專利名稱：一種防治心腦血管疾病的四羥基二苯乙烯苷類新化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種防治心腦血管疾病的四羥基二苯乙烯苷類新化合物。
動脈粥樣硬化及由其引起的心肌梗塞和腦梗塞等心腦血管疾病現(xiàn)已躍居于我國人口死亡的主要原因之列，一般認(rèn)為，目前臨床上對于上述疾病尤其是動脈粥樣硬化的治療尚無理想的防治藥物。
本發(fā)明的目的是提供一種防治心腦血管疾病的四羥基二苯乙烯苷類新化合物。該化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)為 其中R1和R2基團分別為第一組 R2為OH2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-(-2″-O-阿魏?；?-β-D-葡萄糖苷(以下簡稱化合物1)
第二組R1為 R2為OH2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-(-2″-O-p-香豆?；?-β-D-葡萄糖苷(以下簡稱化合物2)第三組R1為OHR2為CH3COO2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-(2″-O-乙酰基)-β-D-葡萄糖苷(以下簡稱化合物3)第四組R1=OHR2= 2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-(6″-O-α-D-葡萄糖)-β-D-葡萄糖苷(以下簡稱化合物4)本發(fā)明以蓼科植物何首烏(Polygonum multiflorum Thunb.)的塊根(生品或炮制品)為原料，具體制備過程為將干燥根粉碎，制成藥材粗粉，以3倍量以上的80％乙醇浸泡1周左右，再按常規(guī)以80％乙醇滲漉提取至滲漉液幾無色，合并浸出液及滲漉液，減壓濃縮得浸膏，浸膏以3～5倍量水混懸，按常規(guī)依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，正丁醇萃取物過大孔樹脂柱，以水及10％、30％、50％、70％、95％乙醇洗脫；收集50％洗脫組份，進行硅膠柱層析，依次以氯仿/甲醇(20∶1、15∶1、10∶1、7∶1、5∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2)溶劑系統(tǒng)洗脫，收集氯仿/甲醇(7∶1)洗脫部位，再反復(fù)柱層析，先得到化合物1的淺棕色結(jié)晶，再得到化合物2的無色結(jié)晶；收集氯仿/甲醇(5∶1)洗脫部位，再反復(fù)柱層析，可得化合物3的無色結(jié)晶；收集氯仿/甲醇(3∶1)洗脫部位，通過SephadexLH20及ODS柱，以30％甲醇洗脫，可得化合物4的粗品，經(jīng)高壓液相色譜儀(HPLC)制備純化，得淺棕色結(jié)晶。
為進一步說明本發(fā)明在醫(yī)藥及保健食品領(lǐng)域中的用途，下面用部分藥理作用結(jié)果來說明，血小板是血栓形成的必需物質(zhì)，其功能激活是高凝狀態(tài)的表現(xiàn)，抑制血小板聚集對于抗血栓具有重要意義，而具有抗血栓、保護血管內(nèi)皮細胞、抑制血管平滑肌細胞增殖、抗氧化等作用的物質(zhì)可從多個環(huán)節(jié)拮抗動脈粥樣硬化的形成與發(fā)展，故具有上述作用的物質(zhì)在制備防治動脈粥樣硬化及由其引起的心肌梗塞和腦梗塞等心腦血管疾病的藥物和保健食品有著廣泛的用途。
1、抗血小板聚集作用自兔心臟取血，以二磷酸腺苷誘導(dǎo)血小板聚集，考察化合物的抑制率，在100μM時，化合物1的抑制率為86％，化合物2的抑制率為84％，化合物3的抑制率為66％，化合物4的抑制率為57％，表明本發(fā)明的二苯乙烯苷類新化合物具有較強的抗血小板聚集作用。
2、抑制血管平滑肌細胞增殖作用以培養(yǎng)的牛主動脈平滑肌細胞為實驗對象，分成1個對照組及4個試驗組，4個試驗組中分別加入化合物1、化合物2、化合物3、化合物4，各化合物的終濃度皆為100μM，共同培養(yǎng)48小時，考察各化合物對平滑肌細胞增殖的抑制作用，化合物1的抑制率為46％，化合物2的抑制率為54％，化合物3的抑制率為58％，化合物4的抑制率為42％，表明本發(fā)明的二苯乙烯苷類新化合物對血管平滑肌細胞增殖具有較強的抑制作用。
