專利名稱：一種同時制備甜菊苷和萊鮑迪苷a的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及甜菊苷和萊鮑迪苷A的分離制備方法。
技術背景甜葉菊為菊科植物甜葉菊(StiviarebaudianaBertoni)多年生草本植物， 原產于巴拉圭東北部與巴西接壤的阿曼拜山脈，幾百年來，當?shù)鼐用袷秤煤椭?療疾病的常用原料。1977年后我屬開始引種栽培，至今己有安徽、黑龍江、江 蘇等20多個省市種植。甜葉菊具有芬芳、清涼的甜味，是因為其含有一類高甜度的成分-甜菊苷類 成分，該類成分不僅甜度是蔗糖的300倍以上，并且具有安全、無毒、低熱量 等無可比擬的優(yōu)點，因此甜葉菊被譽為世界"第三糖源"。當今世界，由于攝入 過多的高能量食物(尤其是還有蔗糖、氨基酸等傳統(tǒng)甜味劑)，而承受肥胖癥、 冠心病、高血壓糖尿病等疾病困擾的人越來越多，因此，對于甜葉菊中甜味成 分-甜菊糖苷類成分的開發(fā)應用就顯得愈發(fā)重要和迫切。隨著對甜葉菊糖苷類成 分研究的深入，人們還發(fā)現(xiàn)此類成分還具有降血糖、降血脂、抗高血壓等藥理 活性。甜菊糖苷類成分越來越被人認為是一種接近理想的甜味劑。因此，建立一種適合工業(yè)化生產的分離制備甜葉菊苷類成分的方法是十分 必要的。我們經(jīng)過對甜葉菊成分、制備工藝、檢測方法等進行研究后，申請了 專利《一種同時制備甜葉菊總甜菊苷和甜葉菊總黃酮的方法》(申請?zhí)?00710111313. 4)，《甜葉菊甜菊苷類和黃酮類提取物及其制備方法》(申請?zhí)?00710111314. 9)，本發(fā)明報道同時分離制備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的方法。 發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種同時制備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的方法，甜 菊苷和萊鮑迪苷A的純度高于85%，適合工業(yè)化生產。 本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的本發(fā)明涉及的同時制備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A方法為a)以干燥的甜葉菊(StiviarebaudianaBerto)葉或新鮮采集的甜葉菊葉或其它部位為原料，用選自水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇或它們 的至少兩種混合物為溶劑進行提取，提取方法可以是煎煮、加熱回流、超聲提 取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取等，優(yōu)選的提取工藝為原料加10 95%乙醇，回流提取1 3次，每次提取0.5 2小時，溶劑用量為5 15倍量(L/kg)。b)將a)提取物通過選自樹脂吸附、聚酰胺層析柱、大孔樹脂吸附法、聚酰 胺層析法、硅膠柱層析法、反相柱層析法或S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl 柱層析法或萃取法以及結晶法的一種或多種方式進行分離，用氯仿、甲醇、丙 酮、乙酸乙酯、正丁醇、丙醇、水或它們的至少兩種混合物為溶劑作為洗脫劑 進行洗脫。C)將b)中洗脫液合并，干燥，加適量氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、 丙醇、水或它們的至少兩種混合物為溶劑進行重結晶，可以在加熱、常溫或冷 卻狀態(tài)下進行。d)將b)中洗脫液合并，干燥，采用選自溶劑萃取法、大孔樹脂吸附法、聚酰 胺層析法、硅膠柱層析法、反相柱層析法或S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl 柱層析法等方法中的一種或多種方法進行純化，分別得到甜菊苷和萊鮑迪苷A 的結晶。根據(jù)本發(fā)明，在步驟b)中，針對樹脂吸附法，樹脂可以選用D101型吸附樹脂， AB-8型吸附樹脂，HPD400型吸附樹脂，X-5型吸附樹脂，S_8型吸附樹脂以及其它型號 的聚苯乙烯型大孔吸附樹脂。