專利名稱：從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中草藥中天然活性成分的提取方法，具體涉及從何首烏中提取分離二
苯乙烯苷的方法。
背景技術：
何首烏，又稱首烏、赤首烏，為寥科植物何首烏(polygonum multif lorumthunb)的 干燥塊根?，F代醫(yī)學表明，何首烏具有增強免疫功能，抗氧化作用，延緩大腦衰老，提高DNA 修復功能，延長壽命，降低膽固醇，改善脂肪代謝等多項功能。何首烏的主要成分有羥基蒽 醌類化合物(主要為大黃素、大黃氛、大黃酸等葡萄糖苷，均為二苯代乙烯化合物)，醌類化 合物，二苯乙烯苷類化合物，酰胺類化合物，色原酮類化合物，卵磷脂，微量元素鈣、鐵、鋅、 錳、銅等。 二苯乙烯苷是何首烏中特有的生物活性成分，它具有良好的水溶性，同時具有抗 氧化清除自由基，降低膽固醇，保肝等多重功能，作為抗衰老的標的組分極具研究的價值。 二苯乙烯苷的化學名稱為2， 3， 5， 4'-四羥基二苯乙烯-2-0-13 -d-葡萄糖苷(tsg)，為白色 無定形粉末，易溶于水、甲醇、乙醇，其相對分子量為406. 39(呂麗爽等，何首烏中二苯乙烯 苷的醇提工藝，食品與發(fā)酵工業(yè)，2004年30巻10期，132 135頁)。 現有的從何首烏中提取二苯乙烯苷的方法大都采用水或乙醇極性溶劑提取，如公 開號為CN101003554的發(fā)明專利公開了一種從何首烏中分離制備四羥基二苯乙烯苷方法， 它是將何首烏塊莖粉碎，過篩20目，用水或乙醇提取2次(乙醇的料液比為1 : 9，水的 料液比為l : 15)，將提取液濃縮；濃縮液用聚酰胺或大孔吸附樹脂層析柱分離，乙醇梯度 洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集二苯乙烯苷組分；將收集到的二苯乙烯苷組分進行減壓濃 縮，用溶劑結晶方法，室溫條件下制備過飽和溶液，慢慢降低溫度，緩慢蒸發(fā)溶劑析出晶體， 抽濾后，取粗晶體相同條件下進行重結晶，得到二苯乙烯苷白色針狀晶體。該方法操作較簡 便、提取純度較高，但是提取溶劑水或乙醇的用量大，生產成本較高；而且在以水為溶劑提 取時，提取溫度需在5(TC條件下進行，而這樣的溫度條件下會加速對二苯乙烯苷的破壞，使 其水解成其它化合物。 又如公開號為CN101560229的發(fā)明專利公開了一種何首烏提取物二苯乙烯苷的 提取方法，其步驟為(l)何首烏醇提物的制備對何首烏粗粉末采用60%的乙醇微波提取 3次，旋轉薄膜回收乙醇，得到何首烏提取濃縮液；(2)采用高速逆流色譜法去除脂溶性雜 質；(3)利用大孔吸附樹脂純化二苯乙烯苷；(4)將上述二苯乙烯苷粗品混懸于水溶液中， 再次裝于逆流色譜儀中，用乙酸乙酯連續(xù)萃取，監(jiān)測直至乙酸乙酯提取液中無二苯乙烯苷 為止，回收乙酸乙酯至小體積，通過低溫結晶處理得到二苯乙烯苷精品。該發(fā)明所述方法操 作較簡便、提取純度較高，但是同樣存在提取溶劑水或乙醇用量大的不足。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種工藝簡單，生產成本低、提取收率高的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法。 為解決上述技術問題，本發(fā)明采用以下技術方案 從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，取何首烏，粉碎，用水或低碳醇滲漉提
取，提取液經大孔樹脂柱層析、反滲透濃縮、析晶、重結晶、冷凍干燥即得。
上述方法具體包括以下步驟 1)取何首烏，粉碎，用原料重量的3 15倍的水或低碳醇滲漉提取，滲漉速度為 0. 1 2BV/h，滲漉時間4 24h ; 2)提取液過大孔樹脂柱，用體積濃度為40 70%的低碳醇洗脫，收集洗脫液； 3)將洗脫液反滲透濃縮，得濃縮液； 4)濃縮液于常溫下析晶，重結晶，冷凍干燥即得。 為了進一步提高二苯乙烯苷的收率，同時盡量減少二苯乙烯苷水解成其它化合
物，可以向濃縮液中加入有機酸后放置12 72h析晶，有機酸的加入量為濃縮液質量的
0.3 0.5%。所述的有機酸為甲酸、乙酸或抗壞血酸。由于二苯乙烯苷在酸性條件下的溶
解度小，因此更易析出晶體。
上述方法中 何首烏粉碎過10 30目篩。 所述提取用低碳醇的體積濃度為10 75%，優(yōu)選50 70%。
