專利名稱：血漿或者血清蛋白的分離的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模分懼(fractionatin)和分離(isolation)蛋白質(zhì)如人血漿或者血清蛋白。具體地，本發(fā)明涉及使用偶聯(lián)捕獲蛋白質(zhì)的配體的吸附劑從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模生產(chǎn)來自如血液、血衆(zhòng)、血清或者其它血源(blood derived source)的治療用血漿或者血清蛋白。技術(shù)背景和現(xiàn)有技術(shù)人和動物血液含有許多蛋白質(zhì)和酶，它們有治療和潛在地挽救生命的特性。有些蛋白質(zhì)可以在紅細(xì)胞中找到，而其它的蛋白質(zhì)可以在血漿或者血清的溶液中找到。自從20世紀(jì)中期，這類蛋白質(zhì)已經(jīng)成為大規(guī)模地和特異分離的目標(biāo)，其目的是提純和標(biāo)準(zhǔn)化用作人治療劑的蛋白質(zhì)。目前可以用作分離的治療產(chǎn)品的主要血蛋白的例子是白蛋白、免疫球蛋白G(IgG)、凝血因子珊和α-I-蛋白酶抑制劑。有些蛋白質(zhì)以每年幾千克的規(guī)模被生產(chǎn)(白蛋白和免疫球蛋白G)，而其它的蛋白僅以每年以克到千克的規(guī)模被生產(chǎn)。然而，從全世界來看，為了分離這些蛋白質(zhì)，每年處理了幾百萬升的血液。血液、血漿和血清是非常復(fù)雜的含有蛋白質(zhì)的溶液，其含有許多其它類的并非所感興趣的蛋白質(zhì)或者酶的化合物，其全部被精細(xì)地平衡和調(diào)節(jié)在血流中的以非常廣泛范圍的生化上復(fù)雜的功能(如氧運輸、免疫防衛(wèi)和防止傷口過量出血的凝血系統(tǒng))進(jìn)行工作。特別是當(dāng)血是從動物上流出并且暴露在大氣和不同類型容器的表面，它會變得非常不穩(wěn)定。盡管可以加入化學(xué)試劑如肝磷脂和檸檬酸鈉以增加其穩(wěn)定性，并且在一定程度上，防止通過分離血細(xì)胞所獲得的血漿的凝結(jié)，但是血漿仍然是非常脆弱，很濃的和粘滯的蛋白質(zhì)溶液液還包括大量的脂質(zhì)。除了添加穩(wěn)定劑，血漿組分的任何處理或者改變會導(dǎo)致意外不穩(wěn)定的風(fēng)險，它可以引起階式凝固器的活化、沉淀如脂質(zhì)組分和使目標(biāo)蛋白變性，因此使血液很難與其一塊起作用。因此，從血液或者血源溶液中分離蛋白所使用的任何方法必須考慮溶液和蛋白質(zhì)自身固有的不穩(wěn)定性。已經(jīng)證明這對于從血液中大規(guī)模生產(chǎn)治療產(chǎn)品是一個重大的挑戰(zhàn)。進(jìn)一步,從技術(shù)方面來看,血液的復(fù)雜性和不穩(wěn)定性使離析(separation)和分離(isolation)血蛋白比從其它類型的蛋白溶液如哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的上層清夜和從遺傳改性的微生物體中發(fā)酵的原湯(broth)中分離蛋白質(zhì)(如在生物技術(shù)工業(yè)中典型使用的)更復(fù)雜和經(jīng)濟上更高要求。而且，生物技術(shù)工業(yè)典型地從細(xì)胞培養(yǎng)的上層清夜中僅分離一種特定產(chǎn)品，而由于經(jīng)濟和倫理的原因，治療血液分離工業(yè)通常必須從有限的血源中分離盡可能多的產(chǎn)品。血液、血清和血漿的成本在最近幾十年已經(jīng)大量增加，主要的原因是增加了為防止病毒疾病從血液捐獻(xiàn)者傳播到血液產(chǎn)品接受者而進(jìn)行的安全措施成本。在10-20年的時間中，很高的血漿成本和實施消除病毒步驟和其它安全措施而增加的成本已經(jīng)使血液分離工業(yè)承受增加單個產(chǎn)品(如免疫球蛋白G (IgG)和α-I-蛋白酶抑制劑)的每升產(chǎn)量的巨大壓力。而且，通常也強烈要求擴展從相同量血漿中生產(chǎn)出的產(chǎn)品數(shù)，即從血漿中生產(chǎn)出更多數(shù)目的不同蛋白質(zhì)，而仍然以可接受的產(chǎn)量生產(chǎn)現(xiàn)有產(chǎn)品。血液分餾工業(yè)已經(jīng)體驗到 這些長時間所感覺到的需求用已知技術(shù)是很難滿足的，盡管很長一段時間已經(jīng)作出嘗試使用作為替代已建立的沉淀方法的現(xiàn)代吸附技術(shù)，但是從此處所述吸附方法的經(jīng)濟可行性和處理活性(processingrobustness)方面來看仍然存在很多的問題。分離血漿或者血清蛋白常見使用的方法之一已經(jīng)描述在美國專利2，390，074(Cohn等人)中，該專利公布了一種大規(guī)模分餾血漿或者血清蛋白的方法，它使用乙醇沉淀，并調(diào)節(jié)溫度、PH值、離子強度以及控制某些蛋白質(zhì)從人血清中沉淀的時間。分餾方法涉及逐步地添加乙醇到血漿原料中，其目的是為了獲得幾種沉淀物(餾分(fractions))和包含不同濃縮的蛋白質(zhì)溶液的相應(yīng)上清夜。由Cohn等人所公布的乙醇沉淀方法的一個缺點是某些蛋白質(zhì)在生產(chǎn)過程中趨向于變性，這導(dǎo)致減小分離的蛋白質(zhì)產(chǎn)量，并且沾染上了聚集物，而該聚集物在獲得可接受的治療產(chǎn)物之前必須移除掉。而且，在該分餾方法期間，沉淀的蛋白質(zhì)不得不再溶解以進(jìn)一步處理。該再溶解的蛋白質(zhì)溶液可以包含大量的不能溶解(失活)的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)材料，這使獲得目標(biāo)產(chǎn)品變得很困難和很耗費時間，這也是有價值產(chǎn)品損失的重要原因。另外，該方法的特征是在逐步添加乙醇期間特定蛋白質(zhì)可以分成幾個所獲得的餾分，這再一次導(dǎo)致低產(chǎn)量的和耗費時間的獲得重新組合的蛋白質(zhì)餾分。在使用Cohn等人所述的分餾方法分餾如α _1_蛋白酶抑制劑或者免疫球蛋白如IgG中，α-I-蛋白酶抑制劑的產(chǎn)量低至10-20%，IgG的產(chǎn)量低至40-50%。然而，因為這些產(chǎn)品是非常急需的，并且為滿足病人需求的產(chǎn)品供應(yīng)不足，所以非常需要用于分離這種蛋白質(zhì)的、產(chǎn)品損失減小的新型方法。在最近幾十年，已經(jīng)嘗試開發(fā)一種分餾方法，該方法可以用許多其它技術(shù)包括色譜法增加產(chǎn)量。然而，與已知吸附技術(shù)相關(guān)的缺點如低流速和低粘附容量導(dǎo)致低的生產(chǎn)率、缺少活力(robustness)以及在應(yīng)用安全清潔程序上的困難性，所有這些使平衡在分離血漿和血清蛋白中所涉及的產(chǎn)量和經(jīng)濟性兩方面變得困難。現(xiàn)有工業(yè)生產(chǎn)方法的關(guān)鍵仍然是基于Cohn等人的工作。目前使用的分離和提純方法已經(jīng)顯示出不適合，并且由于效率低的提純方法而導(dǎo)致的痕量雜質(zhì)激發(fā)病人的免疫響應(yīng)。而且，不能分離活性部分和非活性部分產(chǎn)品的提純方法(如目前所使用的方法)可以導(dǎo)致不可預(yù)知的效果和特定的活性，它可以在各種單獨的餾分之間變化。即使嘗試開發(fā)先進(jìn)的吸附技術(shù)如膨脹床吸附(在二十世紀(jì)九十年代初期首次提出)，也未能改善吸附技術(shù)的使用。Finette G. M. S, Biotechnol. Prog.，1998，14，286-293 中描述了使用具有180 μ m的平均顆粒直徑和密度為I. 79g/ml的吸附劑于填充床和膨脹床中從Cohn懼分II和III中吸附α -I-蛋白酶抑制劑。該作者得出結(jié)論體積流速為O. 2ml/min(相應(yīng)的線流速為O. lcm/min或者60cm/小時)將得到產(chǎn)量為50%的α -I-蛋白酶抑制劑。該作者進(jìn)一步地說明更高流速將減小產(chǎn)量，并且干擾在柱中的栓塞流。這種低流速沒有經(jīng)濟上的吸引力，因此，避免使用如用于工業(yè)分餾血液蛋白的膨脹床吸附。
使用膨脹床吸附來分離人血漿蛋白的其它嘗試認(rèn)可了現(xiàn)有技術(shù)所應(yīng)用的低流速。因此，美國專利6，617，133描述了在應(yīng)用IOOcm/小時的原料流速條件下使用流線型SP吸附劑(Amersham Bioscience)來分離人血清白蛋白，根據(jù)提供者,該吸附劑的平均體積顆粒直徑為200μπι，密度為1.20g/ml。這種低流速限制了吸附系統(tǒng)的生產(chǎn)效率，因此，需要非常大的吸附柱，并導(dǎo)致很高的生產(chǎn)每單位人白蛋白的材料成本。因此，一種用于分餾血清蛋白或者血漿蛋白的方法，它處理快、有活力的(即可靠的在每日操作中的低停機時間)、獨特的和安全的，同時在生產(chǎn)過程中提供改進(jìn)的所關(guān)心產(chǎn)物的產(chǎn)量和純度，因此，與常見使用的方法(如Cohn等人所述的方法)相比，有利于獲得在產(chǎn)量和經(jīng)濟性之間改進(jìn)的和可接受的平衡，并且解決了以上提到的問題，這樣的方法是所期望的。本發(fā)明此處提供這樣的方法。本發(fā)明概括因此，本發(fā)明涉及一種用于分離和/或者分餾蛋白質(zhì)溶液的方法。本發(fā)明方法處理快、有活力的、獨特的和安全的，并且在生產(chǎn)過程中提供改進(jìn)的所關(guān)心產(chǎn)品的產(chǎn)量和純度，因此，與常見使用的方法相比，有利于獲得在產(chǎn)量和經(jīng)濟性之間改進(jìn)的和可接受的平衡。本發(fā)明的方法特別適合于大規(guī)模生產(chǎn)。因此，本發(fā)明的一個方面是提供一種用于從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自以下組的來源獲得，該組包括血液如血清和/或者血漿以及其它血源。該方法包括以下步驟a)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值；b)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率；c)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的吸附柱，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑；d)根據(jù)情況清洗吸附柱；e)從吸附劑中獲得一種或者多種蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的另一個方面，提供一種用于從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模分離一種或者多種血液蛋白如一種或者多種血清蛋白或者一種或多種血漿蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值；b)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率；c)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的吸附柱，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑；d)根據(jù)情況清洗吸附柱；e)從吸附劑中獲得一種或者多種蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供一種用于從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，該方法包括以下步驟
a)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值；b)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率；c)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的吸附柱，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，吸附劑包括顆粒密度至少為I. 5g/ml，平均體積顆粒直徑最多為150 μ m ;d)根據(jù)情況清洗吸附柱；e)從吸附劑中獲得一種或者多種蛋白質(zhì)。其中蛋白質(zhì)溶液已經(jīng)被補充了醇。在本發(fā)明的一個方面，提供一種用于從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，該方法包括以下步驟a)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值；b)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率；c)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于吸附劑，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；d)根據(jù)情況清洗吸附劑；e)從吸附劑中獲得一種或者多種蛋白質(zhì)。其中蛋白質(zhì)溶液已經(jīng)被補充了醇。5在本發(fā)明的另一個方面，提供一種用于從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，該方法包括以下步驟a)提供包含一種或者多種蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)在使蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前，對蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次消除病毒的處理；c)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；d)根據(jù)情況清洗吸附劑；e)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的另一個方面，提供一種用于從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，該方法包括以下步驟a)提供包含一種或者多種蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)在使蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前，對蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次消除病毒的處理；c)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；d)根據(jù)情況清洗吸附劑；以及e)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種蛋白質(zhì)。
在本發(fā)明的一個方面，提供一種用于從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模分離或者離析α -I-蛋白酶抑制劑的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述α-I-蛋白酶抑制劑的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述的α -I-蛋白酶抑制劑。在本發(fā)明的一個方面，提供一種用于大規(guī)模分離或者離析α-I-蛋白酶抑制劑的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述的α-I-蛋白酶抑制劑的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述的α -I-蛋白酶抑制劑。在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模分離或者離析人白蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述人白蛋白的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述的人白蛋白。10在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供一種用于大規(guī)模分離或者離析纖維蛋白原的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述纖維蛋白原的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述纖維蛋白原。在本發(fā)明的一個方面，提供一種用于大規(guī)模分離或者離析纖維蛋白原的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述纖維蛋白原的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述纖維蛋白原。在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于大規(guī)模分離或者離析轉(zhuǎn)鐵蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；
b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述轉(zhuǎn)鐵蛋白。在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供一種用于大規(guī)模分離或者離析轉(zhuǎn)鐵蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述轉(zhuǎn)鐵蛋白。在本發(fā)明的一個方面，提供一種用于大規(guī)模分離或者離析α-I-酸-糖蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述α-I-酸-糖蛋白的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述α-I-酸-糖蛋白。15在本發(fā)明進(jìn)一步方面，提供一種用于大規(guī)模分離或者離析α-I-酸-糖蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述α-I-酸-糖蛋白的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述α-I-酸-糖蛋白。在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于大規(guī)模分離或者離析一種或者多種凝血或抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子Vn、凝血因子VDI、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI-馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述一種或者多種凝血因子的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種凝血因子。在本發(fā)明的一個方面，提供一種用于大規(guī)模分離或者離析一種或者多種凝血或抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子Vn、凝血因子VDI、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI-馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述一種或者多種凝血因子的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；
b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種凝血因子。在本發(fā)明另一個方面，提供一種用于同時大規(guī)模分離至少3種、如4種、如6種選自以下的蛋白質(zhì)ct -I蛋白酶抑制劑、IgG、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α -I-酸-糖蛋白、纖維蛋白原的方法，該方法包括以下步驟a)提供包括至少三種所述α -I蛋白酶抑制劑、IgG、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-I-酸-糖蛋白、纖維蛋白原的蛋白質(zhì)溶液，其具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸；以及c)從所述吸附劑中獲得至少3種、如4種、如5種、如6種選自由以下組成的組的蛋白質(zhì)α -I蛋白酶抑制劑、IgG、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α -I-酸-糖蛋白、纖維蛋白原,它們相互之間分離為單個的蛋白質(zhì)餾分。本發(fā)明詳細(xì)公開在最近的幾十年期間，在膨脹床吸附技術(shù)中的開發(fā)已經(jīng)越來越重視，這是因為它可應(yīng)用于大規(guī)模的提純。蛋白質(zhì)可以從粗蛋白質(zhì)溶液中提純，而不需要為移除顆粒物質(zhì)的單獨的凈化、濃縮以及其它類型的初步提純。用于膨脹床吸附的吸附劑使用相同的原理如親和層析法、離子交換層析或者疏水作用色譜法來捕獲目標(biāo)分子。在膨脹床吸附領(lǐng)域中的基本概念與現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)描述在如EP 0722771、WO01/85329、WO 92/18237、TO 2000/25884、WO 02/05923、TO 99/65586 和 WO 00/57982 專利中，它們公布了不同類型的膨脹床吸附裝置和設(shè)備以及不同類型的吸附顆粒，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)這些非常適合于改裝或者進(jìn)一步開發(fā)用來分離本發(fā)明所描述的血清蛋白或者血漿蛋白。所有這些文獻(xiàn)此處弓I入作為參考。在本發(fā)明的實施方式中，本發(fā)明的方法可以大規(guī)模地進(jìn)行操作。在本文中，術(shù)語“大規(guī)模地”涉及處理原料的量為至少I升/吸附循環(huán)如至少5升/吸附循環(huán)、如至少10升/吸附循環(huán)、如至少25升/吸附循環(huán)、如至少100升/吸附循環(huán)、如至少1000升/吸附循環(huán)，因此，本發(fā)明是區(qū)別于其它任何分析和小規(guī)模的實驗，它并不涉及嚴(yán)格地要求如在工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)環(huán)境中所要求的活性和可重復(fù)性。蛋白質(zhì)溶液根據(jù)本發(fā)明，可以從蛋白質(zhì)溶液中離析和分離所關(guān)心的蛋白質(zhì)。在本文中，術(shù)語“蛋白質(zhì)溶液”涉及液體的、包含所關(guān)心的蛋白質(zhì)的任何類型溶液，并且從該溶液，可以離析和分離出蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液可以從選自以下組成的來源來獲得血液、血清、血衆(zhòng)或者其它的血源。血液、血清、血衆(zhòng)或者其它的血源可以從人或者動物如牛、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、斑馬、雞、魚或者鴕鳥來獲得。在本發(fā)明的實施方式中，所選擇的動物能夠制造或者可能改良制造所關(guān)心的蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的可選擇實施方式中，蛋白質(zhì)溶液可以從哺乳動物的細(xì)胞培養(yǎng)、或者微生物發(fā)酵原湯(其中，哺乳細(xì)胞或者微生物體能夠或者已經(jīng)改良制造所關(guān)心的蛋白質(zhì))或者植物汁(其中，植物能夠制造或者已經(jīng)改良制造所關(guān)心的蛋白質(zhì))中獲得。在本發(fā)明的實施方式中，所使用的蛋白質(zhì)溶液可以被補充醇。
