專利名稱：一種從豬血中提取免疫球蛋白g的工業(yè)化生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
豬血由紅細胞和血清組成，血漿蛋白約占血液總量的4. 6%，血漿蛋白中含量最高的是白蛋白，其次為免疫球蛋白，免疫球蛋白G的相對分子量約為160000道爾頓，約占血漿蛋白的16. 3%，占血清蛋白總量的17. 0%，全血的0. 75%，豬血清的I. 5-1. 8%，血清中免疫球蛋白總量的75-80%。我國豬血資源十分豐富，但目前我國豬血資源利用的深度和廣度都很低，主要是用于生產(chǎn)飼料用豬血漿蛋白粉和血球蛋白粉，并未得到很好地利用。為實現(xiàn)豬血的“變廢為寶”，因此將豬血中的免疫球蛋白G進行提取純化選擇合適的生產(chǎn)工藝進行工業(yè)化生產(chǎn)具有·重要意義。現(xiàn)有的從動物血液中提取免疫球蛋白G的工藝仍然停留在實驗室的研究和運用階段，尤其是以豬血為原料提取免疫球蛋白G的方法中，對血液的質(zhì)量有很高的要求。而在實際生產(chǎn)中，因為采血條件、儲存條件和物流運輸?shù)脑?，會導致原血質(zhì)量有在一定程度上的降低，血液中會含有一定量的雜質(zhì)，因此很難獲得高質(zhì)量的血漿。并且，現(xiàn)有的實驗室工藝對設(shè)備和實驗條件要求太高并不適宜于工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)。提取分離免疫球蛋白G的方法有硫酸銨晶體沉淀法、乙醇分離法、柱色譜分離法(包括離子交換法、凝膠過濾法、親合色譜法)及超濾法。其中采用沉淀法與超濾法相結(jié)合，分離出的純度高、產(chǎn)量大、操作簡便、適合規(guī)?；a(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，而提供一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，該方法采用硫酸銨晶體沉淀法與超濾法相結(jié)合的方法，分離出的免疫球蛋白G純度高、產(chǎn)量大，并且生產(chǎn)方法操作簡便、適合規(guī)?；a(chǎn)。如上構(gòu)思，本發(fā)明的技術(shù)方案是一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征在于以豬血血漿液為原料，通過硫酸銨晶體分步鹽析法獲得免疫球蛋白G固形物，再將免疫球蛋白G固形物溶解后進行超濾濃縮和低溫噴霧干燥獲得免疫球蛋白G的噴干粉。上述硫酸銨晶體分步鹽析法的具體步驟為第一步鹽析向豬血漿液中緩慢均勻加入硫酸銨晶體至血漿液硫酸銨飽和度為20±2%，將pH調(diào)至5. 5±0. 3，處理20_40min，經(jīng)過離心后收集上清液；第二步鹽析向上清液中緩慢均勻加入硫酸銨晶體至上清液硫酸銨飽和度為35±2%，將pH調(diào)至7. 4±0. 2，處理20_40min，經(jīng)過離心后收集沉淀；第三部鹽析向沉淀中加入純凈水使得免疫球蛋白G完全溶解，再緩慢均勻加入硫酸銨晶體至硫酸銨飽和度為35±2%，將pH調(diào)至7. 4±0. 2，處理20_40min，經(jīng)過離心后收集沉淀。上述豬血血漿液的選取條件為原血使用檸檬酸鈉作為抗凝劑，檸檬酸鈉的添加量為原血的6-8%。，儲存時制冷溫度為6-10°C，儲存時間不超過3天，分離后立即進行提取。上述超濾濃縮是在中空纖維膜設(shè)備中進行的，截留分子量為80000-100000道爾頓，操作壓力為0. 05-0. IOMpa0上述低溫噴霧干燥的進口溫度為160_180°C，出口溫度為75_85°C。
上述硫酸銨晶體分步鹽析法中在豬血血漿中均勻加入硫酸銨晶體時的持續(xù)攪拌轉(zhuǎn)速為20-30轉(zhuǎn)/分鐘。上述硫酸銨晶體分步鹽析法中離心使用管式固液分離機，其離心轉(zhuǎn)速為15000-16000 轉(zhuǎn) / 分鐘。本發(fā)明具有如下的優(yōu)點和積極效果I、本發(fā)明使用硫酸銨晶體代替常規(guī)的硫酸銨飽和溶液，減少生產(chǎn)操作和生產(chǎn)成本，更加適宜于工業(yè)生產(chǎn)；2、本發(fā)明采用硫酸銨晶體分步鹽析沉淀的方法并使用管式固液分離機進行離心，操作簡單、生產(chǎn)成本低、原料利用率高；3、本發(fā)明使用中空纖維膜進行超濾濃縮、低溫噴霧干燥，在提高免疫球蛋白G的純度、保護免疫球蛋白G的活性的同時節(jié)約了生產(chǎn)成本；4、本發(fā)明中免疫球蛋白G的噴干粉免疫球蛋白純度在65%以上，粗蛋白達90%以上，得率在15g/kg以上，可以達到工業(yè)化生產(chǎn)的要求；5、本發(fā)明可以連續(xù)性加工生產(chǎn)，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式實施例I :在IOOkg血漿液中緩慢均勻加入Ilkg硫酸銨晶體至血漿液硫酸銨飽和度為20 ±2%，并調(diào)節(jié)血漿液pH為5. 6，處理30min后通過管式離心機進行離心收集上清液；在上清液中緩慢均勻加入Ilkg硫酸銨晶體至上清液硫酸銨飽和度為35±2%，調(diào)節(jié)pH為7. 2處理30min后通過管式離心機進行離心收集沉淀；在沉淀中加入90kg純水溶解，再加入硫酸銨晶體22kg至硫酸銨飽和度為35±2%，調(diào)節(jié)pH為7. 2處理30min后通過管式離心機進行離心收集沉淀；將沉淀加入90kg純水溶解后進行超濾濃縮除鹽，操作壓力為0. 