專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從下田菊中提取高純度下田菊酸b的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物領(lǐng)域，具體涉及一種從下田菊中提取高純度下田菊酸B的方法。
背景技術(shù)：
下田菊酸B (Adenostemmoic acid B)，分子式為 C2tlH28O5，分子量為；348. 44，CAS 號(hào)為130217-16-2，是一種貝殼杉烷型二萜酸類(lèi)化合物，為無(wú)色針晶，mp. 273_274°C。藥理研究表明，下田菊酸B具有細(xì)胞毒活性，對(duì)L-517Y細(xì)胞呈細(xì)胞毒作用，100mg/kgX 5d，延命率 178% ο下田菊 Uo^wo1Sie廁a lavenia (L. ) 0. Ktze.)系菊科(Compositae)下田菊屬植物， 為一年生草本，別名白龍須(云南思茅)、水胡椒、風(fēng)氣草、汗蘇麻等，主產(chǎn)于長(zhǎng)江流域以南以及沿海和西南各地，生于林下及潮濕處。全草入藥，具清熱利濕，解毒消腫之功效，可用于感冒高熱、支氣管炎、咽喉炎、扁桃體炎、黃疸型肝炎的治療，外治癰疥瘡瘍、蛇咬傷等。下田菊資源豐富，但對(duì)其化學(xué)成分研究較少。楊永利等采用水蒸氣蒸餾法、兩相溶劑萃取法提取下田菊地上部分的揮發(fā)油，采用GC-MS法分離并鑒定其揮發(fā)油的化學(xué)成分。主要成分為α-蓽澄茄油烯、石竹烯和Y-欖香烯等?，F(xiàn)有文獻(xiàn)中還沒(méi)有檢索到從下田菊中提取制備高純度下田菊酸B的工藝報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種從下田菊中提取高純度下田菊酸B的方法，以填補(bǔ)目前高純度下田菊酸B提取制備技術(shù)的空白。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種從下田菊中提取高純度下田菊酸B的方法，其特征在于包括以下步驟
1)乙醇提取將下田菊全草粉碎，投入提取罐，加入體積百分比60%-95%的乙醇，采用回流提取或連續(xù)提取等方法提取2-4小時(shí)，收集提取液濃縮至無(wú)醇味；
2)大孔樹(shù)脂吸附將所得濃縮液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，先用去離子水洗脫至流出液無(wú)色，再用水醇梯度洗脫，洗脫梯度依次為5%-20%乙醇、75%-80%乙醇，收集洗脫液減壓回收乙醇，得到提取物；
3)高速逆流色譜純化將所得提取物用高速逆流色譜法進(jìn)一步純化，采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，得到純度95%以上的下田菊酸B。步驟2)所述大孔吸附樹(shù)脂可選AB-8、DlOU HPDlOO等極性或非極性大孔吸附樹(shù)脂，所述大孔吸附樹(shù)脂與原料的質(zhì)量比為1:10-50。步驟3)所述洗脫系統(tǒng)正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其體積比為(12-17) (18-23):(18-23) :(15-20)。本發(fā)明的有益效果是
本發(fā)明以?xún)r(jià)格便宜的大孔吸附樹(shù)脂為載體，以乙醇為溶劑梯度洗脫，再通過(guò)高速逆流色譜進(jìn)一步分離純化，得到純度大于95%的下田菊酸B產(chǎn)品，本發(fā)明方法工序簡(jiǎn)單、快速、綠色環(huán)保，產(chǎn)品純度高。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
將下田菊全株藥材粉碎，取500g加入3L80%乙醇溶液加熱回流提取2小時(shí)，過(guò)濾，濾渣再加入2. 5L80%乙醇溶液回流提取2小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次提取液，減壓濃縮至無(wú)醇味，將濃縮液通過(guò)預(yù)處理好的DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱，大孔樹(shù)脂的重量為33. 5g，先用去離子水洗脫至洗脫液無(wú)色，再依次用10%乙醇、75%乙醇洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得到下田菊酸提取物。將下田菊酸B提取物采用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(12:18:18:15)為溶劑系統(tǒng)，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶劑得到下田菊酸B，經(jīng)HPLC法測(cè)定，其純度為97. 4%。實(shí)施例2:
將下田菊全株藥材粉碎，取500g加入5L65%乙醇溶液加熱回流提取3. 5小時(shí)，過(guò)濾；濾渣再加入4L65%乙醇溶液回流提取2小時(shí)，過(guò)濾；濾渣再重復(fù)上述操作提取2小時(shí)，合并三次提取液，減壓濃縮至無(wú)醇味，將濃縮液通過(guò)預(yù)處理好的AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱，大孔樹(shù)脂的重量為25g，先用去離子水洗脫至洗脫液無(wú)色，再依次用10%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80% 乙醇洗脫液，減壓濃縮得到下田菊酸B提取物。將下田菊酸B提取物采用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:20:19:17)為溶劑系統(tǒng)，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶劑得到下田菊酸B，經(jīng)HPLC法測(cè)定，其純度為96. 6%。實(shí)施例3:
將下田菊全株藥材粉碎，取IOOOg加入8L72%乙醇溶液索氏提取3小時(shí)，收集提取液， 減壓濃縮至無(wú)醇味，將濃縮液通過(guò)預(yù)處理好的HPD100大孔吸附樹(shù)脂柱，大孔樹(shù)脂的重量為 33. 5g，先用去離子水洗脫至洗脫液無(wú)色，再依次用15%乙醇、75%乙醇洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得到下田菊酸B提取物。將下田菊酸B提取物采用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(14:23:23:20)為溶劑系統(tǒng)，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶劑得到下田菊酸B，經(jīng)HPLC法測(cè)定，其純度為95. 8%。實(shí)施例4:
將下田菊全株藥材粉碎，取2000g加入10L95%乙醇溶液加熱回流提取3小時(shí)，過(guò)濾，濾渣再加入8L95%乙醇溶液回流提取2小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次提取液，減壓濃縮至無(wú)醇味，將濃縮液通過(guò)預(yù)處理好的AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱，大孔樹(shù)脂的重量為40g，先用去離子水洗脫至洗脫液無(wú)色，再依次用20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液，減壓濃縮得到下田菊酸提取物。將下田菊酸B提取物采用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(17:21:21:19)為溶劑系統(tǒng)，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶劑得到下田菊酸B，經(jīng)HPLC法測(cè)定，其純度為96. 11實(shí)施例5:
將下田菊全株藥材粉碎，取5000g加入35L60%乙醇溶液索氏提取4小時(shí)，收集提取液， 減壓濃縮至無(wú)醇味，將濃縮液通過(guò)預(yù)處理好的DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱，大孔樹(shù)脂的重量為 200g，先用去離子水洗脫至洗脫液無(wú)色，再依次用5%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液，減壓濃縮得到下田菊酸B提取物。將下田菊酸B提取物采用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(13:19:19:15)為溶劑系統(tǒng)，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶劑得到下田菊酸B，經(jīng)HPLC法測(cè)定，其純度為96. 8%。
權(quán)利要求
1.一種從下田菊中提取高純度下田菊酸B的方法，其特征在于包括以下步驟1)乙醇提取將下田菊全草粉碎，投入提取罐，加入體積百分比60%-95%的乙醇，采用回流提取或連續(xù)提取等方法提取2-4小時(shí)，收集提取液濃縮至無(wú)醇味；2)大孔樹(shù)脂吸附將所得濃縮液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，先用去離子水洗脫至流出液無(wú)色，再用水醇梯度洗脫，洗脫梯度依次為5%-20%乙醇、75%-80%乙醇，收集洗脫液減壓回收乙醇，得到提取物；3)高速逆流色譜純化將所得提取物用高速逆流色譜法進(jìn)一步純化，采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，得到純度95%以上的下田菊酸B。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高純度下田菊酸B的方法，其特征在于，步驟2)所述大孔吸附樹(shù)脂可選AB-8、DlOU HPD100等極性或非極性大孔吸附樹(shù)脂，所述大孔吸附樹(shù)脂與原料的質(zhì)量比為1:10-50。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高純度下田菊酸B的方法，其特征在于，步驟3)所述洗脫系統(tǒng)正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其體積比為(12-17) :(18-23) :(18-23) :(15-20)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從下田菊中提取高純度下田菊酸B的方法，包括以下三個(gè)步驟1)乙醇提取將下田菊全草粉碎，采用回流提取或連續(xù)提取等方法用乙醇提取，提取液濃縮至無(wú)醇味；2)大孔樹(shù)脂吸附將所得濃縮液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂分離，水醇梯度洗脫，洗脫液減壓回收乙醇，得到提取物；3)高速逆流色譜純化將所得提取物用高速逆流色譜法進(jìn)一步純化，得到純度95%以上的下田菊酸B。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)后與傳統(tǒng)工藝相比，具有簡(jiǎn)便、快速、制備量大、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點(diǎn)，易于推廣使用。
文檔編號(hào)C07C51/42GK102391106SQ201110263989
公開(kāi)日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2011年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月8日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司