進一步講，將甜葉菊提取物的7jC溶液或上清液，通過大孔樹脂吸附，用水或稀醇 進行洗脫，稀醇為乙醇、甲醇或丙醇，濃度為5-85%，用量為柱體積的2-6倍，再用 高濃度的醇洗脫，濃度為85-100%，根據(jù)檢測情況，合并洗脫液，回收溶劑，濃縮， 干燥，得甜菊苷和萊鮑迪苷A的粗品。針對聚酰胺層析法，可選用柱層析法或靜態(tài)吸附法，聚酰胺可以選用10-100目 聚酰胺，水、乙醇、丙醇或丙酮等一種或多種洗脫，洗脫可以采用等度洗脫也可以采用梯度洗脫；進一步講，將甜葉菊提取物的水溶液或上清液通過30-60目聚酰胺樹脂柱，用水 或醇進行洗脫，醇為乙醇、甲醇或丙醇，濃度為5-95%，用量為柱體積的2-6倍，根 據(jù)檢測情況，收集此部分洗脫液或部分洗脫液，回收溶劑，濃縮，干'燥，即得含有甜 菊苷和萊鮑迪苷A的粗品。在b)中所用的硅膠柱層析法中，可選用常壓或加壓柱層析，洗脫溶劑可選用 氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、丙醇、水或它們的至少兩種混合物為 溶劑，可以采用等度洗脫，也可以選用梯度洗脫。進一步講，將甜菊苷提取物進行硅膠拌樣，上樣結束后，采用氯仿-甲醇系 統(tǒng)或氯仿-甲醇-水系統(tǒng)，或正丁醇-水等溶劑系統(tǒng)進行洗脫，根據(jù)檢測情況，合 并洗脫液，回收溶劑，濃縮，干燥，即得甜菊苷和萊鮑迪苷A純品，純度均在 90%以上。反相柱層析法或S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl柱層析法，可以采用 常壓或加壓柱層析法，洗脫劑可選用氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、 丙醇、水或它們的至少兩種混合物為溶劑，可以采用等度洗脫，也可以選用梯 度洗脫。進一步講，用洗脫劑溶解含有甜菊苷和萊鮑迪苷A的樣品，樣品溶液通過層 析柱，用含水甲醇、含水乙醇、含水丙酮或含水乙腈或相關的純有機溶劑等進 行洗脫,，可以采用等度洗脫，也可以選用梯度洗脫，根據(jù)檢測情況，合并部分 洗脫劑，回收溶劑，濃縮，即得甜菊苷和萊鮑迪苷A純品，純度均在90%以上。根據(jù)本發(fā)明，C)中重結晶的溶劑優(yōu)選為不同濃度的醇和丙酮，包括甲醇、 乙醇、丙醇等，將粗品溶解在不同體積的溶劑中，于0-l(TC靜置，放置5 60小時，取出，過濾，結晶干燥后，即為高純度甜菊苷，純度在90%以上；母液繼 續(xù)放置于0-l(TC析晶，或放置于常溫下?lián)]去部分溶劑，48小時后，過濾，結晶 干燥后，即為高純度萊鮑迪苷A，純度在85%以上。根據(jù)本發(fā)明，所述干燥為本領域常用的干燥方法，如常壓干燥、減壓干燥、 冷凍干燥或噴霧干燥。
具體實施方式
以下實施例用于進一步說明本發(fā)明，但不意味這對本發(fā)明的任何限制。實施例l:高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的制備干燥甜葉菊1Kg，加10倍量50%乙醇回流提取3次，每次提取1小時，合 并提取液，回收乙醇，減壓濃縮至IOL，離心，上清液通過已處理的聚酰胺樹脂 柱(5L)，上樣結束后，用4倍樹脂體積水洗脫，再用50%乙醇洗脫，經(jīng)檢測， 甜菊苷和萊鮑迪苷A主要集中在水洗脫部分，收集水洗脫液，回收，濃縮，干 燥，得含有甜菊苷和萊鮑迪苷A的粗品。精密稱取粗品1. 0g,加甲醇10mL溶解， 于2。C放置，靜置48小時后，取出，過濾，結晶減壓干燥后，經(jīng)HPLC檢測為甜 菊苷，純度為91.12%;母液敞口室溫放置12小時后，重新于2"C放置，48小時 后取出，過濾，結晶減壓干燥后，經(jīng)HPLC檢測，為萊鮑迪苷A，純度為90.80%。實施例2:高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的制備干燥甜葉菊1Kg，加10倍量50%乙醇回流提取2次，每次提取1小時，合 并提取液，回收乙醇，減壓濃縮至IOL，離心，上清液通過已處理的聚酰胺樹脂 柱(5L)，上樣結束后，用4倍樹脂體積水洗脫，再用50%乙醇洗脫，經(jīng)檢測， 甜菊苷和萊鮑迪苷A主要集中在水洗脫部分，收集水洗脫液，回收，濃縮，干 燥，即得含有甜菊苷和萊鮑迪苷A的粗品。粗品加甲醇溶解，拌樣于160-200目空白硅膠，取已經(jīng)充分溶脹的硅膠，裝柱，將拌樣硅膠上樣，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢測，將分別含有甜菊苷和萊鮑迪苷A的流份合并， 回收溶劑，干燥，經(jīng)HPLC檢測，分別得到高純度的甜菊苷和萊鮑迪苷A，純度 均在90%以上。