在本文中，術(shù)語“被補充醇”涉及添加醇到蛋白質(zhì)溶液中，目的是實現(xiàn)離析在蛋白質(zhì)溶液中出現(xiàn)的至少兩種組分，借此，一種組分將會出現(xiàn)在上清液中，其它組分將會出現(xiàn)在餾分中。特別地，這種蛋白質(zhì)溶液的離析涉及逐步地增加加入到蛋白質(zhì)溶液中的乙醇量，從而，從蛋白質(zhì)溶液中離析至少一種血清蛋白或者血漿蛋白。在離析方法過程中，所關(guān)心的蛋白質(zhì)可以出現(xiàn)在上清液或者餾分中。在本發(fā)明的的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液是用包含至少
O.I體積％體積％的醇來補充,如至少O. 5體積％、如至少O. 75體積％、如至少I. O體積％、如至少I. 5體積％、如至少2. O體積％、如至少3. O體積％、如至少5. O體積％、如至少7. 5體積％、如至少10. O體積％、如至少20體積％、如至少25. O體積％、如至少40體積％、如至少50. O體積％、如至少60體積％、如至少75. O體積％。在本發(fā)明的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液具有總的醇含量為至少O. I體積％的醇如至少O. I體積％、如至少O. 5體積％、如至少O. 75體積％、如至少I. O體積％、如至少I. 5體積％、如至少2. O體積％、如至少3. O體積％、如至少5. O體積％、如至少7. 5體積％、如至少10. O體積％、如至少20體積％、如至少25. O體積％、如至少40體積％、如至少50. O體積％、如至少60體積％、如至少75. O體積％、如至少77體積％。在本發(fā)明文中，術(shù)語“上清液”涉及一種在依據(jù)本發(fā)明通過加入乙醇到蛋白質(zhì)溶液中所獲得的液體餾分、沉積物餾分或者沉淀物餾分上的液相。在本文中，術(shù)語“餾分”涉及可從上清液中通過分餾方法如過濾、微量過濾、離心過濾、蒸餾或者色譜法離析出來的蛋白質(zhì)溶液部分，該餾分可以是化合物的組合或者純化合物。在本發(fā)明的實施方式中，餾分可以是液體(液體餾分)、沉積物(沉積餾分)或者沉淀物(沉淀餾分)。在本發(fā)明的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液可以用選自由以下組成的組的醇來補充甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、仲丁醇、叔丁醇、亞甲基二醇、乙二醇、丙二醇、二甘醇、亞甲基-乙二醇(methylene-ethyleneglycol)以及二亞甲基二醇(dimethyleneglycol)。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液包括血漿或者血清，特別是來源于人的。在本發(fā)明的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液包括血清或者血漿餾分和/或者血漿或者血清上清液，特別是來源于人類的。而且，在本發(fā)明實施方式中，從再溶解的沉淀物中所獲得的餾分可以通過逐步地添加醇到蛋白質(zhì)溶液中獲得。特別地，血漿或者血清餾分可以從通過添加醇到血漿或者血清中所獲得的可再溶解的沉淀物來提供。根據(jù)本發(fā)明，蛋白質(zhì)溶液可以從蛋白質(zhì)溶液中獲得，并且可以包括一種或者多種上清液和/或一種或者多種可再溶解餾分的組合。特別地，人或者動物的血漿或者血清蛋白質(zhì)溶液可以通過重組由加入醇到人或者動物血漿或血清中所獲得的一種或者多種上清液和/或一種或者多種可再溶解的沉淀物來獲得。在本發(fā)明的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液的溫度可以在_5°C -50°C溫度范圍，更優(yōu)選在-5°C -40°C溫度范圍，更優(yōu)選在-5°C -30°C溫度范圍，更優(yōu)選在_5°C _20°C溫度范圍，更優(yōu)選在0°C -10°C溫度范圍或者在0°C -50°C溫度范圍，更優(yōu)選在10°C _50°C溫度范圍，更優(yōu)選在20°C -50°C溫度范圍，更優(yōu)選在30°C -50°C溫度范圍，更優(yōu)選在40°C -50°C溫度范圍。分餾/離析方法
如上所述，分餾蛋白質(zhì)溶液的常見方法涉及Cohn等人所描述的方法，Cohn等人方法涉及逐步地加入醇到蛋白質(zhì)溶液中，從而，所關(guān)心的蛋白質(zhì)逐步地從蛋白質(zhì)溶液中離析出來。該方法已經(jīng)更詳細(xì)地描述在以下文章中Cohn等人,“Separation into Fractionsof Protein and Lipoprotein Components，，, J. Am. Chem. Soc. ,68,459-475,1946 ；E. J. Cohn等人，Preparation and Properties ofSerum and Plasma Proteins, IV A system forthe Sparation into Fractions of theProtein and Lipoprotein Components ofBiological Tissues and Fluids, the Journalof the American Chemical Society, vol.LX VDK Jan. -Jul. 1946)，pp459_475 ;美國專利 2，390, 074 和 2，469，193，它們在此處引入作為參考。在本文中，術(shù)語“分餾”和“離析”可以互換使用，它涉及在其與吸附劑接觸以分離所關(guān)心的蛋白質(zhì)之前制備蛋白質(zhì)溶液的方法。在本發(fā)明的實施方式中，通過加入醇到所獲得的蛋白質(zhì)中所進(jìn)行的蛋白質(zhì)溶液的逐步分餾可以通過一種或者多種以下操作來說明( i )蛋白質(zhì)溶液如血漿可以開始進(jìn)行冷凍，然后經(jīng)過慢慢的、控制的解凍程序，從而形成一種冷凝蛋白質(zhì)，它包括凝血因子VDK與馮維勒布蘭德因子vWF復(fù)合)和纖維蛋白原，包含大量蛋白質(zhì)的上清液保留在血衆(zhòng)中(稱為cryo-poor血楽；)。(ii)在(i )中所獲得的冷凝蛋白質(zhì)餾分可以再溶解以形成蛋白質(zhì)溶液，該蛋白質(zhì)可以通過使其與吸附劑接觸來分離。特別地，蛋白質(zhì)如凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子vWF和纖維蛋白原可以從由再溶解的餾分所獲得的蛋白質(zhì)溶液中分離。(iii)在(i )步中的上清液、cryo-poor血漿可以被補充醇，并且形成餾分I (沉淀物)和上清液I。(iv)上清液I可以用更多的醇補充，形成沉淀餾分II+III和上清液11+111。餾分II+III可以離析和再溶解以形成一種蛋白質(zhì)溶液，所關(guān)心的蛋白質(zhì)可以通過使其與吸附劑接觸來分離。特別地，蛋白質(zhì)如免疫球蛋白(如IgG)可以從由餾分II+III所獲得的蛋白質(zhì)溶液中分離，上清液II +III主要地包括白蛋白和α -I-蛋白酶抑制劑。(V )上清液II +III可以進(jìn)一步地用醇補充，形成上清液IV -1，并且沉淀餾分IV -I。餾分IV -I可以離析和再溶解，并且形成一種蛋白質(zhì)溶液，蛋白質(zhì)可以通過使其與吸附劑接觸來分離。特別地，血漿蛋白如α-I-蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III與凝血因子IX的復(fù)合物可以從由餾分IV -I所獲得的蛋白質(zhì)溶液中分離。(vi)上清液IV -I可以用更多的醇補充，以形沉淀餾分IV -4和上清液IV -4。餾分IV-4可以離析和再溶解，形成一種蛋白質(zhì)溶液，所關(guān)心的蛋白質(zhì)可以通過使其與吸附劑接觸來分離。特別地，丁酰膽堿酯酶可以從由餾分IV -4所獲得的蛋白質(zhì)溶液中分離。(Vii)上清液IV-4可以進(jìn)一步地用醇補充以提供沉淀的餾分V，它可以離析和再溶解以形成一種蛋白質(zhì)溶液，所關(guān)心的蛋白質(zhì)可以通過使其與吸附劑接觸來分離。特別地，白蛋白可以從由餾分V所獲得的蛋白質(zhì)溶液中分離。在本發(fā)明的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液可以選自由以下組成的組cryo_poor血楽；、上清液I、上清液II+III、上清液IV-I、上清液IV-4、重新溶解的冷凝蛋白質(zhì)、重新溶解的餾分I、重新溶解的餾分II+III、重新溶解的餾分IV-I、重新溶解的餾分IV-4、重新溶解的餾分V以及其任何組合。
在本發(fā)明的一個特定實施方式中，蛋白質(zhì)溶液可以選自由以下組成的組上清液
I、上清液II+III、重新溶解的餾分IV-I以及其任何組合。在本發(fā)明的一個特定的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液可以選自由以下組成的組上清液I、上清液II +III、上清液I + II +III、重新溶解的餾分IV -I以及其任何組合。在本發(fā)明的進(jìn)一步特定實施方式中，蛋白質(zhì)溶液可以選自由以下組成的組上清液I、重新溶解的餾分II+III以及其任何組合。沉淀的餾分可以在廣泛范圍的水溶液(包括純水)中重新溶解。在許多優(yōu)選的實施方式中，重新溶解的媒介可以是水緩沖溶液，它具有可適合于如下的下游處理步驟如根據(jù)本發(fā)明的吸附步驟的PH值和離子強度。在本發(fā)明的實施方式中，沉淀的餾分可以通過過濾、離心分離、移注、超濾和/或者沉降從上清液來獲得。在本發(fā)明的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液可以通過在以下文獻(xiàn)中由Cohn等人所描述的 Cohn 分懼方法來獲得,Separation into Fractions of Protein andLipoproteinComponents，，，J. Am. Chem. Soc. ,68,459-475,1946 ；E. J. Cohn 等人，Preparation andProperties of Serum and Plasma Proteins, IV A system forthe Sparation intoFractions of the Protein and Lipoprotein Components ofBiological Tissues andFluids,the Journal of the American Chemical Society, vol. LXVII(Jan.-Jul. 1946),pp459-475 ;美國專利 2，390，074 和 2，469，193。在本發(fā)明的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液包括至少一種從通過添加乙醇如原始的Cohn分餾方法或者與其不同的Cohn-Oncley方法來分餾血漿或者血清所獲得的血漿或者血清蛋白。蛋白質(zhì)在本發(fā)明優(yōu)選的實施方式中，待分離的蛋白質(zhì)是一種血液蛋白如血漿蛋白或者血清蛋白。在本文中，術(shù)語“血漿或者血清蛋白”涉及生產(chǎn)的或者人或動物身體所需要的蛋白質(zhì)。通常，這些血漿或者血清蛋白包含在動物或者人的血液中，特別是某些蛋白質(zhì)最初在紅細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，而其它的蛋白可以在血漿或者血清的溶液中找到。血漿是血液的一個組分，它是液體的，血細(xì)胞懸浮在該液體中。血漿含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、營養(yǎng)物、新陳代謝最后產(chǎn)物、荷爾蒙以及無機電解質(zhì)。血漿典型地通過加入抗凝血劑如檸檬酸鈉、肝磷脂和EDTA使其穩(wěn)定。血清是與血漿相同，除了凝血因子(如纖維蛋白原和凝血因子VID已經(jīng)被移除。在本發(fā)明的實施方式中，血漿或者血清蛋白是人或動物的血漿或者血清蛋白。在本發(fā)明的實施方式中，待分離的一種或者多種血漿或者血清蛋白是選自由以下組成的組白蛋白、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白M (IgM),免疫球蛋白D (IgD)、免疫球蛋白E (IgE), α-I-蛋白酶抑制劑(類似于α-l-蛋白酶)、前凝血蛋白(blood pro-coagulation protein)、抗凝血蛋白、溶栓劑、抗血管生成蛋白、α-2-抗纖溶酶、C-I酯酶抑制劑、載脂蛋白、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL、纖連蛋白、β-2-酸-糖蛋白I、血纖蛋白原、纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶激活物、纖溶酶抑制劑、 血漿蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III、鏈激酶、內(nèi)-α-胰島素抑制劑(內(nèi)-α-胰島素抑制劑(inter-alpha-trypsin inhibitor))、α-2-巨球蛋白、淀粉樣蛋白、鐵蛋白、前白蛋白、GC-球蛋白、血結(jié)素、補體C3、轉(zhuǎn)鐵蛋白、尿激酶、α-I-酸-糖蛋白以及凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子VDI、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)。吸附柱能夠捕獲一種或者多種蛋白質(zhì)的吸附劑保存在吸附柱中，或者它可以不保存載吸附柱中。在本文中，術(shù)語“吸附柱”涉及可以為將蛋白質(zhì)應(yīng)用于吸附柱和隨后洗提蛋白質(zhì)提供至少一個入口和至少一個出口的任何類型的容器。對于某些吸附柱，該入口和出口可以相同(如分批吸附槽)。吸附柱可以是膨脹床(Expanded bed adsorption,EBA)吸附柱、填充床吸附柱、流化床吸附柱、懸浮床吸附柱、膜反應(yīng)器或者分批吸附槽的形式。吸附柱可以以分批處理系統(tǒng)或者連續(xù)系統(tǒng)來使用。典型地，填充床吸附柱和膨脹床吸附柱是在塞流(plugflow)條件下(即在吸附床中沒有液體反向混合和湍流)操作，而懸浮床吸附柱和分批吸附槽是以高度地混合至少大部分的吸附柱體積來操作。EBA技術(shù)通常可以用非澄清的蛋白質(zhì)溶液高效率地工作，這使得它對于分離蛋白質(zhì)很有吸引力。與基于填充床吸附技術(shù)的方法相比，膨脹床吸附技術(shù)EBA可以提供包括很少步驟的、有活力的方法，因此，導(dǎo)致增加產(chǎn)量和改進(jìn)方法的經(jīng)濟性。由于在實施EBA方法期間吸附劑床的膨脹，EBA柱可以進(jìn)一步地放大至工業(yè)規(guī)模，而不需要考慮任何關(guān)于增加反壓或者由于系統(tǒng)的阻塞所導(dǎo)致方法的崩潰(當(dāng)使用填充床吸附柱時，這經(jīng)常是個問題)。根據(jù)本發(fā)明，蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的填充床吸附柱或者膨脹床吸附柱。在本文中，術(shù)語“填充床”涉及以下實施方式在該實施方式中，吸附劑顆粒應(yīng)用在吸附柱中，吸附柱是以顆粒在沉降或者填充的狀態(tài)(在該狀態(tài)中，所有顆粒固定在相互間的頂部)進(jìn)行操作。經(jīng)常地，填充床吸附柱裝備有頂部和底部的轉(zhuǎn)接器，限定和固定整個吸附劑床，以避免在操作期間顆粒的任何移動。 在本文中，術(shù)語“膨脹床”涉及以下實施方式在該實施方式中，吸附劑顆粒應(yīng)用在吸附柱中，吸附柱允許吸附劑膨脹，并且向上的液體流流經(jīng)吸附柱。吸附柱設(shè)計為在吸附柱中避免過量液體混合和湍流，而單個吸附劑顆粒保持在非固定的活動狀態(tài)，僅在吸附柱中很窄的局部區(qū)域移動。而優(yōu)選的膨脹床在吸附柱的底部具有很小的混合區(qū)域，其中，引入的液體分布在整個吸附柱的橫截面，膨脹床通常在類似于填充床的塞流條件下操作。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑保存在膨脹床吸附柱中，并且優(yōu)選用來從蛋白質(zhì)溶液中大規(guī)模地分離一種或者多種蛋白質(zhì)。在吸附劑不是保存在吸附柱中的情況下，它可以是固相如用于膜為基的吸附如薄膜濾器、纖維或者薄片，對此配體偶聯(lián)。每當(dāng)吸附劑是以滲透或者半滲透的膜、纖維或者薄片的形式，吸附劑與蛋白質(zhì)溶液之間的接觸一般可以通過泵/施加壓力使蛋白質(zhì)溶液經(jīng)過表面和/或流經(jīng)多孔結(jié)構(gòu)的膜或者薄片，以確保一種或者多種血漿或者血清蛋白在表面和/或者在吸附劑中與共價鍵附著的官能團緊密接觸。吸附劑本發(fā)明的進(jìn)一步目標(biāo)是提供一種基于對任何類型固相材料(任何形狀和格式)的吸附包括填充床吸附、分批吸附、懸浮床吸附、膨脹床吸附(EBA)、流化床吸附和基于膜的吸附從蛋白質(zhì)溶液中分離蛋白質(zhì)的方法。而且，該吸附的特征是可以使用選擇性的吸附劑和/或配體化學(xué)，它們能進(jìn)行特定的結(jié)合并隨后洗提充分地僅有一種生物分子，或者選擇性地能進(jìn)行一組特定的結(jié)合許多生物分子物質(zhì)并隨后通過選擇性地和連續(xù)地從吸附劑中洗提一種或者多種物質(zhì)。吸附劑包括適合用于結(jié)合一種或者多種所關(guān)心的蛋白質(zhì)的配體。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑可以用一種或者多種清洗緩沖液和/或平衡緩沖液來選擇性地清洗和/或平衡。對于廣泛范圍的本發(fā)明優(yōu)選實施方式，關(guān)鍵重要的是，吸附劑是在尺寸和密度方面具有組合特征的顆粒。因此，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，對于高濃度的蛋白質(zhì)溶液如血漿或者血清，非常期望的是，為了獲得快的和效率高的蛋白質(zhì)結(jié)合(這對于生產(chǎn)率和生產(chǎn)工廠的經(jīng)濟性來說很重要)，使用具有體積平均顆粒直徑小于150 μ m的顆粒。然而，進(jìn)一步地發(fā)現(xiàn)，吸附劑顆粒的小直徑(低于150 μ m)與吸附劑顆粒的某些最小密度(大于I. 5g/ml)的組合能使在生產(chǎn)工廠的生產(chǎn)率方面有重大改進(jìn)。因此，可以獲得一種快的和高效率的蛋白質(zhì)結(jié)合與流經(jīng)本吸附方法所使用的吸附柱的高液體流速的獨特組合。特別是對于非填充吸附柱如膨脹床吸附柱和懸浮床吸附柱，根據(jù)本發(fā)明所獲得的高液體流速與吸附劑很重要。很小吸附劑顆粒具有高的密度，高的密度在填充和再填充過程中提供快沉降速度，否則是慢的和過分苛求的方法步驟，這對于填充床吸附柱是很明顯的優(yōu)點。通常地，發(fā)現(xiàn)更小平均體積直徑的顆粒可以期望得到更高密度的顆粒。可以應(yīng)用于本發(fā)明的某些實施方式中的商業(yè)吸附劑顆粒的例子有-FastLine UFC NNSDff (UpFront Chromatography A/S, Denmark),其體積平均顆粒直徑為70 μ m,密度為2. 9g/ml。-STREAMLINE SP (Amersham Bioscience, Sweden),其體積平均顆粒直徑為200 μ m,密度為 I. 2g/ml。-STREAMLINE Direct CST-I (Amersham Bioscience, Sweden),其體積平均顆粒直徑為135 μ m,密度為1.8g/ml。-Q and CM HyperZ離子交換吸附劑(Biosepra SA, France),其平均顆粒直徑為
751μ m,密度為 3. 2g/ml。特別在膨脹床吸附中，流速、顆粒的尺寸和密度都可以對膨脹床的膨脹有影響。當(dāng)用膨脹床吸附工作時，以保持顆粒在吸附柱里面的方式來控制膨脹的程度是很重要的。膨脹程度可以確定為H/U，其中，Htl是在填充床方式中床的高度(沒有物流通過吸附柱時)，H是在膨脹床方式中床的高度(給定的物流通過吸附柱)。在本發(fā)明的實施方式中，膨脹程度H/H0 是在 I. 1-6 的范圍如 I. 1-5、如 I. 1-4、如 I. 2-5、如 I. 5-4、如 2-4、如、如 2-3、如 3-4。在本發(fā)明的另一實施方式中，膨脹程度H/U為至多I. 2如至多I. 3、如至多I. 5、如至多I. 8、如至多2、如至多2. 5、如至多3、如至多3. 5、如至多4、如至多4. 5。在本發(fā)明的實施方式中，流速為5cm/min，膨脹程度H/U為至多I. 2如至多I. 3、如至多I. 5、如至多I. 8、如至多2、如至多2. 5、如至多3、如至多3. 5、如至多4、如至多4. 5。在本發(fā)明進(jìn)一步的實施方式中，流速為7cm/min，膨脹程度H/U為至多I. 2如至多I. 3、如至多I. 5、如至多I. 8、如至多2、如至多2. 5、如至多3、如至多3. 5、如至多4、如至多4. 5。在本發(fā)明的實施方式中，流速為IOcm/min，膨脹程度H/U為至多I. 2如至多I. 3、如至多I. 5、如至多I. 8、如至多2、如至多2. 5、如至多3、如至多3. 5、如至多4、如至多4. 5。在本發(fā)明的實施方式中，流速為15cm/min，膨脹程度H/U為至多I. 2如至多I. 3、如至多I. 5、如至多I. 8、如至多2、如至多2. 5、如至多