所述低碳醇為甲醇、乙醇、丙醇或丁醇。所述大孔樹脂的型號優(yōu)選為ADS-21、 ADS-7、ADS-17、ADS-4或ADS-F8。
所述洗脫用低碳醇的用量為樹脂重量的2 6倍，洗脫流速為0. 5 2BV/h。
所述洗脫液反滲透濃縮至適量即可，優(yōu)選濃縮至原料重量的0. 5 0. 8倍。
所述的冷凍干燥為現有常規(guī)的冷凍干燥方式。
與現有技術相比，本發(fā)明所述方法的優(yōu)點在于 1、采用常溫滲漉提取，在具備提取溶劑用量少、雜質少、操作方便等優(yōu)點外，還能 避免在高溫條件下進行提取對二苯乙烯苷的破壞；與傳統(tǒng)提取工藝比較，能最大限度的提 取目標成分，且保證不會被破壞；同時相對于超聲提取和超臨界提取來說更適合于工業(yè)化 大生產。 2、提取液上樹脂柱分離后，采用的反滲透濃縮和冷凍干燥，都是低溫操作，將對二 苯乙烯苷的破壞控制在最低限度。 3、進一步地，本發(fā)明向濃縮液中加入有機酸進行結晶和重結晶，一方面利用有機
酸改變析晶溶液的ra值，有利于晶體析出；另一方面有機酸還能很好的保護二苯乙烯不被破壞。 4、工藝簡單，大大減少了提取溶劑的用量，既保證了產品的質量也降低了生產成 本；由本方法制得的二苯乙烯苷產品純度可達99%以上(HPLC法測定)，產品收率可達 5.0%以上。
具體實施例方式
下面以實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。
以下實施例中乙醇濃度為體積濃度；用到的甲酸、乙酸和抗壞血酸為分析純試齊U。
實施例1 1)取何首烏，粉碎至10目，稱取50kg，先用1倍原料重量、20%的乙醇溶液潤溶， 充分均勻后放置lh ;裝入滲漉罐中，加蓋浸漬30h，再用原料重量5倍、20%的乙醇常溫滲漉 提取，滲漉速度為lBV/h，滲漉時間為6h ; 2)提取液過ADS-7大孔樹脂柱，用3倍樹脂重量、60%的乙醇洗脫，流速為lBV/h， 收集洗脫液； 3)將洗脫液反滲透濃縮至原料重量的0. 5倍； 4)向濃縮液中加入濃縮液質量0.3%的乙酸，放置24小時，析出的晶體在相同 條件下進行重結晶，冷凍干燥，得到白色針狀晶體二苯乙烯苷2. 52kg， HPLC法檢測純度為 99. 53%。
實施例2 1)取何首烏，粉碎至20目，稱取80kg，先用0. 75倍原料重量的水潤溶，充分均勻 后放置2h ;裝入滲漉罐中，加蓋浸漬40h，再用原料重量10倍的水常溫滲漉提取，滲漉速度 為0. 8BV/h，滲漉時間為10h ; 2)提取液過ADS-21大孔樹脂柱，用2. 5倍樹脂重量、55 %的乙醇洗脫，流速為 0. 8BV/h，收集洗脫液； 3)將洗脫液反滲透濃縮至原料重量的0. 8倍； 4)向濃縮液中加入濃縮液質量0.5%的甲酸，放置30小時，析出的晶體在相同 條件下進行重結晶，冷凍干燥，得到白色針狀晶體二苯乙烯苷4. 16kg， HPLC法檢測純度為 99. 16%。
實施例3 1)取何首烏，粉碎至10目，稱取100kg，先用1倍原料重量、30%的甲醇溶液潤溶， 充分均勻后放置lh;裝入滲漉罐中，加蓋浸漬30h，再用原料重量14倍、30%的甲醇常溫滲 漉提取，滲漉速度為0. 8BV/h，滲漉時間為5h ; 2)提取液過ADS-17大孔樹脂柱，用3倍樹脂重量、60 %的甲醇洗脫，流速為 0. 8BV/h，收集洗脫液； 3)將洗脫液反滲透濃縮至原料重量的0. 6倍； 4)向濃縮液中加入濃縮液質量0.4%的甲酸，放置32小時，析出的晶體在相同 條件下進行重結晶，冷凍干燥，得到白色針狀晶體二苯乙烯苷5. 31kg， HPLC法檢測純度為 99. 42%。
實施例4 1)取何首烏，粉碎至15目，稱取40kg，先用0. 5倍原料重量、50%的丁醇溶液潤 溶，充分均勻后放置1. 5h ;裝入滲漉罐中，加蓋浸漬10h，再用原料重量3倍、50%的丁醇常 溫滲漉提取，滲漉速度為0. lBV/h，滲漉時間為20h ; 2)提取液過ADS-F8大孔樹脂柱，用5倍樹脂重量、40%的丁醇洗脫，流速為2BV/ h，收集洗脫液； 3)將洗脫液反滲透濃縮至原料重量的0. 7倍； 4)將濃縮液中于常溫下析晶，析出的晶體在相同條件下進行重結晶，冷凍干燥，得 到白色針狀晶體二苯乙烯苷2. 12kg， HPLC法檢測純度為99. 28%。
