液混合，在70X:下加熱10分鐘，然后以100ng/泳道上樣至4-12%NuPAGEBis-Tris凝膠(Invitrogen,Carlsbad,CA)中。分子量標(biāo)準(zhǔn)是SeeBlue(Invitrogen)，并且電泳在IXMES電泳緩沖液(Invitrogen)中進(jìn)行。將凝膠中的蛋白質(zhì)帶轉(zhuǎn)移至0.2Mm的硝酸纖維素膜(Invitrogen)上，并在WesternA緩沖液(50mMTrispH7.4、5mMEDTA、150mMNaCl、0.05%Igepal、0.25%明膠)中的2.5%脫脂千乳粉中封閉過夜。硝酸纖維素膜用約O.lpg/mLmAb濃度的每種單克隆抗體探測。隨后將印跡用綴合至辣根過氧化物酶的二抗(綿羊抗一小鼠IgG—HRP;Amersham，Piscataway,NJ)探測。作為陽性對照，將分離的蛋白質(zhì)印跡用0.1jag/mLIL-31特異性的兔多克隆抗體(ZymoGenetics)，以及綴合至辣根過氧化物酶的二抗(驢抗-兔Ig—HRP;Amersham)探觀寸。將蛋白質(zhì)印跡上的帶用Lumi—LightPlus試劑(Roche,Mannheim,Germany)檢測，并在Lumi—Imager(Mannheim-Boehringer)上記錄化學(xué)發(fā)光。結(jié)果抗IL31mAb的蛋白質(zhì)印跡分析表明，21種雜交瘤中只有3種的mAb檢測到變性的rIL31抗原。最強(qiáng)的信號從雜交瘤294.144.3產(chǎn)生的mAb獲得。這種mAb還比未-還原的/變性的rIL31更強(qiáng)地檢測還原的/變性的rIL31。用該mAb觀察到的信號強(qiáng)度與用多克隆抗體對照獲得的類似。值得注意的是，來自雜交瘤294.144.3的mAb屬于與評估的其它mAb分離的類。來自兩種其它雜交瘤(292.84.1和292.64.6)的單克隆抗體可非常弱地檢測未-還原的/變性的rlL31，但不能檢測還原/變性的rlL31。這種弱信號沒有在掃描的印跡中再現(xiàn)。這些mAb都是來自類"的中和抗體。實(shí)施例14大鼠抗-小鼠單克隆抗體對IL-31配體的相對結(jié)合親和力4種大鼠-抗Ms-IL-31-配體MAb對抗IL-31配體的相對結(jié)合親和力可如下測定。檢測克隆271.26.6.6.1、克隆271.33.3.2.1、克隆271.33.1.2.2和克隆271.39:4.6.5。將山羊-抗-大鼠IgG-Fcy特異性抗體(Jackson)固定在CM5Biacore芯片上。在初步試驗(yàn)后，將該測定進(jìn)一步優(yōu)化以使每個MAb結(jié)合至抗-大鼠捕獲表面上，并隨后將一濃度系列的IL-31配體注射通過MAb來觀察結(jié)合和解離。在每次運(yùn)行后，通過2次注入30mMHCl使表面再生回到固定的抗-大鼠抗體。產(chǎn)生了每種MAb的數(shù)據(jù)并用評估軟件確定相對動力學(xué)值。通過評估MAb-抗原結(jié)合曲線產(chǎn)生的相對動力學(xué)數(shù)據(jù)在表4中顯示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table>實(shí)施例15在AD小鼠才莫型中TARC和MDC響應(yīng)抗IL-31抗體的減少方法I將6周大的雄性NC/Nga小鼠(CRLJapan)每周三次用50"g粉塵螨提取物(D.pteronyssinus，IndoorBiotechnologies)在背部通過皮內(nèi)致敏，并對類似AD病患打分。在致敏5周后，對小鼠實(shí)施安樂死，并且切離右耳并置于補(bǔ)充有RPMI+2°/。FBS(GIBC0Invitrogen)的48孔培養(yǎng)皿(Corning)的單個孔中。將平板置于5%0)2的濕度控制保溫箱中。在24小時后收集上清液并在-20'C下冷凍直到進(jìn)一步分析。方法II將12周大的雌性NC/Nga小鼠(CRLJapan)每周3次用10jigSEB(ToxinTechnology)在耳內(nèi)和背上通過皮內(nèi)致敏。對小鼠類似AD的病患打分。在致敏5周后，讓小鼠安樂死，并從每只小鼠接受注射的耳朵取出6mm活檢穿孔器提取物并置于補(bǔ)充有RPMI+2%FBS的48孔培養(yǎng)皿的單個孔中。將平板置于5。/。C02的濕度控制保溫箱中。在24小時后收集上清液并在-20。C下冷凍直到進(jìn)一步分析。將這兩種研究中的小鼠組用10mg/kg的大鼠抗-小鼠IL-31單克隆抗體或載體進(jìn)行腹膜內(nèi)處理，處理從致敏1至2周后開始，每周2次。24-小時上清液樣品中的TARC和MDC濃度通過常規(guī)的ELISA(R&DSystems)觀'J量。在這兩種研究中，與對照小鼠比較，TARC和MDC的濃度在來自抗IL-31處理的小鼠的耳朵上清液中較低，然而，當(dāng)通過AN0VA分析時這些結(jié)果在統(tǒng)計上不顯著，可能是由于小的樣本量。當(dāng)將來自兩個試驗(yàn)的數(shù)據(jù)合并并分析時，在受處理組之間存在統(tǒng)計上顯著的差異。實(shí)施例16IL-31中和抗體的施用將約8-12周大的正常雌性BALB/c小鼠(CRL)皮下植入遞送1jug/天的mIL-31的14-天滲透泵(Alzet,#2002)。從IL-31遞送前1周開始，數(shù)組小鼠每周兩次接受腹膜內(nèi)(i.P.)注射10mg/kg(200jig/小鼠)的大鼠抗-小鼠IL-31單克隆抗體。小鼠對照組以相同給藥方案，接受i.p.注射的栽體(PBS/0.1%BSA)。采用下列標(biāo)準(zhǔn)每天給小鼠的脫毛和搔癢打分0-無搔癢行為，動物表現(xiàn)正常；1-小范圍內(nèi)毛發(fā)變稀疏，觀察到搔抓行為；2=不嚴(yán)重的脫毛(小塊)，搔抓行為；3-中度脫毛，搔抓行為；以及4=嚴(yán)重脫毛，過度的搔抓行為。在所有試驗(yàn)中，用大鼠抗-mIL-31mAb處理的小鼠的癥狀發(fā)作延遲了約5至7天，并具有較低的脫毛和搔癢的總體打分。