專利名稱：：他克林-阿魏酸雜聯(lián)體,其制備方法及其藥物組合物的制作方法他克林-阿魏酸雜聯(lián)體，其制備方法及其藥物組合物
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及他克林-阿魏酸雜聯(lián)體，其制備方法，含有它們的藥物組合物，以及它們?cè)谥苽淠憠A酯酶(AChE)介導(dǎo)疾病的藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：阿爾茨海默氏病(Alzheimer'sdisease,AD)是一種臨床表現(xiàn)為認(rèn)知和記憶功能逐漸惡化，日常生活能力進(jìn)行性減退，并且伴有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙的神經(jīng)退行性疾病。其病理特征是腦區(qū)，尤以新皮質(zhì)和海馬區(qū)，神經(jīng)細(xì)胞外出現(xiàn)老年斑(senileplaque,SP)，神經(jīng)元內(nèi)tau蛋白異常磷酸化形成神經(jīng)纖維lt結(jié)(neurofibrillarytangles,NFT)，以及神經(jīng)突觸和4,體細(xì)月包的丟失。2006年預(yù)防癡呆癥國際會(huì)議上指出全世界有超過2600萬AD患者，全球48%的早老性癡呆癥患者在亞洲，形勢(shì)非常嚴(yán)峻。目前臨床上治療AD主要是基于膽堿能缺陷假說研究開發(fā)的乙酰膽堿酯酶抑制劑(acetylcholinesteraseinhibitors,AChEIs)為主。該類藥物作用才幾制是抑制膽堿酯酶(AChE),提高腦內(nèi)乙酰膽堿(acetylcholine,ACh)水平。在改善患者神經(jīng)精神癥狀方面具有明顯的作用。美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)上市的AChEIs有他克林(Tacrine)，多奈哌齊(又稱安理申，Do叩ezi,Aricept,E2020)，利伐斯的明(又稱艾斯能,Rivastigmine,Exelon),力口蘭他敏(Galantamine，Reminyl)。他克林作為第一個(gè)批準(zhǔn)治療AD的藥物，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)存在明顯的不足(l)肝毒副作用較大，服用的患者約有25%轉(zhuǎn)氨酶升高，患者服藥的同時(shí)必須進(jìn)行嚴(yán)格的轉(zhuǎn)氨酶監(jiān)控。(2)服用劑量偏高，后期一般要達(dá)到80mg/d甚至更高。(3)口服藥次數(shù)多。目前該藥已經(jīng)退出了臨床使用。但對(duì)他克林衍生物的研究沒有停止。根據(jù)AChE的雙位點(diǎn)同時(shí)結(jié)合學(xué)說，科學(xué)家們采用攣藥的設(shè)計(jì)方法，合成出一批他克林二聯(lián)體或雜聯(lián)體，以望求得效能更高，選擇性更好的新型AChEIs。在Pang等報(bào)道了烷烴偶聯(lián)的"他克林二聯(lián)體"衍生物中，活性最強(qiáng)，選擇性最好的為七個(gè)亞曱基(heptylene)連接的雙(7)-他克林(bis(7)-tacrine,A7A),其選4奪性比他克林高近1000倍，毒性^f氐近IOOOO倍，治療效果約是他克林的100倍，而且A7A的合成周期短、成本^[氐(/^/^，"a7，/.C力e瓜，"％，"2，Z6"—""i^p,M7Z^W，")。雖然，A7A等改進(jìn)衍生物的活性和藥效明顯比他克林好，但其水溶性和人體耐受性差，因此A7A等改進(jìn)衍生物的研究至今還停留在I期臨床階段。Hu等設(shè)計(jì)合成出吖咬環(huán)上6位被氯取代的A7A，在抑制ACh的效能和選擇性上分別是A7A(IC5產(chǎn)0.2nM，大鼠腦AChE)的2.9倍和1.7倍,他克林(IC5。=333nM)的4757倍和1237倍(/.ledC/e//7人"(7":"77-^<^)。原因可能在于卣素吸電子效應(yīng)改變了苯環(huán)上電子分布，更有利與酶的氨基酸殘基發(fā)生作用。另外一些團(tuán)隊(duì)則研究他克林與其它藥物的偶合，如與抗氧化劑，鈣離子拮抗劑，5-HT3抑制劑，以望得到除AChE抑制作用外，抗氧化作用，或鈣離子拮抗作用，或抑制5-HL的作用。Rosini等將他克林與疏辛酸通過一段長度的亞曱基鏈連接形成一系列的化合物，以達(dá)到同時(shí)具有抗氧化和AChE抑制的雙重作用。Marco小組巧妙地將他克林的丫啶環(huán)與l.4-二氫吡啶結(jié)構(gòu)整合得到一類雜合體，達(dá)到AChE抑制和釣拮抗雙重作用。Cappel1i才艮據(jù)上述思路將2-吡啶奎寧-4-羧酰胺部分與他克林的吖啶環(huán)通過五個(gè)亞曱基連接合成異二聯(lián)體，使得具有AChE抑制和5-HL拮抗作用。除此之外，根據(jù)姜黃素，槲皮素等天然抗氧化劑的具有金屬螯合作用，Maria等將烷烴鏈變換成含有羰基的鏈，具有絡(luò)合銅、鋅的作用。
