專利名稱：一種高效基因靶向的siRNA在制備抑制腫瘤遷移藥物中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一個(gè)生存素survivin基因?yàn)榘覙?biāo)的高效基因耙向的小 分子干擾RNA(siRNA)在制備抑制腫瘤遷移藥物中的用途。
背景技術(shù)：
RNA干擾技術(shù)(RNAi)是近幾年發(fā)展起來的被認(rèn)為是研究功能基因組最有力工具之一。這 種新興的生物技術(shù)為腫瘤分子水平的基因治療提供了新的技術(shù)和方法。RNA干擾(RNA interference, RNAi)是由雙鏈RNA( double stranded RNA , dsRNA) dsRNA)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后的基 因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS)現(xiàn)象。通過在多種生物細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入外源或內(nèi)源 的dsRNA可以使內(nèi)源性mRNA發(fā)生特異性降解，從而引起相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄的阻抑。RNAi已作 為一種簡(jiǎn)單有效的基因敲除的技術(shù)，廣泛地應(yīng)用于功能基因組學(xué)研究以及抗病毒、抗腫瘤治
療的研究中。
惡性腫瘤是當(dāng)前威脅人類生命健康的主要?dú)⑹种?，目前還沒有找到真正有效的根治方 法，這迫使科研工作者不斷尋找新的技術(shù)和方法，試圖從根本上攻克癌癥。Survivin是1997 年耶魯大學(xué)Aitieric.DC等人在人類基因組庫中首先篩選分離出來的IAP(凋亡抑制蛋白)家族 的一個(gè)成員。它定位于17q25，該基因幾乎在所有種類的腫瘤組織中特異性地表達(dá)，而正常 組織幾乎沒有表達(dá)；該基因在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)后，不但促進(jìn)腫瘤細(xì)胞抗凋亡、促進(jìn)腫瘤細(xì) 胞有絲分裂、參與血管形成和放化療耐受多種功能，而引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。
有研究者(丄ab Invest, 1999,79(11 ):1327-1333; Am J Pathol, 1998, 152(1 ):43-49)對(duì)正常 增殖細(xì)胞中survivin基因的潛在分布進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)包括皮膚表面的角化細(xì)胞、腸道的上皮 細(xì)胞和正常的骨髓細(xì)胞在內(nèi)，在各種有絲分裂細(xì)胞系中均沒有檢測(cè)到survWin基因的表達(dá)； survivin具有在腫瘤組織中表達(dá)特異性強(qiáng)、表達(dá)率高，而在正常組織中不表達(dá)的特點(diǎn)以及在腫 瘤的發(fā)生、發(fā)展及抗藥性等諸多方面所扮演的重要角色而使它很有可能成為腫瘤基因治療理 想的新靶點(diǎn)。
腫瘤的難治還在于腫瘤的天然耐藥以及后期治療時(shí)產(chǎn)生的耐受。腫瘤本身高表達(dá)survivin
能保護(hù)化療藥和放射線對(duì)腫瘤的殺傷:相反，不足量的化療藥或放射線也能誘導(dǎo)survivin的表
達(dá)，產(chǎn)生對(duì)治療的繼發(fā)耐受。研究表明，survivin能抑制某些化療藥物、IL-3 ， TNF-a, X射線
誘導(dǎo)的Fas, Caspase, Bax等參與的凋亡信號(hào)通路(Cancer Res， 1998， 58(23): 5315-5320; J Cancer
Res, 2000， 91(11):1204-1209)。但假如其唯一的BIR區(qū)發(fā)生C84A的突變，survivin也就喪失對(duì)抗化療藥物Taxol誘導(dǎo)的凋亡的抵抗作用。