權利要求
1、一種同時制備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的方法，其特征在于所用的原料為菊科植物甜葉菊(Stivia rebaudiana Bertoni)的干燥葉或植株中的任一部位，或新鮮采集的同屬其它植物的葉或其它部位。
2、 如權利要求1所述的高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的制備方法，其特 征為將權利要求1所述原料用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇 或它們的至少兩種混合物為溶劑提取，回收溶劑后將提取物通過選自溶劑萃 取法、大孔樹脂吸附法、聚酰胺層析法、硅膠柱層析法、反相柱層析法或 S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl柱層析法的一種或者多種方式分離， 采用結晶、重結晶、柱層析等方法進行純化。
3、 如權利要求2所述方法，其特征在于原料的提取是在室溫或加熱狀 態(tài)下提取、超聲波振蕩儀超聲提取、微波提取等，提取次數(shù)可以是一次，也 可以是多次。
4、 如權利要求2所述的萃取法可以液-固萃取法，也可以是液-液萃取 法；所用萃取溶劑可以是水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、丙醇 或它們的至少兩種混合物為溶劑。
5、 如權利要求2所述方法，其特征在于所述大孔樹脂吸附法中所用的 樹脂為聚苯乙烯型大孔吸附樹脂，洗脫溶劑選自水、乙醇、甲醇、丙酮和 丙醇或由它們組成的混合溶劑。
6、 如權利要求2所述方法，其特征在于所述聚酰胺分離制備方法為柱 層析或靜態(tài)吸附過濾法，洗脫溶劑可以是水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 正丁醇、丙醇或它們的至少兩種混合物為溶劑，洗脫時可以是等度也可以是 梯度。
7、 如權利要求2所述方法，其特征在于所述硅膠柱分離制備方法為柱 層析法，洗脫劑可以是氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、丙醇、水或 它們的至少兩種混合物為溶劑，洗脫時可以是等度也可以是梯度。
8、 如權利要求2所述方法，其特征在于所述反相柱層析法或S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl柱層析法為常壓或加壓柱層析，洗脫劑選自含水乙腈、含水丙酮、含水乙醇、含水甲醇、含水丙醇等組成的洗脫劑或相關的 純有機溶劑，洗脫時可以是等度洗脫也可以是梯度洗脫。
9、 如權利要求2所述方法，其特征在于所述結晶、重結晶的方法為在 室溫、加熱或冷凍狀態(tài)下進行，所用溶劑為氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 正丁醇、丙醇、水或它們的至少兩種混合物為溶劑，重結晶次數(shù)可以是一次 也可以是多次。
10、 如權利要求2所述方法，其特征在于所述柱層析純化法可以是權利 要求2所述的各種柱層析法的反復應用，純化次數(shù)可以是一次，也可以是多 次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的制備方法。該方法以甜葉菊(Stivia rebaudiana Bertoni)的干燥葉或植株中的任一部位，或新鮮采集的同屬其它植物的葉或其它部位為原料，采用溶劑提取法、大孔樹脂吸附法、聚酰胺層析法、硅膠柱層析法、反相柱層析法或Sephadex LH-20柱層析法、Toypear1柱層析法的一種或者多種方式分離，采用結晶、重結晶、柱層析等方法進行純化，并結合干燥等方法制備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A，純度均在85％以上，工藝簡單易行，適宜于產業(yè)化生產。
文檔編號C07H15/00GK101220062SQ200810000579
公開日2008年7月16日 申請日期2008年1月23日 優(yōu)先權日2008年1月23日
發(fā)明者劉惠媛, 姜艷艷, 石任兵 申請人:石任兵