實施例5 1)取何首烏，粉碎至10目，稱取100kg，先用0. 6倍原料重量、70%的丙醇溶液潤 溶，充分均勻后放置2h ;裝入滲漉罐中，加蓋浸漬7h，再用原料重量8倍、70%的丙醇常溫滲 漉提取，滲漉速度為1. 5BV/h，滲漉時間為15h ; 2)提取液過ADS-4大孔樹脂柱，用6倍樹脂重量、70%的丁醇洗脫，流速為0. 5BV/ h，收集洗脫液； 3)將洗脫液反滲透濃縮至原料重量的1倍； 4)向濃縮液中加入濃縮液質量0. 35%的抗壞血酸酸，放置12小時，析出的晶體在 相同條件下進行重結晶，冷凍干燥，得到白色針狀晶體二苯乙烯苷5. 29kg， HPLC法檢測純 度為99. 35%。
權利要求
從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其特征在于取何首烏，粉碎，用水或低碳醇滲漉提取，提取液經大孔樹脂柱層析、反滲透濃縮、析晶、重結晶、冷凍干燥即得。
2. 根據權利要求1所述的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其特征在于包括以 下步驟1) 取何首烏，粉碎，用原料重量的3 15倍的水或低碳醇滲漉提取，滲漉速度為0. l 2BV/h，滲漉時間4 24h ;2) 提取液過大孔樹脂柱，用體積濃度為40 70%的低碳醇洗脫，收集洗脫液；3) 將洗脫液反滲透濃縮，得濃縮液；4) 濃縮液于常溫下析晶，重結晶，冷凍干燥即得。
3. 根據權利要求2所述的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其特征在于向濃 縮液中加入有機酸后放置12 72h析晶，有機酸的加入量為濃縮液質量的0. 3 0. 5%。
4. 根據權利要求3所述的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其特征在于所述 的有機酸為甲酸、乙酸或抗壞血酸。
5. 根據權利要求1 4中任何一項所述的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其 特征在于提取用低碳醇的體積濃度為10 75%。
6. 根據權利要求5所述的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其特征在于低碳 醇的體積濃度為50 70%。
7. 根據權利要求1 4中任何一項所述的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其 特征在于所述低碳醇為甲醇、乙醇、丙醇或丁醇。
8. 根據權利要求1 4中任何一項所述的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其 特征在于所述大孔樹脂的型號為ADS-21、ADS-7、ADS-17、ADS-4或ADS-F8。
9. 根據權利要求1 4中任何一項所述的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其 特征在于洗脫用低碳醇的用量為樹脂重量的2 6倍，洗脫流速為0. 5 2BV/h。
10. 根據權利要求2 4中任何一項所述的從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，其 特征在于洗脫液反滲透濃縮至原料重量的0. 5 0. 8倍。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從何首烏中提取分離二苯乙烯苷的方法，它是取何首烏，粉碎，用水或低碳醇滲漉提取，提取液經大孔樹脂柱層析、反滲透濃縮、析晶、重結晶、冷凍干燥即得。與現有技術相比，本發(fā)明采用常溫滲漉提取，在具備提取溶劑用量少、雜質少、操作方便等優(yōu)點外，還能避免在高溫條件下進行提取對二苯乙烯苷的破壞；后續(xù)采用的反滲透濃縮和冷凍干燥，都是低溫操作，將對二苯乙烯苷的破壞控制在最低限度；進一步地，在濃縮液中加入有機酸進行結晶和重結晶，一方面可改變析晶溶液的PH值，有利于晶體析出；另一方面還能很好的保護二苯乙烯不被破壞；由本方法制得的產品純度可達99％以上(HPLC法測定)，產品收率可達5.0％以上。
文檔編號C07H15/18GK101787060SQ20101013395
公開日2010年7月28日 申請日期2010年3月26日 優(yōu)先權日2010年3月26日
發(fā)明者盧昶年, 盧照凱 申請人:盧昶年;盧照凱