3、如至多3. 5、如至多4、如至多4. 5。在本發(fā)明的實施方式中，流速為20cm/min，膨脹程度H/H0為至多I. 2如至多I. 3、如至多I. 5、如至多I. 8、如至多2、如至多2. 5、如至多3、如至多3. 5、如至多4、如至多4. 5。在本發(fā)明的實施方式中，填充床吸附柱或者平膨脹床吸附柱的線流速可以為至少2cm/min,更優(yōu)選為至少3cm/min,更優(yōu)選為至少4cm/min,更優(yōu)選為至少5cm/min,更優(yōu)選為至少6cm/min,更優(yōu)選為至少7cm/min,更優(yōu)選為至少8cm/min,更優(yōu)選為至少IOcm/min,更優(yōu)選為至少12cm/min,更優(yōu)選為至少15cm/min,更優(yōu)選為至少20cm/min,更優(yōu)選為至少25cm/min,更優(yōu)選為至少30cm/min,更優(yōu)選為至少40cm/min,更優(yōu)選為至少50cm/min。在本發(fā)明的實施方式中，線流速是在l_75cm/min的范圍如2_75cm/min、如7_75cm/min、如 10_75cm/min、如 15_75cm/min、如 20_75cm/min、如 30_75cm/min、如 40_75cm/min、如 50_75cm/min、如 l_50cm/min、如 2_50cm/min、如 2_30cm/min、如 3_30cm/min、如 3_20cm/min、如 3_15cm/min、如 4_30cm/min、如 4_25cm/min、如 4_20cm/min、如 4_15cm/min、如5_25cm/min、如 5_15cm/min、如 5-10cm/min、如 5-7. 5cm/min、如 7. 5cm/min。與傳統(tǒng)使用的流速相比(特別對于填充床吸附柱)，這些增加的流速可能在很大程度上由于小顆粒直徑與吸附劑的高密度相結(jié)合。在特定的本發(fā)明實施方式中，將蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于吸附劑柱可以在線速度為至少200cm/小時如至少300cm/小時下來操作，更優(yōu)選為至少400cm/小時如至少500或者600cm/小時、如至少900cm/小時。在本發(fā)明的實施方式中，吸附柱可以包含一種高密度的吸附劑。在本文中“高密度吸附劑”涉及部分組的吸附劑，并涉及出現(xiàn)在吸附柱中的整床吸附劑顆粒。術(shù)語“吸附劑顆?！笨梢耘c術(shù)語“顆?！被Q使用，并涉及單獨的、組成吸附床中的吸附劑的單個顆粒。優(yōu)選單個吸附劑顆粒的形狀為充分地球形。然而，顆粒的全部形狀通常不是非常重要，因此，顆?？梢跃哂衅渌愋偷膱A形狀如橢圓體、小滴形(droplet)和豆夾形狀(bean forms)。然而，對于某些應(yīng)用(如當(dāng)顆粒用于裝備的流化床時)，優(yōu)選的是，至少95%的顆粒是充分地圓形。在本文中，術(shù)語“顆粒直徑”和“顆粒尺寸”可以互換使用，并且涉及圍繞顆粒的圓形物的直徑，因此，它可以認(rèn)為在顆粒最寬處的顆粒直徑。吸附劑的密度打算描述吸附劑顆粒在其完全溶劑化(如水合)的狀態(tài)下的密度，相對的是干燥吸附劑的密度。在本發(fā)明中，顆粒的密度可以通過操作以下過程來測量1)通過在真空玻璃過濾器中輕微地抽吸以移除占據(jù)在各個顆粒珠之間的空間的縫隙水，抽干吸附劑顆粒。2)稱量抽干的顆粒樣品，確定顆粒的總質(zhì)量。3)全部量的抽干顆粒樣品加入到已知量的水(在量筒中)中，并讀出通過加入抽干的顆粒所獲得的總體積增加量。4)通過抽干樣品的總質(zhì)量除以3)項所確定的體積增加量，計算密度。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑顆粒的密度可以在I. 5g/ml-20g/ml的范圍，更優(yōu)選在I. 9g/ml-20g/ml的范圍，更優(yōu)選在2. 0g/ml-20g/ml的范圍，更優(yōu)選在2. lg/ml_20g/ml的范圍，更優(yōu)選在2. 3g/ml-20g/ml的范圍，甚至更優(yōu)選在2. 5g/ml-20g/ml的范圍，甚至更優(yōu)選在2. 8g/ml-20g/ml的范圍，甚至更優(yōu)選在2. 9g/ml-20g/ml的范圍，更優(yōu)選在3. Og/ml-20g/ml的范圍，更優(yōu)選在3. 5g/ml-20g/ml的范圍，更優(yōu)選在4. 0g/ml-20g/ml的范圍，更優(yōu)選在5g/ml-20g/ml的范圍，更優(yōu)選在10g/ml-20g/ml的范圍，更優(yōu)選在15g/ml_20g/ml的范圍，更優(yōu)選在4g/ml-15g/ml的范圍，更優(yōu)選在4g/ml_10g/ml的范圍，更優(yōu)選在I. 5g/ml-15g/ml 的范圍。EBA吸附劑顆粒的密度對于與吸附劑床的最大膨脹程度(可能在典型的EBA吸附柱中出現(xiàn)，如H/U最大為3-5)相關(guān)的可應(yīng)用流速來說很重要，EBA吸附劑顆粒的密度至少為I. 3g/ml,更優(yōu)選為至少I. 5g/ml,更優(yōu)選為至少I. 8g/ml,更優(yōu)選為至少I. 9g/ml,更優(yōu)選為至少2. Og/ml,更優(yōu)選為至少2. lg/ml,更優(yōu)選為至少2. 3g/ml,更優(yōu)選為至少2. 5g/ml,甚至更優(yōu)選為至少2. 8g/ml,甚至更優(yōu)選為至少2. 9g/ml,更優(yōu)選為至少3. Og/ml,更優(yōu)選為至少3. 5g/ml，其目的是使該方法具有高的生產(chǎn)率。在本發(fā)明的實施方式中，85%體積的單個吸附劑顆粒的直徑是在5-200μπι的范圍，更優(yōu)選在10-150 μ m的范圍，更優(yōu)選在15-120 μ m的范圍，更優(yōu)選在20-100 μ m的范圍，更優(yōu)選在20-80 μ m的范圍，更優(yōu)選在80-150 μ m的范圍，甚至更優(yōu)選在40-120 μ m的范圍。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑的平均顆粒直徑可以為150μπι或者更小，優(yōu)選為120μπι或者更小，甚至更優(yōu)選為100 μ m或者更小，甚至更優(yōu)選為80 μ m或者更小，甚至更優(yōu)選為70 μ m或者更小，甚至更優(yōu)選為60 μ m或者更小，甚至更優(yōu)選為50 μ m或者更小，甚至更優(yōu)選為40 μ m或者更小。對流速有影響的幾個參數(shù)可以在EBA方法中實施。吸附劑顆粒的流化性能(它可以通過斯托克斯定律來描述)決定為了膨脹吸附劑并且仍然使吸附劑保持在吸附柱中，哪種流速可以使用。影響這個的主要因素有吸附劑顆粒的直徑和密度，以及流經(jīng)吸附柱的液體流的粘度。然而，對于確保EBA方法的最佳效率和生產(chǎn)率，相應(yīng)于特定領(lǐng)域的結(jié)合和傳質(zhì)動力學(xué)是同等重要。例如，根據(jù)物理流化性能和物理膨脹性能，它可能以很高的流速運行包含某些EBA吸附劑的EBA吸附柱，而所使用的高流速導(dǎo)致差的和低效率的吸附(即低的動力學(xué)容量)，這是因為待結(jié)合的目標(biāo)分子不能與該流速匹配的擴散進(jìn)出吸附劑顆粒(即傳質(zhì)動力學(xué)是限制因素)。因此，結(jié)合特別優(yōu)選的本發(fā)明實施方式，在該實施方式中，在應(yīng)用蛋白質(zhì)溶液期間，所使用的線流速高于300cm/小時，平均體積顆粒直徑為150 μ m或者更小。典型地，在某些實施方式中，分懼方法在以下條件下操作所使用的線流速高于500cm/min,平均體積顆粒直徑低于120 μ m，優(yōu)選低于90 μ m。典型地，在某些實施方式中，分餾方法在以下條件下操作所使用的線流速高于600cm/min,平均體積顆粒直徑低于85 μ m,更優(yōu)選低于75 μ m?；A(chǔ)地，在本文中顆粒尺寸分布的表示是基于本技術(shù)領(lǐng)域中的一般理解的體積，如Malven設(shè)備有限公司(Malven Instrument Ltd,伍斯特郡,英國)在它們的Mastersizer2000E粒度儀操作指南(MAN 0320Issue I. OMar. 2004)所描述的，在該指南中，描述了通過光散射測試顆粒尺寸分布。當(dāng)結(jié)果顯示例如11%的分布是在65-78 μ m的尺寸范圍時，這意思是在上述尺寸范圍(在65-78 μ m的尺寸范圍內(nèi))的所有顆粒的總體積代表了 11%的分布中的所有顆粒的總體積。在本文中所稱謂的平均體積直徑(或者體積平均直徑)涉及體積的平均直徑，對于Mastersizer 2000E粒度儀，Malven標(biāo)記其為“D (4,3)”。每當(dāng)顆粒尺寸范圍稱為如“該顆粒具有顆粒直徑在X-Y μ m的范圍”，應(yīng)當(dāng)理解為至少90%的顆?？傮w積具有直徑在X-Yμ m的范圍，如至少95%、如至少98%、如至少99%。
在本發(fā)明實施方式中，以上所述的吸附劑密度、顆粒直徑和平均體積顆粒直徑可以以任何方式組合，可能提供用于分離一種或者多種所關(guān)心蛋白質(zhì)的最適合的吸附劑。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑的密度可以在I. 5-10. O的范圍，85%體積的單個吸附劑顆粒的直徑可以在10-150 μ m的范圍，平均體積顆粒直徑可以在15-100 μ m的范圍。在本發(fā)明的另一實施方式中，吸附劑的密度可以在2. 0-5. O的范圍，85%體積的單個吸附劑顆粒的直徑可以在20-140μπι的范圍，平均體積顆粒直徑可以在55-85μπι的范圍。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑的密度可以在2. 5-3. 5的范圍，85%體積的單個吸附劑顆粒的直徑可以在40-120 μ m的范圍，平均體積顆粒直徑可以在60-80 μ m的范圍。結(jié)合優(yōu)選的實施方式，平均體積顆粒直徑可以為120 μ m或者更小，顆粒密度為至少I. 6g/ml,更優(yōu)選為至少I. 9g/mL·當(dāng)平均體積顆粒直徑小于90 μ m時，密度必須為至少I. 8g/ml,或者更優(yōu)選為2. Og/ml。當(dāng)平均體積顆粒直徑少于75 μ m時,密度必須為至少
2.Og/ml,更優(yōu)選為至少2. 3g/ml,最優(yōu)選為至少2. 5g/ml。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑顆粒包括具有平均體積顆粒直徑為至多150 μ m和顆粒密度為至少I. 5g/ml的顆粒，如顆粒密度為至少I. 6g/ml、如顆粒密度為至少I. 9g/ml、如顆粒密度為至少2. Og/ml、如顆粒密度為至少2. 3g/ml、如顆粒密度為至少2. 5g/ml、如顆粒密度為至少2. 8g/ml、如顆粒密度為至少3. Og/ml、如顆粒密度為至少3. 5g/ml、如顆粒密度為至少4. Og/ml、如顆粒密度為至少4. 5g/ml。優(yōu)選的是，吸附劑顆粒包括具有平均體積顆粒直徑為至多120 μ m和顆粒密度為至少I. 5g/ml的顆粒，如顆粒密度為至少I. 6g/ml、如顆粒密度為至少I. 9g/ml、如顆粒密度為至少2. Og/ml、如顆粒密度為至少2. 3g/ml、如顆粒密度為至少2. 5g/ml、如顆粒密度為至少2. 8g/ml、如顆粒密度為至少3. Og/ml、如顆粒密度為至少3. 5g/ml、如顆粒密度為至少4. Og/ml、如顆粒密度為至少4. 5g/ml。更優(yōu)選的是，吸附劑顆粒包括具有平均體積顆粒直徑為至多IOOym和顆粒密度為至少1.5g/ml的顆粒，如顆粒密度為至少I. 6g/ml、如顆粒密度為至少I. 9g/ml、如顆粒密度為至少2. Og/ml、如顆粒密度為至少2. 3g/ml、如顆粒密度為至少2. 5g/ml、如顆粒密度為至少2. 8g/ml、如顆粒密度為至少3. Og/ml、如顆粒密度為至少3. 5g/ml、如顆粒密度為至少4. Og/ml、如顆粒密度為至少4. 5g/ml。甚至更優(yōu)選的是，吸附劑顆粒包括具有平均體積顆粒直徑為至多90 μ m和顆粒密度為至少1.5g/ml的顆粒，如顆粒密度為至少I. 6g/ml、如顆粒密度為至少I. 9g/ml、如顆粒密度為至少2. Og/ml、如顆粒密度為至少2. 3g/ml、如顆粒密度為至少2. 5g/ml、如顆粒密度為至少2. 8g/ml、如顆粒密度為至少3. Og/ml、如顆粒密度為至少
3.5g/ml、如顆粒密度為至少4. Og/ml、如顆粒密度為至少4. 5g/ml。甚至更優(yōu)選的是，吸附劑顆粒包括具有平均體積顆粒直徑為至多75 μ m和顆粒密度為至少I. 5g/ml的顆粒，如顆粒密度為至少I. 6g/ml、如顆粒密度為至少I. 9g/ml、如顆粒密度為至少2. Og/ml、如顆粒密度為至少2. 3g/ml、如顆粒密度為至少2. 5g/ml、如顆粒密度為至少2. 8g/ml、如顆粒密度為至少3. Og/ml、如顆粒密度為至少3. 5g/ml、如顆粒密度為至少4. Og/ml、如顆粒密度為至少
4.5g/ml。甚至更優(yōu)選的是，吸附劑顆粒包括具有平均體積顆粒直徑為至多50 μ m和顆粒密度為至少I. 5g/ml的顆粒，如顆粒密度為至少I. 6g/ml、如顆粒密度為至少I. 9g/ml、如顆粒密度為至少2. Og/ml、如顆粒密度為至少2. 3g/ml、如顆粒密度為至少2. 5g/ml、如顆粒密度為至少2. 8g/ml、如顆粒密度為至少3. Og/ml、如顆粒密度為至少3. 5g/ml、如顆粒密度為至少4. Og/ml、如顆粒密度為至少4. 5g/mL·甚至更優(yōu)選的是，吸附劑顆粒包括具有平均體積顆粒直徑為至多40 μ m和顆粒密度為至少I. 5g/ml的顆粒，如顆粒密度為至少I. 6g/ml、如顆粒密度為至少I. 9g/ml、如顆粒密度為至少2. Og/ml、如顆粒密度為至少2. 3g/ml、如顆粒密度為至少2. 5g/ml、如顆粒密度為至少2. 8g/ml、如顆粒密度為至少3. Og/ml、如顆粒密度為至少3. 5g/ml、如顆粒密度為至少4. Og/ml、如顆粒密度為至少4. 5g/ml。根據(jù)本發(fā)明所使用的吸附劑顆粒必須至少部分滲透到待分離的生物分子物質(zhì)中，其目的是為了確保很多的結(jié)合容量。相比之下，不能滲透的顆粒僅能在其表面粘附目標(biāo)分子，這導(dǎo)致相對低的結(jié)合容量。吸附劑顆?？梢允遣煌Y(jié)構(gòu)、組分和形狀的排列。吸附劑顆粒的高密度在很大程度上是通過在多孔聚合物相中的內(nèi)含物或者某種比例的致密非多孔的芯材料來獲得。非多孔的芯優(yōu)選具有密度為至少4. Og/ml如至少
5.Og/ml、如至少8. Og/ml、如至少10g/ml、如至少15g/ml。典型地,非多孔的芯材料具有在大約4. 0-25g/ml范圍的密度，如大約4. 0_20g/ml、如大約4. 0_15g/ml、如大約12_19g/ml、如大約 14_18g/ml、如大約 6. 0-15. Og/ml、如大約 6. 0-10g/ml。其它類型的高密度吸附劑顆粒是基于由多孔高密度材料如氧化鋯制成的顆粒，在多孔材料中，用于吸附的孔配體可以直接固定在高密度材料或者用高密度材料填充孔的多孔聚合網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，參見如美國專利US 6，036，861和國際專利WO 99/51316。盡管是提供高密度和小吸附劑顆粒的有吸引力的方法，但是這類吸附劑通常有一些缺點，這是因為在多孔結(jié)構(gòu)中的擴散限制以及高體積量的高密度相導(dǎo)致低的可達(dá)到的蛋白質(zhì)結(jié)合體積(accessible proteinbinding volume)。對于廣泛范圍的本發(fā)明優(yōu)選實施方式，根據(jù)本發(fā)明所使用的吸附劑顆粒具有高的可達(dá)到的蛋白質(zhì)結(jié)合體積，這是很關(guān)鍵的。在本文中，術(shù)語“顆?？蛇_(dá)到的蛋白質(zhì)結(jié)合體積”涉及任何特定顆粒類型的相對孔體積，并且表示為相對于整個顆粒珠體積的體積百分比(即由孔所占據(jù)的體積/顆粒珠的總體積X 100% )。因此，如果過多的顆粒體積被高密度材料占據(jù)，則只能獲得低的體積生產(chǎn)率。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑的顆粒可達(dá)到的蛋白質(zhì)結(jié)合體積可以為至少20 %，更優(yōu)選為至少30 %，更優(yōu)選為至少40 %，更優(yōu)選為至少50 %，更優(yōu)選為至少55 %，更優(yōu)選為至少60%，更優(yōu)選為至少65%，更優(yōu)選為至少70%，更優(yōu)選為至少75%，更優(yōu)選為至少80 %，更優(yōu)選為至少85 %，更優(yōu)選為至少90 %。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑在10%的突破點可以具有對所述至少一個特定的蛋白質(zhì)的動力學(xué)結(jié)合容量為至少5g/l的沉降的吸附劑，更優(yōu)選為至少10g/l，甚至更優(yōu)選為至少15g/l,更優(yōu)選為至少20g/l,更優(yōu)選為至少25g/l,更優(yōu)選為至少30g/l,更優(yōu)選為至少35g/l,更優(yōu)選為至少40g/l,更優(yōu)選為至少50g/l,更優(yōu)選為至少60g/l。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液加入到吸附劑柱時，為了保留吸附劑的高容量以及獲得高純度的待分離的一種蛋白質(zhì)或多種蛋白質(zhì)，出現(xiàn)在吸附柱中的吸附劑顆粒與蛋白質(zhì)溶液的比例可以最優(yōu)化。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方式中，出現(xiàn)在吸附柱中的吸附劑顆粒相對于裝載在吸附柱中的蛋白質(zhì)溶液是以至少1:100的比例來提供，如為至少1:50、如為至少1:30、如為至少1:15、如為至少1:10、如為至少1:5、如為至少1:1、如為至少1:0. 5,其比例是以體積/體積為基礎(chǔ)計量。因此，吸附劑顆?？梢杂稍S多具有在給定的流速下操作所必須的密度、直徑和/或者結(jié)合容量的、化學(xué)衍生的多孔材料來構(gòu)成。顆粒可以是具有至少兩個由多孔材料所包
21圍的非多孔芯的聚結(jié)型顆粒(如在WO 92/00799中所述的)或者具有單個由多孔材料所包圍的非多孔芯的薄片型顆粒。在本文中，術(shù)語“聚結(jié)型”涉及以下顆粒材料組成的顆粒，該顆粒材料含有不同類型和尺寸的芯材料的、通過聚合物的基體結(jié)合一起的顆粒珠，例如芯顆粒包括兩個或者兩個以上的由所圍繞的聚合物的基體(瓊脂糖)結(jié)合一起的高密度顆粒。在本文中，術(shù)語“薄片型”涉及復(fù)合顆粒，在復(fù)合顆粒中，每個顆粒包括僅僅一個涂覆有一層多孔聚合物基體的高密度芯材料，如高密度不銹鋼的涂覆有瓊脂糖的顆粒珠。因此，術(shù)語“至少一個高密度非多孔芯”涉及包括一個單一的高密度非多孔顆粒的薄片芯，或者涉及一種包括一個以上的高密度非多孔顆粒的聚結(jié)芯。吸附劑顆粒如所述的吸附劑顆?？梢园ㄒ粋€由多孔材料所圍繞的高密度非多孔芯，并且所述多孔材料根據(jù)情況在其外部表面包括一種配體。在本文中，術(shù)語“芯”涉及非多孔芯的顆?；蛘叱霈F(xiàn)在吸附劑顆粒內(nèi)部的芯顆粒。芯顆?；蛘咝绢w?？梢耘既坏胤植荚诙嗫撞牧蟽?nèi)，并不限制其位于吸附劑顆粒的中心。非多孔芯典型地構(gòu)成為至多70%的吸附劑顆粒的總體積，如為至多60%，優(yōu)選為至多50%，優(yōu)選為至多40%，優(yōu)選為至多30%，優(yōu)選為至多20%，優(yōu)選為至多15%，優(yōu)選為至多10%，優(yōu)選為至多5%。合適的非多孔芯材料的例子有無機化合物、金屬、重金屬、基本的非金屬、金屬氧化物、非金屬氧化物、金屬鹽和金屬合金等，只要滿足在密度標(biāo)準(zhǔn)以上。這種芯材料的例子有金屬硅酸鹽；金屬硼硅酸鹽；陶瓷包括二硼化鈦、碳化鈦、二硼化鋯、碳化鋯、碳化鎢、碳化娃、氮化招、氮化娃、氮化鈦、氧化乾、娃金屬粉末以及二娃化鑰(molybdenum disilide)；金屬的氧化物和硫化物包括鎂、鋁、鈦、釩、鉻、鋯、鉿、錳、鐵。鈷、鎳、銅和銀的氧化物；非金屬氧化物；金屬鹽包括硫Ife鎖；金屬兀素包括鶴、錯、欽、給、鑰；、絡(luò)、猛、鐵、鉆、鎮(zhèn)、鋼、銅、銀、金、鈀、鉬、釕、鋨、銠、銥以及金屬元素合金如所述金屬元素的合金如不銹鋼；結(jié)晶和無定形形式的碳包括石墨、碳黑和木炭。優(yōu)選的非多孔芯材料有碳化鎢、鎢、鋼和鈦顆粒珠如不銹鋼顆粒珠。多孔材料是一種聚合物基體，它用作覆蓋和保持多個(或者單個)芯材料結(jié)合一起并且在吸附劑顆粒內(nèi)的工具，以及作為結(jié)合吸附配體的工具。聚合物的基體可以在有些類型的天然或者合成的有機聚合物中尋找，該有機聚合物典型地選自i)天然和合成的多聚糖以及其它碳水化合物為基的聚合物包括瓊脂、藻酸鹽、豆膠、阿拉伯樹膠、印度樹膠、黃蓍膠、刺梧桐樹膠、卡拉膠、黃原膠、瓊脂糖、纖維素、果膠、粘蛋白、右旋糖苷、淀粉、肝磷脂、殼聚糖、羥基淀粉、羥丙基淀粉、羧甲基淀粉、羧乙基淀粉、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素；ii)合成的有機聚合物和生成聚合物的單體包括丙烯酸聚合物、聚酰胺、聚酰亞胺、聚酯、聚醚、聚合的乙烯基化合物、聚烯烴以及它們的取代的衍生物、包括多個這種聚合物的共聚物以及它們的取代的衍生物；以及iii)其混和物。優(yōu)選組的聚合物基體是多聚糖如瓊脂糖。本發(fā)明的研究者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)為了確保在高流速條件下有效的吸附，必須使吸附劑顆粒的平均體積顆粒直徑最小化。因此，在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，吸附劑顆粒的的平均體積顆粒直徑為至多150 μ m，典型的平均體積顆粒直徑在大約40-150 μ m的范圍。典型的吸附劑顆粒的平均體積顆粒直徑為至多120 μ m，特別是為至多100 μ m，更優(yōu)選為至多90 μ m、80 μ m或者75 μ m,更優(yōu)選為70 μ m,最優(yōu)選為60 μ m。從生產(chǎn)率方面來看，吸附劑能夠粘附高的生物分子量/單元體積的吸附劑是很重要。因此，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，優(yōu)選應(yīng)用具有聚合物相的吸附劑(即可滲透的聚合物網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，配體位于其中，并且是真實吸附所發(fā)生的地方)，該聚合物相構(gòu)成為至少50%的吸附劑顆粒的體積，優(yōu)選至少70%，更優(yōu)選為80%，最優(yōu)選為至少50%的吸附劑顆粒的體積。配體一種或者多種蛋白質(zhì)的分離方法可以通過粘附合適配體在吸附劑上來提供，并且通過粘附合適配體在吸附劑上使該方法更容易。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑包括職能化的基體聚合物，它負(fù)載多個含有共價鍵連接的官能團的配體。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方式中，該配體包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)的系統(tǒng)和一種或者多種酸基團。在本文中，術(shù)語“職能化基體聚合物”涉及配體的停泊位置，它促進(jìn)所想要的蛋白質(zhì)吸附特征。依賴于吸附劑顆粒的結(jié)構(gòu)，基體聚合物可以形成限定吸附劑顆粒的物理形狀的支柱或者骨架，或者它可以是占據(jù)用作吸附劑顆粒支柱或者骨架的另外材料的孔洞的聚合物。在優(yōu)選的實施方式中，職能化基體聚合物是合成或者天然的有機聚合物如多聚糖(如聚丙烯酸聚合物、瓊脂糖或者纖維素)，或者他可以是無機聚合物如硅石。在特殊情況下，基體聚合物自身可以構(gòu)成為蛋白質(zhì)吸附位置，在這種情況中，不必固定進(jìn)一步的配體在聚合物上。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連官能團的職能化基體聚合物，所述基團具有以下通式M-SPl-X-AlK式中，M代表吸附劑聚合物；SPl代表可選擇性地用-A-SP2-ACID、-A或者-ACID來取代的選擇性間隔基；X代表-O-、-S-、-NH-或者NAlK- ；A1K可以缺省的、-A-SP2-ACID、-A、-ACID或者C1^烷基，其中Q_4烷基可以選擇性地用-A-SP2-ACID、-A、-ACID來取代；A代表可選擇性取代的芳香或者雜芳香環(huán)部分；SP2代表可選擇的間隔基；以及ACID代表一種或者多種酸基團；其中至少一個SPl或者AlK是用-A-SP2-ACID或者-A來取代，至少一個SPl或者AlK包括-ACID，其中出現(xiàn)至少一個SPl或者A1K。如果AlK缺省，X也將缺省。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑可以結(jié)合配體，它在pH值為10或者更低下帶有一個正電荷，如PH值為9或者更低、如pH值為8或者更低、如pH值為7或者更低、如pH值為6或者更低、如pH值為5或者更低、如pH值為4或者更低。進(jìn)一步地發(fā)現(xiàn)，為了獲得吸附劑的高結(jié)合容量和高化學(xué)穩(wěn)定性，官能團在尺寸和復(fù)合度上不應(yīng)該太大。因此，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，更大的分子重量和環(huán)數(shù)目(在許多物質(zhì)的官能團中所出現(xiàn)的)僅僅增加吸附劑的成本而沒有帶來更高的結(jié)合容量(在每升吸附劑可以結(jié)合的蛋白質(zhì)數(shù)量)。而且，如果使用大分子的官能團，在吸附劑上可以獲得的共價鍵連接的官能團的濃度可以更低(可能是由于位阻)。因此，在本發(fā)明的實施方式中，對于每個附著在基體聚合物上的官能團，共價鍵連接的官能團包含最大為三個單環(huán)或者雙環(huán)的芳香族或者雜芳香族的環(huán)系統(tǒng)；更優(yōu)選最大為兩個單環(huán)或者雙環(huán)的芳香族或者雜芳香族的環(huán)系統(tǒng)；對于每個附著在基體聚合物上的官能團，甚至更優(yōu)選最大為一個單環(huán)或者雙環(huán)的芳香族或者雜芳香族的環(huán)系統(tǒng)。同樣地，在本發(fā)明的實施方式中，共價鍵連接的官能團包含最大為三個酸基團，優(yōu)選最大為兩個酸基團，最優(yōu)選最大為一個酸基團附著在出現(xiàn)在共價鍵連接的官能團上的、每個芳香或者雜芳香的環(huán)系統(tǒng)上。在本發(fā)明優(yōu)選實施方式中，一個或者多個酸基團選自由以下組成的組羧酸、磺酸、磷酸、硼酸以及其組合。在本發(fā)明實施方式中，配體可以從以下物質(zhì)衍生二乙基氨基乙基團、聚亞烷基亞胺、烷基胺、烷基二胺或者聚丙烯胺。優(yōu)選的是，具有3-14個原子的鏈烷和1-5個胺官能團的烷基胺或者烷基二胺是合適的。形成鏈部分的原子可以涉及C (碳)、N (氮)、0 (氧)和/或S (硫)。在本發(fā)明的實施方式中，吸附劑可以包括具有芳香基團和胺基團如芳香胺或者芳香二胺的配體。優(yōu)選的芳香二胺有1，4- 二甲苯-二胺或者1，4- 二甲苯-二胺的異構(gòu)體。在本發(fā)明實施方式中，吸附劑可以結(jié)合具有酸基團、芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)部分、雜芳香環(huán)基團或者其任何組合所取代的二元環(huán)的配體，如具有酸基團和芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)部分的配體；具有酸基團和雜芳香環(huán)基團、或者芳香環(huán)、或者雜芳香環(huán)部分所取代的二元環(huán)的配體；以及雜芳香環(huán)部分所取代的二元環(huán)的配體。在本發(fā)明實施方式中，配體可以包括雜芳香環(huán)部分所取代的二元環(huán)，它可以從選自以下組的化合物衍生，該組包括苯并咪唑、苯并噻唑和苯并唑。在本發(fā)明的實施方式中，配體可以是選自以下組的芳香或者雜芳香酸，該組包括羧酸、磺酸、磷酸、硼酸。優(yōu)選的是，配體可以是選自由以下組成的組2_巰基苯甲酸、2-巰基煙酸、2-氨基苯酸、3-氨基苯酸、4-氨基苯酸、4-輕苯基-巰基-乙酸、4-輕苯基-巰基-丙酸、4-羥苯基-巰基-丁酸、2，3- 二羥基苯甲酸、2，4- 二羥基苯甲酸、2，5- 二羥基苯甲酸、2，6- 二羥基苯甲酸、3，4- 二羥基苯甲酸、3，5- 二羥基苯甲酸、巰基苯并咪唑磺酸(mercaptobenz imidazole sulfonic acid)、鄰氛基苯橫酸、間氛基苯橫酸、對氛基苯橫酸、