發(fā)明內(nèi)容基于以上研究，結(jié)合作用于AD的不同靶點(diǎn)的藥物要比單一靶點(diǎn)的治療效果更好的特點(diǎn)，我們發(fā)明了用于預(yù)防治療AChE介導(dǎo)的相關(guān)疾病的藥物尤其是預(yù)防治療阿爾茨海默氏病及其他氧化應(yīng)激參與的癡呆癥的藥物一系列的他克林-阿魏酸雜聯(lián)體。阿魏酸，來源廣泛，具有抗血小板聚集、抗炎、抗氧化多種藥理作用，并能阻滯P1受體、拮抗EI-1生物效應(yīng)。臨床上廣泛使用其抗氧化作用。除此之夕卜,阿魏酸還具有抑制AP狀纖維{fAP(fibrilsamyloid-betap印tide))的形成，降低AP毒性，并且可使已經(jīng)形成的fAP不穩(wěn)定。本發(fā)明的化合物存在兩個(gè)主要的單元他克林部分和阿魏酸部分，它們通過適當(dāng)?shù)慕宇^連接。一方面可以調(diào)整接頭的類型和長度以同時(shí)與酶的雙重位點(diǎn)結(jié)合，提高對(duì)AChE抑制活性和選擇性，降低副作用；另一方面，同時(shí)發(fā)揮阿魏酸衍生物的抗氧化作用，提高改善AD的癥狀和進(jìn)程，使得它們成為藥物開發(fā)的性，除此，通過與不同的阿魏酸類衍生物得到的抗氧化作用也是不同的。本發(fā)明涉及式(I)的化合物或其互變異構(gòu)體，藥用鹽，前藥或溶劑化物。式(I)其中，6位R,H,C1或F，8位R2-H,CI或F;^f旦R共R2，_Y=NCH3,羰基，乙二?；?，1.3-丙二?；?，對(duì)環(huán)己烷基，或-0C2H40-，n=Q~3，m=0~3。除非另外指明，本發(fā)明的化合物還意欲包括區(qū)別僅在于存在一個(gè)或多個(gè)同位素富集的原子的化合物。例如，具有本結(jié)構(gòu)的除了用氘或氚替換氫，或者用13c或"C-富集的碳原子替換碳原子，或"N-富集的氮以為的化合物屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。屬于"藥用鹽，衍生物，溶劑化物，前藥"是指任何藥用鹽，酯，溶劑化物，或經(jīng)施用于接受者后能夠提供(直接或間接)本文所述化合物的其他化合物。然而，應(yīng)當(dāng)理解非藥用鹽也屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)，因?yàn)槟切┛赡苡糜谥苽渌幱名}，鹽，前藥和衍生物的制備可以通過本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行。例如，本發(fā)明提供的化合物的藥用鹽可以通過常規(guī)方法由母體化合物合成，該母體化合物含有堿或酸部分。通常，該鹽例如通過將游離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計(jì)水性介質(zhì)如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。酸加成鹽的實(shí)例包括無機(jī)酸加成鹽例如，鹽酸鹽，氬溴酸鹽，氫碘酸鹽，>琉酸鹽，硝酸鹽，和有機(jī)酸加成鹽，如例如乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，蘋果酸鹽，扁桃酸鹽和對(duì)曱苯磺酸鹽。堿加成鹽的實(shí)例包括無機(jī)鹽如例如鈉，鉀，鈣，銨，鎂，鋁和鋰鹽；和有機(jī)堿如例如乙二胺，乙醇胺，N，N-二烷基乙醇胺，三乙醇胺，葡糖胺和堿性氨基酸鹽。優(yōu)選的衍生物或前藥是相對(duì)于母體物質(zhì)，當(dāng)將這些化合物使用于患者時(shí)提高本發(fā)明化合物的生物利用度(例如通過使得口服給藥的化合物更容易被吸收到血液中)或增強(qiáng)母體化合物向生物區(qū)室(例如腦或淋巴系統(tǒng))的傳遞的那些。式(I)化合物前藥的任何化合物屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語"前藥"以其最廣泛的意義使用并且包括在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明化合物的那些衍生物。這些衍生物對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，并且根據(jù)分子中存在的官能團(tuán)，包括不限于本發(fā)明化合物的下列衍生物酯；氨基酸酯；磷酸；金屬鹽^5克酸；氨基曱酸酯和酰胺。本發(fā)明的化合物可以是作為有利化合物或作為溶劑化物的晶體形式，意欲將兩種形式都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。溶劑化的方法是本領(lǐng)域公知的。適當(dāng)?shù)娜軇┗锸撬幱萌軇┗?。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，溶劑化物是水合物。9-氯四氫吖啶可以按照已經(jīng)報(bào)道的方法合成(CaW/"，戶.A，,C/(w，A《.&/2，F(xiàn)"a7/.yl/ed67e瓜，""，W，4""。有機(jī)合成的通用方法可以從例如"March，sAdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure，，5thEiditionWiley;Wileyseries"CompendijiMofOrganicSyntheticMethods"等。本發(fā)明的優(yōu)選化合物的結(jié)構(gòu)是6位Rj皮CI原子取代，8位R2未被取代，Y為羰基，乙二?；?.3-丙二?；琻-l,m-O時(shí)結(jié)構(gòu)活性均優(yōu)于其他結(jié)構(gòu)活性。以下為制備本發(fā)明的化合物的方法，經(jīng)過以下兩步法合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>加熱回流后，二氯甲烷稀釋，堿洗，干燥，濃縮，純化得9-烷基氨基四氬吖夂；2)、室溫下，在N2下向阿魏酸衍生物在無水四氫呋喃中的溶液中加入卡特縮合劑，加入相應(yīng)的9-烷基氨基四氫吖啶在THF中的溶液，攪拌，過夜，濃縮，純化得最終產(chǎn)物。