3、對血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用以培養(yǎng)的牛主動脈內(nèi)皮細胞為實驗對象，分成1個對照組及4個試驗組，均加入腫瘤壞死因子-α(TNFα)，4個試驗組同時分別加入化合物1、化合物2、化合物3、化合物4，各化合物的終濃度皆為100μM，共同孵育24小時后，測定細胞上清乳酸脫氫酶(LDH)活性及觀察細胞形態(tài)；化合物1使LDH活力降低58％，化合物2使LDH活力降低46％，化合物3使LDH活力降低63％，化合物4使LDH活力降低35％，各試驗組的內(nèi)皮細胞形態(tài)正常，表明本發(fā)明的二苯乙烯苷類新化合物對血管內(nèi)皮細胞損傷具有較強的保護作用。
4、抗氧化作用昆明種小白鼠30只，分成正常組和2個試驗組，2個試驗組分別以含有本類化合物總含量80％的有效組分5mg/kg、20mg/kg灌胃給藥，3天后，脫頸處死，取全腦勻漿，測定過氧化脂質(zhì)(LPO)值，有效組分(20mg/kg)使正常小鼠腦中LPO值降低23％，表明本發(fā)明的二苯乙烯苷類新化合物具有顯著的抗氧化作用。
5、急性毒性試驗昆明種小白鼠50只，分成5組，分別一次性灌胃給于含有本類化合物總含量80％的有效組分1.0g/kg、2.0g/kg、4.0g/kg、6.0g/kg、7.8g/kg，觀察各劑量組小白鼠在7天內(nèi)的一般表現(xiàn)及死亡數(shù)目，并對存活和死亡小白鼠進行解剖病理檢查，結(jié)果顯示各劑量組小白鼠無死亡，一般觀察及病檢均未見異常表現(xiàn)，表明本類化合物具有較高的安全性。
實施例從何首烏中提取分離四羥基二苯乙烯苷類化合物。
將何首烏干燥根20kg粉碎，制成藥材粗粉，以足夠量(約3倍量以上)的80％乙醇浸泡1周左右，再按常規(guī)以80％乙醇滲漉提取至滲漉液幾無色，合并浸出液及滲漉液，減壓濃縮得浸膏，浸膏以3～5倍量水混懸，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取。正丁醇萃取部分過大孔樹脂，以水及10％、30％、50％、70％、95％乙醇洗脫；收集50％洗脫組份，減壓濃縮，取250g進行硅膠柱層析，依次以氯仿/甲醇(20∶1、15∶1、10∶1、7∶1、5∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2)溶劑系統(tǒng)洗脫，收集氯仿/甲醇(7∶1)洗脫部位，再反復(fù)柱層析，先可得到化合物1的淺棕色結(jié)晶(223mg)，再得到化合物2的無色結(jié)晶(142mg)；收集氯仿/甲醇(5∶1)洗脫部位，再反復(fù)柱層析，可得化合物3的無色結(jié)晶(433mg)；收集氯仿/甲醇(3∶1)洗脫部位，通過SephadexLH20及ODS柱，以30％甲醇洗脫，可得化合物4的粗品，經(jīng)HPLC制備純化，得淺棕色結(jié)晶(33mg)。
結(jié)構(gòu)鑒定化合物1分子量為582，分子式為C30H30O12，其性狀為淺棕色針晶(甲醇)，熔點范圍為202～203℃；FAB-MSm/z:582(M+),EI-MSm/z:244(M+-glc),IRmax(KBr,cm-1):3409(OH),1703(C=O),1603,1515,1463(benzenering);1H-NMR、13C-NMR數(shù)據(jù)見表1。
化合物2分子量為552，其性狀為無色針晶(甲醇)，熔點范圍為197～198℃；FAB-MSm/z:552(M+),EI-MSm/z:244(M+-glc),IRmax(KBr,cm-1):3412(OH),1700(C=O),1606,1515,1465(benzene ring);1H-NMR、13C-NMR數(shù)據(jù)見表2。
