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      針對人csf-1r的抗體及其用途

      文檔序號:3481615閱讀:5427來源:國知局
      針對人csf-1r的抗體及其用途
      【專利摘要】本發(fā)明涉及針對人CSF-1R的抗體(CSF-1R抗體)、其生成方法、含有所述抗體的藥物組合物、及其用途。
      【專利說明】針對人CSF-1R的抗體及其用途
      [0001] 本發(fā)明涉及針對人CSF-1R的抗體(CSF-1R抗體)、其生成方法、含有所述抗體的藥 物組合物、及其用途。
      [0002] 發(fā)明背景
      [0003] CSF-1受體(CSF-1R ;同義詞:M-CSF受體,巨噬細(xì)胞集落刺激因子1受體, EC2. 7. 10. 1,F(xiàn)ms 原癌基因,c-fms,Swiss Prot P07333, CD115,(SEQ ID NO :23))自 1986 年以來是已知的(Coussens L.et al.,Nature320(1986)277-280)。CSF-1R 是一種生長 因子,并且由c-fms原癌基因編碼(綜述見例如Roth, P. and Stanley, E. R.,Curr. Top. Microbiol. Immunol. 181(1992) 141-67)。
      [0004] CSF-1R是M-CSF (巨噬細(xì)胞集落刺激因子,又稱作CSF-1)的受體,并且介導(dǎo)此細(xì) 胞因子的生物學(xué)效應(yīng)(Sherr,C.J.et al.,Cell41 (1985)665-676)。集落刺激因子-1受 體(又稱作(:-伽8)的克隆第一次記載于1?〇118861,]\^.6七31.,恥忉代325(1987)549-552。 在該出版物中,顯示了 CSF-1R具有轉(zhuǎn)化潛力,其依賴于蛋白質(zhì)的C端尾部的變化,包含抑制 性酪氨酸969磷酸化的喪失,其結(jié)合Cbl,并且由此調(diào)節(jié)受體下調(diào)(Lee, P. S. et al.,Embo J. 18(1999)3616-3628)。
      [0005] CSF-1R是一種單鏈、跨膜受體酪氨酸激酶(RTK)和以受體的胞外部分中的重 復(fù)Ig域為特征的含有免疫球蛋白(Ig)基序的RTK家族的一名成員。胞內(nèi)蛋白質(zhì)酪氨 酸激酶域以獨特插入域中斷,所述獨特插入域也存在于包括血小板衍生的生長因子受體 (TOGFR)、干細(xì)胞生長因子受體(c-Kit)和fins樣細(xì)胞因子受體(FLT3)的其它相關(guān)RTK III類家族成員中。盡管此生長因子受體家族間有結(jié)構(gòu)同源性,但是它們具有截然不同的 組織特異性功能。CSF-1R主要在單核細(xì)胞譜系的細(xì)胞上及在女性生殖道和胎盤中表達(dá)。 另外,已經(jīng)在皮膚中的朗格漢斯細(xì)胞,即一種平滑肌細(xì)胞子集(Inaba,T.et al.,J.Biol. Chem. 267 (1992) 5693-5699)、B 細(xì)胞(Baker,A. H. et al.,0ncogene8 (1993) 371-378)和小 膠質(zhì)(Sawada,M. et al·,fcain Res. 509(1990) 119-124)中報告了 CSF-1R 的表達(dá)。
      [0006] CSF-1R信號傳導(dǎo)的主要生物學(xué)效應(yīng)是造血前體細(xì)胞向巨噬細(xì)胞譜系(包括破骨 細(xì)胞)的分化、增殖、遷移、和存活。CSF-1R的激活由其配體M-CSF介導(dǎo)。M-CSF對CSF-1R 的結(jié)合誘導(dǎo)同二聚體的形成和通過酪氨酸磷酸化實現(xiàn)的激酶活化(Stanley, E. R. et al., Mol. R印rod. Dev. 46 (1997) 4-10)。別的信號傳導(dǎo)由分別連接PI3K/AKT和Ras/MAPK途徑的 PI3K的p85亞基和Grb2介導(dǎo)。這兩種重要的信號傳導(dǎo)途徑可以調(diào)節(jié)增殖、存活和凋亡。結(jié)合 CSF-1R的磷酸化的胞內(nèi)域的其它信號傳導(dǎo)分子包括STATl、STAT3、PLCyjPCbl(Bourette, R. Ρ· and Rohrschneider, L. R. , Growth Factorsl7 (2000) 155-166)。
      [0007] CSF-1R信號傳導(dǎo)在免疫應(yīng)答中、在骨重建(bone remodeling)中及在生殖系統(tǒng)中 具有生理學(xué)作用。已經(jīng)顯示了 M-CSF-1 (Pollard, J.W.,Mol. R印rod. Dev. 46 (1997) 54-61) 或〇5?-11?(0&丨,乂.]\16七&1.,81〇〇(199(2002) 111-120)的敲除動物具有與05?-11?在相應(yīng)細(xì) 胞類型中的作用一致的骨硬化(osteopetrotic)、造血、組織巨噬細(xì)胞、和生殖表型。
      [0008] Sherr,C. J. et al·,Blood73 (1989) 1786-1793 涉及抑制 CSF-1 活性的一些 針對 CSF-1R 的抗體(見 Sherr,C.J.et al·,Blood73 (1989) 1786-1793)。Ashum, R. A. et al.,Blood73 (1989) 827-837 涉及 CSF-1R 抗體。Lenda,D. et al.,Journal of immunologyl70(2003)3254-3262涉及CSF-1缺陷型小鼠中降低的巨噬細(xì)胞募集、增殖、 和活化導(dǎo)致腎炎癥期間降低的腎小管凋亡。Kitaura,H.et al·,Journal of dental research87 (2008) 396-400提及一種抑制口腔正畸牙移動的抗CSF-1抗體。W02001/030381 在僅披露CSF-1反義核苷酸的情況中提及包括反義核苷酸和抗體的CSF-1活性抑制 齊[J。W02004/045532涉及通過M-CSF拮抗劑(僅披露抗CSF-1抗體作為拮抗劑)對轉(zhuǎn)移 癌的轉(zhuǎn)移和骨損失預(yù)防和治療。W02005/046657涉及通過抗CSF-1抗體治療炎性腸病。 US2002/0141994涉及集落刺激因子的抑制劑。W02006/096489涉及通過抗CSF-1抗體治療 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
      [0009] 發(fā)明概沭
      [0010] 一方面,本發(fā)明包括一種結(jié)合人CSF-1R的抗體,其特征在于與保藏抗體DSM ACC2920結(jié)合相同表位,用于在CSF-1配體依賴性和/或CSF-1配體不依賴性CSF-1-R表達(dá) 細(xì)胞中抑制細(xì)胞增殖。
      [0011] 在一個實施方案中,所述CSF-1-R表達(dá)細(xì)胞為癌細(xì)胞。
      [0012] 在一個實施方案中,所述抗體特征在于作為重鏈可變域⑶R3區(qū)包含SEQ ID N0 :1 或 SEQ ID NO :9 的 CDR3 區(qū)。
      [0013] 在一個實施方案中,所述抗體特征在于:
      [0014] a)重鏈可變域包含 SEQ ID N0 :1 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID N0 :2 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO :3的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :4的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :5的CDR2區(qū)、和 SEQ ID N0 :6 的 CDR1 區(qū),或
      [0015] b)重鏈可變域包含 SEQ ID N0 :9 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID N0 :10 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO : 11的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :12的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :13的CDR2區(qū)、 和 SEQ ID NO :14 的 CDR1 區(qū),或
      [0016] c) a)或b)所述抗體的CDR嫁接的、人源化的或T細(xì)胞表位消減的抗體變體。
      [0017] 如此,能夠結(jié)合相同表位的依照本發(fā)明的抗體能夠在CSF-1配體依賴性和CSF-1 配體不依賴性細(xì)胞中抑制細(xì)胞增殖。
      [0018] 另一方面,本發(fā)明包括一種結(jié)合人CSF-1R的抗體,其特征在于與保藏抗體DSM ACC2920結(jié)合相同表位。
      [0019] 另一方面,本發(fā)明包括一種結(jié)合人CSF-1R的抗體,其特征在于與保藏抗體DSM ACC2920結(jié)合相同表位;
      [0020] 其中在體外競爭性結(jié)合抑制測定法中通過表面等離振子共振(SPR)于25°C測量 對相同表位的結(jié)合;且
      [0021] 其中所述抗體具有下述特性:
      [0022] &)于抗體濃度1(^8/1111將見!13了3-野生型05?-11?重組細(xì)胞的生長抑制90%或 更多;和
      [0023] b)于抗體濃度10 μ g/ml將NIH3T3 -突變型CSF-1R L301S Y969F重組細(xì)胞的生 長抑制60 %或更多。
      [0024] 在一個實施方案中,所述抗體特征在于作為重鏈可變域⑶R3區(qū)包含SEQ ID N0 :1 或 SEQ ID NO :9 的 CDR3 區(qū)。
      [0025] 在一個實施方案中,所述抗體特征在于:
      [0026] a)重鏈可變域包含 SEQ ID N0 :1 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID N0 :2 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO :3的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :4的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :5的CDR2區(qū)、和 SEQ ID N0 :6 的 CDR1 區(qū),或