其中9-烷基氨基四氫吖啶的純化優(yōu)選采用硅膠柱分離，洗脫劑為二氯曱烷、曱醇、氨水的任何比例的混合液。其中式(I)化合物的純化優(yōu)選采用硅膠柱分離，洗脫劑為二氯曱烷、曱醇的任何比例的混合液。如果需要，可以通過常規(guī)方法如結(jié)晶法或色譜法純化反應(yīng)產(chǎn)物。當(dāng)用于制備本發(fā)明化合物的上述方法產(chǎn)生立體異構(gòu)體的混合物時(shí)，這些異構(gòu)體可以通過常規(guī)技術(shù)如制備色譜法分離。如果存在手性中心，化合物可能以外消旋形式制一種優(yōu)選的藥用形式是結(jié)晶形式，包括藥物組合物中的這種形式。如果是鹽和溶劑化物，另外的離子或溶劑部分也應(yīng)當(dāng)是非毒性的。本發(fā)明另外提供以式(I)化合物為活性成份的藥物組合物，其包含本發(fā)明的化合物或其互變異構(gòu)體、藥用鹽、前藥或溶劑化物，以及藥用載體，輔劑，或賦形劑。本發(fā)明的化合物可以與其它藥物一起制備成組合物。例如和雪花胺及其鹽，制備成復(fù)方藥物。由上迷結(jié)構(gòu)式(I)表示的化合物或其互變異構(gòu)體、藥用鹽、前藥或溶劑化物顯示優(yōu)越的乙酰膽石威酯酶抑制作用。因此，本發(fā)明另一方面涉及它們以及以它們?yōu)榛钚猿煞莸乃幬锝M合物，在治療、改善或預(yù)防AChE介導(dǎo)的相關(guān)疾病的藥物的用途，該藥物可以用來治療、改善或預(yù)防認(rèn)知障礙如老年性癡呆，腦血管癡呆，輕度認(rèn)知損傷，注意缺損障礙，和/或帶有異常蛋白聚集的神經(jīng)變性癡呆癥，特別是阿爾茨海默氏病或病癥，及其他氧化應(yīng)激參與的癡呆癥老年癡呆癥。上文所述藥學(xué)上可接受的載體、輔劑或賦形劑，是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，例如稀釋劑，賦形劑如水等，填充劑如淀粉、蔗糖等；黏合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸釣和碳酸氫鈉；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂翻土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、和聚乙二醇等。另外還可以以組合物中加入其他輔料如香味劑、甜味劑等。本發(fā)明-阿魏酸雜聯(lián)體或其互變異物體、藥用鹽類、前藥或溶劑化物可以給患有老年癡呆癥病的病人口服或行皮下或靜脈注射，或用植入體內(nèi)的方法給藥，因此可以制備成常規(guī)的口服制劑、注射劑。所述他克林衍生物及其藥物學(xué)上可接受的鹽在室溫下一般是略溶于水的。因此，可以4巴它配制成一種水溶液或懸浮液劑型。所迷他克林衍生物及其藥物學(xué)上可接受的鹽類也可以液體或固形劑型來口服，例如水性懸浮液，乙醇溶液，片劑或膠囊。如果需要，也可以將其制成緩釋劑型/控釋劑型，其在一端時(shí)間內(nèi)能釋放活性成分并因此使在病人體內(nèi)所述他克林衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽的濃度保持在一個(gè)可控制水平。所述緩釋劑型/控釋劑型可以采用通常的制藥技術(shù)來制備。本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使活性成分與一種或多種栽體混合，然后將其制成所需的劑型。本發(fā)明的藥物組合物含有重量比為0.1%~99.5%的活性成分，優(yōu)選含有重量比為0.5%~95°/。的活性成分。本發(fā)明的化合物的施用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類型和嚴(yán)重程度等變化，其日劑量可以是O.01~10mg/kg體重，優(yōu)先0.1~5mg/kg體重。可以一次或多次使用。具體實(shí)施方式以上已經(jīng)描述了用于制備本發(fā)明化合物的通用方法。提供下列實(shí)施例進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明范圍的限定。實(shí)施例1:3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸-{N-(2-[2-(1,2，3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-乙基]-曱基-氨基]}-酰胺。試劑阿魏酸(170mg，8.3mmo1),無水THF(35ml),BOP(770mg,17mmo1),和(N-(1,2,3，4-四氫-吖咬-9-胺基)-N，-曱基}-1,2-雙乙二胺(200mg，6.7mmo1)。方法取阿魏酸溶于無水THF中，加入三乙胺，室溫?cái)嚢?，之后滴加B0P，最后加入(N-(1,2，3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-N，-曱基}-1.2-雙乙二胺，室溫?cái)嚢柽^夜。濃縮后，直接硅膠柱層析分離，洗脫劑二氯曱烷曱醇=11:3。純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(12:1)。