4-甲基苯基胺-2-磺酸、4-甲氧基苯基胺-2-磺酸、苯胺-2，5- 二磺酸、N-甲基間氨基苯磺酸、7-氨基-I-萘酚-3-磺酸、I-萘酚-4-磺酸、2-萘酚-6-磺酸以及2-羥基-3-萘酸、疏基苯并咪唑橫酸(mercaptobenzimidazole-sulphonic acid)。在本發(fā)明的實施方式中，配體可以是N-苯甲酰胺酸或者包含硫醇或者巰基的N-苯甲酰胺酸。在本發(fā)明實施方式中，配體可以通過硫醇-醚連接、胺連接或者羥基-醚連接與吸附劑結(jié)合。在聚合物的吸附劑骨架中共價鍵連官能團(配體)的最佳濃度(還經(jīng)常稱為官能團或者配體濃度)將依賴于官能團的詳細(xì)結(jié)構(gòu)和制備吸附劑所使用的吸附劑材料的種類。為了確保最佳的吸附強度和吸附劑的生產(chǎn)率，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在吸附劑中的配體濃度是很重要。因此，在合適的實施方式中，吸附劑負(fù)載用于吸附生物分子物質(zhì)配體，該配體的濃度為至少20mM(毫摩爾)如至少30mM或至少40mM,優(yōu)選為至少50mM,最優(yōu)選為至少60mM。然而，通常優(yōu)選的是，吸附劑具有共價鍵連接的官能團在其沉降(填充)床中的濃度為5-500mM/l (毫摩爾/升)的范圍，更優(yōu)選為10_250mM/l的范圍，更優(yōu)選為10_125mM/I的范圍，更優(yōu)選為15-100mM/l的范圍，更優(yōu)選為20_80mM/l的范圍，更優(yōu)選為25_75mM/l的范圍，更優(yōu)選為30-60mM/l的范圍。在本發(fā)明的實施方式中，共價鍵連接的官能團可以通過已知的本身可應(yīng)用于該目的的任何共價鍵與吸附劑連接，或者通過配體和吸附劑之間的直接化學(xué)反應(yīng)，或者通過用 已知的本身可能使聚合物基體骨架與官能團連接的合適試劑而進(jìn)行的吸附劑或者配體的前述活化。這種合適的活化劑的例子有表氯醇；表溴醇；聚烯丙基縮水甘油醚；雙_環(huán)氧化合物如丁二醇二縮水甘油醚；鹵代脂肪族化合物如二氯丙醇、羰基二咪唑；醛如戊二醛；苯醌；高碘酸鹽如高碘酸鈉；碳二亞胺；磺酰氯如甲苯磺酰基氯、三氟代乙烷磺酰氯；N-羥基琥珀酰亞胺；2_氟-I-甲基吡啶甲苯-4-磺酸；唑酮；馬來酰亞胺；吡啶基二硫化物以及酰肼。在這些化合物中，優(yōu)選的是使間隔基團SPl不同于單鍵的活化劑如表氯醇；表溴醇 ’聚烯丙基縮水甘油醚；雙_環(huán)氧化合物；鹵代脂肪族化合物；醛；苯醌；溴化氰；氯-三嗪；唑酮；馬來酰亞胺；吡啶基二硫化物；酰肼。特別令人關(guān)注的活化劑有環(huán)氧化合物如表氯醇、聚烯丙基縮水甘油醚和丁二醇二縮水甘油醚以及聚甘油醚(polyglycidylether)如丙三醇聚甘油醚。在某些情況中，在該情況州中官能團的共價鍵連接的穩(wěn)定性顯示出用氫氧化鈉如O. 1M-0. 2M (摩爾/I)來處理很穩(wěn)定，活化劑可以是基于三嗪衍生的試劑如氯-三嗪如氰尿酰氯。上述提到的可能性使限定內(nèi)襯于聚合物吸附劑骨架(也稱為基體聚合物)中的、可選擇的間隔基SPl的出現(xiàn)與其相關(guān)。在本文中，間隔基SPl可以認(rèn)為是活化劑的一部分，它在基體聚合物與官能團之間形成連接。因此，間隔基SPl與活化劑和所涉及的耦合反應(yīng)相符。在有些情況如當(dāng)使用碳二胺中，活化劑形成活化形式的基體聚合物或者官能團試劑。在耦合反應(yīng)之后，在官能團和基體聚合物之間沒有剩下活化劑部分，因此，SPl是簡單的單鍵。在其它的情況中，間隔基S Pl可以是影響連接特征的官能團的主要部分(即官能團)，并且，如果間隔基包括功能性的活化位置或者能夠通過氫鍵、靜電結(jié)合或者排斥、電荷轉(zhuǎn)移等相互作用的組分如硫醇、胺、酸基團、砜基、硝基、羥基、腈基或者其它基團，這將會特別重要。在其它情況中，間隔基SPl可以包括芳香或者雜芳香環(huán)，它對于吸附劑的結(jié)合特征起到重要的作用。這例如以下情況，苯醌和氯-三嗪用作吸附劑或者官能團的活化劑。在進(jìn)一步的情況中，間隔基可以是從選自以下的活化劑衍生的單基團或者雙基團表氯醇、聚烯丙基縮水甘油醚、烯丙基溴、雙-環(huán)氧化合物如丁二醇二縮水甘油醚、鹵代脂肪族化合物如1，3- 二氯丙基-2-醇、醛如戊二醛、苯醌、溴化氰、氯-三嗪如氰尿酰氯、2-氟-I-甲基吡啶甲苯-4-磺酸、馬來酰亞胺、唑酮、酰肼。在本發(fā)明的實施方式中，間隔基S Pl可以是短鏈脂肪族雙基團如具有以下化學(xué)式-CH2_CH(OH)-CH2-(從表氯醇衍生的)、-(CH2)3-O-CH2-CH(OH)-CH2-(從聚烯丙基縮水甘油醚衍生的)或者-CH2-CH(OH) -CH2-O-(CH2)4-0_CH2-CH(OH) -CH2-(從丁二醇二縮水甘油醚衍生的)，或者為單基團。在本發(fā)明實施方式中，吸附劑典型地包括選自以下組的含有芳香或者雜芳香基團的配體，該組包括i)含有以下類的作為官能團的配體苯甲酸如2-氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、2-巰基苯甲酸、4-氨基-2-氯苯甲酸、2-氨基-5-氯苯甲酸、2-氨基-4-氯苯甲酸、4-氨基水楊酸、5-氨基水楊酸、3，4- 二氨基苯甲酸、3，5- 二氨基苯甲酸、5-氨基異酞酸、4-氨基異酞酸；司瑪酸(cinnmaic acid)如輕基-司瑪酸(cinnmaicacid);煙酸如2-巰基煙酸；萘酸如2-羥基-I-萘酸、喹啉如2-巰基喹啉；四唑乙酸如5-羥基- I-四唑乙酸；噻重氮如2-羥基-5-甲基-1，3，4-噻重氮；苯并咪唑如2-氨基苯并咪唑、2-巰基苯并咪唑和2-巰基-5-硝基苯并咪唑；苯并噻唑如2-氨基苯并噻唑、2-氨基-6-硝基苯并噻唑、2-巰基苯并噻唑、2-巰基-6-乙氧基苯并噻唑；苯并唑如2-巰基苯并唑；苯 硫酚如苯硫酚和2-氨基苯硫酚；2-(4_氨基苯硫基)乙酸；芳香或者芳香雜環(huán)磺酸和磷酸如I-氨基-2-萘酚-4-磺酸；苯酚如2-氨基-4-硝基-苯酚。應(yīng)該指出的是，以下情況:M是瓊脂糖情況下，SPl是從乙烯基砜，以及L是4-氨基苯甲酸，根據(jù)本發(fā)明(參考專利WO92/16292)，這種情況可以明確地拒接固相基體。最優(yōu)選的是氨基苯甲酸如2-氨基苯甲酸、2-巰基苯甲酸、3-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氨基-2-氯苯甲酸、2-氨基-5-氯苯甲酸、2-氨基-4-氯苯甲酸、4-氨基水楊酸、5-氨基水楊酸、3，4- 二氨基苯甲酸、3，5- 二氨基苯甲酸、5-氨基異酞酸、4-氨基異酞酸。通常地，使用乙烯基砜的耦合反應(yīng)可能不合適，因為乙烯基砜耦合反應(yīng)是不穩(wěn)定的(當(dāng)與堿性物接觸時)，并且堿性物是目前最合適的和常使用的澄清劑(cleaning agent), 二乙烯基砜稱合的吸附劑并不認(rèn)為與工業(yè)化相關(guān)。ii)含有2-輕基-司瑪酸(cinnmaic acid)、3_輕基-司瑪酸(cinnmaic acid)、4_輕基-司瑪酸(cinnmaic acid)的配體；iii)含有以下的、作為取代基的羧酸和氨基的配體,如2-氨基煙酸、2-巰基煙酸、6-氨基煙酸和2-氨基-4-羥基嘧啶-羧酸；iv)含有從與雜芳香環(huán)系統(tǒng)熔合的苯環(huán)中衍生的基團的配體，如選自以下的配體苯并咪唑如2-巰基苯并咪唑、2-巰基-5-硝基-苯并咪唑；苯并噻唑如2-氨基-6-硝基苯并噻唑、2-巰基苯并噻唑、2-巰基-6-乙氧基苯并噻唑；苯并唑如2-巰基苯并唑；以及V)選自苯硫酹如苯硫酹和2-氨基苯硫酚組的配體。在配體選自上述的i)組-V)組的實施方式內(nèi)，吸附劑典型地具有動力學(xué)結(jié)合容量為至少10g/L (生物分子物質(zhì)/升)，更優(yōu)選為至少為20g/L，更優(yōu)選為至少為30g/L (當(dāng)根據(jù)在相關(guān)領(lǐng)域所使用的方法條件來測試時)。吸附劑的結(jié)合容量可以以它結(jié)合牛血清白蛋白(BSA)的容量來確定。結(jié)合容量典型地為結(jié)合BSA至少10g/L (根據(jù)測試方法A)。方法A方法A是一種用來確定所選擇的吸附劑的牛血清蛋白結(jié)合容量的方法，包括以下過程牛血清白蛋白溶液pH值4. O (BSA pH4. O):純化的牛血清白蛋白(A 7906, Sigma,USA)溶解在20毫升的pH值為4. O的檸檬酸鈉中，得到最終濃度為2mg/ml的溶液。吸附劑用50體積的20毫升的pH值為4. O的檸檬酸鈉清洗，并在吸濾器上抽干。I. Oml的抽干的吸附劑樣品放入50ml的試管中，接著加入30ml的pH值為4. O的BSA。試管然后用塞子封閉，懸浮液在輥軸混合器上以及在室溫條件(20_25°C)下孵育2小時。然后，試管在2000rpm (轉(zhuǎn)每分鐘)條件下離心5分鐘，其目的是使吸附劑沉降完全。然后，上清液通過吸液到分開的試管中從吸附劑中分離出來，應(yīng)避免任何吸附劑顆粒的遺留物，并且用很小的非吸附的0.2μπι過濾器(Millipore，USA)來過濾。緊接著，通過在分光光度計上測量在280nm處的光學(xué)密度(0D)，確定在上清液中的沒有結(jié)合的BSA量。然后，結(jié)合到吸附劑上的BSA量可以根據(jù)以下式子來計算mg結(jié)合的BSA/ml = (I-測試的上清液的0D/BSA開始溶液的0D) X 60mg BSA/ml吸附劑過程參數(shù)如上所述，包括一種或者多種所關(guān)心的蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液可以調(diào)整為具有預(yù)設(shè)的PH值和預(yù)設(shè)的離子強度或者導(dǎo)電率。在本文中，術(shù)語“預(yù)設(shè)的”涉及調(diào)整pH值、離子強度或者電導(dǎo)率分別至特定的和預(yù)定的值(目的是選擇吸附劑結(jié)合一種或者多種所關(guān)心的蛋白質(zhì)的能力，借此，增加吸附劑分離蛋白質(zhì)的效率)。在本發(fā)明的實施方式，預(yù)設(shè)的pH值是在pH 3. 0-10. O的范圍，優(yōu)選在pH4_9的范圍，更優(yōu)選在pH 4-8的范圍，甚至更優(yōu)選在pH 4-8的范圍，甚至優(yōu)選在pH 4_7的范圍，甚至優(yōu)選在pH 4-6的范圍，甚至優(yōu)選在pH 4. 5-5. 5的范圍或者在4-10的范圍，優(yōu)選在pH
5-9的范圍，甚至優(yōu)選在pH 6-9的范圍，甚至優(yōu)選在pH 6-8的范圍。在本發(fā)明的實施方式中，預(yù)設(shè)的離子強度是在0.0001-12.0的范圍，優(yōu)選在O. 0001-5的范圍，更優(yōu)選在O. 0001-1的范圍，更優(yōu)選在O. 0001-0. I的范圍，更優(yōu)選在O. 0001-0. 05的范圍，更優(yōu)選在O. 0001-0. 075的范圍，更優(yōu)選在O. 01-0. 005的范圍或者在O. 1-12. O的范圍，優(yōu)選在在O. 5-12的范圍，更優(yōu)選在在1-12的范圍，更優(yōu)選在在I. 5-12的范圍，更優(yōu)選在在2-12的范圍，更優(yōu)選在在4-12的范圍。在本發(fā)明的另一實施方式中，預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率是在O. 01-1000mS/cm的范圍，優(yōu)選在O. 01-200mS/cm的范圍，更優(yōu)選在O. 5-100mS/cm的范圍，更優(yōu)選在O. l_50mS/cm的范圍，更優(yōu)選在O. 5-20mS/cm的范圍，更優(yōu)選在I. 0-10mS/cm的范圍，更優(yōu)選在I. 0_5mS/cm的范圍或者在10-1000mS/cm的范圍，優(yōu)選在100-1000mS/cm的范圍，更優(yōu)選在200_1000mS/cm的范圍，更優(yōu)選在300-1000mS/cm的范圍，更優(yōu)選在400-1000mS/cm的范圍，更優(yōu)選在500-1000mS/cm的范圍，更優(yōu)選在600-1000mS/cm的范圍，更優(yōu)選在2. 0-15mS/cm的范圍，更優(yōu)選在2. 0-12mS/cm的范圍，更優(yōu)選在2. 0-10mS/cm的范圍。本發(fā)明的蛋白質(zhì)溶液的離子強度和電導(dǎo)率是相關(guān)的實體，這是因為兩個實體都是在溶液中的離子濃度的函數(shù)。然而，在它們之間沒有直接理論的一致性。當(dāng)評價含離子的溶液時，對于本技術(shù)領(lǐng)域人員很容易計算(如無機鹽的)獲得一個確定的離子強度所必須的量。相反地，當(dāng)本技術(shù)領(lǐng)域人員面對在不知道添加鹽的量情況下確定離子強度的問題時，很難作出準(zhǔn)確的評估，這是因為離子強度是一個從離子濃度和離子電荷所計算出來的理論實體。在這種情況下，對于本技術(shù)領(lǐng)域人員來說，測試電導(dǎo)率則更容易。正是這些原因，術(shù)語“離子強度”和“電導(dǎo)率”用在本文中表征相同的狀況。當(dāng)談到這兩個量的優(yōu)選范圍時(盡管如此)，并不打算表面在所示的離子強度下限或者上限與電導(dǎo)率的下限或者上限之間存在任何的一致性。對于從吸附劑中獲得一種或者多種蛋白質(zhì)，一種或者多種蛋白質(zhì)可以用一種或者多種緩沖溶液來洗提?？筛鶕?jù)情況，在經(jīng)過洗提緩沖溶液洗提之前，吸附劑可以用清洗緩沖溶液來清洗。在本發(fā)明實施方式中，在從吸附劑中洗提一種或者多種蛋白質(zhì)之前，吸附劑是用清洗緩沖溶液來清洗掉非結(jié)合的材料。病毒消除由于增加防止病毒疾病從血液捐獻(xiàn)者傳播到血液產(chǎn)品的接受者所必須的安全措施，必須引入一種或者多種病毒消除步驟。
在本發(fā)明的實施方式中，蛋白質(zhì)溶液可以進(jìn)行至少一種病毒消除處理。優(yōu)選的是，在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸以前，可以進(jìn)行至少一種病毒消除處理。病毒消除處理涉及添加一種清洗劑和/或一種有機溶劑如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。在本發(fā)明實施方式中，可以進(jìn)行幾個病毒消除步驟，優(yōu)選的是，在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸以前，可以進(jìn)行一種病毒消除處理。在本發(fā)明實施方式中，可以進(jìn)行幾個病毒消除步驟，優(yōu)選的是，在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸以前，進(jìn)行一種病毒消除處理，并且，在吸附步驟期間，添加到蛋白質(zhì)溶液中的任何物質(zhì)如清洗劑和/或有機溶劑保持未與吸附劑結(jié)合，在洗提待分離的蛋白質(zhì)溶液之前，從吸附柱中清洗掉這些物質(zhì)。在本發(fā)明的實施方式中，用于消除在生物流體中的病毒的方法可以通過用有機溶劑和/或者去污劑處理(特別是用磷酸三正丁酯(TNBP)和非離子性去污劑如吐溫80或者曲通(Triton)X-IO來處理)來進(jìn)行。該方法可以獲得良好的不穩(wěn)定蛋白質(zhì)如凝血因子珊、凝血因子IX回收率，而且獲得高水平的殺病毒效果如殺死率> IO6到> IO8ID的包膜病毒，然而非包膜病毒消除很少。美國專利US 4，481，189公開了通過用非陰離子去污劑、醇、醚或者其混和物處理來進(jìn)行病毒消除。美國專利US 4，481，189此處引入作為參考。在本發(fā)明中，常見使用和可使用于在輸液中所使用的生物流體的其它病毒消除方法也可以是在60°C或者更高溫度下進(jìn)行熱處理，或者是單獨用UVC或與B-丙酸內(nèi)脂(B-PL) 一起來進(jìn)行的處理。進(jìn)一步的實施方式在本發(fā)明實施方式中，該方法進(jìn)一步涉及使吸附劑經(jīng)過洗提緩沖液(第一緩沖液)以洗提至少一種所述一種或者多種蛋白質(zhì)的步驟。使用吸附劑并結(jié)合本發(fā)明的官能團(配體)從蛋白質(zhì)溶液如從血漿或者血清或者其它血源中分離至少一種或者多種蛋白質(zhì)，這一過程包括以下步驟(i)提供包含一種或者多種血漿或者血清蛋白的、具有預(yù)設(shè)的PH值和預(yù)設(shè)的離子強度的蛋白質(zhì)溶液；(ii)使所述溶液與吸附劑接觸，選擇性地用一種或者多種平衡緩沖溶液清洗，從而，一種或者多種血漿或者血清蛋白質(zhì)可以被可逆地結(jié)合到吸附劑上或者保持未被結(jié)合；(iii)用清洗緩沖溶液來清洗吸附劑，獲得一種包含非結(jié)合材料的蛋白質(zhì)餾分；(iv)用至少一種洗提緩沖溶液清洗吸附劑，獲得至少一種含有可被吸附劑可逆結(jié)合的蛋白質(zhì)的洗出液；(V)使在清洗緩沖溶液中所獲得的蛋白質(zhì)或者在洗提緩沖溶液中所獲得蛋白質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的、包括至少一種病毒消除步驟的下游處理。而且，與吸附劑耦合的配體可以包括一種負(fù)載有多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團(帶負(fù)電荷并且PH值為4. O以上)的官能團的職能化基體聚合物。為了移除未結(jié)合的材料(包括未結(jié)合的蛋白質(zhì))，吸附劑可以經(jīng)過清洗緩沖溶液。在本發(fā)明的實施方式中，從蛋白質(zhì)溶液中待分離的一種或者多種蛋白質(zhì)溶液可以用清洗緩沖液來清洗掉吸附劑。該清洗可以在使吸附劑經(jīng)過洗提緩沖液之前進(jìn)行操作(如上所述)。在本發(fā)明的實施方式中，α-I-蛋白酶抑制劑作為非結(jié)合蛋白質(zhì)可以用清洗緩沖溶液被清洗掉。本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易改變工業(yè)條件、吸附劑和配體，以改變的方式，一種或者多種血清或者血漿蛋白(非α-I-蛋白酶抑制劑)可以用清洗緩沖溶液來清洗掉，而α-l-蛋白酶抑制劑可以被結(jié)合。在實施方式中，清洗和/或者洗提可以用具有比蛋白質(zhì)溶液的預(yù)設(shè)PH值和預(yù)設(shè)離子強度更高的PH值和/或更高的離子強度的清洗緩沖溶液和/或洗提緩沖溶液來進(jìn)行操作。在另一實施方式中，清洗緩沖溶液和/或洗提緩沖溶液可以包括一種或者多種在相同的分子內(nèi)具有疏水性和帶負(fù)電荷的基團的化合物，如帶負(fù)電荷的去污劑如辛基硫酸鹽、溴酚蘭、辛烷磺酸鹽、月桂基肌氨酸鈉、己烷磺酸鹽、十二烷基硫酸鈉、辛酸鈉。為了從吸附劑中獲得一種或者多種另外的蛋白質(zhì)，本發(fā)明的方法進(jìn)一步包括用一種或者多種另外的洗提緩沖溶液來洗提剩下的蛋白質(zhì)。在本文中，術(shù)語“另外的洗提緩沖溶液”涉及后來用于洗提一種或者多種蛋白質(zhì)的洗提緩沖溶液，其中，所述蛋白質(zhì)為在用第一洗提緩沖溶液洗提之后仍然保持與吸附劑結(jié)合的蛋白質(zhì)。在本文中，術(shù)語“剩下的蛋白質(zhì)”涉及一種或者多種蛋白質(zhì)，它在經(jīng)過第一洗提緩沖溶液之后仍保持與吸附劑結(jié)合，并且，該蛋白質(zhì)可以隨后通過加入一種另外的洗提緩沖溶液來洗提出來。在本發(fā)明的實施方式中，在每個洗提步驟之間，吸附劑可以用另外的清洗緩沖溶液來清洗。在本文中，術(shù)語“蛋白質(zhì)餾分”涉及從待分離的一種或者多種蛋白質(zhì)所位于的吸附劑中獲得的收集物。該蛋白質(zhì)餾分可以經(jīng)過進(jìn)一步的下游處理，進(jìn)一步地分離所出現(xiàn)的一種或者多種蛋白質(zhì)。進(jìn)一步的下游處理可以涉及操作如過濾、離心、沉降、微量過濾、沉淀和色譜法。在本發(fā)明實施方式中，色譜法涉及離子交換色譜、凝膠過濾、親合色譜法、疏水作用色譜法、反相色譜法，其中，在隨后的下游處理過程中，蛋白質(zhì)可以結(jié)合到第二吸附劑上。在本發(fā)明的實施方式中，進(jìn)一步的下游處理可以包括蛋白質(zhì)餾分中的蛋白質(zhì)如α -I-蛋白酶抑制劑被吸附到帶正電的離子交換劑上。在本發(fā)明的實施方式中，進(jìn)一步的下游處理可以包括蛋白質(zhì)餾分中的蛋白質(zhì)如α -I-蛋白酶抑制劑被吸附到烷基二胺如二氨基己烷、二氨基庚烷、二氨基辛烷以及其異構(gòu)體或者衍生物。在本發(fā)明的實施方式中，α -I-蛋白酶抑制劑在第一吸附步驟中未被結(jié)合，進(jìn)一步的下游處理包括α -I-蛋白酶抑制劑被吸附到烷基二胺如二氨基己烷、二氨基庚烷、二氨基辛烷、二氨基壬烷、二氨基癸烷以及其異構(gòu)體或者衍生物。在本發(fā)明的實施方式中，進(jìn)一步的下游處理包括蛋白質(zhì)餾分中的蛋白質(zhì)如α -I-蛋白酶抑制劑被吸附到一種具有感膠離子鹽(lyotropic salt)的吸附劑，如但不限制于硫酸銨、硫酸鉀、硫酸鈉、磷酸銨、磷酸鉀和檸檬酸鈉。在優(yōu)選的實施方式中，在含有α -I-蛋白酶抑制劑的溶液中感膠離子鹽的濃度為至少O. IM (摩爾每升)，至少O. 25Μ如至少O. 5Μ,至少O. 75Μ,至少I. 25Μ,至少I. 5Μ,至少I. 75Μ或者至少2Μ。在本發(fā)明的實施方式中，進(jìn)一步的下游處理包括蛋白質(zhì)餾分中的蛋白質(zhì)如α -I-蛋白酶抑制劑被吸附到一種具有感膠離子鹽(lyotropic salt)或者沒有感膠離子鹽的吸附劑，其中，該吸附劑包括疏水配體如含有長的、可選擇取代的烷基鏈(如丁基、己基、癸基、十二烷基的衍生基團)和/或芳香和雜芳香環(huán)結(jié)構(gòu)(如苯基、萘基、苯并咪唑的衍生基團)的不帶電荷的配體。還有優(yōu)選的配體如在美國專利US 6，610, 630中所公開的那些，其中，它公開了用巰基-雜環(huán)配體作為色譜法吸附劑，因此，該專利此處引入作為參考。進(jìn)一步優(yōu)選配體是含有正電荷的、PH值為和低于4的混合模式配體，如含有長的、可選擇性取代的烷基鏈(如丁基、己基、癸基、十二烷基的衍生基團)和/或芳香和雜芳香環(huán)結(jié)構(gòu)(如苯基、萘基、苯并咪唑的衍生基團)的正電荷配體。這種配體的非限制性例子有丁基胺、己胺基_、癸胺基_和苯基丁胺基-。在本發(fā)明的實施方式中，提供一種用于根據(jù)本發(fā)明大規(guī)模地分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，該方法包括以下步驟a)提供包含一種或者多種蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值以及可選擇性的預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，提供一種用于根據(jù)本發(fā)明大規(guī)模地分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，該方法包括以下步驟a)提供包含一種或者多種蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值以及可選擇性的預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種含有至少一種高密度非多孔芯的、并被多孔材料所包圍的、和/或所述顆粒的密度至少為I. 5g/ml平均體積顆粒直徑最多為150 μ m的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的實施方式中，通過串聯(lián)兩種或者兩種以上吸附劑的方式如3種吸附劑、如4種吸附劑、如5種吸附劑、如6種吸附劑、如7種吸附劑、如8種吸附劑、如9種吸附劑、如10種吸附劑，從蛋白質(zhì)溶液中分離兩種或者兩種以上的蛋白質(zhì)。在3種吸附劑串聯(lián)中，發(fā)生以下過程a)第一吸附劑能夠捕獲一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白；b)第二吸附劑能夠捕獲一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白，它不同于第一吸附劑所能夠捕獲的一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白；c)第三吸附劑能夠捕獲一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白，它不同于第一吸附劑或者第二吸附劑所能夠捕獲的一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白；在本發(fā)明的實施方式中，一種或者多種凝血因子或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子Vn、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白被結(jié)合在第一吸附劑上。在本發(fā)明的實施方式中，至少兩種凝血因子或者抗凝血因子結(jié)合到吸附劑上如至少3種凝血因子或者抗凝血因子、如至少4種凝血因子或者抗凝血因子、至少5種凝血因子或者抗凝血因子、至少6種凝血因子或者抗凝血因子、至少7種凝血因子或者抗凝血因子、至少8種凝血因子或者抗凝血因子。在本發(fā)明的另一實施方式中，至少一種選自以下的蛋白質(zhì)白蛋白、IgG、轉(zhuǎn)鐵蛋