      [0027] b)重鏈可變域包含 SEQ ID N0 :9 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID N0 :10 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO: 11的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :12的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :13的CDR2區(qū)、 和 SEQ ID NO :14 的 CDR1 區(qū),或
      [0028] c) a)或b)所述抗體的CDR嫁接的、人源化的或T細(xì)胞表位消減的抗體變體。
      [0029] 在一個實施方案中,所述抗體結(jié)合人CSF-1R,并且特征在于上文所提及的氨基酸 序列和氨基酸序列片段是人IgGl亞類的或者是人IgG4亞類的。
      [0030] 本發(fā)明的又一個實施方案是包含依照本發(fā)明的抗體的藥物組合物。
      [0031] 本發(fā)明進(jìn)一步包括以包含結(jié)合人CSF-1R的抗體為特征的藥物組合物,所述結(jié)合 人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文所提及的氨基酸序 列和氨基酸序列片段。
      [0032] 本發(fā)明進(jìn)一步包括以包含結(jié)合人CSF-1R的抗體為特征的抗體用于制造藥物組合 物的用途,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上 文所提及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0033] 本發(fā)明進(jìn)一步包括以包含結(jié)合人CSF-1R的抗體為特征的抗體用于治療CSF-1R介 導(dǎo)的疾病的用途,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備 選地上文所提及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0034] 本發(fā)明進(jìn)一步包括以包含結(jié)合人CSF-1R的抗體為特征的抗體用于治療癌癥的用 途,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文所提 及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0035] 本發(fā)明進(jìn)一步包括以包含結(jié)合人CSF-1R的抗體為特征的抗體用于治療骨損失的 用途,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文所 提及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0036] 本發(fā)明進(jìn)一步包括以包含結(jié)合人CSF-1R的抗體為特征的抗體用于預(yù)防或治療轉(zhuǎn) 移的用途,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上 文所提及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0037] 本發(fā)明進(jìn)一步包括以包含結(jié)合人CSF-1R的抗體為特征的抗體用于治療炎性疾病 的用途,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文 所提及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0038] 所述抗體優(yōu)選以至少l(T8mol/l至10_12mol/l的親和力結(jié)合人CSF-1R。
      [0039] 優(yōu)選地,所述抗體是人源化抗體或人抗體。
      [0040] 本發(fā)明的又一個實施方案是編碼依照本發(fā)明的抗體的重鏈可變域和/或輕鏈可 變域的核酸。優(yōu)選地,所述核酸編碼結(jié)合人CSF-1R的抗體的重鏈,其特征在于作為重鏈 CDR3 區(qū)包含 SEQ ID N0 :1、SEQ ID N0 :9、或 SEQ ID N0 : 17 的 CDR3 區(qū)。
      [0041] 本發(fā)明的又一個實施方案是編碼依照本發(fā)明的抗體的核酸,所述抗體特征在于:
      [0042] a)重鏈可變域包含 SEQ ID N0 :1 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID N0 :2 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO :3的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :4的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :5的CDR2區(qū)、和 SEQ ID NO :6 的 CDR1 區(qū),或
      [0043] b)重鏈可變域包含 SEQ ID NO :9 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID NO :10 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO : 11的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :12的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :13的CDR2區(qū)、 和 SEQ ID NO :14 的 CDR1 區(qū),或
      [0044] c) a)或b)所述抗體的CDR嫁接的、人源化的或T細(xì)胞表位消減的抗體變體。
      [0045] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了含有依照本發(fā)明的核酸、能夠在原核或真核宿主細(xì)胞中表達(dá) 所述核酸的表達(dá)載體,和含有此類載體以重組生成此類抗體的宿主細(xì)胞。
      [0046] 本發(fā)明進(jìn)一步包括包含依照本發(fā)明的載體的原核或真核宿主細(xì)胞。
      [0047] 本發(fā)明進(jìn)一步包括用于生成依照本發(fā)明的重組人或人源化抗體的方法,其特征在 于在原核或真核宿主細(xì)胞中表達(dá)依照本發(fā)明的核酸,并自所述細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物上清液回 收所述抗體。本發(fā)明進(jìn)一步包括通過此類重組方法可獲得的抗體。
      [0048] 依照本發(fā)明的抗體對需要CSF-1R靶向療法的患者顯示益處。依照本發(fā)明的抗體 具有對患有腫瘤疾病,尤其是患有癌癥的患者引起益處的、具有新穎性和創(chuàng)造性的特性。 [0049] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了用于治療患有癌癥的患者的方法,包括對診斷為具有此類疾 ?。ú⑶乙虼诵枰祟惎煼ǎ┑幕颊呤┯糜行Я康囊勒毡景l(fā)明的結(jié)合人CSF-1R的抗體。優(yōu) 選地,在藥物組合物中施用抗體。
      [0050] 本發(fā)明的又一個實施方案是用于治療患有癌癥的患者的方法,其特征在于對患者 施用依照本發(fā)明的抗體。
      [0051] 本發(fā)明進(jìn)一步包括依照本發(fā)明的抗體用于治療患有癌癥的患者及用于制造依照 本發(fā)明的藥物組合物的用途。另外,本發(fā)明包括用于制造依照本發(fā)明的藥物組合物的方法。
      [0052] 本發(fā)明進(jìn)一步包括包含依照本發(fā)明的抗體,任選地以及出于藥用目的可用于配制 抗體的緩沖液和/或佐劑的藥物組合物。
      [0053] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含藥學(xué)可接受載體中的依照本發(fā)明的抗體的藥物組合物。 在一個實施方案中,藥物組合物可以包含在制品或試劑盒中。
      [0054] 附圖簡沭
      [0055] 圖1 :在用10μ g/ml濃度的不同抗CSF-1R單克隆抗體處理下對3D培養(yǎng)中BeWo腫 瘤細(xì)胞的生長抑制。
      [0056] X軸:與細(xì)胞的ATP含量對應(yīng)的存活力均值相對光單位(RLU) (CellTiterGlo測定 法)。
      [0057] Y軸:測試探針:極限培養(yǎng)基(0. 5 % FBS)、小鼠 IgGl (mlgGl,10 μ g/ml)、小鼠 IgG2a(mIgG2al0y g/ml)、僅 CSF-1、<CSF-1R>9D11. 2E8、<CSF-1R>10H2. 2F12、和 SC-02、克 隆2-4A5。用依照本發(fā)明的抗CSF-1R抗體觀察到對CSF-1誘導(dǎo)的生長的最高抑制。
      [0058] 發(fā)明詳沭
      [0059] 本發(fā)明進(jìn)一步包括一種結(jié)合人CSF-1R的抗體,其特征在于作為重鏈可變域⑶R3 區(qū)包含 SEQ ID N0 :1 或 SEQ ID N0 :9 的 CDR3 區(qū)。
      [0060] 本發(fā)明進(jìn)一步包括所述抗體,其特征在于:
      [0061] a)重鏈可變域包含 SEQ ID N0 :1 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID N0 :2 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO :3的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :4的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :5的CDR2區(qū)、和 SEQ ID NO :6 的 CDR1 區(qū),或
      [0062] b)重鏈可變域包含 SEQ ID NO :9 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID NO :10 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO :11的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :12的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :13的CDR2區(qū)、 和 SEQ ID NO :14 的 CDR1 區(qū),或
      [0063] c) a)或b)所述抗體的CDR嫁接的、人源化的或T細(xì)胞表位消減的抗體變體。
      [0064] 術(shù)語"抗體"涵蓋各種形式的抗體,包括但不限于全抗體、抗體片段、人源化抗體、 嵌合抗體、Τ細(xì)胞表位消減的抗體、和別的遺傳工程化抗體,只要依照本發(fā)明的特征性特性 得到保留。