白色固體，產(chǎn)率110mg(35%)'H核磁共振結(jié)果為^NMR(DMS0，400MHz，Sppm):9.38(s，1H)，7.90—7.84(m，2H),7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60—7.56(m，1H)，7.30—7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97—6.95(d,1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d,1H)，3.73(s，6H)，3.63-3.60(m，2H)，3.34—3.30(m,2H),2.97(br，2H)，2.65(br，2H),1.83(br,4H)，1.75-1.31(m，4H)。"C核三磁共振結(jié)果為"CNMR(DMS0，100MHz，S卯m):S168.8，161.4,158.3，，150.1,151,2，148.2，144.5,143.3，136.8，130.5,127.2,126.7，123.3，123.0,122.6,120.7，118.2，117.6,115.8，57.1，48.2，35.5，31.3，29.4，24.5，24.2，21.9;MS(ESI)m/z476([M+H]+)。實(shí)施例2:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸-{N-(2-[2-(6-氯-1，2,3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-乙基]-曱基-氨基]}-酰胺。試劑阿魏酸(170mg，8.3mmo1)，無水THF(35ml),BOP(770mg,17mmo1)，和(N-(6-氯-l，2，3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-N，-曱基}-1.2-雙乙二胺(200mg,6.Ommol)。純化硅膠柱色譜法，使用二氯曱烷曱醇DCM/MeOH(12:1)。白色固體，產(chǎn)率106mg(34%)。除試劑、純化柱不同外，其余制備純化步驟同實(shí)施例1。加MR(DMSO,400MHz，Sppm):9.38(s，1H),7.90-7.84(m，1H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H),7.30-7.56(d,1H),7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，6.42-6.39(d，1H)，3.73(s，6H)，3.63-3.60(m，2H)，3.34—3.30(m,2H),2.97(br,2H),2.65(br，2H)，1.83(br，4H),1.75-1.31(m,4H)。"CNMR(DMSO，100MHz，5卯m):S168.8，161.4，158.3,，150.1，151.2,148.2，144.5,143.3,136.8，130.5,127.2,126.7，123.3，123.0，122.6，120.7,118.2,117.6,115.8,57.1,48.2，35.5，31.3,29.4,24.5，24.2，21.9;MS(ESI)m/z512([M+H]+)。實(shí)施例3:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸-(N-[(l，2，3,4-四氫-吖啶-9-胺基)-戊基-3-酮]}-酰胺試劑阿魏酸(170mg,8.3mmo1)，無水THF(35ml)，BOP(770mg,17國o1),和(N-[(l,2,3,4-四氬-吖咬-9-胺基)-3-酮]}-戊二胺(200mg,6.l隱l)。純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(12:l)。黃色固體，產(chǎn)率105mg(30%)。除試劑、純化柱不同外，其余制備純化步驟同實(shí)施例1。醒R(DMSO，400MHz，S卯m):9.38(s，1H),7.90-7.84(m,2H),7.80(m,1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H),7.09(d,1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d,1H),.6.42-6.39(d，1H)，3.73(s,3H)，3.63-3.60(m，2H)，3.34-3.30(m,2H),2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br,4H)，1.60-1.41(m，4H)。"CNMR(DMSO，100MHz,S卯m):S210.8，168.8，161.4,158.3,,150.1,151.2,148.2,144.5，143,3,136.8,130.5,127.2，126.7，123.3,123.0,122.6，120.7，118.2，117.6,115.8，57.1,48.2，35.5,31.3,29.4,24.5，24.2,2L9;MS(ESI)m/z475([M+H]+)。實(shí)施例4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸-{N-[(6-氯-l，2，3,4-四氫-吖啶-9-胺基)-戊基-3-酮]}-酰胺試劑阿魏酸(170mg，8.3mmo1),無水THF(35ml)，BOP(770mg，"mmol)，和(N-[(6-氯-1，2，3,4-四氫-吖啶-9-胺基)-3-酮]卜戊二胺(200mg，5.5mmo1)。純化硅膠柱色語法，使用DCM/MeOH(12:l)。黃色固體，產(chǎn)率101mg(28%)。除試劑、純化柱不同外，其余制備純化步驟同實(shí)施例1。'