30白、纖維蛋白原被結(jié)合到第二吸附劑上。在本發(fā)明的實施方式中，至少兩種蛋白質(zhì)結(jié)合到該附劑上，如至少3種、如至少4種。在本發(fā)明的實施方式中，至少一種α-I-蛋白酶抑制劑或者α-I-酸-糖蛋白結(jié)合到第三吸附劑上。在本發(fā)明的實施方式中，至少兩種蛋白質(zhì)結(jié)合到該吸附劑上。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，選自由以下組成的組的蛋白質(zhì)IgG、白蛋白、纖維蛋白原、α-I-蛋白酶抑制劑、α-I-酸-糖蛋白以及一種或者多種凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子VDI、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白在至少兩種單獨的蛋白質(zhì)餾分中分離出來，如至少3中單獨蛋白質(zhì)餾分、如至少4中單獨蛋白質(zhì)餾分、如至少5中單獨蛋白質(zhì)餾分、如至少6中單獨蛋白質(zhì)餾分。而且，優(yōu)選的是，在蛋白質(zhì)餾分中各個蛋白質(zhì)的交叉污染程度為至多20%如至多15%、如至多10%、如至多5%、如至多3%、如至多1%、如至多O. 5%、如至多O. 1%、如至多O. 01%。優(yōu)選地，各個蛋白質(zhì)餾分在單個吸附循環(huán)中獲得。根據(jù)本發(fā)明，待分離的一種或者多種蛋白質(zhì)可以通過以下方式來分離(i)待分離的一種或者多種蛋白質(zhì)可以經(jīng)過吸附劑來清洗，而沒有特定地結(jié)合到在清洗緩沖溶液中所收集的吸附劑上。(ii)待分離的一種或者多種蛋白質(zhì)可以特定地結(jié)合到吸附劑上，隨后，用一種或者多種的洗提緩沖溶液來洗提，并且在一種或者多種的洗提緩沖溶液中收集。(iii)待分離的一種或者多種蛋白質(zhì)可以經(jīng)過吸附劑來清洗；另外一種或者多種待分離的蛋白質(zhì)可以特定地結(jié)合到吸附劑上，并且在洗提緩沖溶液中收集；所關(guān)心的一種或者多種蛋白質(zhì)可以隨后用一種或者多種的洗提緩沖溶液來洗提，并且在一種或者多種的洗提緩沖溶液中收集。在本發(fā)明的實施方式中，纖維蛋白原可以被結(jié)合到吸附劑上，同時一種或者多種凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子νπ、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白可以從吸附劑中作為非結(jié)合材料來獲得。優(yōu)選地，至少50%的纖維蛋白原可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。在本發(fā)明的另一實施方式中，白蛋白和IgG可以被結(jié)合到吸附劑上，同時α _1_蛋白酶抑制劑可以從吸附劑中作為非結(jié)合材料來獲得。隨后，白蛋白和IgG可以從吸附劑中通過逐步地洗提來獲得。優(yōu)選地，至少50%的白蛋白可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。優(yōu)選地，至少50%的IgG可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。在本文中，術(shù)語“逐步洗提”涉及加入到吸附劑中的洗提緩沖溶液在(但不限制于)離子強度或者電導(dǎo)率、pH值、極性、溫度、競爭物質(zhì)(competingsubstances)等方面的性能的逐步地但是不連續(xù)的變化。在本發(fā)明的另一實施方式中，纖維蛋白原和IgG可以被結(jié)合到吸附劑上，同時白蛋白可以從吸附劑中作為非結(jié)合材料來獲得。隨后，纖維蛋白原和IgG可以從吸附劑中通過逐步地洗提來獲得。優(yōu)選地，至少50%的IgG可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。優(yōu)選地，至少50%的纖維蛋白原可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。在本發(fā)明的另一實施方式中，纖維蛋白原、白蛋白和IgG可以被結(jié)合到吸附劑上，同時α-I-蛋白酶抑制劑可以從吸附劑中作為非結(jié)合材料來獲得。隨后，纖維蛋白原、白蛋白和IgG可以從吸附劑中通過逐步地洗提來獲得。優(yōu)選地，至少50%的IgG可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。優(yōu)選地，至少50%的纖維蛋白原可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。優(yōu)選地，至少50%的白蛋白可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。在本發(fā)明的另一實施方式中，至少I種如至少2種、如至少3種纖維蛋白原、白蛋白和IgG可以被結(jié)合到吸附劑上，同時α-I-酸-糖蛋白可以從吸附劑中作為非結(jié)合材料來獲得。隨后，纖維蛋白原、白蛋白和/或IgG可以從吸附劑中通過逐步地洗提來獲得。優(yōu)選地，至少50%的IgG可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。優(yōu)選地，至少50%的纖維蛋白原可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。優(yōu)選地，至少50%的白蛋白可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少 98%。在本發(fā)明的另一實施方式中，至少I種如至少2種、如至少3種纖維蛋白原、白蛋白和IgG可以被結(jié)合到吸附劑上，同時α-I-酸-糖蛋白和/或α-I-蛋白酶抑制劑可以從吸附劑中作為非結(jié)合材料來獲得。隨后，纖維蛋白原、白蛋白和/或IgG可以從吸附劑中通過逐步地洗提來獲得。優(yōu)選地，至少50%的IgG可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。優(yōu)選地，至少50%的纖維蛋白原可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。優(yōu)選地，至少50%的白蛋白可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。在本發(fā)明的實施方式中，至少50%的α-l-蛋白酶抑制劑、白蛋白、IgG、纖維蛋白原或者一種或者多種凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子νπ、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白可以從吸附劑中獲得，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。在本發(fā)明的實施方式中，白蛋白可以被結(jié)合到吸附劑上，同時α-l-蛋白酶抑制劑可以從吸附劑中作為非結(jié)合材料來獲得。優(yōu)選地，至少50%的白蛋白可以結(jié)合到吸附劑上，如至少60%、如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%。在本發(fā)明實施方式中，α-l-蛋白酶抑制劑可以用包括以下步驟的方法從蛋白質(zhì)溶液如血漿或者血清中分離(i)使含有IgG、白蛋白和α-I-蛋白酶抑制劑的血漿蛋白質(zhì)水溶液與陰離子交換吸附劑在以下條件接觸，即白蛋白和α-l-蛋白酶抑制劑結(jié)合到吸附劑上而IgG保持未被結(jié)合，所述蛋白質(zhì)溶液是選自由以下組成的組預(yù)處理的cryo-poor血楽；、預(yù)處理的cryo-poor血清、預(yù)處理的上清液I或者預(yù)處理的上清液11+111、預(yù)處理的上清液I+II+III ;(ii)選擇性地回收未被結(jié)合的IgG，獲得一種富IgG的蛋白質(zhì)餾分；(iii)從陰離子交換媒介中洗提白蛋白，獲得一種富白蛋白的蛋白質(zhì)餾分；以及(iv)從陰離子交換媒介中洗提以獲得一種富α -I-蛋白酶抑制劑的蛋白質(zhì)餾分。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，非結(jié)合的蛋白質(zhì)餾分可以包括經(jīng)過吸附劑以高產(chǎn) 量清洗的蛋白質(zhì)如α-l-蛋白酶抑制劑、α-l-酸-糖蛋白、白蛋白、IgG或者纖維蛋白原。優(yōu)選產(chǎn)量高于70%，更優(yōu)選產(chǎn)量高于80%，優(yōu)選產(chǎn)量高于90%的α -I-蛋白酶抑制劑。本發(fā)明的進(jìn)一步目標(biāo)是提供一種方法，其中，所述的在非結(jié)合的蛋白質(zhì)餾分中經(jīng)過吸附劑以高產(chǎn)量清洗的蛋白質(zhì)如α -I-蛋白酶抑制劑、α -I-酸-糖蛋白、白蛋白、IgG或者纖維蛋白原可以最后通過進(jìn)一步的下游處理(如通過應(yīng)用第二色譜吸附步驟)從非結(jié)合的蛋白質(zhì)餾分中分離。本發(fā)明的實施方式提供一種方法，其中，多種蛋白餾分通過每個吸附循環(huán)來提供，如至少2種蛋白質(zhì)餾分、如至少3蛋白質(zhì)餾分、如至少4蛋白質(zhì)餾分、如至少5蛋白質(zhì)餾分、如至少6蛋白質(zhì)餾分。優(yōu)選地，每個這些蛋白質(zhì)餾分包含高產(chǎn)量的單個蛋白質(zhì)，而沒有在相同蛋白質(zhì)餾分內(nèi)的至少2種蛋白質(zhì)之間出現(xiàn)蛋白質(zhì)餾分的交叉污染，如至少3種蛋白質(zhì)、如至少4種蛋白質(zhì)、如至少5種蛋白質(zhì)、如至少6種蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的實施方式中，在蛋白質(zhì)餾分中的交叉污染量為小于20%如小于15%、如小于10%、如小于5%、如小于3%、如小于1%、如小于O. 5%、如小于O. 1%、如小于O. 01%。在本文中，術(shù)語“交叉污染”涉及所關(guān)心的出現(xiàn)在蛋白質(zhì)餾分中的蛋白質(zhì)的量或者含量。在某些情況中，重要的是，在一個洗提循環(huán)中同時洗提兩種或者兩種以上的蛋白質(zhì)，在這種情況下，有意地洗提一起的蛋白質(zhì)并不認(rèn)為被污染。在本發(fā)明的實施方式中，在蛋白質(zhì)餾分中，單個蛋白質(zhì)的交叉污染程度為至多20%如至多為15%、如至多為10%、如至多為5%、如至多為3%、如至多為1%、如至多為O. 5%、如至多為O. 1%、如至多為O. 01%。在如下的非限制性圖、所列舉的條項和實施例中，進(jìn)一步地說明本發(fā)明。圖I.是通過逐漸添加乙醇逐步分餾人血漿蛋白質(zhì)，獲得一系列的包含各種人血漿蛋白質(zhì)的上清液和沉淀物的整個分餾過程。圖2.是含有緊密填充的吸附劑顆粒的填充床吸附柱和含有吸附劑顆粒的膨脹床吸附柱之間的不同，其中，它們都是用向上的液體流來流化，膨脹床吸附柱仍然有塞流、最小程度的反向混合。圖3.是從DEAE離子交換劑(在實施7中所使用的)中洗提出來的SDS-PAGE洗提液，并且顯示出從DEAE離子交換劑中洗提出來的α -I-蛋白酶抑制劑具有高程度的純度(用SDS-PAGE來測試，測試的純度>80%)。圖4.是彈性蛋白酶的結(jié)合活性，其中，泳道I包含蛋白質(zhì)溶液而沒有彈性蛋白酶孵育，泳道2包含蛋白質(zhì)溶液+彈性蛋白酶孵育。實驗顯示出在蛋白質(zhì)溶液(實施例5中的非結(jié)合餾分)中充分地所有α-l-蛋白酶抑制劑都是活性的，并且結(jié)合到彈性蛋白酶上。圖5.是實施例8中的結(jié)果，顯示出很高程度的α -I-蛋白酶抑制劑洗提液(從用芐胺作為配體的實施例5中得到的)的純度(用SDS-PAGE來測試，測試的純度>95%)。列舉條項I. 一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自以下組的來源獲得，該組包括血液如血清和/或者血漿以及其它血源，該方法包括以下步驟f)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值；g)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率；h)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的吸附柱，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑；i)根據(jù)情況清洗吸附柱；j)從吸附劑中獲得一種或者多種蛋白質(zhì)。2.根據(jù)I項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一種病毒消除處理。3.根據(jù)2項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。4.根據(jù)1-3項中的任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。5.根據(jù)1-4項中的任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和/或一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。6.根據(jù)1-5項中的任一項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。7.根據(jù)1-6項中的任一項所述的方法，其中，一種或者蛋白是一種或者多種人血液蛋白質(zhì)如一種或者多種人血漿蛋白質(zhì)或者一種或者多種人血清蛋白質(zhì)。8.根據(jù)1-7項中的任一項所述的方法，其中，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)是選自由以下組成的組白蛋白、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D (IgD)、免疫球蛋白E (IgE)、α-l-蛋白酶抑制劑、前凝血蛋白(bloodpro-coagulation protein)、抗凝血蛋白、溶栓劑、抗血管生成蛋白、α-2-抗纖溶酶、C-1酯酶抑制劑、載脂蛋白、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL、纖連蛋白、β -2-糖蛋白I、纖維蛋白原、纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶激活劑、纖溶酶抑制劑、血漿蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III、鏈激酶、內(nèi)_α -胰島素抑制劑(inter-alpha-trypsin inhibitor)、α -2-巨球蛋白、淀粉樣蛋白、鐵蛋白、前白蛋白、GC-球蛋白、血結(jié)素、補體C3、轉(zhuǎn)鐵蛋白、尿激酶、α-l-酸-糖蛋白以及凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)。9.根據(jù)1-8項中的任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。10.根據(jù)9項所述的方法，其中，一種非結(jié)合的蛋白質(zhì)是α-l-蛋白酶抑制劑。11.根據(jù)1-10項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液已經(jīng)被補充了醇。12. 一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)如一種或多種血清蛋白或者一種或多種的血漿蛋白的方法，所述方法包括以下步驟f)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值；g)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率；h)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的吸附柱，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑；i )根據(jù)情況清洗吸附柱；j)從吸附劑中獲得一種或者多種蛋白質(zhì)。13.根據(jù)12項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。14.根據(jù)13項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。15.根據(jù)12-14項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一種病毒消除處理。16.根據(jù)15項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。17.根據(jù)15-16項中的任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。18.根據(jù)12-17項中的任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和/或一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。19.根據(jù)12-18項中的任一項所述的方法，其中，一種或者多種蛋白是一種或者多種人血液蛋白質(zhì)如一種或者多種人血漿蛋白質(zhì)或者一種或者多種人血清蛋白質(zhì)。20.根據(jù)12-19項中的任一項所述的方法，其中，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)是選自由以下組成的組白蛋白、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D (IgD)、免疫球蛋白E (IgE)、α-l-蛋白酶抑制劑、前凝血蛋白(bloodpro-coagulation protein)、抗凝血蛋白、溶栓劑、抗血管生成蛋白、α-2-抗纖溶酶、C-1酯酶抑制劑、載脂蛋白、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL、纖連蛋白、β -2-糖蛋白I、纖維蛋白原、纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶激活劑、纖溶酶抑制劑、血漿蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III、鏈激酶、內(nèi)_α -胰島素抑制劑(inter-alpha-trypsin inhibitor)、α -2-巨球蛋白、淀粉樣蛋白、鐵蛋白、前白蛋白、GC-球蛋白、血結(jié)素、補體C3、轉(zhuǎn)鐵蛋白、尿激酶、α-l-酸-糖蛋白以及凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)。21.根據(jù)12-20項中的任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。22.根據(jù)21項所述的方法，其中，一種非結(jié)合的蛋白質(zhì)是α-l-蛋白酶抑制劑。23.根據(jù)12-22項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液已經(jīng)被補充了醇。24. 一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟f )根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值；