      [0065] "抗體片段"包含全長抗體的一部分,優(yōu)選地,其可變域,或至少其抗原結(jié)合位點。 抗體片段的例子包括雙抗體、單鏈抗體分子、和自抗體片段形成的多特異性抗體。例如, scFv 抗體記載于 Houston,J. S.,Methods in Enzymol. 203(1991)46-88。另外,抗體片段包 含具有結(jié)合CSF-1R的VH域或結(jié)合CSF-1R的 '域的特征(即能夠與 '域或VH域一起裝配 成功能性抗原結(jié)合位點,并且由此提供該特性)的單鏈多肽。
      [0066] 如本文中所使用的,術(shù)語"單克隆抗體"或"單克隆抗體組合物"指單一氨基酸組 成的抗體分子的制備物。
      [0067] 術(shù)語"嵌合抗體"指通常通過重組DNA技術(shù)制備的,包含來自小鼠的可變區(qū),即結(jié) 合區(qū)和自不同來源或物種衍生的恒定區(qū)的至少一部分的單克隆抗體。包含小鼠可變區(qū)和人 恒定區(qū)的嵌合抗體是特別優(yōu)選的。此類大鼠/人嵌合抗體是包含編碼大鼠免疫球蛋白可變 區(qū)的DNA區(qū)段和編碼人免疫球蛋白恒定區(qū)的DNA區(qū)段的所表達(dá)免疫球蛋白基因的產(chǎn)物。本 發(fā)明所涵蓋的"嵌合抗體"的其它形式是那些其中類或亞類已經(jīng)自初始抗體的類或亞類修 飾或改變的。此類"嵌合"抗體又稱為"類轉(zhuǎn)換抗體"。用于生成嵌合抗體的方法牽涉本領(lǐng) 域現(xiàn)在公知的常規(guī)重組DNA和基因轉(zhuǎn)染技術(shù)。參見例如1〇1'1^8〇]1,5.1^6七31.,?1'〇〇.似1:1· Acad Sci. USA81(1984)6851-6855 ;US5,202, 238 和 US5, 204, 244。
      [0068] 如本申請內(nèi)所使用的,術(shù)語"⑶R嫁接的變體"意指通常通過重組DNA技術(shù)制備的 包含來自一種來源或物種的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR或高變區(qū))和來自不同來源或物種的框架區(qū) (FR)的抗體可變域。包含鼠 CDR和人FR的可變域的CDR嫁接變體是優(yōu)選的。
      [0069] 如本申請內(nèi)所使用的,術(shù)語"T細(xì)胞表位消減的變體"意指通過除去人T細(xì)胞表 位(可變域內(nèi)具有結(jié)合MHC II類分子的能力的肽序列)修飾為消除或降低免疫原性的抗 體可變域。通過此方法,鑒定可變域的氨基酸側(cè)鏈與具有MHC II類結(jié)合溝的特定結(jié)合袋 間的相互作用。將鑒定的免疫原性區(qū)突變以消除免疫原性。一般地,此類方法記載于例如 W098/52976。
      [0070] 如本申請內(nèi)所使用的,術(shù)語"人源化變體"意指自非人起源,例如非人物種的互補(bǔ) 決定區(qū)(⑶R),和自人起源的框架區(qū)(FR)重建的,并且已經(jīng)進(jìn)一步修飾以重建或改善初始 非人可變域的結(jié)合親和力和特異性的抗體可變域。此類人源化變體通常通過重組DNA技術(shù) 來制備。親本非人可變域的親和力和特異性的重建是至關(guān)重要的步驟,對此目前使用不同 方法。在一種方法中,測定在非人CDR中及在人FR中引入突變,即所謂的回復(fù)突變是否是 有益的??梢岳缤ㄟ^序列或同源性分析,通過選擇人框架(固定的框架方法;同源性匹配 或最佳擬合),通過使用共有序列,通過自幾種不同人單抗選擇FR,或者通過用存在于人單 抗中的最常見的殘基替換三維表面上的非人殘基("表面重修"或"鑲飾")來鑒定此類回 復(fù)突變的合適位置。
      [0071] 另外,依照本發(fā)明的抗體包括具有"保守序列修飾",即不影響或改變依照本發(fā)明 的抗體的上文所提及的特征的核苷酸和氨基酸序列修飾的此類抗體??梢酝ㄟ^本領(lǐng)域中已 知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù),諸如定點誘變和PCR介導(dǎo)的誘變引入修飾。保守氨基酸替代包括用具有相 似側(cè)鏈的氨基酸殘基替換氨基酸殘基的。本領(lǐng)域中已經(jīng)限定具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基的 家族。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈(例如,賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如,天冬 氨酸、谷氨酸)、不帶電荷的極性側(cè)鏈(例如,甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、 酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非極性側(cè)鏈(例如,丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨 酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-分支的側(cè)鏈(例如,蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳香族側(cè) 鏈(例如,酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。如此,優(yōu)選地,可以將人抗CSF-1R 抗體中預(yù)測的非必需氨基酸殘基用來自同一側(cè)鏈家族的另一種氨基酸殘基替換。
      [0072] 可以基于分子建模通過誘變實施氨基酸替代,如Riechmann,L. et al. , Nature332 (1988) 323-327 及 Queen, C. et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA86 (1989) 10029-10033 所描述的。
      [0073] CSF-1受體(CSF-1R ;同義詞:M_CSF受體,巨噬細(xì)胞集落刺激因子1受體, EC2.7.10.1,F(xiàn)ms 原癌基因,c-fms,Swiss Prot P07333,CD115,(SEQ ID N0:23))自 1986 以 來是已知的(Coussens L.et al·,Nature320(1986)277-280)。CSF-1R是一種生長因子,并 且由 c-fms 原癌基因編碼(綜述見例如 Roth,P. and Stanley,E. R.,Curr. Top. Microbiol. Immunol. 181(1992) 141-67)。
      [0074] CSF-1R是M-CSF (巨噬細(xì)胞集落刺激因子,又稱作CSF-1)的受體,并且介導(dǎo)此細(xì) 胞因子的生物學(xué)效應(yīng)(Sherr,C. J. et al·,Cell41 (1985)665-676)。集落刺激因子-1受體 (又稱作 c-fms)的克隆第一次記載于 Roussel,M.F.et al.,Nature325(1987)549-552。在 該出版物中,顯示了 CSF-1R具有轉(zhuǎn)化潛力,其依賴于該蛋白質(zhì)的C端尾部的變化,包括抑制 性酪氨酸969磷酸化的喪失,其結(jié)合Cbl,并且由此調(diào)節(jié)受體下調(diào)(Lee, P. S. et al.,Embo J. 18(1999)3616-3628)。
      [0075] 如本文中所使用的,"結(jié)合人CSF-1R"指特異性結(jié)合人CSF-1R抗原的抗體。結(jié)合 親和力是于35°C的1. ΟχΙΟΛιοΙ/Ι或更低的KD值的,優(yōu)選地,于35°C的1. 0xl〇-9mol/l或更 低的KD值的。于35°C用標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合測定法,諸如表面等離振子共振技術(shù)(BmcoreK )測定結(jié) 合親和力(見實施例4)。
      [0076] 術(shù)語"表位"意指能夠特異性結(jié)合抗體的蛋白質(zhì)決定簇。表位通常由分子的化學(xué) 活性表面聚集諸如氨基酸或糖側(cè)鏈組成,并且通常表位具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征及特定的 電荷特征。構(gòu)象性和非構(gòu)象性表位的區(qū)別之處在于在存在變性溶劑的情況中喪失對前一 種,而不是對后一種的結(jié)合。優(yōu)選地,依照本發(fā)明的抗體特異性結(jié)合天然的,而不是變性的 CSF-1R。
      [0077] 如本文中所使用的,術(shù)語"與保藏抗體DSM ACC2920結(jié)合相同表位"指結(jié)合CSF-1R 上抗體<CSF-1R>9D11.2E8(保藏號DSM ACC2920)結(jié)合的相同表位的本發(fā)明的抗CSF-1R 抗體??梢允褂帽绢I(lǐng)域中已知的技術(shù)來測定本發(fā)明的抗CSF-1R抗體的表位結(jié)合特性。于 25°C在體外競爭性結(jié)合抑制測定法中通過表面等離振子共振(SPR)測定測試抗體抑制抗 體<CSF-1R>9D11.2E8(保藏號DSM ACC2920)結(jié)合CSF-1R的能力來測量CSF-1R抗體。這 可以通過 BIAcore 測定法(Pharmacia Biosensor AB,Uppsala,Sweden)調(diào)查,如例如在實 施例5中。在實施例5中,與結(jié)合的抗體<CSF-1R>9D11. 2E8(保藏號DSM ACC2920)競爭的 本發(fā)明的CSF-1R抗體的預(yù)期結(jié)合響應(yīng)的百分比(%)通過"100*相對響應(yīng)(大體_穩(wěn)定 性_早期)/rMax"計算,其中rMax通過"相對響應(yīng)(大體_穩(wěn)定性_晚期)*抗體分子量/ 抗原分子量"計算,如記載于Biacore測定法表位定位說明書的。還自相同抗體1和2的 對計算最小限度結(jié)合響應(yīng)(見實施例5)。其獲得的最大值+50%設(shè)置為顯著競爭并且如 此顯著結(jié)合相同表位的閾值(見實施例5,對于抗體<CSF-1R>9D11. 2E8,計算的閾值是8+4 =12)。如此,以"與<CSF-1R>9D11. 2E8(保藏號DSM ACC2920)結(jié)合相同表位"為特征的結(jié) 合人CSF-1R的抗體具有低于12的預(yù)期結(jié)合響應(yīng)的百分比(%)(小于12的%預(yù)期結(jié)合響 應(yīng))。
      [0078] 如本文中所使用的,"可變域"(輕鏈可變域(VL)、重鏈可變域(VH))意為直接牽涉 抗體結(jié)合抗原的輕和重鏈域?qū)χ糠N。可變輕和重鏈域具有相同的一般結(jié)構(gòu),并且每個域 包含通過三個"高變區(qū)"(或互補(bǔ)決定區(qū),CDR)連接的其序列廣泛保守的四個框架(FR)區(qū)。 框架區(qū)采用β-片層構(gòu)象,而⑶R可以形成連接β-片層結(jié)構(gòu)的環(huán)。每條鏈中的⑶R通過 框架區(qū)保持其三維結(jié)構(gòu),并且與來自另一條鏈的CDR -起形成抗原結(jié)合位點。抗體的重和 輕鏈CDR3區(qū)在依照本發(fā)明的抗體的結(jié)合特異性/親和力中發(fā)揮特別重要的作用,并且因 此提供本發(fā)明的又一個目的。