血管形成過程取決于血管內(nèi)皮細(xì)胞生存和凋亡的平衡。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞中很 難檢測(cè)到survivin。在血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)的刺激下， 靜止的血管內(nèi)皮表達(dá)survivin的能力約可增強(qiáng)4倍，VEGF的許多抗凋亡活性都是通過誘導(dǎo)內(nèi) 皮細(xì)胞表達(dá)survivin來實(shí)現(xiàn)的(Am J Pathol, 2001, 158 (5): 1757-1765)。血管生成素-一 l(angi叩oietin-l， Ang-l)是胚胎血管形成過程中維持血管穩(wěn)定性和管腔形成的關(guān)鍵因子。它沒 有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，而只促進(jìn)了血管網(wǎng)的穩(wěn)定和分枝血管的形成。研究發(fā)現(xiàn)，Ang-1可以 促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞中survivin表達(dá)，通過Akt(或蛋白激酶B)途徑激活survivin的抗凋亡活性，從 而阻止內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，在體內(nèi)血管形成過程中穩(wěn)定血管結(jié)構(gòu)(J Biol Chem, 2000， 275(3): 9102-9105)。新血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的必要因素，因此抑制survivin的表達(dá)可能對(duì)防止 腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、遷移起重要作用。己有多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，反義survivin RNA或survivin 突變體可以有效抑制實(shí)體瘤的血管形成和腫瘤的侵襲增殖。因此，survivin基因可以作為腫瘤 治療的新靶點(diǎn)。
最早的針對(duì)survivin的RNAi研究報(bào)導(dǎo)于2003年，Carvalho等用小分子干擾RNA (small interfering RNA, siRNA)轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，60h后蛋白印跡結(jié)果顯示治療組中己檢測(cè)不到 survivin的表達(dá)，細(xì)胞增殖明顯受抑，部分細(xì)胞有絲分裂受到阻滯，出現(xiàn)凋亡(J Cell Sci，2003, 1 16(14):2987-2998)。隨著RNAi技術(shù)的不斷完善，由原來直接導(dǎo)入外源的siRNA，發(fā)展到真 核表達(dá)載體轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生siRNA，以及用于RNAi的病毒載體的出現(xiàn)，大大提高了轉(zhuǎn)染效率和干 擾效率。Cheng等用靶向survivin基因的RNAi真核載體轉(zhuǎn)染肝細(xì)胞癌SMMC7721細(xì)胞，發(fā) 現(xiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中幾乎沒有survivin基因的表達(dá)，轉(zhuǎn)染細(xì)胞自發(fā)的凋亡增加，G2/M期細(xì)胞比例減 少，細(xì)胞增殖減慢(World J Gastroenterol 2005,11(5): 756-759)。目前針對(duì)survivin的RNAi研究 進(jìn)展迅速，體外實(shí)驗(yàn)顯示了良好的效果，相信不遠(yuǎn)的將來會(huì)有更為豐富和完善的研究結(jié)果出 現(xiàn)。
應(yīng)用RNA干擾技術(shù)，以小分子RNA作為靶向藥物，有針對(duì)性地對(duì)survivin基因的轉(zhuǎn)錄 后表達(dá)進(jìn)行干擾，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的有絲分裂，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)的血 管形成和降低腫瘤細(xì)胞放化療的耐受性，多層次，多途徑對(duì)腫瘤進(jìn)行抑制，這可能成為了一 種新的腫瘤治療策略。而且survivin基因選擇性地表達(dá)在幾乎所有種類的腫瘤組織中，而正 常組織幾乎不表達(dá)，則可使這種基因治療對(duì)正常組織和細(xì)胞的毒副作用降到最低，應(yīng)用RNAi 特異地抑制survivin等腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)有望成為一種新的腫瘤基因治療方式。