HNMR(DMSO，400MHz，Sppm):9.38(s，1H)，7.90-7.84(m，1H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m,1H),7.60—7.56(m，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d,1H)，3.73(s，6H),3.63-3.60(m，2H)，3,34-3.30(m,2H)，2.97(br,2H),2.65(br,2H)，1.83(br，4H)，1.65-1.45(m，4H)。"C隨(DMSO，100MHz,Sppm):S210.8,168.8,161.4,158.3，，150.1，151.2,148.2，144.5,143.3,136.8,130.5，127.2,126.7,123.3，1210,122.6，120.7,118.2，117.6,115.8,57.1,48.2,35.5，31.3，29.4,24.5，24.2，21.9;MS(ESI)m/z510([M+H]+)。實(shí)施例5:3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸(N-[(1,2，3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-1.4-二曱胺基-環(huán)己烷基])-酰胺。試劑阿魏酸(170mg，8.3隨o1),無水THF(35ml)，BOP(770mg,17mmo1),和(N-[(l,2，3,4-四氫-吖啶-9-胺基)-1.4-二曱胺基])-環(huán)己烷(200mg，6.7mmo1)。純化硅膠柱色諳法，使用DCM/MeOH(12:1)。油狀物，產(chǎn)率95mg(40%)。加MR(DMSO，400MHz,5ppm):9.38(s，1H),7.90-7.84(m，2H)，7,80(d,1H)，7.78-7.77(d，1H),7.60-7.56(d，1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d,1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.73(s，3H)，3.55-3.50(m,2H)，3.34-3.30(m，2H)，2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.65(2br，4H),1.41(sbr4H)。"CNMR(DMS0，100MHz，S卯m):5165.8，161.4,158.3,，150.1,151.2,148.2,144.5,143.3,136.8,130.5，127.2,126.7，123.3，123.0,122.6,120.7，118.2,117.6，115.8，57.1，48.2，39.1,38.2,30.6，30.4,30.2,30.1,29.4，24.5，24.2，21.9;MS(ESI)m/z501([M+H]+)。實(shí)施例6:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸(N-[(6-氯-1,2，3,4-四氫-吖啶-9-胺基)-1.4-二乙胺基-環(huán)己烷基]}-酰胺。試劑阿魏酸(170mg,8.3mmo1),無水THF(35ml),BOP(770mg,17mmo1),和{N-[(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-1.4-二曱胺基]}-環(huán)己烷(200mg,6.3fMK)1)。純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(12:1)。油狀物，產(chǎn)率120mg(25%)。除試劑、純化柱不同外，其余制備純化步驟同實(shí)施例1。'HNMR(DMSO，400MHz，Sppm):9.38(s，1H)，7.90-7.84(m，1H)，7.80(d，1H)，7.78—7.77(d，1H)，7.60-7.56(d,1H)，7.30-7.56(d，1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，.6.42-6.39(d，1H)，3.73(s，3H)，3.55-3.50(m，2H),3.34-3.30(m，2H),2.97(br，2H)，2.65(br，2H)，1.83(br，4H)，1.65(2br，4H)，1.41(sbr4H)。13CNMR(DMSO,100MHz,Sppm):5165.8，161.4,158.3,，150.1，151.2,148.2,144.5，143.3，136.8,130.5,127.2，126.7,123.3,123.0，122.6,120.7，118.2，117.6，115.8，56.1,45.2，39.1,38.2，30.6，30.4,30.2,30.1，29.4,24.5,24.2，21.9;MS(ESI)m/z536([M+H]+)。16實(shí)施例7:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸{N-(1,2,3,4-四氫-吖啶-9-胺基)-2.2，-(乙基-1.2-雙二氧-乙基)-氨基})-酰胺。試劑阿魏酸(160mg,8.3mmo1)，無水THF(35ml)，BOP(740mg，17mmo1)，和N-(1，2,3,4-四氫-吖啶-9-胺基)-2.2，-(乙基-l.2-雙二氧-乙基)-己二氨(200mg，6.Ommol)。純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(12:1)。油狀物，產(chǎn)率115mg(40%)。除試劑、純化柱不同外，其余制備純化步驟同實(shí)施例1。