      [0079] 術(shù)語"抗體的抗原結(jié)合部分"在本文中使用時指抗體中負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的氨基酸殘 基。抗體的抗原結(jié)合部分包含來自"互補(bǔ)決定區(qū)"或"⑶R"的氨基酸殘基。"框架"或"FR" 區(qū)是除了如本文中所限定的高變區(qū)殘基外的那些可變域區(qū)。因此,抗體的輕和重鏈可變域 從Ν至C端包含域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、和FR4。特別地,重鏈的CDR3是對抗 原結(jié)合貢獻(xiàn)最大并且限定抗體特性的區(qū)域。⑶R和FR區(qū)依照Kabat et al·,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th ed. , Public Health Service, National Institutes of Health,Bethesda,MD (1991)的標(biāo)準(zhǔn)定義和/或來自"高變環(huán)"的那些殘基 確定。
      [0080] 如本文中所使用的,術(shù)語"核酸"或"核酸分子"意圖包括DNA分子和RNA分子。核 酸分子可以是單鏈或雙鏈,但是優(yōu)選的是雙鏈DNA。
      [0081] 如本申請內(nèi)所使用的,術(shù)語"氨基酸"意指天然存在的羧基α-氨基酸的組,包括 丙氨酸(三字母代碼:ala,單字母代碼:Α)、精氨酸(arg,R)、天冬酰胺(asn,Ν)、天冬氨酸 (asp, D)、半胱氨酸(cys,C)、谷氨酰胺(gin, Q)、谷氨酸(glu,E)、甘氨酸(gly,G)、組氨酸 (his,H)、異亮氨酸(ile,I)、亮氨酸(leu,L)、賴氨酸(lys,K)、甲硫氨酸(met, M)、苯丙氨 酸(phe,F(xiàn))、脯氨酸(pro, P)、絲氨酸(ser,S)、蘇氨酸(thr,T)、色氨酸(trp,W)、酪氨酸 (tyr,Y)、和纟顏氨酸(val,V)。
      [0082] 本發(fā)明的又一個實施方案是用于生成依照本發(fā)明的針對CSF-1R的抗體的方法, 其特征在于將編碼結(jié)合人CSF-1R的人IgGl類抗體的重鏈的核酸和編碼所述抗體的輕鏈的 核酸的序列插入表達(dá)載體中,在真核宿主細(xì)胞中插入所述載體,表達(dá)編碼的蛋白質(zhì),并自宿 主細(xì)胞或上清液回收。
      [0083] 優(yōu)選地,通過重組手段來生成依照本發(fā)明的抗體。此類方法是現(xiàn)有技術(shù)中普遍已 知的,并且包括在原核和真核細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì),隨后分離抗體多肽,并且通常純化至藥學(xué) 可接受純度。對于蛋白質(zhì)表達(dá),通過標(biāo)準(zhǔn)的方法將編碼輕和重鏈或其片段的核酸插入表達(dá) 載體中。在合適的原核或真核宿主細(xì)胞,如CHO細(xì)胞、NSO細(xì)胞、SP2/0細(xì)胞、HEK293細(xì)胞、 COS細(xì)胞、酵母、或大腸桿菌細(xì)胞中實施表達(dá),并且自細(xì)胞(自上清液或在細(xì)胞裂解后)回收 抗體。
      [0084] 通過本領(lǐng)域中已知的多種方法來制備編碼抗CSF-1R抗體的氨基酸序列變體的核 酸分子。這些方法包括但不限于自天然來源分離(在天然存在的氨基酸序列變體的情況 中)或者通過對較早制備的變體或非變體型式的人源化抗CSF-1R抗體進(jìn)行寡核苷酸介導(dǎo) 的(或定點)誘變、PCR誘變、和盒式誘變來制備。
      [0085] 將依照本發(fā)明的重和輕鏈可變域與啟動子、翻譯起始、恒定區(qū)、3'非翻譯區(qū)、多腺 苷酸化、和轉(zhuǎn)錄終止的序列組合以形成表達(dá)載體構(gòu)建體??梢詫⒅睾洼p鏈表達(dá)構(gòu)建體組合 入單一載體中,共轉(zhuǎn)染、連續(xù)轉(zhuǎn)染、或分開轉(zhuǎn)染入宿主細(xì)胞中,然后,將所述宿主細(xì)胞融合以 形成表達(dá)這兩條鏈的單一宿主細(xì)胞。
      [0086] 抗體的重組生成是現(xiàn)有技術(shù)中公知的,并且例如記載于綜述文章 Makrides, S. C. , Protein Expr.Purif. 17(1999) 183-202 ;Geisse, S. et al. , Protein Expr. Purif. 8(1996) 271-282 ;Kaufman, R. J. , Mol.Biotechnol. 16(2000) 151-161 ;fferner, R. G.,Drug Res. 48 (1998) 870-880。
      [0087] 抗體可以存在于整個細(xì)胞中,在細(xì)胞溶胞物中,或者為部分純化的或基本上純的 形式。通過標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù),包括堿/SDS處理、CsCl分帶、柱層析、瓊脂糖凝膠電泳、和本領(lǐng)域 中公知的其它技術(shù)來實施純化以消除其它細(xì)胞組分或其它污染物,例如其它細(xì)胞核酸或 蛋白質(zhì)° 見 Ausubel,F(xiàn). et al. eds. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York(1987)〇
      [0088] NSO 細(xì)胞中的表達(dá)由例如Barnes,L. M. et al·,Cytotechnology32 (2000) 109-123 ; Barnes,L. M. et al·,Biotech. Bioeng. 73 (2001) 261-270 描述。瞬時表達(dá)由例如 Durocher, Y.et al.,Nucl.Acids.Res.30(2002)E9 描述??勺冇虻目寺∮?0rlandi,R.et al·, Proc. Natl. Acad. Sci. USA86 (1989) 3833-3837 ;Carter, P. et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA89(1992) 4285-4289 ;Norderhaug,L. et al·,J.Immunol. Methods204(1997)77-87 描述。一種優(yōu)選的瞬時表達(dá)系統(tǒng)(HEK293)由Schlaeger,E. -J.,Christensen, K.,于 Cytotechnology30 (1999)71-83,及由 Schlaeger,E.-J.,于 J. Immunol· Methodsl94(1996) 191-199 描述。
      [0089] 適合于原核生物的控制序列例如包括啟動子,任選地操縱基因序列,和核糖體結(jié) 合位點。已知真核細(xì)胞利用啟動子、增強(qiáng)子和多腺苷酸化信號。
      [0090] 在將核酸放置入與另一種核酸序列的功能性關(guān)系中時,它是"可操作連接的"。例 如,若前序列或分泌前導(dǎo)的DNA以參與多肽分泌的前蛋白表達(dá),則它與多肽的DNA可操作連 接;若啟動子或增強(qiáng)子影響序列的轉(zhuǎn)錄,則它與編碼序列可操作連接;或者若核糖體結(jié)合 位點定位為使得便于翻譯,則它與編碼序列可操作連接。一般而言,"可操作連接的"意指所 連接的DNA序列是連續(xù)的,并且在分泌前導(dǎo)的情況中,是連續(xù)的且在讀碼框中。然而,增強(qiáng) 子不必是連續(xù)的。通過在方便的限制性位點處的連接來實現(xiàn)連接。若不存在此類位點,則 依照常規(guī)的實踐使用合成的寡核苷酸銜接頭或接頭。
      [0091 ] 通過常規(guī)的免疫球蛋白純化規(guī)程,諸如例如蛋白A-Sepharose、輕磷灰石層析、凝 膠電泳、透析、或親和層析自培養(yǎng)液適當(dāng)?shù)胤蛛x單克隆抗體。容易使用常規(guī)規(guī)程將編碼單克 隆抗體的DNA和RNA分離并測序。雜交瘤細(xì)胞可以充當(dāng)此類DNA和RNA的來源。一旦分離, 可以將DNA插入表達(dá)載體中,然后將所述表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入不另外生成免疫球蛋白蛋白質(zhì)的 宿主細(xì)胞諸如HEK293細(xì)胞、CHO細(xì)胞、或骨髓瘤細(xì)胞中,以獲得重組單克隆抗體在宿主細(xì)胞 中的合成。
      [0092] 如本文中所使用的,表述"細(xì)胞"、"細(xì)胞系"、和"細(xì)胞培養(yǎng)物"可互換使用,并且所 有此類名稱包括后代。如此,詞語"轉(zhuǎn)化體"和"經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞"包括原代主題細(xì)胞和自其衍 生的培養(yǎng)物,而不管傳遞的次數(shù)。還應(yīng)當(dāng)理解,由于有意或無意的突變,所有后代在DNA內(nèi) 容上可以不是正好相同的。包括具有如在初始轉(zhuǎn)化細(xì)胞中篩選的相同功能或生物學(xué)活性的 變體后代。
      [0093] 抗體的"Fc部分"不直接牽涉抗體對抗原的結(jié)合,但是展現(xiàn)出各種效應(yīng)器功 能。"抗體的Fc部分"是熟練技術(shù)人員公知的術(shù)語,并且基于木瓜蛋白酶對抗體的切割限 定。根據(jù)其重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列,抗體或免疫球蛋白分成類:IgA、IgD、IgE、IgG和 IgM,并且這些中的數(shù)種可以進(jìn)一步分成亞類(同種型),例如IgGl、IgG2、IgG3、和IgG4、 IgAl、和IgA2。依照重鏈恒定區(qū),免疫球蛋白的不同類分別稱作α、δ、ε、γ、和μ。抗 體的Fc部分直接牽涉ADCC(抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性)和CDC(補(bǔ)體依賴性細(xì) 胞毒性),其基于補(bǔ)體激活、Clq結(jié)合和Fc受體結(jié)合。補(bǔ)體激活(⑶C)通過補(bǔ)體因子Clq 與大多數(shù)IgG抗體亞類的Fc部分的結(jié)合來啟動。雖然抗體對補(bǔ)體系統(tǒng)的影響依賴于某 些條件,但是對Clq的結(jié)合是由Fc部分中的限定結(jié)合位點引起的。此類結(jié)合位點是現(xiàn) 有技術(shù)中已知的,并且例如記載于Boackle,R. J. et al.,Nature282(1979)742-743 ; Lukas, T. J. et al. , J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560 ;Brunhouse, R. and Cebra, J. J. , Mol.Immunol. 16(1979)907-917 ;Burton et al. , Nature288(1980)338-344 ; Thommesen, J. E. et al·,Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004 ; Idusogie,E. E. et al·, J. Immunol. 164(2000)4178-4184 ;Hezareh, M. et al. , J. Virology75(2001) 12161-12168 ; Morgan, A. et al·,Immunology86 (1995) 319-324 ;EP0307434。此類結(jié)合位點是例如 L234、 L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331 和 P329 (依照 Kabat,E. A.的 EU 索引的編號方式, 參見下文)。亞類IgGl、IgG2和IgG3的抗體通常顯示補(bǔ)體激活及Clq和C3結(jié)合,而IgG4 不激活補(bǔ)體系統(tǒng),而且不結(jié)合Clq和C3。