g)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率；h)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的吸附柱，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑；i)根據(jù)情況清洗吸附劑；j)從吸附劑中獲得一種或者多種蛋白質(zhì)。其中蛋白質(zhì)溶液已經(jīng)被補充了醇。25.根據(jù)24項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。26.根據(jù)25項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。27.根據(jù)24-26項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一種病毒消除處理。28.根據(jù)27項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。29.根據(jù)29項中的任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。30.根據(jù)24-29項中的任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和/或一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。31.根據(jù)24-30項中的任一項所述的方法，其中，一種或者多種蛋白是一種或者多種人血液蛋白質(zhì)如一種或者多種人血漿蛋白質(zhì)或者一種或者多種人血清蛋白質(zhì)。32.根據(jù)24-31項中的任一項所述的方法，其中，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)是選自由以下組成的組白蛋白、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D (IgD)、免疫球蛋白E (IgE)、α-l-蛋白酶抑制劑、前凝血蛋白(bloodpro-coagulation protein)、抗凝血蛋白、溶栓劑、抗血管生成蛋白、α-2-抗纖溶酶、C-1酯酶抑制劑、載脂蛋白、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL、纖連蛋白、β -2-糖蛋白I、纖維蛋白原、纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶激活劑、纖溶酶抑制劑、血漿蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III、鏈激酶、內(nèi)_α -胰島素抑制劑(inter-alpha-trypsin inhibitor)、α -2-巨球蛋白、淀粉樣蛋白、鐵蛋白、前白蛋白、GC-球蛋白、血結(jié)素、補體C3、轉(zhuǎn)鐵蛋白、尿激酶、α-l-酸-糖蛋白以及凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)。33.根據(jù)24-32項中的任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。34.根據(jù)33項所述的方法，其中，一種非結(jié)合的蛋白質(zhì)是α_1_蛋白酶抑制劑。35. 一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟
f)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值；g)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率；h)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于吸附劑，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；i)根據(jù)情況清洗吸附劑；j)從吸附劑中獲得一種或者多種蛋白質(zhì)。36.根據(jù)35項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。37.根據(jù)36項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。38.根據(jù)35-37項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一種病毒消除處理。39.根據(jù)38項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。40.根據(jù)38-39項中的任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。41.根據(jù)35-40項中的任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和/或一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。42.根據(jù)35-41項中的任一項所述的方法，其中，一種或者多種蛋白是一種或者多種人血液蛋白質(zhì)如一種或者多種人血漿蛋白質(zhì)或者一種或者多種人血清蛋白質(zhì)。43.根據(jù)35-42項中的任一項所述的方法，其中，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)是選自由以下組成的組白蛋白、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D (IgD)、免疫球蛋白E (IgE)、α-l-蛋白酶抑制劑、前凝血蛋白(bloodpro-coagulation protein)、抗凝血蛋白、溶栓劑、抗血管生成蛋白、α-2-抗纖溶酶、C-1酯酶抑制劑、載脂蛋白、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL、纖連蛋白、β -2-糖蛋白I、纖維蛋白原、纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶激活劑、纖溶酶抑制劑、血漿蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III、鏈激酶、內(nèi)_α -胰島素抑制劑(inter-alpha-trypsin inhibitor)、α -2-巨球蛋白、淀粉樣蛋白、鐵蛋白、前白蛋白、GC-球蛋白、血結(jié)素、補體C3、轉(zhuǎn)鐵蛋白、尿激酶、α-l-酸-糖蛋白以及凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)。44.根據(jù)35-43項中的任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。45.根據(jù)44項所述的方法，其中，一種非結(jié)合的蛋白質(zhì)是α_1_蛋白酶抑制劑。46.根據(jù)35-45項中任一項所述的方法，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒。47.根據(jù)35-45項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。48. 一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟a)提供包含一種或者多種蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)在使蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前，對蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次消除病毒的處理；c)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；d)根據(jù)情況清洗吸附劑；e)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種蛋白質(zhì)。49.根據(jù)48項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。50.根據(jù)48-49項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。51.根據(jù)50項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。52.根據(jù)48-51項中的任一項所述的方法，其中，一種或者多種蛋白是一種或者多種人血液蛋白質(zhì)如一種或者多種人血漿蛋白質(zhì)或者一種或者多種人血清蛋白質(zhì)。53.根據(jù)48-52項中的任一項所述的方法，其中，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)是選自由以下組成的組白蛋白、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D (IgD)、免疫球蛋白E (IgE)、α-l-蛋白酶抑制劑、前凝血蛋白(bloodpro-coagulation protein)、抗凝血蛋白、溶栓劑、抗血管生成蛋白、α-2-抗纖溶酶、C-1酯酶抑制劑、載脂蛋白、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL、纖連蛋白、β -2-糖蛋白I、纖維蛋白原、纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶激活劑、纖溶酶抑制劑、血漿蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III、鏈激酶、內(nèi)_α -胰島素抑制劑(inter-alpha-trypsin inhibitor)、α -2-巨球蛋白、淀粉樣蛋白、鐵蛋白、前白蛋白、GC-球蛋白、血結(jié)素、補體C3、轉(zhuǎn)鐵蛋白、尿激酶、α-l-酸-糖蛋白以及凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)。54.根據(jù)48-53項中的任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。55.根據(jù)54項所述的方法，其中，一種非結(jié)合的蛋白質(zhì)是α -I-蛋白酶抑制劑。56.根據(jù)48-55項中任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液已經(jīng)被補充了醇。57.根據(jù)48-56項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒。58.根據(jù)48-57項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。59. 一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟a)提供包含一種或者多種蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)在使蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前，對蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次消除病毒的處 理；c)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；d)根據(jù)情況清洗吸附劑；以及e)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種蛋白質(zhì)。60.根據(jù)59項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。61.根據(jù)59-60項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。62.根據(jù)61項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。63.根據(jù)59-62項中的任一項所述的方法，其中，一種或者多種蛋白是一種或者多種人血液蛋白質(zhì)如一種或者多種人血漿蛋白質(zhì)或者一種或者多種人血清蛋白質(zhì)。64.根據(jù)59-63項中的任一項所述的方法，其中，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)是選自由以下組成的組白蛋白、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D (IgD)、免疫球蛋白E (IgE)、α-l-蛋白酶抑制劑、前凝血蛋白(bloodpro-coagulation protein)、抗凝血蛋白、溶栓劑、抗血管生成蛋白、α-2-抗纖溶酶、C-1酯酶抑制劑、載脂蛋白、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL、纖連蛋白、β -2-糖蛋白I、纖維蛋白原、纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶激活劑、纖溶酶抑制劑、血漿蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III、鏈激酶、內(nèi)_α -胰島素抑制劑(inter-alpha-trypsin inhibitor)、α -2-巨球蛋白、淀粉樣蛋白、鐵蛋白、前白蛋白、GC-球蛋白、血結(jié)素、補體C3、轉(zhuǎn)鐵蛋白、尿激酶、α-l-酸-糖蛋白以及凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)。65.根據(jù)59-64項中的任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述一種或者多種人血液蛋白質(zhì)作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。66.根據(jù)65項所述的方法，其中，一種非結(jié)合的蛋白質(zhì)是α-l-蛋白酶抑制劑。67.根據(jù)48-55項中任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液已經(jīng)被補充了醇。68.根據(jù)59-67項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。69.根據(jù)59-68項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。70. 一種用于大規(guī)模地分離α -I-蛋白酶抑制劑的方法，所述方法包括以下步驟a)提供一種包含α-I-蛋白酶抑制劑的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的PH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；
b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述α -I-蛋白酶抑制劑。71.根據(jù)70項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。72.根據(jù)71項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。73.根據(jù)70-72項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。74.根據(jù)70-73項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。75.根據(jù)74項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。76.根據(jù)70-75項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。77.根據(jù)70-76項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒。78.根據(jù)70-77項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。79. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析α _1_蛋白酶抑制劑的方法，所述方法包括以下步驟a)提供一種包含α-I-蛋白酶抑制劑的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的PH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述α -I-蛋白酶抑制劑。80.根據(jù)79項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。81.根據(jù)79-80項中任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。82.根據(jù)81項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。83.根據(jù)81或者82項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。84.根據(jù)80-83項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。85.根據(jù)79-84項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。86.根據(jù)85項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。
87.根據(jù)79-86項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。88.根據(jù)70-86項中任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述α-l-蛋白酶抑制劑作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。89. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析人白蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述人白蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述人白蛋白。90.根據(jù)89項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。91.根據(jù)90項中任一項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。92.根據(jù)90或91項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。93.根據(jù)89-92項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。94.根據(jù)93項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。95.根據(jù)89-94項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。96.根據(jù)89-95項中的任一項所述的方法，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒。97.根據(jù)89-95項中的任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。98.根據(jù)89-97項中任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述人白蛋白作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。99. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析纖維蛋白原的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述纖維蛋白原的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述纖維蛋白原。100.根據(jù)99項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。101.根據(jù)100項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。102.根據(jù)100或101項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。103.根據(jù)99-102項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成
41的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。104.根據(jù)103項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。105.根據(jù)99-104項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。106.根據(jù)99-105項中的任一項所述的方法，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒。107.根據(jù)99-106項中的任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。108. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析纖維蛋白原的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述纖維蛋白原的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述纖維蛋白原。109.根據(jù)108項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。110.根據(jù)108-109項中任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次
病毒消除處理。111.根據(jù)110項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。112.根據(jù)110或111項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。113.根據(jù)108-112項中的任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和/或一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。114.根據(jù)108-113項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。115.根據(jù)108-114項中任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述人白蛋白作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。116. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析轉(zhuǎn)鐵蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述轉(zhuǎn)鐵蛋白。117.根據(jù)116項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。118.根據(jù)117項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。
42