^NMR(DMSO，400MH，dppm):9.40(s，1H)，7.90-7,84(m，2H)，7.80(m，1H),7.78一7.77(m,1H)，7.60—7.56(m，1H),7.30-7.56(d,1H)，7.09(d，1H),6.97-6.95(d,1H)，6.79-6.77(d，1H),.6.42-6.39(d,1H)，3.83(s，3H)，3.70-3.64(m，4H)3.16-3.11(m，4H),2.97(br，2H)，2.65(br，2H),1.83(br，4H)，1.70-1.40(m，4H)。"CNMR(DMSO，100MHz，S卯m):S171.8,161.4,155.3,,152.1,151.2，150.2，144.8，142.3,134.8,130.5，127.1，126.5,123.6，121.1，120.7，120.6，118.2,117.6,115.8,57.1,48.2,43.1，40.0，36.4,33.7，30.1，22.8，22.6，21.4;MS(ESI)m/z507([M+H]+)。實(shí)施例8:3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸{N-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-2.2，-(乙基-l.2-雙二氧-乙基)-氨基))-酰胺。試劑阿魏酸(160mg，8.3mmo1),無水THF(35ml),BOP(740mg,17,1),和N-(6-氯-1，2，3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-2.2，-(乙基-l.2-雙二氧-乙基)-己二氛(200mg,5.7mmo1)。純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(12:1)。油狀物，產(chǎn)率120mg(40%)。除試劑、純化柱不同外，其余制備純化步驟同實(shí)施例1。^NMR(DMSO，400MH,dppm):9.40(s，1H),7.90-7.84(m，1H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H),7.60-7.56(m,1H)，7.30-7.56(d,1H)，7.09(d，1H),6.97-6.95(d，1H)，6.79-6.77(d，1H)，6.42-6.39(d,1H)，3.83(s,3H)，3.70-3.64(m,4H)3.16-3.11(m,4H),2.97(br,2H)，2.65(br，2H)，1.83(br,4H),1.70-1.40(m,4H)。"C腿(DMS0，10醒z,S卯m):S171.8，161.4，155.3，，152.1,151.2,150.2,144.8，142.3,134.8,130.5，127.1，126.5，123.6，121.1,120.7，120.6,118.2，117.6,115.8，57.1，48.2，43.1，40.0，36.4，33.7,30.1,22.8,22.6，21.4;MS(ESI)m/z543([M+H]+)。實(shí)施例9:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸-{N-(l，2，3,4-四氫-吖啶-9-胺基)-曱基}-乙二酰胺試劑阿魏酸(160mg,8.3mmo1),無水THF(35ml),BOP(740mg,17mmo1),和N-(1，2，3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-曱基}-乙二酰胺(200mg，6.4mmo1)。純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(12:l)。黃色固體，產(chǎn)率105mg(40%)。除試劑、純化柱不同外，其余制備純化步驟同實(shí)施例1。'HNMR(DMSO，400MH，dppm):9.40(s,1H),8.O(s，3H)，7.90—7.84(m，2H)，7.80(m，1H)，7.78-7.77(m，1H)，7.60-7.56(m，1H),7.30-7.56(d,1H)，7.09(d，1H)，6.97-6.95(d,1H)，6.79—6.77(d,1H)，.6.42—6.39(d，1H)，3.83(s,3H),3.70-3,64(m,2H),2.97(br，2H),2.65(br，2H)，1.83(br,4H)。13CNMR(DMSO，100MHz,Sppm):5171.8，162.7，161.4，159.6，155.3，，152.1，151.2，150.2，144.8，142.3,134.8，130.5，127.1，126.5,123.6，121.1,120.7，120.6,118.2,117.6，115.8,57.1,30.1，22.8，22.6，21.4;MS(ESI)m/z491([M+H]+)。實(shí)施例10:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>3-曱氧基-4-羥基-阿魏酸-{N-(6-氯-1,2,3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-曱基)-乙二酰胺。試劑阿魏酸(160mg,8.3咖o1)，無水THF(35ml)，BOP(740mg,17畫1)，和N-(6-氯-1,2，3，4-四氫-吖啶-9-胺基)-曱基}-乙二酰胺(200mg，5.8mmo1)。純化硅膠柱色譜法，使用DCM/MeOH(12:1)。黃色固體，產(chǎn)率110mg(40%)。除試劑、純化柱不同外，其余制備純化步驟同實(shí)施例1。'