      [0094] 在一個實施方案中,依照本發(fā)明的抗體包含自人起源衍生的Fc部分,和優(yōu)選地人 恒定區(qū)的所有其它部分。如本文中所使用的,術(shù)語"自人起源衍生的Fc部分"意指如下的 Fc部分,其作為IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亞類的人抗體的Fc部分,優(yōu)選地,來自人IgGl亞 類的Fc部分、來自人IgGl亞類的突變Fc部分(優(yōu)選地具有L234A+L235A方面的突變)、 來自人IgG4亞類的Fc部分或來自人IgG4亞類的突變Fc部分(優(yōu)選地具有S228P方面的 突變)。通常優(yōu)選的是SEQ ID N0 :19 (人IgGl亞類)、SEQ ID N0 :20 (具有突變L234A和 L235A 的人 IgGl 亞類)、SEQ ID N0 :21 (人 IgG4 亞類)、或 SEQ ID N0 :22 (具有突變 S228P 的人IgG4亞類)的人重鏈恒定區(qū)。
      [0095] 在一個實施方案中,依照本發(fā)明的抗體的特征在于:恒定鏈?zhǔn)侨似鹪吹?。此類恒?鏈?zhǔn)乾F(xiàn)有技術(shù)中公知的,并且例如由Kabat,E.A.(見例如Johnson,G. and Wu,T.T.,Nucleic Acids Res. 28(2000)214-218)描述。例如,一種有用的人重鏈恒定區(qū)包含氨基酸序列SEQ ID NO :17。例如,一種有用的人輕鏈恒定區(qū)包含κ輕鏈恒定區(qū)氨基酸序列SEQ ID NO :18。 進(jìn)一步優(yōu)選的是,抗體是小鼠起源的,并且包含依照Kabat的小鼠抗體的抗體可變序列框。
      [0096] 本發(fā)明包括一種用于治療需要治療的患者的方法,其特征在于對患者施用治療有 效量的依照本發(fā)明的抗體。
      [0097] 本發(fā)明包括依照本發(fā)明的抗體用于治療的用途。
      [0098] 如此,依照本發(fā)明的結(jié)合相同表位的抗體能夠在CSF-1配體依賴性和CSF-1配體 不依賴性細(xì)胞中抑制細(xì)胞增殖。尤其是,本發(fā)明的CSF-1R抗體用于治療CSF-1配體依賴性 和CSF-1配體不依賴性CSF-1R介導(dǎo)的疾病。這意味著CSF1-R介導(dǎo)的疾病依賴于CSF-1配 體和相應(yīng)的經(jīng)由CSF-1R的信號傳導(dǎo)和/或不依賴于CSF-1配體和相應(yīng)的經(jīng)由CSF-1R的信 號傳導(dǎo)。經(jīng)由CSF-1R的信號傳導(dǎo)有可能涉及腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。
      [0099] 本發(fā)明的一個實施方案是在治療"CSF-1R介導(dǎo)的疾病"中使用的本發(fā)明的CSF-1R 抗體或用于制造在治療"CSF-1R介導(dǎo)的疾病"(其可以如下描述)中的藥物的本發(fā)明的 CSF-1R 抗體。
      [0100] 存在著CSF-1R信號傳導(dǎo)可能牽涉腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的3種獨特的機(jī)制。第一種是已 經(jīng)在女性生殖系統(tǒng)(乳房、卵巢、子宮內(nèi)膜、宮頸)中起源的腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)CSF配體和受 體的表達(dá)(Scholl,S. M. et al.,J. Natl. Cancer Inst. 86 (1994) 120-126 ;Kacinski,Β· M., Mol. Reprod. Dev. 46 (1997) 71-74 ;Ngan, Η. Y. et al. , Eur. J. Cancer35 (1999) 1546-1550 ; Kirma,N.et al·,Cancer Res67 (2007) 1918-1926),并且表達(dá)已經(jīng)與乳腺癌異種移植 物生長以及乳腺癌患者中不良預(yù)后聯(lián)系起來。在一項研究中測試的約10-20%急性 髓細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病和脊髓發(fā)育不良患者中在CSF-1R中看到兩處 點突變,并且發(fā)現(xiàn)突變之一破壞受體周轉(zhuǎn)(Ridge,S.A. et al·,Proc. Natl. Acad. Sci USA87 (1990) 1377-1380)。然而,突變的發(fā)生在后來的研究中未能得到確認(rèn)(Abu-Duhier, F.M.et al.,Br.J. Haematol. 120(2003)464-470)。還在肝細(xì)胞癌(Yang,D.H.et al·, Hepatobiliary Pancreat.Dis.Int. 3(2004)86-89)和特發(fā)性骨髓纖維化(Abu-Duhier, F. M. et al·,Br. J. Haematol. 120 (2003) 464-470)的一些病例中發(fā)現(xiàn)突變。
      [0101] 色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎(PVNS)和腱鞘滑膜巨大細(xì)胞腫瘤(TGCT)可以由于將 Μ-CSF基因與膠原基因 C0L6A3融合,并導(dǎo)致Μ-CSF過表達(dá)的易位而發(fā)生(West,R. B. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA103 (2006) 690-695)。提出景觀效應(yīng)(landscape effect)造成所 得的腫瘤塊,其由被表達(dá)M-CSF的細(xì)胞吸引的單核細(xì)胞組成。TGCT是可以自它們通常發(fā)生 的指相對容易地除去的較小腫瘤。PVNS由于它可以在大的關(guān)節(jié)中復(fù)發(fā)而更具攻擊性,而且 不同樣容易用手術(shù)控制。
      [0102] 第二種機(jī)制基于阻斷骨中轉(zhuǎn)移部位經(jīng)由M-CSF/CSF-1R的信號傳導(dǎo),其誘導(dǎo)破骨 細(xì)胞發(fā)生(osteoclastogenesis)、骨吸收和溶骨性骨損傷。乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤和肺癌 是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移至骨,并且引起溶骨性骨疾病,導(dǎo)致骨骼并發(fā)癥的癌癥的例子。由腫瘤細(xì) 胞和基質(zhì)釋放的Μ-CSF與核因子κ -B配體的受體激活物RANKL協(xié)作誘導(dǎo)造血髓樣單核細(xì) 胞祖先分化成成熟的破骨細(xì)胞。在此過程期間,Μ-CSF通過對破骨細(xì)胞給予存活信號充 當(dāng)允許因子(Tanaka,S.et al·,J. Clin. Invest. 91 (1993) 257-263)。用抗 CSF-1R 抗體對 破骨細(xì)胞分化和成熟期間CSF-1R活性的抑制有可能阻止引起溶骨性疾病和轉(zhuǎn)移性疾病中 有關(guān)的骨骼相關(guān)事件的破骨細(xì)胞的不平衡活性。鑒于乳腺、肺癌和多發(fā)性骨髓瘤通常導(dǎo)致 溶骨性損傷,前列腺癌中的骨轉(zhuǎn)移最初具有成骨細(xì)胞出現(xiàn),其中升高的骨形成活性導(dǎo)致"編 織骨",其與正常骨的典型薄片狀結(jié)構(gòu)不同。在疾病進(jìn)展期間,骨損傷展現(xiàn)出顯著的溶骨性 組分及骨吸收的高血清水平,并且提示了抗吸收療法可以是有用的。已經(jīng)顯示了二膦酸鹽 類抑制溶骨性損傷的形成,并且僅在具有激素不應(yīng)性轉(zhuǎn)移性前列腺癌的男性中減少骨骼相 關(guān)事件的數(shù)目,但是在這點上,其對成骨細(xì)胞損傷的影響是有爭議的,并且二膦酸鹽類至今 在預(yù)防骨轉(zhuǎn)移或激素響應(yīng)性前列腺癌中尚不是有益的??刮談┰诨旌闲匀芄切?成骨 細(xì)胞性前列腺癌中的效果在臨床中仍在研究(Choueiri,M.B.et al.,Cancer Metastasis Rev.25(2006)601-609 ;Vessella, R.L.and Corey, E. , Clin. Cancer Res. 12(20Pt2) (2006)6285s-6290s)〇
      [0103] 第三種機(jī)制基于最近的觀察結(jié)果,即存在于乳癌、前列腺、卵巢和宮頸癌 的實體瘤中的腫瘤有關(guān)的巨噬細(xì)胞(ΤΑΜ)與不良預(yù)后相關(guān)聯(lián)(Bingle,L. et al., J. Pathol. 196 (2002) 254-265 ;Pollard,J. W.,Nat. Rev. Cancer4 (2004) 71-78)。巨噬細(xì)胞 通過M-CSF和其它趨化因子募集至腫瘤。然后,巨噬細(xì)胞可以經(jīng)由分泌血管生成因子、蛋白 酶和其它生長因子和細(xì)胞因子促成腫瘤進(jìn)展,并且可以通過抑制CSF-1R信號傳導(dǎo)而阻斷。 最近,Zins 等(Zins,K.et al·,Cancer Res. 67 (2007) 1038-1045)顯示了腫瘤壞死因子 a (TNFa )、M_CSF或這兩者的組合的siRNA的表達(dá)會在相應(yīng)siRNA的腫瘤內(nèi)注射后將小鼠 異種移植物模型中的腫瘤生長降低34% -50%。靶向由人SW620細(xì)胞分泌的TNF a的siRNA 降低小鼠 M-CSF水平,并且導(dǎo)致腫瘤中的巨噬細(xì)胞減少。另外,用針對M-CSF的抗原結(jié)合片 段處理MCF7腫瘤異種移植物確實導(dǎo)致40%腫瘤生長抑制,反轉(zhuǎn)對化療劑的抗性,而且在與 化療劑組合給予時改善小鼠的存活(Paulus,P.et al.,Cancer Res. 66(2006)4349-4356)。