06MPa,濃縮至體積為15L進行低溫噴霧干燥，噴霧干燥進口溫度為170°C，出口溫度為75°C，收集免疫球蛋白G噴干粉共1539g，相關(guān)指標見附表I。上述硫酸銨晶體分步鹽析法中在豬血血漿中均勻加入硫酸銨晶體時的持續(xù)攪拌轉(zhuǎn)速為20-30轉(zhuǎn)/分鐘。上述硫酸銨晶體分步鹽析法中離心使用管式固液分離機，其離心轉(zhuǎn)速為15000-16000轉(zhuǎn)/分鐘。實施例2 在5. Ot血漿液加入0. 6t硫酸銨晶體至血漿液硫酸銨飽和度為20土2%，并調(diào)節(jié)血漿液PH為5. 7，在血漿罐中反應20min后通過管式離心機進行離心收集上清液；在上清液中加入0. 5t硫酸銨晶體至上清液硫酸銨飽和度為35±2%，調(diào)節(jié)pH為7. 2在罐中處理20min后通過管式離心機進行離心收集沉淀；在沉淀中加入5. Ot純水溶解，再加入硫酸銨晶體
I.It至硫酸銨飽和度為35 ±2%,調(diào)節(jié)pH為7. 2在罐中處理20min后通過管式離心機進行離心收集沉淀；將沉淀加入4. Ot純水溶解后進行超濾濃縮除鹽，操作壓力為0. 06MPa,濃縮至體積為，I. Ot時進行低溫噴霧干燥，噴霧干燥進口溫度為175°C，出口溫度為75°C，收集免疫球蛋白G噴干粉82. 7kg，相關(guān)指標見附表2。上述硫酸銨晶體分步鹽析法中在豬血血漿中均勻加入硫酸銨晶體時的持續(xù)攪拌轉(zhuǎn)速為20-30轉(zhuǎn)/分鐘。上述硫酸銨晶體分步鹽析法中離心使用管式固液分離機，其離心轉(zhuǎn)速為15000-16000轉(zhuǎn)/分鐘。附表I :實例I得到的免疫球蛋白G各項指標如下
指標(％)
粗蛋白質(zhì)90. 58
免疫球蛋白G 69. 36 灰分2752
水分2.63
粗纖維(102
食鹽oTTI
~oTTi ,丐oTTi附表2 實例2得到的免疫球蛋白G各項指標如下
指標(％)
粗蛋白質(zhì)91.25
免疫球蛋白G67. 43
灰分3. 12
水分2^42
粗纖維003
食鹽021
總磷0. 16
,丐o7T權(quán)利要求
1.一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征在于以豬血血漿液為原料，通過硫酸銨晶體分步鹽析法獲得免疫球蛋白G固形物，再將免疫球蛋白G固形物溶解后進行超濾濃縮和低溫噴霧干燥獲得免疫球蛋白G的噴干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征在于上述硫酸銨晶體分步鹽析法的具體步驟為 第一步鹽析向豬血漿液中緩慢均勻加入硫酸銨晶體至血漿液硫酸銨飽和度為20±2%，將pH調(diào)至5. 5±0. 3，處理20_40min，經(jīng)過離心后收集上清液； 第二步鹽析向上清液中緩慢均勻加入硫酸銨晶體至上清液硫酸銨飽和度為35±2%，將pH調(diào)至7. 4±0. 2，處理20-40min，經(jīng)過離心后收集沉淀； 第三部鹽析向沉淀中加入純凈水使得免疫球蛋白G完全溶解，再緩慢均勻加入硫酸銨晶體至硫酸銨飽和度為35±2%，將pH調(diào)至7. 4±0. 2，處理20_40min，經(jīng)過離心后收集沉淀。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征在于上述豬血血漿液的選取條件為原血使用檸檬酸鈉作為抗凝劑，檸檬酸鈉的添加量為原血的6-8%。，儲存時制冷溫度為6-10°C，儲存時間不超過3天，分離后立即進行提取。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征在于上述超濾濃縮是在中空纖維膜設(shè)備中進行的，截留分子量為80000-100000道爾頓，操作壓力為O. 05-0. IOMpa0
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征在于上述低溫噴霧干燥的進口溫度為160-180°C，出口溫度為75-85°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征在于上述硫酸銨晶體分步鹽析法中在豬血血漿中均勻加入硫酸銨晶體時的持續(xù)攪拌轉(zhuǎn)速為20-30轉(zhuǎn)/分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征在于上述硫酸銨晶體分步鹽析法中離心使用管式固液分離機，其離心轉(zhuǎn)速為15000-16000 轉(zhuǎn) / 分鐘。
全文摘要
一種從豬血中提取免疫球蛋白G的工業(yè)化生產(chǎn)方法，以豬血血漿液為原料，通過硫酸銨晶體分步鹽析法獲得免疫球蛋白G固形物，再將免疫球蛋白G固形物溶解后進行超濾濃縮和低溫噴霧干燥獲得免疫球蛋白G的噴干粉。本發(fā)明采用硫酸銨晶體沉淀法與超濾法相結(jié)合的方法，分離出的免疫球蛋白G純度高、產(chǎn)量大，并且生產(chǎn)方法操作簡便、適合規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號C07K16/06GK102796195SQ20121025774
公開日2012年11月28日 申請日期2012年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月24日
發(fā)明者鄒國慶, 吳明文, 盧進峰, 徐寶海, 姚遠新 申請人:安徽寶迪肉類食品有限公司