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種高效的針對(duì)survivin基因的廣譜的小分子干擾RNA (siRNA)抑制腫 瘤遷移藥物，由具有下述核苷酸序列的正義鏈和反義鏈組成 正義鏈5'- GCAGUUUGAAGAAUUAACCtt -3'， 反義鏈5'- GGUUAAUUCUUCAAACUGQt -3' 其中X代表tt、 TT或UU。 t代表脫氧胸腺嘧啶dT。 X優(yōu)選代表tt。 本發(fā)明的小分子干擾RNA是主要針對(duì)survivin基因開放閱讀框(ORF)的功能保守區(qū)設(shè) 計(jì)的雙鏈siRNA，藥理試驗(yàn)證明本發(fā)明的小分子干擾RNA具有抑制腫瘤遷移作用，對(duì)乳腺癌 MDA-MB-231、胃癌MGC-803、肝癌HepG2細(xì)胞在體外均有抑制它們遷移作用，該序列的 正義鏈與survivin基因的mRNA結(jié)合，干擾survivin基因mRNA的翻譯，從而抑制腫瘤細(xì)胞 遷移，達(dá)到抑制腫瘤擴(kuò)散的目的。本發(fā)明是一種全新作用機(jī)制的制腫瘤細(xì)胞遷移的新型藥物， 可能為腫瘤的治療帶來了新的希望。
本發(fā)明所述的腫瘤疾病包括乳腺癌、胃癌、肝癌細(xì)胞。
在臨床使用中，可以將本發(fā)明小分子干擾RNA (簡(jiǎn)稱YCUsiRNAl)溶于不含RNA酶 的無菌水中，輕輕混勻，建議YCUsiRNAl為10微克/微升。取適量YCUsiRNAl與小分子干 擾脂A轉(zhuǎn)染試劑RNAi-Mate混合，在室溫溫育30分鐘，以形成YCUsiRNAl-脂Ai-Mate復(fù) 合物。將制備好的YCUsiRNAl-RNAi-Mate復(fù)合物按5-500nmol/kg靜脈給藥，一天一次，20 天左右一個(gè)療程。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
siRNA的設(shè)計(jì)與合成
儀器 OligoPilot II DNA/RNA Synthesizer (瑞典Pharmacia公司)，HP-llOO型高效液相 色譜儀(美國(guó)惠普公司)，DU2640紫外分光光度計(jì)(美國(guó)Backman公司)。
材料和試劑合成柱(6.3 mL )，分子篩(3A Sigma)， 30HL載體(批號(hào)256723)， RNA Pac PA 100分析柱(美國(guó)Dionex公司)，5種核苷酸單體(A，U,C，G,dT),乙腈，二氯乙酸，四唑,N2 甲基咪唑，除注明廠家外，其余為瑞典Pharmacia公司產(chǎn)品。
siRNA的設(shè)計(jì)根據(jù)survivin基因開放閱讀框(ORF)的序列，設(shè)計(jì)小分子干擾RNA YCUsiRNAl和1對(duì)負(fù)對(duì)照siRNA，將他們的序列在人類EST數(shù)據(jù)庫中比對(duì)，確定沒有與他 們相同的其它基因序列。YCUsiRNAl正義鏈5'-GCAGUUUGAAGAAUUAACCtt-3'，反義鏈5'- GGUUAAUUCUUCAAACUGCtt -3'。負(fù)對(duì)照siRNA的正義鏈5，-UUCUCCGAACGUGUC ACGUdTdT-3'，反義鏈5，-ACGUGACACGUUCGGAGAAdTdT-3，。 siRNA的設(shè)計(jì)后送上海 吉馬公司合成。
siRNA的化學(xué)合成用乙腈將5種單體(A，U，C，G, dT)配制成0.2 mol/L溶液，分別將5 種單體、乙腈、二氯乙酸、四唑安裝到合成儀相應(yīng)位置，其中單體、乙腈、四唑應(yīng)加入適當(dāng) 分子篩。合成歩驟(1)利用二氯乙酸處理結(jié)合于固相載體的核苷酸或寡核苷酸，脫去其5'羥 基官能團(tuán)上的二甲氧基三苯甲基(DMT)保護(hù)基團(tuán)，露出反應(yīng)性的5'端；(2)偶聯(lián)反應(yīng)由四唑 催化完成，形成3' —5'磷酸酯鏈；(3)封閉反應(yīng)將未反應(yīng)5'羥基在N2甲基咪唑催化下由乙酸 酐來完成。RNA合成儀按照設(shè)計(jì)好的程序合成出YCUsiRNAl和負(fù)對(duì)照siRNA的單鏈RNA。 應(yīng)用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)D260nm值，并計(jì)算產(chǎn)量。