      [0104] ΤΑΜ是慢性炎癥和癌癥間新出現(xiàn)聯(lián)系的唯一一個例子。炎癥與癌癥間的聯(lián)系存在 著別的證據(jù),因為許多慢性疾病與升高的癌癥風(fēng)險有關(guān),癌癥在慢性炎癥的部位出現(xiàn),在許 多癌癥中找到炎癥的化學(xué)介導(dǎo)物;刪除炎癥的細(xì)胞或化學(xué)介導(dǎo)物抑制實驗性癌癥的形成, 并且抗炎劑的長期使用降低一些癌癥的風(fēng)險。那些幽門螺桿菌(H.pyl 〇ri)誘導(dǎo)的胃炎 (對于胃癌)、血吸蟲?。▽τ诎螂装?、HHVX(對于卡波西(Kaposi)肉瘤)、子宮內(nèi)膜異位 癥(endometriosis)(對于卵巢癌)和前列腺炎(對于前列腺癌)中的許多炎性狀況存在 與癌癥的聯(lián)系(Balkwill,F(xiàn).et al·,Cancer Cell7(2005)211-217)。巨噬細(xì)胞是慢性炎 癥中的關(guān)鍵細(xì)胞,并且差別響應(yīng)其微環(huán)境。存在著在功能性狀態(tài)的連續(xù)區(qū)中被認(rèn)為是極端 的兩類巨噬細(xì)胞:Ml巨噬細(xì)胞牽涉1型反應(yīng)。這些反應(yīng)牽涉通過微生物產(chǎn)物的激活及隨后 殺死病原性微生物,這生成反應(yīng)性氧中間體。極端的另一端是牽涉2型反應(yīng)的M2巨噬細(xì) 胞,所述2型反應(yīng)促進(jìn)細(xì)胞增殖、調(diào)整炎癥和適應(yīng)性免疫,而且促進(jìn)組織重塑、血管發(fā)生和 修復(fù)(Mantovani,A.et al·,Trends Immunol. 25(2004)677-686)。導(dǎo)致建立的新生物形 成的慢性炎癥通常與M2巨噬細(xì)胞有關(guān)。介導(dǎo)炎性反應(yīng)的一種樞要的細(xì)胞因子是TNFa,其 名符其實在高劑量能刺激抗腫瘤免疫和出血性壞死,而且最近還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了由腫瘤細(xì)胞表 達(dá),并且充當(dāng)腫瘤促進(jìn)物(Zins,K. et al·,Cancer Res. 67(2007) 1038-1045 ;Balkwill,F(xiàn)., Cancer Metastasis Rev. 25(2006)409-416)。巨噬細(xì)胞就腫瘤而言的特定作用仍需要更好 地了解,包括對其功能的潛在空間和時間依賴性和與特定腫瘤類型的相關(guān)性。
      [0105] 如此,本發(fā)明的一個實施方案是在治療癌癥中使用的本發(fā)明的CSF-1R抗體。如本 文中所使用的,術(shù)語"癌癥"可以例如是肺癌、非小細(xì)胞肺(NSCL)癌、細(xì)支氣管肺泡細(xì)胞肺 癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、皮膚或眼內(nèi)黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛區(qū)癌、 胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮 內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、何杰金(Hodgkin)氏病、食管癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌、 甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎或輸 尿管癌、腎細(xì)胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細(xì)胞癌、膽癌(biliary cancer)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS) 新生物、脊柱軸腫瘤、腦干膠質(zhì)瘤、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastoma multiforme)、星形 細(xì)胞瘤、神經(jīng)鞘瘤(schwanoma)、室鼓膜瘤(ependymona)、髓母細(xì)胞瘤、腦脊膜瘤、鱗狀細(xì)胞 癌、垂體腺瘤、淋巴瘤、淋巴細(xì)胞性白血病,包括任何上述癌癥的頑固性型式、或一種或多種 上述癌癥的組合。優(yōu)選地,此類癌癥是乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、肺癌或前列腺癌。優(yōu)選地, 此類癌癥的進(jìn)一步特征在于CSF-1或CSF-1R表達(dá)或過表達(dá)。本發(fā)明的又一個實施方案是 在原發(fā)性腫瘤和新的轉(zhuǎn)移的同時治療中使用的本發(fā)明的CSF-1R抗體。
      [0106] 如此,本發(fā)明的另一個實施方案是在治療牙周炎、組織細(xì)胞增多病X、骨質(zhì)疏松、 佩吉特(Paget)氏骨?。≒DB)、由于癌癥療法所致的骨損失、假體周圍骨質(zhì)溶解、糖皮質(zhì) 素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎(psioratic arthritis)、骨關(guān)節(jié)炎 (osteoarthritis)、炎性關(guān)節(jié)炎(inflammatory arthridities)、和炎癥中使用的本發(fā)明的 CSF-1R 抗體。
      [0107] Rabello, D. et al. , Biochem. Biophys. Res. Commun. 347 (2006) 791-796 已經(jīng)表明 CSF1基因中的SNP展現(xiàn)出與攻擊性牙周炎:即一種由于牙槽骨的吸收引起牙損失的牙周組 織炎性疾病的正關(guān)聯(lián)。
      [0108] 組織細(xì)胞增多病X(又稱作朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增多病,LCH)是一種表現(xiàn)為在 骨和骨外LCH損傷中分化成破骨細(xì)胞的朗格漢斯樹突細(xì)胞的增殖性疾病。朗格漢斯細(xì)胞自 循環(huán)單核細(xì)胞衍生。發(fā)現(xiàn)在血清和損傷中測量到的升高的M-CSF水平與疾病嚴(yán)重性相關(guān)聯(lián) (da Costa,C.E.et al.,J. Exp. Med. 201 (2005) 687-693)。疾病主要在兒科患者群體中發(fā) 生,并且在疾病變?yōu)橄到y(tǒng)性或者是復(fù)發(fā)性時不得不用化學(xué)療法治療。
      [0109] 骨質(zhì)疏松的病理生理學(xué)是由形成骨的造骨細(xì)胞的損失和增加的破骨細(xì)胞 依賴性骨吸收介導(dǎo)的。Cenci等已經(jīng)描述了支持性數(shù)據(jù),其顯示了抗M-CSF抗體 注射在切除卵巢的小鼠中保護(hù)骨密度并且抑制骨吸收(Cenci,S. et al.,J.Clin. Invest. 105(2000) 1279-1287)。最近,鑒定由于雌激素缺乏所致的絕經(jīng)后骨損失間的潛 在聯(lián)系,并且發(fā)現(xiàn)了 TNFa生成T細(xì)胞的存在影響骨代謝(Roggia,C. et al·,Minerva Med. 95(2004) 125-132)。一種可能的機(jī)制可能是TNF α在體內(nèi)誘導(dǎo)M-CSF。通過阻斷小鼠 中TNF a誘導(dǎo)的骨質(zhì)溶解的針對M-CSF的抗體的效果確認(rèn)M-CSF在TNF- a誘導(dǎo)的破骨細(xì) 胞發(fā)生中的重要作用,并且由此生成炎性關(guān)節(jié)炎的CSF-1R信號傳導(dǎo)潛在的靶物的抑制劑 (Kitaura, H. et al· , J. Clin. Invest. 115(2005)3418-3427)。
      [0110] 佩吉特氏骨?。≒DB)是骨質(zhì)疏松后第二位最常見的骨代謝病癥,其中骨周轉(zhuǎn)升高 的病灶性異常導(dǎo)致并發(fā)癥諸如骨痛、畸形、病理性骨折和耳聾。已經(jīng)鑒定出四種基因中的突 變,其調(diào)節(jié)正常的破骨細(xì)胞功能,并且使個體易患PDB及相關(guān)病癥:TNFRSF11A (其編碼核因 子(NF) κ B的受體激活物(RANK),即破骨細(xì)胞功能的一種至關(guān)重要的調(diào)節(jié)物)中的插入突 變、編碼護(hù)骨蛋白(RANK配體的誘餌受體)的TNFRSF11B的失活突變、Sequestosomel基 因(SQSTM1)(其編碼NFkB途徑中的重要支架蛋白)的突變和含有纈酪肽的蛋白質(zhì)(VCP) 基因中的突變。此基因編碼VCP,其在使NF K B抑制劑靶向蛋白酶體所致降解中具有作用 (Daroszewska, A. and Ralston, S. H. , Nat. Clin. Pract. Rheumatol. 2(2006)270-277) 〇 向性CSF-1R抑制劑提供一個間接阻斷RANKL信號傳導(dǎo)脫調(diào)節(jié)的機(jī)會,并且對目前使用的二 膦酸鹽類添加額外的治療選項。
      [0111] 癌癥療法誘導(dǎo)的骨損失(尤其在乳腺和前列腺癌患者中)是一種別 的適應(yīng)癥,其中靶向性CSF-1R抑制劑可以預(yù)防骨損失(Lester,J. E. et al., Br. J. Cancer94 (2006) 30-35)。隨著早期乳腺癌的預(yù)后改善,輔助療法的長期后果變得 更加重要,因為一些療法,包括化學(xué)療法、放射、芳香酶抑制劑和卵巢切除通過降低骨 礦物密度影響骨代謝,導(dǎo)致骨質(zhì)疏松及有關(guān)的骨折的風(fēng)險升高(Lester,J. E. et al., Br. J. Cancer94 (2006) 30-35)。乳腺癌中的輔助芳香酶抑制劑療法的等同方案是前列腺 癌中的雄激素消融療法,其導(dǎo)致骨礦物密度損失,而且顯著增加骨質(zhì)疏松相關(guān)骨折的風(fēng)險 (Stoch, S.A.et al. , J. Clin.Endocrinol. Metab. 86(2001)2787-2791) 〇
      [0112] 對CSF-1R信號傳導(dǎo)的靶向性抑制在靶定的細(xì)胞類型包括破骨細(xì)胞和巨噬細(xì)胞時 在其它適應(yīng)癥中也可能是有益的,例如治療響應(yīng)關(guān)節(jié)置換術(shù)(由于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的特 定并發(fā)癥。由于假體周圍骨損失及隨后的假體松弛所致的植入失敗是關(guān)節(jié)置換術(shù)的一個主 要并發(fā)癥,并且需要重復(fù)手術(shù),對于個體患者和健康護(hù)理系統(tǒng)造成高的社會經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。至 今,沒有用于預(yù)防或抑制假體周圍骨質(zhì)溶解的得到批準(zhǔn)的藥物療法(Dr eeS,P.et al.,Nat. Clin. Pract. Rheumatol. 3(2007) 165-171)。