HNMR(DMSO，400MH，dppm):9.40(s，1H)，8.0(s，3H)，7.90-7.84(m，1H),7.80(m,1H),7.78—7.77(m,1H),7.60—7.56(m,1H)，7.30—7.56(d,1H),7.09(d，1H)，6.97-6.95(d，1H)'6.79-6.77(d，1H),6.42-6.39(d，1H)，3.83(s,3H)，3.70-3.64(m，2H),2.97(br，2H),2.65(br,2H)，1.83(br，4H)。13CNMR(DMSO，100MHz,S卯m):S171.8，162,7，161.4,159.6，155.3,,152.1，151.2，150.2,144.8,142.3，134.8，130.5，127.1,126.5,123.6，121.1，120.7，120.6，118.2，117.6，115.8，57.1，30.1,22.8，22.6,21.4;MS(ESI)m/z526([M+H]+)。實(shí)施例ll:制劑實(shí)施例安瓿劑活性成分2mg氯化鈉9mg制備方法將活性成分(即本發(fā)明的化合物)和氯化鈉溶解于適量的注射用水中，過濾所得溶液，在無菌條件下裝入安瓿瓶中。本發(fā)明的其余制劑同樣采用藥學(xué)制劑領(lǐng)域的常規(guī)處方、按常規(guī)生產(chǎn)方法制備。實(shí)施例12:生物學(xué)評(píng)估乙酰膽堿酯酶(AChE)抑制試驗(yàn)Ellman(Ellman，G.L.;Courtney,K.D.;Andres,B.;Featherstone,R.M.Biochem.Pharmacol.1961,7,88-95)才艮道的比色法在3(TC評(píng)估AChE抑制活性，測(cè)試溶液由以下各項(xiàng)組成0.lM磷酸鹽緩沖液pH8，0.3mM5，5，-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB，Ellman，s試劑),0.02單位AChE(SigmaChemicalCo.，來源于牛紅細(xì)胞)，和0.5mM乙酰硫代膽堿碘化物作為酶促反應(yīng)的底物。將檢測(cè)的化合物加入測(cè)定溶液中并與酶在30。C下預(yù)溫育5分鐘。該時(shí)間后，加入底物。用孩i板讀數(shù)器Digiscan340T記錄在405mm處的吸光度變化5分鐘，比較反應(yīng)速率，計(jì)算由于測(cè)試化合物的存在導(dǎo)致的百分比抑制。用至少一式三份的測(cè)量值計(jì)算分應(yīng)速率，計(jì)算相對(duì)于不含化合物的對(duì)照，由于測(cè)試化合物的存在導(dǎo)致的百分比抑制。測(cè)定產(chǎn)生50。/。的AChE抑制的化合物濃度(IC5。)。結(jié)果在表l中顯示，ICw越小反映抑制AChE活性越強(qiáng)。實(shí)施例13:生物學(xué)評(píng)估丁酰膽喊酯酶(BuChE)抑制試驗(yàn)通過Ellman報(bào)道的比色法在30。C評(píng)估BuChE抑制活性。測(cè)定溶液由以下各項(xiàng)組成0.01單位來源于人血清的BuChE，0.1M磷酸鈉緩沖液pH8,0，3mM5，5，-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB，Ellman，s試劑)，和0.5mM乙酰硫代膽堿碘化物作為酶促反應(yīng)的底物。用微板讀數(shù)器Digiscan340T測(cè)量5分鐘期間內(nèi)在405nm下的吸光度，測(cè)定酶活性。將測(cè)試的化合物與酶在3(TC下預(yù)溫育IO分鐘。用至少一式三份的測(cè)量值計(jì)算分應(yīng)速率。將IC5。定義為相對(duì)于沒有抑制劑下將酶活性降低50%的每種化合物的濃度。結(jié)果在表l中顯示，IC5。越小反映抑制AChE活性越強(qiáng)。實(shí)施例14:生物學(xué)評(píng)估有機(jī)自由基(DPPH)消除能力的測(cè)定參考Larrauri和Yokozawa等的方法進(jìn)行修改.利用DPPH溶液的特征紫紅色團(tuán)的吸收峰，以分光光度法測(cè)定加抗氧化劑后，吸光度517nm吸收的下降表示其對(duì)有機(jī)自由基消除能力.在反應(yīng)管中加入2ml0.2mmol/LDPPH的乙醇溶液，再加入2ml的目標(biāo)化合物終濃度為(5.0，15.0，25.0和50.0|uM)，混合均勻，黑暗下室溫避光反應(yīng)30min后在517nm處讀取吸光度為實(shí)-瞼組，同時(shí)以2mlDPPH+2ml緩沖溶液混合后的吸光度為對(duì)照組，2ml雙蒸水+2ml乙醇混合后的吸光度為正常組，計(jì)算清除率(％)=[1-(化合物組A517-正常組A517)/對(duì)照組A517]x薩。ECs。表示清除DPPH50y。的藥物濃度。結(jié)果在表l顯示，ECso越小反映DPPH清除能力越強(qiáng)。實(shí)施例15:生物學(xué)評(píng)估抑制AChE誘導(dǎo)A&聚集作用試驗(yàn)于凍干的2mg/mL六氟異丙醇(HFIP)取Ap(1-40)(P-淀粉樣多肽1-40)2uL，溶解在DMSO,終濃度為230nM，室溫下在磷酸緩沖液PBS孵育2411(PH=8.0)。共同孵育實(shí)驗(yàn)，AChE(2.30liM，Ap/AChE100/l)和AChE待測(cè)藥物(100juM)，IC50檢測(cè)，抑制劑的五個(gè)不同濃度測(cè)試。AP，AChE,AP加待測(cè)藥物，AChE加待測(cè)化合物。每個(gè)測(cè)試管最終體積20uL。使用硫磺素T(thioflavinT)熒光4企測(cè)方法定量測(cè)試淀粉樣蛋白纖維形成。因此，在孵育之后，樣品用包含硫磺素T的甘氨酸-NaOH緩沖液稀釋至2mL。