119.根據(jù)117或118項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。120.根據(jù)116-119項中的任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。121.根據(jù)120項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。122.根據(jù)116-121項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。123.根據(jù)116-122項中任一項所述的方法，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒。124.根據(jù)116-123項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。125. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析轉(zhuǎn)鐵蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述轉(zhuǎn)鐵蛋白。126.根據(jù)125項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。127.根據(jù)125-126項中任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。128.根據(jù)127項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。129.根據(jù)127或128項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。130.根據(jù)125-129項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和/或一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。131.根據(jù)125-130項中的任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。132.根據(jù)131項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。133.根據(jù)125-132項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。134.根據(jù)125-133項中任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述人白蛋白作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。135. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析α-l-酸-糖蛋白的方法，該方法包括以下步驟
a)提供一種包含所述α-l-酸-糖蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述α-l-酸-糖蛋白。136.根據(jù)135項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。137.根據(jù)136項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。138.根據(jù)136或137項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。139.根據(jù)135-138項中的任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。140.根據(jù)139項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。141.根據(jù)135-140項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。142.根據(jù)135-141項中任一項所述的方法，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。143.根據(jù)135-142項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。144. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析α-l-酸-糖蛋白的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種包含所述α-l-酸-糖蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及c)從所述吸附劑中獲得所述α-l-酸-糖蛋白。145.根據(jù)144項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。146.根據(jù)144-145項中任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。147.根據(jù)146項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。148.根據(jù)146或147項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。149.根據(jù)144-148項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和/或一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。
150.根據(jù)144-149項中的任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。151.根據(jù)150項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。152.根據(jù)144-151項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。153.根據(jù)144-152項中任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液，所述α-l-酸-糖蛋白作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。154. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析一種或者多種凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子νπ、凝血因子VDI、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟a)提供一種包含所述一種或者多種凝血因子的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的PH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及c)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種凝血因子。155.根據(jù)154項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。156.根據(jù)155項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。157.根據(jù)155-156項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。158.根據(jù)154-157項中的任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。159.根據(jù)158項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。160.根據(jù)154-159項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。161.根據(jù)154-160項中任一項所述的方法，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒。162.根據(jù)154-161項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。163. 一種用于大規(guī)模地分離或者離析一種或者多種凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子νπ、凝血因子VDI、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟a)提供一種包含所述一種或者多種凝血因子的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的PH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率；b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及
c)從所述吸附劑中獲得所述一種或者多種凝血因子。
164.根據(jù)163項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。
165.根據(jù)163-164項中任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。
166.根據(jù)165項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。
167.根據(jù)165或166項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。
168.根據(jù)144-148項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和/或一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。
169.根據(jù)164-168項中的任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。
170.根據(jù)169項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。
171.根據(jù)164-170項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。
172.根據(jù)154-171項中任一項所述的方法，其中，用一種或者多種清洗緩沖溶液， 所述一種或者多種凝血因子作為非結(jié)合蛋白質(zhì)被清洗出來。
173. 一種用于同時大規(guī)模地分離至少3種如4種、如5種、如6種選自以下的蛋白質(zhì)α-l蛋白酶抑制劑、IgG、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-I-酸-糖蛋白、纖維蛋白原的方法， 所述方法包括以下步驟
a)提供包括至少三種所述α -I蛋白酶抑制劑、IgG、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、 α-l-酸-糖蛋白、纖維蛋白原的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的PH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率；
b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸；以及
c)從所述吸附劑中獲得至少3種如4種、如5種、如6種選自由以下組成的組的蛋白質(zhì)α-1蛋白酶抑制劑、IgG、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-I-酸-糖蛋白、纖維蛋白原，它們相互之間分離在單個的蛋白質(zhì)餾分。
174.根據(jù)173項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次病毒消除處理。
175.根據(jù)174項所述的方法，其中，所述至少一種病毒消除處理是在蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前來進(jìn)行。
176.根據(jù)174-175項中任一項所述的方法，其中，所述病毒消除處理涉及加入去污劑和/或有機溶劑如如吐溫、曲通(Triton)、磷酸三正丁酯到蛋白質(zhì)溶液中。
177.根據(jù)173-176項中的任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由以下組成的組的來源血液、血清、血漿以及其它血源而獲得。
178.根據(jù)177項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。
179.根據(jù)173-178項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是已經(jīng)用醇補充。
180.根據(jù)173-179項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和/或一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物。
181.根據(jù)173-180項中任一項所述的方法，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒。
182.根據(jù)173-181項中任一項所述的方法，其中，吸附劑包括至少為I. 5g/ml的顆粒密度，最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑。
183.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，高密度吸附劑是用一種或者多種平衡緩沖溶液來平衡。
184.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，在吸附劑與蛋白質(zhì)溶液接觸之后，吸附劑用清洗緩沖溶液來清洗出非結(jié)合的材料。
185.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，所述方法進(jìn)一步包括以下步驟
使吸附劑經(jīng)過洗提緩沖溶液，洗提出一種或者多種蛋白質(zhì)溶液。
186.根據(jù)185項所述的方法，其中，所述方法進(jìn)一步包括以下步驟
重復(fù)以下步驟使吸附劑經(jīng)過洗提緩沖溶液以洗提出一種或者多種蛋白質(zhì)溶液。
187.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，所獲得的蛋白質(zhì)經(jīng)過進(jìn)一步地下游處理，以進(jìn)一步地分離。
188.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，預(yù)設(shè)的pH值是在pH 3. 0-10.0的范圍。
189.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，在整個工藝過程期間的pH值維持在pH 3. 0-10. O的范圍。
190.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，預(yù)設(shè)的離子強度是在O. 0001-12. O的范圍。
191.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率是在O. 01-1000mS/cm的范圍。
192.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑的密度是在I. 5-20g/ml的范圍。
193.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，85%體積的單個吸附劑顆粒的直徑在 5-200 μ m的范圍。
194.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑的平均體積顆粒直徑為150μπι或者更小。
195.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑的密度是在1.5-10. O的范圍，8 5 %體積的單個吸附劑顆粒的直徑在IO -15 O μ m的范圍，平均體積顆粒直徑是在 15-100 μ m的范圍。
196.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑的顆?？蛇_(dá)到的蛋白質(zhì)結(jié)合體積為至少20%。
197.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，經(jīng)過吸附柱的線液體流速為至少2cm/mirio
198.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液的溫度是在_5°C -50°C的范圍。
199.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑在10%突破點具有對所述至少一種特定蛋白質(zhì)的動力學(xué)結(jié)合容量為至少5g/l的沉降吸附劑。
200.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的官能團的職能化基體聚合物，所述基團具有以下通式
M-SPl-X-AlK
式中，M代表吸附劑聚合物；SPl代表可選擇性地用-A-SP2-ACID、-A或者-ACID來取代的選擇性間隔基；X代表-O-、-S-、-NH-或者NAlK- ；A1K可以缺省的、-A-SP2-ACID、-A、-ACID或者C1^烷基，其中Q_4烷基可以選擇性地用-A-SP2-ACID、-A、-ACID來取代；A代表可選擇性取代的芳香或者雜芳香環(huán)部分；SP2代表可選擇的間隔基；以及ACID代表一種或者多種酸基團；其中至少一個SPl或者AlK是用-A-SP2-ACID或者-A來取代，至少一個SPl或者AlK包括-ACID，其中出現(xiàn)至少一個SPl 或者A1K。如果AlK缺省，X也將缺省。
201.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑與包含一種芳香或者雜芳香酸的配體連接。
202.根據(jù)201項所述的方法，其中，配體為選自由以下組成的組的一種芳香或者雜芳香酸羧酸、磺酸、磷酸和硼酸。
203.根據(jù)200-202項所述的方法，其中，配體是通過硫醇-醚連接、胺連接或者羥基-醚連接與吸附劑結(jié)合。
204.根據(jù)200-203項所述的方法，其中，配體為選自由以下組成的組2_巰基苯甲酸、6-巰基煙酸、2-氨基苯酸、3-氨基苯酸、4-氨基苯酸、4-羥苯基-巰基-乙酸、4-羥苯基_巰基_丙酸、4-羥苯基-巰基-丁酸、2，3- 二羥基苯甲酸、2，4- 二羥基苯甲酸、2，5- 二羥基苯甲酸、2，6- 二羥基苯甲酸、3，4- 二羥基苯甲酸、3，5- 二羥基苯甲酸、巰基苯并咪唑磺酸(mercaptobenzimidazole sulfonic acid)。
205.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑與包含一種雜芳香基團取代的雙環(huán)的配體連接。
206.根據(jù)205項所述的方法，其中，配體是從選自由以下組成的組的化合物中衍生苯并咪唑、苯并噻唑和苯并唑。
207.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑是與在pH值為10時帶有一個正電荷的配體連接。
208.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，配體是從以下物質(zhì)中衍生二乙基氨基乙基、聚亞烷基亞胺、烷基胺、烷基二胺或者聚丙烯胺。
209.根據(jù)208項所述的方法，其中，烷基胺或者烷基二胺具有鏈長為3_14個原子以及胺官能團為1-5個。
210.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑包含芳香胺或者芳香二胺的配體。
211.根據(jù)210項所述的方法，其中，芳香二胺是1，4_ 二甲苯-二胺或者1，4_ 二甲48苯_ 二胺。
212.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，至少2種如3種、如4種、如5 種、如6種選自由以下組成的組的蛋白質(zhì)白蛋白、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白 A (IgA)、免疫球蛋白M (IgM)、免疫球蛋白D (IgD)、免疫球蛋白E (IgE), α-I-蛋白酶抑制劑、前凝血蛋白(blood pro-coagulation protein)、抗凝血蛋白、溶栓劑、抗血管生成蛋白、α-2-抗纖溶酶、C-I酯酶抑制劑、載脂蛋白、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL、纖連蛋白、β-2-酸-糖蛋白I、血纖蛋白原、纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶激活物、纖溶酶抑制劑、血漿蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III、鏈激酶、內(nèi)-α-胰島素抑制劑 (inter-alpha-trypsininhibitor)> α -2-巨球蛋白、淀粉樣蛋白、鐵蛋白、前白蛋白、 GC-球蛋白、血結(jié)素、補體C3、轉(zhuǎn)鐵蛋白、尿激酶、α-I-酸-糖蛋白以及凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子VDI、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或 S蛋白是同時從至少2種如3種、如4種、如5種、如6種單個蛋白質(zhì)餾分相互之間分離開。
213.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，至少2種如3種、如4種、如5種、如6 種選自由以下組成的組的蛋白質(zhì)α-I-蛋白酶抑制劑、免疫球蛋白G (IgG)、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、凝血酶、凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子珊、凝血因子IX、C蛋白質(zhì)、 S蛋白、α -I-酸-糖蛋白、纖連蛋白是同時從至少2種如3種、如4種、如5種、如6種單個蛋白質(zhì)餾分相互之間分離開。
214.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，纖連蛋白是與吸附劑結(jié)合，同時一種或者多種凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子νπ、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子 XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)作為非結(jié)合材料從吸附劑中獲得。
215.根據(jù)214項所述的方法，其中，至少40%的纖連蛋白結(jié)合到吸附劑上。
216.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，白蛋白和免疫球蛋白G (IgG)結(jié)合到吸附劑上，同時α -I-蛋白酶抑制劑作為非結(jié)合材料從吸附劑中獲得。
217.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，白蛋白和免疫球蛋白G (IgG)是通過逐步洗提從吸附劑中獲得。
218.根據(jù)216或者217項中任一項所述的方法，其中，至少50%的白蛋白結(jié)合到吸附劑上，和/或至少50%的免疫球蛋白G (IgG)結(jié)合到吸附劑上。
219.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，纖維蛋白原和IgG結(jié)合到吸附劑上，同時白蛋白作為非結(jié)合材料從吸附劑中獲得。