合成粗產(chǎn)品的HPLC色譜分析色譜柱DNA 2Pac PA 2100 (4mm X 250mm );樣品20 OD/m L ,進(jìn)樣的量20 y L;流動(dòng)相A: 25 mmol/L Tris, 1 mmol/LEDTA ， 10%乙腈，pH 8;流動(dòng) 相B: 25 mmol/L Tris， 1 mmol/L EDTA ， 3 mol/L NH4C1， pH 8;洗脫梯度流動(dòng)相B在40 min 內(nèi)從10%到70%;流速lmL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)260nm;柱溫50 'C。
合成的單鏈RNA的正義鏈和反義鏈后，退火成雙鏈的YCUsiRNAI和負(fù)對(duì)照siRNA，之 后進(jìn)行HPLC純化的純度大于97%的雙鏈YCUsiRNAl和負(fù)對(duì)照siRNA。
實(shí)施例2
YCUsiRNAl改變腫瘤細(xì)胞與IV型膠原蛋白間黏附能力 實(shí)驗(yàn)材料
人胃癌細(xì)胞MGC-803
人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231
人肝癌細(xì)胞株HepG2
24孔培養(yǎng)板
Thincert侵襲小室(孔徑8pm) 主要試劑
RPMI1640培養(yǎng)基干粉
胰蛋白酶
MTT 主要儀器
水平電泳槽
恒溫振蕩器
中國(guó)藥科大學(xué)腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)藥科大學(xué)腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)藥科大學(xué)新藥篩選中心 Corning公司 Greincr公司
Gibco公司 Amersco公司 Sigma公司
南京大學(xué)儀器廠 上海智誠(chéng)分析儀器制造公司熒光倒置顯微鏡 Leica公司 實(shí)驗(yàn)方法
腫瘤細(xì)胞與IV型膠原蛋白間黏附能力的檢測(cè)
參照Herren等的方法，采用MTT法測(cè)定癌細(xì)胞與IV型膠原蛋白間的黏附能力。具體操 作如下-
IV型膠原蛋白包被96孔培養(yǎng)板將IV型膠原蛋白儲(chǔ)液用PBS稀釋成0.1 mg/mL，按 50)iL/孔加入到96孔培養(yǎng)板中，4 。C過夜后再于37 。C下孵育2h，然后吸去上情。
用0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞，按1.5X 104個(gè)/孔接種到己包被IV型膠原蛋白的96孔培養(yǎng) 板中；于37 °C, 5%C02條件下培養(yǎng)0.5h后，將細(xì)胞分為兩組(1)黏附細(xì)胞組，用PBS 小心洗滌2~3遍除去未黏附的細(xì)胞，然后釆用MTT法測(cè)定黏附細(xì)胞的吸光度值；(2)總細(xì) 胞組，不用PBS洗滌，直接采用MTT法測(cè)定吸光度值(A)。每組設(shè)6個(gè)平行孔。同時(shí)，測(cè) 定IV型膠原蛋白每被但未接種細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照(control)。按照如下公式計(jì)算黏附率 (Adhesion rate):
Adhesi。n fate (%) = 1--^-^"7-x 100 。/。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表l小分子千擾RNA改變腫瘤細(xì)胞對(duì)IV型膠原蛋白間黏附能力_
Cdi/Ycusi歸i 0nM 25riM 50nM 100nM 150nM 200幽
MDA-MB-231 100% 45.0**±2.40/。 37.3**±2.9% 29.9**±1.7% 25.8**±3.60/0 21. i **±2.20/0 MGC-803 100% 77.1*±2.3% 69.3**±2.80/0 62.4**±2.6% 58.5**±2.1% 40.3**±2.4%
H印G2_100% 87.2±3.3°/0 78.4*±2.6% 69.3*士4.4% 66.3*±3.30/0 63.2**±3.4%
注n=8，mean±SD，重復(fù)3次，*為？<0.05 (有顯力:差異)；**^P<0.01 (有極顯著差異)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明小分子干擾RNA能明顯改變?nèi)橄侔┘?xì)胞MDA-MB-231、胃癌細(xì)胞MGC-803 和肝癌細(xì)胞HepG2對(duì)IV型膠原蛋白間黏附能力。
