專利名稱：一種檢測雜色曲霉素的elisa試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及檢測雜色曲霉素的ELISA試劑盒。
背景技術(shù)：
雜色曲霉素(Sterigmatocys簡稱ST)是一種雜環(huán)化合物(圖)具有很強(qiáng)的肝及腎臟毒素，能誘發(fā)多種腫瘤。南非某些地區(qū)的肝癌高發(fā)可能與ST有關(guān)。雜色曲霉素是，可導(dǎo)致膽管癌和肝癌，有致突變性，但對食品的污染頻率較低。ST還可轉(zhuǎn)化成更強(qiáng)烈的致癌物黃曲霉毒素。ST還能引起一些動(dòng)物疾病。ST可有10多種真菌代謝產(chǎn)生，在人工培養(yǎng)基的產(chǎn)量高達(dá)10g/kg。已知可被ST污染的食品包括:大米、小麥、玉米、花生、大豆、火腿、奶酪、咖啡等。雜色曲霉素經(jīng)三氯化鋁噴霧后加熱，可在365nm波長紫外光下呈黃色熒光。衛(wèi)生研究所建立的檢測雜色曲霉素的薄層色譜法已于1984年列為國家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T5009.25-1996)。該法對大米、玉米、小麥的最低檢出量為25 μ g/kg,黃豆、花生為50yg/kg。雜色曲霉素的
結(jié)構(gòu)如下:
權(quán)利要求
1.一種抗雜色曲霉素的抗體，其特征在于，所述的抗體包括輕鏈和重鏈，其中所述輕鏈的氨基酸的序列如序列表SEQ ID NO:1所示，所述重鏈的氨基酸的序列如序列表中SEQ IDNO:2所示。
2.編碼權(quán)利要求1所述抗體的核苷酸序列。
3.權(quán)利要求1所述的抗體在制備檢測雜色曲霉素試劑、藥劑或試劑盒中的應(yīng)用。
4.一種檢測雜色曲霉素的ELISA試劑盒，包括權(quán)利要求1所述的抗體。
5.權(quán)利要求4所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述的抗體帶有生物標(biāo)記或化學(xué)標(biāo)記，所述生物標(biāo)記或化學(xué)標(biāo)記為突光標(biāo)記、放射性標(biāo)記或酶標(biāo)記。
6.權(quán)利要求5所述的ELISA試劑盒，其特征在于，所述的酶標(biāo)記為辣根過氧化酶標(biāo)記。
7.權(quán)利要求5所述的ELISA試劑盒，還包括:辣根過氧化物酶底物緩沖液、雜色曲霉素標(biāo)準(zhǔn)品、偶聯(lián)BSA的雜色曲霉素、陰性對照樣品BSA。
8.—種檢測雜色曲霉素的方法，包括以下步驟: a)用包被液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液)稀釋BSA-ST至濃度為2 μ g/ml，取稀釋后的BSA-ST加入酶標(biāo)板中，每孔100μ 1，4°C過夜； b)洗滌液(PH7.4PBS)清洗酶標(biāo)板3次，每次在搖床上搖5_8min ； c)將待測樣品和100μ I 按 I: 3000-1: 5000 稀釋的 HRP-Sulfo-SMCC-ASPl 稀釋液，同時(shí)加入到包被的酶標(biāo)板中，37°C孵育2h，每個(gè)樣品包被2個(gè)孔，同時(shí)將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋依次為 5ng/ml、10 ng/ml、40ng/ml、160ng/ml、640ng/ml、2560ng/ml,每孔 100 μ I ； d)再用洗滌液清洗3次，加辣根過氧化物酶底物緩沖液100μ 1，顯色5min后，加入終止液100 μ I,終止顯色； e)用酶標(biāo)儀檢測0D450的值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而根據(jù)吸光值判斷所測樣品中ST的濃度。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測雜色曲霉素的ELISA試劑盒，所述試劑盒包括抗雜色曲霉素抗體，所述抗體包括輕鏈和重鏈，其中輕鏈的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，重鏈的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示，本發(fā)明公開了制備上述抗體的方法。本發(fā)明所述的ELISA檢測試劑盒，還包括辣根過氧化物酶底物緩沖液、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品ST(100ug/ml，0.1ml)、包被原BSA-ST、陰性對照樣品BSA，本發(fā)明同時(shí)還公開了上述試劑盒的使用方法。
文檔編號C07K16/14GK103193884SQ20131013697
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月19日
發(fā)明者江飛劍, 王海彬, 楊承剛, 韋國棟 申請人:中華人民共和國臺(tái)州出入境檢驗(yàn)檢疫局