220.根據(jù)219項所述的方法，其中，纖維蛋白原和IgG可以通過逐步洗提從吸附劑中獲得。
221.根據(jù)219或者220項中任一項所述的方法，其中，至少50%的IgG結(jié)合到吸附劑上，和/或至少50%的纖連蛋白結(jié)合到吸附劑上。
222.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，纖維蛋白原、白蛋白和IgG結(jié)合到吸附劑上，同時α -I-蛋白酶抑制劑作為非結(jié)合材料從吸附劑中獲得。
223.根據(jù)222項所述的方法，其中，纖維蛋白原、白蛋白和IgG是通過逐步洗提從吸附劑中獲得。
224.根據(jù)222或者223項中任一項所述的方法，其中，至少50%的IgG結(jié)合到吸附劑上，和/或至少50%的纖連蛋白結(jié)合到吸附劑上，和/或至少50%的白蛋白結(jié)合到吸附劑上。
225.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，至少I種如至少2種、如3種纖連蛋白、 白蛋白和IgG結(jié)合到吸附劑上，同時α -I-酸-糖蛋白作為非結(jié)合材料從吸附劑中獲得。
226.根據(jù)225項所述的方法，其中，纖連蛋白、白蛋白和/或IgG是通過逐步洗提從吸附劑中獲得。
227.根據(jù)225或者226項中任一項所述的方法，其中，至少50%的IgG結(jié)合到吸附劑上，和/或至少50%的纖連蛋白結(jié)合到吸附劑上，和/或至少50%的白蛋白結(jié)合到吸附劑上。
228.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，至少I種如至少2種、如3種纖連蛋白、 白蛋白和IgG結(jié)合到吸附劑上，同時α -I-酸-糖蛋白和/或α _1_蛋白酶抑制劑作為非結(jié)合材料從吸附劑中獲得。
229.根據(jù)230項所述的方法，其中，纖連蛋白、白蛋白和/或IgG是通過逐步洗提從吸附劑中獲得。
230.根據(jù)228或者229項中任一項所述的方法，其中，至少50%的IgG結(jié)合到吸附劑上，和/或至少50%的纖連蛋白結(jié)合到吸附劑上，和/或至少50%的白蛋白結(jié)合到吸附劑上。
231.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，至少50%的α-l-蛋白酶抑制劑、白蛋白、IgG、纖連蛋白、或者一種或者多種凝血或抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子珊-馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)是從吸附劑中獲得。
232.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，所關(guān)心蛋白質(zhì)的產(chǎn)量為至少60%。
233.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，非所關(guān)心蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)產(chǎn)量為至多 20%。
234.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，選自以下組的蛋白質(zhì)IgG、白蛋白、纖連蛋白、α-l-蛋白酶抑制劑、α-l-酸-糖蛋白和一種或者多種凝血或抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子VII、凝血因子VDI、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)在至少2個蛋白質(zhì)餾分如3個蛋白質(zhì)餾分、如4個蛋白質(zhì)餾分、如5個蛋白質(zhì)餾分、如6 個蛋白質(zhì)餾分中分離。
235.根據(jù)234項所述的方法，其中，在蛋白質(zhì)餾分中各個蛋白質(zhì)的交叉污染為至多 20%。
236.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，吸附劑是一種吸附劑顆粒。
237.根據(jù)236項所述的方法，其中，吸附劑顆粒保存在膨脹床吸附柱、懸浮床吸附柱、連續(xù)攪拌槽接觸器、管狀流化床吸附柱、攪拌槽或者填充床吸附柱中。
238.根據(jù)237項所述的方法，其中，吸附劑顆粒保存在膨脹床吸附柱中，吸附劑顆粒的膨脹程度(由H/U確定)是在I. 0-20的范圍。
239.根據(jù)前述的任一項所述的方法，其中，在用醇補充之后，蛋白質(zhì)溶液可以包含上清液和沉淀餾分。
240.根據(jù)239項所述的方法，其中，上清液和沉淀餾分是通過過濾、微量過濾、離心、移注和/或者沉降來分離。
241.根據(jù)240項所述的方法，其中，一種或者多種蛋白質(zhì)可以在上清液中得到。
242.根據(jù)240項所述的方法，其中，一種或者多種蛋白質(zhì)可以在沉淀餾分中得到。
243.根據(jù)239-242項中任一項所述的方法，其中，上清液或者沉淀餾分的醇濃度以體積為至少O. 1%。
244.根據(jù)239-242項中任一項所述的方法，其中，所述醇選自由以下組成的組甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、仲丁醇、叔丁醇、亞甲基二醇、乙二醇、丙二醇、二甘醇、亞甲基-乙二醇以及二亞甲基二醇。
245.根據(jù)239-244項中任一項所述的方法，其中，沉淀餾分是一種可再溶解的通過加入醇到血液、血漿、血清或者其它血源中所獲得的沉淀物。
246.根據(jù)245項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。
247.根據(jù)239-246項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是通過重組由加入醇到人血漿或血清中所獲得的一種或者多種上清液和/或一種或者多種可再溶解的沉淀物來獲得。
248.根據(jù)前述項中的任一項所述的方法，其中，所述蛋白質(zhì)溶液是用Cohn分餾方法或者其變化的方法來獲得。
249.根據(jù)245-254項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是選自由以下組成的組上清液I、上清液II、上清液III、再溶解餾分IV-1、再溶解餾分I、再溶解餾分II、再溶解餾分III以及其任何組合。
250.根據(jù)239-248項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是選自由以下組成的組上清液11+111、上清液I+II+III、再溶解餾分II+III以及再溶解餾分I+II+III。
251.根據(jù)前述項中的任一項所述的方法，其中，通過串聯(lián)2種或者2種以上吸附劑的方式，2種或者多種蛋白質(zhì)從蛋白質(zhì)溶液中分離。
252.根據(jù)251項所述的方法，其中
d)第一吸附劑能夠捕獲一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白；
e)第二吸附劑能夠捕獲一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白，它不同于第一吸附劑所能夠捕獲的一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白；
f)第三吸附劑能夠捕獲一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白，它不同于第一吸附劑或者第二吸附劑所能夠捕獲的一種或者多種血液蛋白、血清蛋白或者血漿蛋白；
253.根據(jù)251或者252項中任一項所述的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是血液、血清、血衆(zhòng)或者cryo-poor血衆(zhòng)。
254.根據(jù)253項所述的方法，其中，血液、血清、血漿或者其它血源是從人或者動物如牛、魚、駱駝、豬、綿羊、山羊、兔、小鼠、大鼠、馬、雞、斑馬或者鴕鳥來獲得。
255.根據(jù)251-254項中的任一項所述的方法，其中，一種或者多種凝血或抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子νπ、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制劑、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白結(jié)合在第一吸附劑上。
256.根據(jù)255項所述的方法，其中，至少2種凝血因子粘附到第一吸附劑上。
257.根據(jù)251-256項中的任一項所述的方法，其中，至少一種蛋白質(zhì)是選自由以下組成的組白蛋白、IgG、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖連蛋白結(jié)合到第二吸附劑上。
258.根據(jù)257項所述的方法，其中，至少2種蛋白質(zhì)結(jié)合到第二吸附劑上。
259.根據(jù)251-258項中的任一項所述的方法，其中，至少一種α-l-蛋白酶抑制劑或者α-l-酸-糖蛋白結(jié)合到第三吸附劑上。
260.根據(jù)259項所述的方法，其中，2種蛋白質(zhì)結(jié)合到吸附劑上。實施例
實施例I
用膨脹床吸附從Cohn餾分(上層清液I、II >111)中離析人白蛋白和α -I-蛋白酶抑制劑。
吸附劑FaseL,ine UFC NNSDW,產(chǎn)品號C S48，UpFront Chromatography A/S。吸附劑是以瓊脂糖為基礎(chǔ)并引入碳化鎢顆粒，聚結(jié)顆粒的密度為2.9g/ml，顆粒直徑在 40-120 μ m的范圍，其體積平均顆粒直徑(D (4，3)為70 μ m (用Mastersizer 2000E粒度分析儀(Malvern Instruments, Worcestershire,英國)測試)。吸附劑包括作為配體的2_巰基煙酸，配體的濃度為40毫摩爾每毫升沉降吸附劑。
蛋白質(zhì)溶液的預(yù)處理
蛋白質(zhì)溶液包括Cohen餾分、上層清液I、II JII,電導(dǎo)率為5. 74mS, pH值為7. 2， 含有大約10%的乙醇。
用去離子水以I體積的上清液I、II、111對2體積的水的比例來稀釋蛋白質(zhì)溶液， 用IM的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為5. O。電導(dǎo)率在稀釋之后為3. 8mS。
工藝參數(shù)
本實驗是在Faselil.ie 20膨脹床吸附柱(φ=2αιι，產(chǎn)品號7020-0000，UpFront Chromatography A/S)上操作的。
吸附柱填充50cm的吸附劑(157ml)，并且在室溫(20_25°C )下，用160ml的IM的 NaOH溶液(第一平衡緩沖溶液)、400ml的40mM的pH值為4. 5的檸檬酸鈉緩沖溶液(第二平衡緩沖溶液)以及400ml的40mM的pH值為5. O的檸檬酸鈉緩沖溶液(第三平衡緩沖溶液)來平衡。
兩個實驗是以450cm/hr的線流速操作
( i )實驗A) 236ml的稀釋蛋白質(zhì)溶液裝載在吸附柱中
(ii)實驗B) :353ml的稀釋三倍的蛋白質(zhì)溶液轉(zhuǎn)載在吸附柱中
-餾分I:將非結(jié)合的材料用IOmM的pH值為5. O的檸檬酸緩沖溶液清洗出吸附柱。在清洗餾分中收集α-l-蛋白酶抑制劑。隨后，在兩步中充分地洗提出結(jié)合的蛋白質(zhì)。
-懼分2,第一洗提步驟用5mg/ml的pH值為6.0的辛酸鈉(sodiumcaprylate) 洗提出人白蛋白。
-餾分3，第二洗提步驟用0.3M的pH值為7. 4的檸檬酸鈉洗提出其它的蛋白質(zhì)包括IgG和轉(zhuǎn)鐵蛋白。
實驗結(jié)果
以下表所示的是裝載在每個吸附柱中的蛋白質(zhì)溶液和緩沖溶液的體積
權(quán)利要求
1.一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由血液如血清和/或者血漿以及其它血源所組成的組的來源獲得，所述方法包括以下步驟 k)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值； I)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率； m)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的吸附柱，所述吸附劑包括具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，所述吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度以及最多為150 μ m的平均體積顆粒直徑；η)根據(jù)情況清洗吸附柱；ο)從吸附劑中獲得所述的一種或者多種蛋白質(zhì)。
2.一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)如一種或多種血清蛋白或者一種或多種血漿蛋白的方法，所述方法包括以下步驟 k)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值； I)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率； m)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的吸附柱，所述吸附劑包括具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，所述吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度以及至多為150 μ m的平均體積顆粒直徑；η)根據(jù)情況清洗吸附柱；ο)從吸附劑中獲得所述的一種或者多種蛋白質(zhì)。
3.一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟 k)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值； I)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率； m)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于吸附，所述吸附劑包括具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度，至多為150μπι的平均體積顆粒直徑； η)根據(jù)情況清洗吸附劑； ο)從吸附劑中獲得所述的一種或者多種蛋白質(zhì)； 其中所述蛋白質(zhì)溶液已經(jīng)被補充了醇。
4.一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟 k)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值； I)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率； m)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于吸附，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；η)根據(jù)情況清洗吸附劑； ο)從吸附劑中獲得所述的一種或者多種蛋白質(zhì)； 其中蛋白質(zhì)溶液已經(jīng)被補充了醇。
5.一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟 a)提供包含一種或者多種蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)在使蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前，對蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次消除病毒的處理； c)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物； d)根據(jù)情況清洗吸附劑；以及 e)從所述吸附劑中獲得所述的一種或者多種蛋白質(zhì)。
6.一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟 a)提供包含一種或者多種蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)在使蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸之前，對蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行至少一次消除病毒的處理； c)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒； d)根據(jù)情況清洗吸附劑；以及 e)從所述吸附劑中獲得所述的一種或者多種蛋白質(zhì)。
7.一種用于大規(guī)模地分離或者離析α-I-蛋白酶抑制劑的方法，所述方法包括以下步驟 a)提供一種包含所述α-I-蛋白酶抑制劑的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的α-I-蛋白酶抑制劑。
8.一種用于大規(guī)模地分離或者離析α-I-蛋白酶抑制劑的方法，所述方法包括以下步驟 a)提供一種包含α-I-蛋白酶抑制劑的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的α-I-蛋白酶抑制劑。
9.一種用于大規(guī)模地分離或者離析人白蛋白的方法，該方法包括以下步驟 a)提供一種包含所述人白蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及 C)從所述吸附劑中獲得所述的人白蛋白。
10.一種用于大規(guī)模地分離或者離析纖維蛋白原的方法，該方法包括以下步驟 a)提供一種包含所述纖維蛋白原的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的纖維蛋白原。
11.一種用于大規(guī)模地分離或者離析纖維蛋白原的方法，該方法包括以下步驟 a)提供一種包含所述纖維蛋白原的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的纖維蛋白原。
12.一種用于大規(guī)模地分離或者離析轉(zhuǎn)鐵蛋白的方法，該方法包括以下步驟 a)提供一種包含所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的轉(zhuǎn)鐵蛋白。
13.一種用于大規(guī)模地分離或者離析轉(zhuǎn)鐵蛋白的方法，該方法包括以下步驟 a)提供一種包含所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的轉(zhuǎn)鐵蛋白。
14.一種用于大規(guī)模地分離或者離析α-l-酸-糖蛋白的方法，該方法包括以下步驟 a)提供一種包含所述α-I-酸-糖蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的α-I-酸-糖蛋白。
15.一種用于大規(guī)模地分離或者離析α-l-酸-糖蛋白的方法，該方法包括以下步驟 a)提供一種包含所述α-l-酸-糖蛋白的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的α-l-酸-糖蛋白。
16.一種用于大規(guī)模地分離或者離析一種或者多種凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子νπ、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟 a)提供包含所述一種或者多種凝血因子的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，吸附劑包括負(fù)載多個共價鍵連接的包括芳香環(huán)或者雜芳香環(huán)系統(tǒng)和一種或者多種酸基團的官能團的職能化基體聚合物；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的一種或者多種凝血或者抗凝血因子。
17.一種用于大規(guī)模地分離或者離析一種或者多種凝血或者抗凝血因子如凝血因子II、凝血因子V、凝血因子νπ、凝血因子珊、馮維勒布蘭德因子、凝血因子VDI -馮維勒布蘭德因子的復(fù)合物、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、Cl抑制蛋白、C蛋白質(zhì)和/或S蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟 a)提供一種包含所述一種或者多種凝血因子的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的pH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)的離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸，其中，所述吸附劑包括一種具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒；以及 c)從所述吸附劑中獲得所述的一種或者多種凝血或者抗凝血因子。
18.一種用于同時大規(guī)模地分離α-l蛋白酶抑制劑、IgG、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α -I-酸-糖蛋白、纖維蛋白原中的至少3種蛋白質(zhì)，如4種蛋白質(zhì)，如5種蛋白質(zhì)，如6種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟 a)提供包括至少三種所述α-I蛋白酶抑制劑、IgG、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α _1_酸-糖蛋白、纖維蛋白原的蛋白質(zhì)溶液，所述蛋白質(zhì)溶液具有預(yù)設(shè)的PH值和可根據(jù)情況預(yù)設(shè)離子強度或電導(dǎo)率； b)使所述蛋白質(zhì)溶液與吸附劑接觸；以及 c)從所述吸附劑中獲得選自由以下所組成的組的蛋白質(zhì)中的至少3種蛋白質(zhì)如4種蛋白質(zhì)，如5種蛋白質(zhì)，如6種蛋白質(zhì)α-l蛋白酶抑制劑、IgG、人白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-l-酸-糖蛋白、纖維蛋白原，它們相互之間分離為單個的蛋白質(zhì)餾分。
全文摘要
本發(fā)明涉及血漿或者血清蛋白的分離，具體涉及一種用于大規(guī)模地從蛋白質(zhì)溶液中分離一種或者多種蛋白質(zhì)的方法，其中，蛋白質(zhì)溶液是從選自由血液如血清和/或者血漿以及其它血源所組成的組的來源獲得，所述方法包括以下步驟k)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的pH值為預(yù)設(shè)的pH值；l)根據(jù)情況調(diào)整蛋白質(zhì)溶液的離子強度或者電導(dǎo)率為預(yù)設(shè)的離子強度或者預(yù)設(shè)的電導(dǎo)率；m)將所述蛋白質(zhì)溶液應(yīng)用于含有吸附劑的吸附柱，所述吸附劑包括具有至少一種被多孔材料所包圍的高密度非多孔芯的顆粒，所述吸附劑包括至少為1.5g/ml的顆粒密度以及最多為150μm的平均體積顆粒直徑；n)根據(jù)情況清洗吸附柱；o)從吸附劑中獲得所述的一種或者多種蛋白質(zhì)。
文檔編號C07K14/47GK102924565SQ201210458088
公開日2013年2月13日 申請日期2005年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月7日
發(fā)明者阿蘭·奧托·弗格·利赫姆 申請人:厄普弗朗特色譜公司