通過13天的試驗(yàn)，所有mAb處理的小鼠組(不考慮給藥頻率或濃度)發(fā)生了與對照小鼠類似的脫毛和搔癢。這些數(shù)據(jù)表明，IL-31的中和可延緩由IL-31誘導(dǎo)的搔抓/脫毛反應(yīng)的發(fā)作。根據(jù)上文中描述的，應(yīng)該理解，雖然為了說明目的已在此描述了本發(fā)明的特殊實(shí)施方案，但可作出多種修改而不背離本發(fā)明的精神和范圍。因此，本發(fā)明僅受附帶的權(quán)利要求書限制。權(quán)利要求1.一種單克隆抗體，所述單克隆抗體包括特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO2的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA-6816、c)ATCC專利保藏名稱PTA-6829、d)ATCC專利保藏名稱PTA-6830、e)ATCC專利保藏名稱PTA-6831、f)ATCC專利保藏名稱PTA-6871、g)ATCC專利保藏名稱PTA-6872、h)ATCC專利保藏名稱PTA-6875，和i)ATCC專利保藏名稱PTA-6873。2.—種特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA-6816、c)ATCC專利保藏名稱PTA-6871、d)ATCC專利保藏名稱PTA-6829,和e)ATCC專利保藏名稱PTA-6830。3.—種特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA-6816,和c)ATCC專利保藏名稱PTA-6871。4.一種特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6829，和b)ATCC專利保藏名稱PTA-6830。5.—種特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6872,和b)ATCC專利保藏名稱PTA-6875。6.—種特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:11的多肽的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6874。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6的抗體，其中所述抗體中和IL-31(SEQIDNO:2)與IL-31RA(SEQIDNO:5)的相互作用。8.根據(jù)權(quán)利要求1-6的抗體，其中所述抗體是(a)鼠單克隆抗體、(b)源自(a)的人源化抗體、或(c)抗體片段或(d)人單克隆抗體。9.權(quán)利要求1-6的抗體，其中所述抗體還含有放射性核素、酶、底物、輔助因子、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、肽標(biāo)簽、磁性顆粒或毒素。10.權(quán)利要求1-6的抗體，其中所述抗體還包含聚乙二醇化。11.權(quán)利要求l-6的抗體，其中所述抗體是中和性抗體。12.權(quán)利要求l-6的抗體，其中施用所述抗體至哺乳動物抑制、防止、減少或阻斷所述多肽的促炎活性。13.權(quán)利要求l-6的抗體，其中施用所述抗體至哺乳動物抑制、防止、減輕或阻斷了與所述多肽的促炎活性相關(guān)的搔抓行為和皮炎。14.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所迷多肽能夠結(jié)合由保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6815的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體。15.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6816的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體。16.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由l呆藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6829的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體。17.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6830的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體。18.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6831的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體。19.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6871的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體。20.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6872的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體。21.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6875的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體。22.