實(shí)施例3
YCUSIRNA1抑制腫瘤細(xì)胞二維水平細(xì)胞遷移能力 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑實(shí)施例2 ' 二維水平細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
參照Nakayama等的方法，采用劃痕損傷模型分析小分子千擾RNA在二維水平上對(duì)腫瘤 細(xì)胞的遷移能力的影響，操作歩驟如下
(1)用0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞，按6X 104個(gè)/孔接種到24孔培養(yǎng)板中，于37 。C， 5% C02條件下培養(yǎng)；
(2) 次R，待細(xì)胞長(zhǎng)成均勻單層后，用無菌的1000)iL移液器吸頭延孔的中軸線輕輕劃過。 用37 'C預(yù)熱的PBS輕輕洗滌2 3遍除去漂起的細(xì)胞殘骸后，加入37 'C預(yù)熱的培養(yǎng) 基，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；
(3) 培養(yǎng)0.5 lh后(待細(xì)胞恢復(fù))，以這一時(shí)間作為零時(shí)間點(diǎn)，分別在O、 12、 24h時(shí)通 過倒置顯微鏡下(50X)觀察細(xì)胞遷移情況并利用目鏡刻度尺測(cè)量劃痕寬度(S)， 每孔測(cè)量5處(即兩端、中點(diǎn)、左l/4處和右l/4處)求平均值，直至細(xì)胞完全匯合。 每組細(xì)胞均設(shè)三個(gè)平行孔。按照如下公式計(jì)算細(xì)胞遷移率(Migration rate):
s — s
"t"ne zero " "me point
Migration rate (%) = ^-X 100%
° time zero
表l YCUsiRNAl抑制乳腺癌、胃癌、肝癌細(xì)胞二維水平細(xì)胞遷移能力 乳腺癌MDA-MB-231 胃癌細(xì)胞MGC-803肝癌細(xì)胞HepG2
負(fù)對(duì)照函M負(fù)對(duì)照飾M負(fù)對(duì)照100nM
Oh0.0%0.0%0.00%0.00%0.00%0,00%
12h19.6%7.3%37.9%29.3%〗0.1%5.8%
24h31.2%18.9%58.2%44.9%17.8%7,4%
36h59.9%37.3%73.0%62.7%39.2%22.5%
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明小分子干擾RNA能明顯改變?nèi)橄侔┘?xì)胞MDA-MB-231 、胃癌細(xì)胞 MGC-803和肝癌細(xì)胞HepG2 二維水平細(xì)胞遷移能力。
實(shí)施例4
YCUsiRNAl抑制腫瘤細(xì)胞三維水平細(xì)胞遷移能力 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑實(shí)施例2
釆用侵襲小室模型分析小分子干擾RNA在三維水平上對(duì)腫瘤細(xì)胞的遷移能力的影響，具 體操作如下
(1) 將細(xì)胞用無血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h后，用0.25%胰蛋白酶消化、無血清 RPMI-1640培養(yǎng)基制備單細(xì)胞懸液，調(diào)整濃度為2.5Xl()S個(gè)/mL;
(2) 向24孔培養(yǎng)板中加入600 nL含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，然后將Thincert 侵襲小室浸入，再向小室中加入200pL無血清單細(xì)胞懸液(即5.0乂104個(gè)細(xì)胞)；
(3) 37 °C， 5% C02培養(yǎng)20 h后，取出Thincert小室，用棉簽小心將膜上表面的細(xì)胞擦 拭去除；
(4) 用手術(shù)刀片小心沿小室邊緣將膜切下，把膜下表面向上放在一個(gè)潔凈的24孔培養(yǎng)板的孔中；
(5)將膜用甲醇冰醋酸(3: 1)固定10min，然后用10%姬姆薩染液染色15~30 min; 將膜用蒸餾水漂洗干凈后在倒青顯微鏡下(200X)隨機(jī)選取6個(gè)視野(上、下、左、右 各一，中央兩個(gè))計(jì)數(shù)細(xì)胞(呈紫紅色)。
表1 YCUsiRNAl抑制乳腺癌、胃癌、肝癌細(xì)胞三維水平細(xì)胞遷移能力