采用300秒的熒光強(qiáng)度掃描(Uexc=446nm;入em=490nm)，在減去背景l(fā).5jaM硫磺素T熒光后算每組平均值。結(jié)果見表l,抑制率越高反映抑制AP聚集的能力越強(qiáng)表l、各實(shí)施例化合物AchE、BuhE、EC5Q、AI3聚集抑制率結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>結(jié)果見附表2，logKf越大顯示絡(luò)合金屬離子能力的越強(qiáng)，而他克林則無金屬絡(luò)合作用表2、各實(shí)施例化合物(y+、Fe2+物絡(luò)合能力結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實(shí)施例17:生物學(xué)評(píng)估肝毒性研究取成年雌性SD大鼠(購于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，按25°C，12h黑白夜，合適濕度飼養(yǎng)。鹽酸他克林(購買于SIGMA)溶解在PBS中(PH7.4),按l.5mg/100g(5.93lamol/100g)腹膜內(nèi)給藥。待測(cè)化合物3溶解在酸性的鹽水中，按和他克林等摩爾量腹腔給藥。在給藥后12，20,36小時(shí)從眼后靜脈叢收集肝素化血清用常規(guī)方法;險(xiǎn)測(cè)ASAT,LDH水平和白蛋白濃度(肝損失的三個(gè)指標(biāo))。在給藥后20小時(shí)和36小時(shí)處死他克林組和待測(cè)化合物3組大鼠，取出肝臟根據(jù)Biuret抬，測(cè)組織蛋白濃度，再與未給藥的空白組比較。其結(jié)果見附表3，其值越大反映抑制酶的活性越低表3、各實(shí)施例化合物肝毒性試驗(yàn)結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>權(quán)利要求1、下述式(I)的化合物或其互變異構(gòu)體、藥用鹽類、前藥或溶劑化物式(I)其中，R1＝H，Cl或F；R2＝H，Cl或F；但R1≠R2；Y＝NCH3，羰基，乙二酰基，1.3-丙二?；瑢?duì)環(huán)己烷基，或-OC2H4O-，n＝0～3，m＝0～3。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其互變異構(gòu)體、藥用鹽類、前藥或溶劑化物，其特征在于R,C1，R2=H，Y-羰基，乙二?；?，或1.3-丙二?；?，n=l，m=0。3、一種藥物組合物，包括如權(quán)利要求l所述的化合物或其藥用鹽類、前藥或溶劑化物，以及藥用載體、輔劑或賦形劑。4、權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，包括以下兩個(gè)步-^"1)、9-氯吖啶或取代的9-氯吖啶溶解在正戊醇中，加入N^々Y^7^NH2，加熱回流后，二氯曱烷稀釋，堿洗，干燥，濃縮，純化得9-烷基氨基四氫吖啶；2)、室溫下，在N2下向阿魏酸衍生物在無水四氫呋喃中的溶液中加入卡特縮合劑，加入相應(yīng)的9-烷基氨基四氫吖啶在THF中的溶液，攪拌，過夜，濃縮，純化得最終產(chǎn)物。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物的制備方法，其特征在于9-烷基氨基四氮吖咬的純化采用硅膠柱分離，洗脫劑為二氯曱烷、曱醇、氨水的任何比例的混合液。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物的制備方法，其特征在于所述的化合物的純化采用硅膠柱分離，洗脫劑為二氯曱烷、曱醇的任何比例的混合液。7、權(quán)利要求1-2中任意一項(xiàng)的化合物或其互變異構(gòu)體、藥用鹽類、前藥或溶劑化物在制備預(yù)防、治療AChE介導(dǎo)的疾病藥物中的應(yīng)用。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的化合物或其互變異構(gòu)體、藥用鹽類、前藥或溶劑化物在制備預(yù)防、治療AChE介導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所說的AChE介導(dǎo)的疾病為阿爾茨海默氏病或其他氧化應(yīng)激參與的癡呆癥。9、權(quán)利要求3所述的組合物在制備預(yù)防、治療AChE介導(dǎo)的疾病藥物中的應(yīng)用。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物在制備預(yù)防、治療AChE介導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所說的AChE介導(dǎo)的疾病為阿爾茨海默氏病或其他氧化應(yīng)〗敫參與的癡呆癥。全文摘要本發(fā)明涉及他克林與阿魏酸雜聯(lián)體或其互變異構(gòu)體、藥用鹽類、前藥或溶劑化物，結(jié)構(gòu)式如式(I)所示，本發(fā)明還涉及其制備方法，本發(fā)明另外還涉及式(I)化合物為活性成份的組合物，以及其化合物及組合物作為預(yù)防、治療AChE介導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用，特別是在制備防治阿爾茨海默氏病，及其他氧化應(yīng)激參與的癡呆病的藥物中的應(yīng)用。文檔編號(hào)C07D219/00GK101284812SQ200810028558公開日2008年10月15日申請(qǐng)日期2008年6月5日優(yōu)先權(quán)日2008年6月5日發(fā)明者劉培慶,葉敏忠,成志毅,皮榮標(biāo)申請(qǐng)人:中山大學(xué)