根據(jù)權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，具有ATCC專利保藏名稱PTA-6873的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體。23.—種減輕哺乳動物中的炎癥的方法，所述方法包括施用給哺乳動物一定量的根據(jù)權(quán)利要求1的IL-31抗體，以此減輕炎癥。24.—種治療受其中IL-31起作用的炎性疾病折磨的哺乳動物的方法，所述方法包4舌施用IL-31拮抗劑給該哺乳動物，這樣炎癥得以減輕，其中所述拮抗劑包括(i)特異性結(jié)合IL-31RA的多肽或多肽片段的抗體、抗體片段或結(jié)合多肽，或者(ii)IL-31RA的多肽或多肽片段；并且其中IL-31的炎性活性得以減少。25.—種在哺乳動物中減輕、抑制或防止其中IL-31起作用的搔癢癥的影響的方法，所述方法包括施用IL-31拮抗劑給哺乳動物，這樣搔癢癥得以減輕，其中所述拮抗劑包括(i)特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2或其片段的多肽的多肽或多肽片段的抗體、抗體片段或結(jié)合多肽，并且其中IL-31的騷癢活性得以減少。26.—種在哺乳動物中減輕、抑制或防止其中IL-31起作用的搔癢癥的影響的方法，所述方法包括施用IL-31拮抗劑給哺乳動物，這樣使得哺乳動物中的騷癢得以減輕，其中所述的拮抗劑包括(i)特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDN0:2，或其片段的多肽的多肽或多肽片段的抗體、抗體片段或結(jié)合多肽，并由此IL-31的搔抓活性得以減少。27.權(quán)利要求23-26的方法，其中所述疾病是炎性疾病，包括搔癢性疾病。28.根據(jù)權(quán)利要求23-26的方法，其中所述疾病是特應(yīng)性皮炎。29.根據(jù)權(quán)利要求23-26的方法，其中所述疾病是結(jié)節(jié)性癢滲。30.根據(jù)權(quán)利要求23-26的方法，其中所述抗體是根據(jù)權(quán)利要求1-6的抗體。31.—種特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由選自下列的雜交瘤克隆名稱號產(chǎn)生的單克隆抗體a)克隆292.12.3.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6815)、b)克隆292.63.5.3(ATCC專利保藏名稱PTA-6829)、c)克隆292.72.3.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6816)、d)克隆292.84.1.6(ATCC專利保藏名稱PTA-6871)和e)克隆292.118.6.4(ATCC專利保藏名稱PTA-6830)。32.—種特異性結(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中所述多肽能夠結(jié)合由選自下列的雜交瘤克隆名稱號產(chǎn)生的單克隆抗體a)克隆294.35.2.6.3(ATCC專利保藏名稱PTA-6872)、b)克隆294.144.3.5(ATCC專利保藏名稱PTA-6873)、c)克隆294.154.5.6(ATCC專利保藏名稱PTA-6875)，和d)克隆294.163.2.1(ATCC專利保藏名稱PTA-6831)。33.—種單克隆抗體，所述單克隆抗體包括能夠竟?fàn)幗Y(jié)合含有氨基酸序列SEQIDNO:2的多肽的單克隆抗體，其中該多肽能夠結(jié)合由雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體，所述雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA-6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA-6816、c)ATCC專利保藏名稱PTA-6829、d)ATCC專利保藏名稱PTA-6830、e)ATCC專利保藏名稱PTA-6831、f)ATCC專利保藏名稱PTA-6871、g)ATCC專利保藏名稱PTA-6872、h)ATCC專利保藏名稱PTA-6875，和i)ATCC專利保藏名稱PTA-6873。34.—種雜交瘤，其中所述雜交瘤由美國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，具有選自下列的ATCC專利保藏名稱a)ATCC專利保藏名稱PTA--6815、b)ATCC專利保藏名稱PTA--6816、c)ATCC專利保藏名稱PTA--6829、d)ATCC專利保藏名稱PTA--6830、e)ATCC專利保藏名稱PTA--6831、0ATCC專利保藏名稱PTA--6871、g)ATCC專利保藏名稱PTA--6872、h)ATCC專利保藏名稱PTA--6875,和i)ATCC專利保藏名稱PTA-6873。全文摘要本發(fā)明涉及治療搔癢疾病的方法，所述方法包括向下述疾病施用IL-31單克隆抗體，所述疾病包括但不局限于接觸性皮炎、特應(yīng)性皮炎、藥物誘發(fā)的延遲型皮膚變應(yīng)性反應(yīng)、中毒性表皮壞死松解癥、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、大皰性類天皰瘡、禿頭癥、白癲風(fēng)、酒糟鼻、結(jié)節(jié)性癢疹、硬皮病、單純皰疹病毒或其組合。本發(fā)明進(jìn)一步提供了產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤。文檔編號C07K16/24GK101198624SQ200680021182公開日2008年6月11日申請日期2006年5月8日優(yōu)先權(quán)日2005年5月6日發(fā)明者A·C·哈倫,A·W·斯亞達(dá)克,E·弗洛爾凱維奇,J·比爾斯伯勒,S·利內(nèi)申請人:津莫吉尼蒂克斯公司