乳腺癌MDA-MB-231 胃癌細(xì)胞MGC-803肝癌細(xì)胞H印G2 負(fù)對(duì)照 R100nm負(fù)對(duì)照 R100nm負(fù)對(duì)照 R100nm mean 123.3 64.7 181.5 129 9 109. 3 79'7
SD 20.5 14.9 36.2 29.610-3 U-8
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明小分子干擾RNA能明顯改變?nèi)橄侔┘?xì)胞MDA-MB-231、胃癌細(xì)胞 MGC-803和肝癌細(xì)胞HepG2三維水平細(xì)胞遷移能力。一種高效基因耙向的siRNA在制備抑制腫瘤遷移藥物中的新用途 <110>申請(qǐng)人姓名宜春學(xué)院
<120>發(fā)明名稱 一種高效基因靶向的siRNA在制備抑制腫瘤遷移藥物中的新用途 〈160〉序列表中序列的個(gè)數(shù)6
〈210〉序列相對(duì)應(yīng)的序列標(biāo)識(shí)符1 〈211〉序列長(zhǎng)度21
〈212〉序列的類型RNA
〈213〉生物體人工序列 〈400〉序列標(biāo)識(shí)符1
GCAGUUUGAAGAAUUAACCtt
〈210〉序列相對(duì)應(yīng)的序列標(biāo)識(shí)符2 〈211〉序列長(zhǎng)度21 〈212〉序列的類型RNA
〈213〉生物體人工序列
〈400〉序列標(biāo)識(shí)符2 GGUUAAUUCUUCAAACUGCtt
〈210〉序列相對(duì)應(yīng)的序列標(biāo)識(shí)符3 〈211〉序列長(zhǎng)度21 〈212〉序列的類型RNA 〈213〉生物體人工序列 〈400〉序列標(biāo)識(shí)符3 GCAGUUUGAAGAAUUAACCTT
〈210〉序列相對(duì)應(yīng)的序列標(biāo)識(shí)符4 〈211〉序列長(zhǎng)度21
〈212〉序列的類型RNA
〈213〉生物體人工序列〈400〉序列標(biāo)識(shí)符4 GGUUAAUUCUUCAAACUGCTT
〈210〉序列相對(duì)應(yīng)的序列標(biāo)識(shí)符5 〈211〉序列長(zhǎng)度21
〈212〉序列的類型RNA
〈213〉生物體人工序列
〈400〉序列標(biāo)識(shí)符5 GCAGUUUGAAGAAUUAACCUU
〈210〉序列相對(duì)應(yīng)的序列標(biāo)識(shí)符6 〈211〉序列長(zhǎng)度21
〈212〉序列的類型RNA
〈213〉生物體人工序列
〈400〉序列標(biāo)識(shí)符6 GGUUAAUUCUUCAAACUGCUU
權(quán)利要求
1、一種雙鏈小分子干擾RNA，其特征是由具有下述核苷酸序列的正義鏈和反義鏈組成正義鏈5′-GCAGUUUGAAGAAUUAACCtt-3′，反義鏈5′-GGUUAAUUCUUCAAACUGCtt-3′其中X代表tt、TT或UU。
2、 權(quán)利要求1的雙鏈小分子干擾RNA，其中X代表tt， t為脫氧胸腺嘧啶。
3、 權(quán)利要求1或要求2的雙鏈小分子干擾RNA在制備抑制腫癉轉(zhuǎn)移藥物中的用途。其特征 在于所述的小分子干擾RNA可以改變?nèi)橄侔⑽赴?、肝癌?xì)胞的黏附力，顯著抑制乳腺 癌、胃癌、肝癌細(xì)胞的遷移能力。
4、 權(quán)利要求3所述的特征在于小分子干擾RNA可以改變?nèi)橄侔?、胃癌、肝癌?xì)胞對(duì)IV型膠 原蛋白的黏附力，抑制乳腺癌、胃癌、肝癌細(xì)胞二維、三維水平上的遷移能力。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種高效的基因靶向小分子干擾RNA在制備抑制腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的用途，這種高效的基因靶向小分子干擾RNA可以沉沒survivin基因表達(dá)，改變?nèi)橄侔?、胃癌、肝癌?xì)胞對(duì)IV型膠原蛋白的黏附力，抑制乳腺癌、胃癌、肝癌細(xì)胞二維、三維水平上的遷移能力。這種高效的基因靶向小分子干擾RNA可以制備抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物。
文檔編號(hào)C07H21/02GK101445536SQ200810136599
公開日2009年6月3日 申請(qǐng)日期2008年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月24日
發(fā)明者陸云華 申請(qǐng)人:宜春學(xué)院