化合物3分子量為448，其性狀為無色針晶(甲醇)，熔點范圍為173～174℃;IRmax(KBr)cm-1:3409(OH),1722(C=O),1606、1515、1463;FAB-MS:448(M+),EI-MSm/z(％):244(100);1H-NMR、13C-NMR數(shù)據(jù)見表3。
化合物4分子量為568，其性狀為淺棕色針晶(甲醇)，熔點范圍為203～204C。IRmax(KBr)cm-1:3409(OH),1606、1515、1463;FAB-MSm/z:568(M+),59l(M++Na),608(M++K),EI-MSm/z(％):244(100);1H-NMR(DMSO-d6,TMS)δ:4.41(1H,d,J=7.8Hz,1″-H),4.71(1H,d,J=3.6Hz,1-H);6.18(1H,d,J=2.7Hz,4-H),6.55(1H,d,J=2.7Hz,6-H),6.75(2H,m,3′-H,5′-H),7.39(2H,m,2′-H,6′-H);6.87(1H,d,J=16.5Hz,β-H),7.63(1H,d,J=16.5Hz,α-H);13C-NMR數(shù)據(jù)見表4。
上述實施例中的符號表示如下IR為紅外光譜；FAB-MS為快速原子轟擊質(zhì)譜；EI-MS為電子轟擊質(zhì)譜；1H-NMR為核磁共振氫譜；13C-NMR為核磁共振碳譜；CD3OD為氘代甲醇；DMSO-d6為氘代二甲基亞砜。
本發(fā)明的優(yōu)點在于本類化合物原料來源豐富、價廉、未見毒副作用，制備工藝較為簡單，可作為口服劑型或注射劑；具有顯著抑制血管平滑肌細胞增殖、保護血管內(nèi)皮細胞、抗氧化等作用，有利于預(yù)防和治療心腦血管疾?。患瓤捎脕碇苽浞乐涡哪X血管疾病的藥物，也可用于制備保健食品。表1．2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-(-2″-O-阿魏酰基)-β-D-葡萄糖苷的NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6)氫 化學(xué)位移(δ) 偶合常數(shù)(Hz)碳 化學(xué)位移(δ)二苯乙烯-4 6.22(d)2.72二苯乙烯-1 131.97s66.48(d)2.72 2134.46s2′,6′ 7.38(m) 3150.10s3′,5′ 6.78(m) 4102.92dα 7.21(d)16.44 5154.10sβ 6.88(d)16.44 6101.40d阿魏?；?2 7.20(d)1.84 1′ 128.88s5 7.42(d)8.31 2′,6′ 127.93d6 7.01(dd) 8.31,1.84 3′,5′ 116.26d7 7.60(d)15.18 4′ 157.25s8 6.46(d)15.18 α 120.02dOCH33.70(s) β 128.66dβ-葡萄糖-1″ 4.92(d)8.05 阿魏酰基-1125.56s2″ 5.06(dd) 8.05,8.02 2 111.30d3″ 3.58(m) 3 147.83s4″ 3.40(m) 4 149.22s5″ 3.22(m) 5 115.52d6″ 3.60(m) 6 122.68d7 145.21d8 114.55dCOO 165.95sOCH355.62qβ-葡萄糖-1″ 101.71d2″ 73.96d3″ 73.96d4″ 69.74d5″ 76.98d6″ 60.57t表2．2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-(-2″-O-p-香豆?；?-β-D-葡萄糖苷的NMR數(shù)據(jù)(CD3OD)氫 化學(xué)位移(δ) 偶合常數(shù)(Hz)碳 化學(xué)位移(δ)二苯乙烯-4 6.23(d) 2.86苯乙烯-1133.06s6 6.55(d) 2.862 136.46s2′,6′ 7.39(m) 3 152.02s3′,5′ 6.74(m) 4 103.86dα 7.18(d) 16.26 5 155.88sβ 6.93(d) 16.26 6 103.41d香豆酰基-2,6 7.19(m) 1′ 131.73s3,56.74(m) 2′,6′ 129.41d7 7.58(d) 15.85 3′,5′ 116.59d8 6.32(d) 15.85 4′ 158.71sβ-葡萄糖-1″4.93(d) 8.18α 120.95d2″5.19(dd) 8.18,8.12 β 130.94d3″3.67(m)香豆?