      [0113] 糖皮質(zhì)素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松(GI0P)是另一種適應(yīng)癥,其中CSF-1R抑制劑可以阻止 由于那些慢性阻塞性肺疾病、哮喘和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的各種狀況而給予的長期糖皮質(zhì)類 固醇使用后的骨損失(Guzman-Clark,J. R. et al·,Arthritis Rheum. 57(2007) 140-146 ; Feldstein,A.C. et al·,Osteoporos. Int. 16(2005)2168-2174)。
      [0114] 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎和炎性關(guān)節(jié)炎本身是CSF-1R信號傳導(dǎo)抑制劑的 潛在適應(yīng)癥,因為它們由巨噬細(xì)胞組分和不同程度骨破壞組成(Ritchlin,C.T. et al., J. Clin. Invest. Ill (2003)821-831)。骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是由巨噬細(xì)胞在結(jié)締組 織中積累和巨噬細(xì)胞浸潤入滑液中(其由M-CSF至少部分介導(dǎo))引起的炎性自身免疫性 疾病。Campbell,I.K.et al.,J.Leukoc.Biol. 68(2000) 144-150 表明人-關(guān)節(jié)組織細(xì)胞 (軟骨細(xì)胞、滑膜成纖維細(xì)胞)在體外生成M-CSF,并且其存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑 液中,提示了它促成與疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)的巨噬細(xì)胞浸潤和滑膜組織增殖。對CSF-1R信 號傳導(dǎo)的抑制有可能控制關(guān)節(jié)中巨噬細(xì)胞的數(shù)目,并且減輕來自有關(guān)的骨破壞的疼痛。為 了使不利影響最小化并且為了進(jìn)一步了解CSF-1R信號傳導(dǎo)在這些適應(yīng)癥中的影響,一種 方法是特異性抑制CSF-1R,而不靶向無數(shù)其它激酶,諸如Raf激酶。
      [0115] 最近的文獻(xiàn)報告將增加的循環(huán)M-CSF與慢性冠狀動脈疾病中的不良預(yù)后和動 脈粥樣硬化進(jìn)展聯(lián)系起來(Saitoh,T.et al·,J. Am. Coll. Cardiol. 35 (2000) 655-665; Ikonomidis,I. et al·,Eur. Heart. J. 26(2005)第 1618-1624 頁);M_CSF 通過幫助形成表 達(dá)CSF-1R并且呈現(xiàn)初始斑塊的泡沫細(xì)胞(具有攝取的氧化的LDL的巨噬細(xì)胞)影響動脈 粥樣硬化過程(Murayama,T. et al·,Circulation99 (1999) 1740-1746)。
      [0116] 在活化的小膠質(zhì)中找到M-CSF和CSF-1R的表達(dá)和信號傳導(dǎo)。小膠質(zhì)(其是中樞神 經(jīng)系統(tǒng)的駐留巨噬細(xì)胞)可以通過多種損傷,包括感染和創(chuàng)傷性損傷活化。認(rèn)為M-CSF是 腦中炎性應(yīng)答的一種關(guān)鍵調(diào)節(jié)物,并且M-CSF水平在HIV-1、腦炎、阿耳茨海默(Alzheimer) 氏?。ˋD)和腦腫瘤中升高。由于M-CSF/CSF-1R的自分泌信號傳導(dǎo)所致的小膠質(zhì)細(xì)胞增 生(microgliosis)導(dǎo)致誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子和一氧化氮釋放,如通過例如使用實驗性神經(jīng) 兀損傷模型證明的(Hao,A.J.et al.,Neurosciencell2 (2002)889-900 ;Murphy,G.M., Jr. et al.,J. Biol. Chem. 273 (1998) 20967-20971)。發(fā)現(xiàn)具有升高的 CSF-1R 表達(dá)的小膠 質(zhì)在AD中及在AD的淀粉樣前體蛋白V717F轉(zhuǎn)基因小鼠模型中圍繞斑塊(Murphy,G. Μ., Jr. et al.,Am. J. Pathol. 157(2000)895-904)。另一方面,與正常對照相比,在腦中具有較 少小膠質(zhì)的〇p/〇P小鼠導(dǎo)致A-β的原纖維沉積和神經(jīng)元損失,提示了小膠質(zhì)在op/op小鼠 中在AD缺乏的形成中確實具有神經(jīng)保護(hù)性功能(Kaku,M.et al.,Brain Res. Brain Res. Protoc. 12(2003) 104-108)。
      [0117] M-CSF和CSF-1R的表達(dá)和信號傳導(dǎo)與炎性腸?。↖BD)有關(guān)(W02005/046657)。術(shù) 語"炎性腸病"指以胃腸道中多個部位的慢性炎癥為特征的嚴(yán)重的、慢性的腸道病癥,并且 明確包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩(Crohn)氏病。
      [0118] 本發(fā)明包括用于治療癌癥的抗體,其特征在于包括結(jié)合人CSF-1R的抗體,所述結(jié) 合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文提及的氨基酸序 列和氨基酸序列片段。
      [0119] 本發(fā)明包括用于治療骨損失的抗體,其特征在于包括結(jié)合人CSF-1R的抗體,所述 結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文提及的氨基酸 序列和氨基酸序列片段。
      [0120] 本發(fā)明包括用于預(yù)防或治療轉(zhuǎn)移的抗體,其特征在于包括結(jié)合人CSF-1R的抗體, 所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文提及的氨 基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0121] 本發(fā)明包括用于治療炎性疾病的抗體,其特征在于包括結(jié)合人CSF-1R的抗體,所 述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文提及的氨基 酸序列和氨基酸序列片段。
      [0122] 本發(fā)明包括抗體用于治療癌癥或者備選地用于制造供治療癌癥用的藥物的用途, 所述抗體特征在于包括結(jié)合人CSF-1R的抗體,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上文所 提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文提及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0123] 本發(fā)明包括抗體用于治療骨損失或者備選地用于制造供治療骨損失用的藥物的 用途,所述抗體特征在于包括結(jié)合人CSF-1R的抗體,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在于上 文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文提及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0124] 本發(fā)明包括抗體用于預(yù)防或治療轉(zhuǎn)移或者備選地用于制造供預(yù)防或治療轉(zhuǎn)移用 的藥物的用途,所述抗體特征在于包括結(jié)合人CSF-1R的抗體,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特 征在于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文提及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0125] 本發(fā)明包括抗體用于治療炎性疾病或者備選地用于制造供治療炎性疾病用的藥 物的用途,所述抗體特征在于包括結(jié)合人CSF-1R的抗體,所述結(jié)合人CSF-1R的抗體特征在 于上文所提及的表位結(jié)合特性或者備選地上文提及的氨基酸序列和氨基酸序列片段。
      [0126] 在一個實施方案中,依照本發(fā)明的抗體具有一項或多項下述特性:
      [0127] &)于抗體濃度1(^8/1111將見!13了3-野生型05?-11?重組細(xì)胞的生長抑制90%或 更多(見實施例2);
      [0128] b)于抗體濃度10μ g/ml將NIH3T3-突變型CSF-1R L301S Y969F重組細(xì)胞的生長 抑制60%或更多(例如見實施例2);
      [0129] c)抑制CSF-1/CSF-1R相互作用(例如IC50值為15ng/ml或更低)(見實施例3);
      [0130] d)在野生型NIH3T3-CSF-1R重組細(xì)胞中抑制CSF-1誘導(dǎo)的CSF-1R磷酸化(例如 IC50值為80ng/ml或更低)(見實施例4);
      [0131] e)抑制BeWo腫瘤細(xì)胞的生長(例如于抗體濃度10 μ g/ml抑制80 %或更多)(見 實施例7);
      [0132] f)抑制巨噬細(xì)胞分化(例如IC50值為0. 8nM或更低)(見實施例8)。
      [0133] 一方面,本發(fā)明包括一種結(jié)合人CSF-1R的抗體,其中所述抗體與保藏抗體DSM ACC2920結(jié)合相同表位且其中所述抗體具有一項或多項下述特性 :
      [0134] &)于抗體濃度1(^8/1111將見!13了3-野生型05?-11?重組細(xì)胞的生長抑制90%或 更多(見實施例2);
      [0135] b)于抗體濃度10μ g/ml將NIH3T3-突變型CSF-1R L301S Y969F重組細(xì)胞的生長 抑制60%或更多(例如見實施例2);
      [0136] c)抑制CSF-1/CSF-1R相互作用(例如IC50值為15ng/ml或更低)(見實施例3);
      [0137] d)在野生型NIH3T3-CSF-1R重組細(xì)胞中抑制CSF-1誘導(dǎo)的CSF-1R磷酸化(例如 IC50值為80ng/ml或更低)(見實施例4);