；?1 127.12s4″3.60(m)2,6131.28d5″3.35(m)3,5116.76d6″3.80(m)4 161.25s7 147.46d8 114.86dCOO168.62sβ-葡萄糖-1″ 104.56d2″ 75.31d3″ 76.14d4″ 71.07d5″ 78.49d6″ 62.01t表3．2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-(2″-O-乙酰基)-β-D-葡萄糖苷的NMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6)氫 化學(xué)位移(δ) 偶合常數(shù)(Hz) 碳 化學(xué)位移(δ)二苯乙烯-4 6.20(d)2.6 二苯乙烯-1131.9s6 6.56(d)2.62136.4s2′、6′7.34(m) 3150.6s3′、5′6.72(m) 4102.5dα 7.59(d)16.5 5154.8sβ 6.90(d)16.5 6100.9d3-OH9.02(s) 1′ 128.5s5-OH9.29(s) 2′、6′ 127.8d4′-OH9.64(s) 3′、5′ 115.5d乙?；?CH31.78(s) 4′ 157.2sβ-葡萄糖-1″ 4.47(d)7.6 α 120.5d2″3.32(m) β 128.3d3″3.44(m)乙酰基-CO 170.4s4″3.35(m) CH320.4q5″3.22(m) β-葡萄糖-1″ 106.6d6″4.20(d)10.2 2″ 73.9d4.11(m) 3″ 74.0d4″ 69.7d5″ 75.8d6″ 64.0t表4．2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-(6″-O-α-D-葡萄糖)-β-D-葡萄糖苷的13CNMR數(shù)據(jù)(DMSO-d6)碳 化學(xué)位移(δ) 碳 化學(xué)位移(δ)二苯乙烯-1 131-87sβ-葡萄糖-1″106.71d2 136.28s 2″73.36d3 150.53s 3″73.86d4 102.79d 4″69.31d5 154.71s 5″76.22d6 101.15d 6″65.92t1′ 128.46sα-葡萄糖-198.72d2′、6′128.06d 272.19d3′、5′115.66d 375.16d4′ 157.24s 470.20dα 120.05d 572.54dβ 128.68d 660.84t
權(quán)利要求
1.一種四羥基二苯乙烯苷類化合物，其結(jié)構(gòu)為 其中R1和R2基團分別為第一組 R2為OH第二組 R2為OH第三組R1為OHR2為CH3COO第四組R1為OHR2為
2.權(quán)利要求1所述的化合物用作制備防治心腦血管疾病藥物和保健食品的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種防治心腦血管疾病的四羥基二苯乙烯苷類新化合物,包括2,3,5,4′－四羥基二苯乙烯－2－O－(－2”－O－阿魏?；?－β－D－葡萄糖苷、2,3,5,4′－四羥基二苯乙烯－2－O－(－2”－O－p－香豆酰基)－β－D－葡萄糖苷、2,3,5,4’－四羥基二苯乙烯－2－O－(2”－O－乙?；?－β－D－葡萄糖苷、2,3,5,4’－四羥基二苯乙烯－2－O－(6”－O－α－D－葡萄糖)－β－D－葡萄糖苷,具有較強且廣泛的心腦血管活性,可用于制備防治心腦血管疾病的藥物和保健食品。
文檔編號C07H15/00GK1303858SQ9911985
公開日2001年7月18日 申請日期1999年10月26日 優(yōu)先權(quán)日1999年10月26日
發(fā)明者陳萬生, 李力, 殷學(xué)平, 楊根金, 喬傳卓, 張衛(wèi)東, 陳海生 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)