      [0138] e)抑制BeWo腫瘤細(xì)胞的生長(例如于抗體濃度10 μ g/ml抑制80 %或更多)(見 實施例7);
      [0139] f)抑制巨噬細(xì)胞分化(例如IC50值為0. 8nM或更低)(見實施例8)。
      [0140] 在另一方面,本發(fā)明提供了含有與藥學(xué)可接受載體一起配制的一種或一組的本發(fā) 明的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的組合物,例如藥物組合物。
      [0141] 如本文中所使用的,"藥學(xué)可接受載體"包括生理學(xué)相容的任何和所有溶劑、分散 介質(zhì)、涂層材料、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等張劑和吸收延遲劑、等等。優(yōu)選地,載體適合于注 射或輸注。
      [0142] 可以通過本領(lǐng)域中已知的多種方法來施用本發(fā)明的組合物。如熟練技術(shù)人員會領(lǐng) 會的,施用的路徑和/或模式會隨期望的結(jié)果而變化。
      [0143] 藥學(xué)可接受載體包括無菌水溶液或分散體和供制備無菌可注射溶液或分散體用 的無菌粉劑。對藥學(xué)活性物質(zhì)使用此類介質(zhì)和藥劑是本領(lǐng)域中已知的。在水外,載體可以 是例如等張緩沖鹽水溶液。
      [0144] 不管選擇的施用路徑,通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法來將本發(fā)明的化合物 (其可以以合適的水合形式使用)和/或本發(fā)明的藥物組合物配制成藥學(xué)可接受劑量形式。
      [0145] 可以改變活性成分在本發(fā)明的藥物組合物中的實際劑量水平,從而獲得對于實現(xiàn) 特定患者的期望的治療響應(yīng)、組成、和施用模式有效的,而對患者無毒的活性成分量(有效 量)。選定的劑量水平會取決于多種藥動學(xué)因素,包括所采用的本發(fā)明的特定組合物,或 其酯、鹽或酰胺的活性、施用路徑、施用時間、所采用的特定化合物的排泄速率、與所采用的 特定組合物組合使用的其它藥物、化合物和/或材料、所治療的患者的年齡、性別、重量、狀 況、一般健康和先前的醫(yī)學(xué)史等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域公知的因素。
      [0146] 本發(fā)明包括依照本發(fā)明的抗體用于治療患有癌癥,尤其是結(jié)腸、肺或胰腺癌的患 者的用途。
      [0147] 本發(fā)明還包括用于治療患有此類疾病的患者的方法。
      [0148] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了用于制造包含有效量的依照本發(fā)明的抗體及藥學(xué)可接受載 體的藥物組合物的方法和依照本發(fā)明的抗體用于此類方法的用途。
      [0149] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了有效量的依照本發(fā)明的抗體用于制造藥劑(優(yōu)選地與藥學(xué) 可接受載體一起)以治療患有癌癥的患者的用途。
      [0150] 本發(fā)明還提供了有效量的依照本發(fā)明的抗體用于制造藥劑(優(yōu)選地與藥學(xué)可接 受載體一起)以治療患有癌癥的患者的用途。
      [0151] 提供以下實施例和序列表來幫助理解本發(fā)明,其實際范圍在所附權(quán)利要求書中列 出。應(yīng)當(dāng)理解,可以在不背離本發(fā)明精神的前提下在所列的規(guī)程中做出修改。
      [0152] 抗體保藏
      [0153] 依照本發(fā)明優(yōu)選的雜交瘤細(xì)胞系,雜交瘤細(xì)胞系<CSF-1R>9D11. 2E,依照國際承認(rèn) 用于專利程序的微生物保藏布達(dá)佩斯條約于2008年6月10日保藏于德意志微生物和細(xì) 胞培養(yǎng)物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, DSMZ,德國),登錄號 DSM ACC2920。
      [0154]
      [0155]
      【權(quán)利要求】
      1. 一種結(jié)合人CSF-1R的抗體,其特征在于與保藏抗體DSM ACC2920結(jié)合相同表位,用 于在CSF-1配體依賴性和/或CSF-1配體不依賴性CSF-1-R表達(dá)細(xì)胞中抑制細(xì)胞增殖。
      2. 依照權(quán)利要求1的抗體,其中所述CSF-1-R表達(dá)細(xì)胞為癌細(xì)胞。
      3. 依照權(quán)利要求1或2的抗體,其特征在于作為重鏈可變域⑶R3區(qū)包含SEQ ID NO : 1 或 SEQ ID NO :9 的 CDR3 區(qū)。
      4. 依照權(quán)利要求3的抗體,其特征在于: a) 重鏈可變域包含 SEQ ID NO :1 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID NO :2 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO : 3的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :4的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :5的CDR2區(qū)、和SEQ ID NO :6 的 CDR1 區(qū),或 b) 重鏈可變域包含 SEQ ID NO :9 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID NO :10 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO : 11的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :12的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :13的CDR2區(qū)、和 SEQ ID NO :14 的 CDR1 區(qū),或 c) a)或b)所述抗體的CDR嫁接的、人源化的或T細(xì)胞表位消減的抗體變體。
      5. -種結(jié)合人CSF-1R的抗體,其特征在于與保藏抗體DSM ACC2920結(jié)合相同表位。
      6. -種結(jié)合人CSF-1R的抗體,其特征在于與保藏抗體DSM ACC2920結(jié)合相同表位; 其中在體外競爭性結(jié)合抑制測定法中通過表面等離振子共振(SPR)于25°C測量對相 同表位的結(jié)合;且 其中所述抗體具有下述特性: &)于抗體濃度1(^8/1111將見!13了3-野生型03?-11?重組細(xì)胞的生長抑制90%或更多; 和 b)于抗體濃度10 μ g/ml將NIH3T3 -突變型CSF-1R L301S Y969F重組細(xì)胞的生長抑 制60 %或更多。
      7. 依照權(quán)利要求5的抗體,其特征在于作為重鏈可變域⑶R3區(qū)包含SEQ ID NO :1或 SEQ ID NO :9 的 CDR3 區(qū)。
      8. 依照權(quán)利要求7的抗體,其特征在于: a) 重鏈可變域包含 SEQ ID NO :1 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID NO :2 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO : 3的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :4的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :5的CDR2區(qū)、和SEQ ID NO :6 的 CDR1 區(qū),或 b) 重鏈可變域包含 SEQ ID NO :9 的 CDR3 區(qū)、SEQ ID NO :10 的 CDR2 區(qū)、和 SEQ ID NO : 11的CDR1區(qū),且輕鏈可變域包含SEQ ID NO :12的CDR3區(qū)、SEQ ID NO :13的CDR2區(qū)、和 SEQ ID NO :14 的 CDR1 區(qū),或 c) a)或b)所述抗體的CDR嫁接的、人源化的或T細(xì)胞表位消減的抗體變體。
      9. 依照權(quán)利要求5至8中任一項的抗體,其特征在于所述抗體是人IgG4亞類的或者是 人IgGl亞類的。
      10. 藥物組合物,其特征在于包含依照權(quán)利要求5至9中任一項的抗體或片段。
      11. 依照權(quán)利要求5至9中任一項的抗體,其用于治療癌癥。
      12. 依照權(quán)利要求5至9中任一項的抗體,其用于治療骨損失。
      13. 依照權(quán)利要求5至9中任一項的抗體,其用于預(yù)防或治療轉(zhuǎn)移。
      14. 依照權(quán)利要求5至8中任一項的抗體,其用于治療炎性疾病。
      15. 編碼結(jié)合CSF-1R的抗體的重和輕鏈的核酸,其特征在于所述抗體包含依照權(quán)利要 求7的重和輕鏈可變域。
      16. 表達(dá)載體,其特征在于包含依照權(quán)利要求14的核酸以在原核或真核宿主細(xì)胞中表 達(dá)結(jié)合CSF-1R的抗體。
      17. 原核或真核宿主細(xì)胞,其包含依照權(quán)利要求11的載體。
      18. 用于生成依照權(quán)利要求5至8中任一項的重組抗體的方法,其特征在于在原核或真 核宿主細(xì)胞中表達(dá)依照權(quán)利要求14的核酸,并自所述細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物上清液回收所述 抗體。
      19. 依照權(quán)利要求5至9的抗體用于制備治療癌癥的藥物的用途。
      20. 依照權(quán)利要求5至9的抗體用于制備治療骨損失的藥物的用途。
      21. 依照權(quán)利要求5至9的抗體用于制備預(yù)防或治療轉(zhuǎn)移的藥物的用途。
      【文檔編號】C07K16/28GK104159921SQ201280067529
      【公開日】2014年11月19日 申請日期:2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月15日
      【發(fā)明者】G.弗蒂格, A.菲德勒, K.卡魯扎, C.里斯, S.西伯, M.托馬斯 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司
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