用活性炭梯度洗脫從地黃提取甘露三糖單體的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用活性炭梯度洗脫從地黃提取甘露三糖單體的方法,其步驟是將地黃根用10倍量的水超聲提取或水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，提取液減壓濃縮成浸膏，浸膏溶解后上活性炭色譜柱，先以重蒸水、5%乙醇溶液、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫除去單糖、二糖及四糖，再以15%乙醇溶液洗脫4-5倍柱體積，收集15%乙醇洗脫液，減壓冷凍干燥或減壓低溫加熱干燥15%乙醇洗脫液，即得甘露三糖單體。本發(fā)明簡(jiǎn)單快速，具有分離效率高、環(huán)保、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，解決了現(xiàn)有技術(shù)問(wèn)題。用活性炭色譜柱分離、重蒸水和不同濃度乙醇梯度洗脫從地黃提取甘露三糖單體成分的純度達(dá)99%，提取率達(dá)到3.2%（g/g）。
【專利說(shuō)明】用活性炭梯度洗脫從地黃提取甘露三糖單體的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種從玄參科植物地黃中分離純化制備甘露三糖單體的方法，即利用 活性炭柱色譜法從地黃中分離純化制備高純度的甘露三糖單體的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 地黃為玄參科植物地黃Wwiifliosa Libosch.)的新鮮或干燥塊根。地 黃是我國(guó)常用的大宗中藥，2010版《中國(guó)藥典》收載的90多種成方制劑中有地黃，占收載 成方制劑三分之一，如經(jīng)典名方"六味地黃丸"、"金匱腎氣丸"等。
[0003] 現(xiàn)代研究表明地黃中含有復(fù)雜的化學(xué)成分，包括糖類、環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷 類、紫羅蘭酮類、黃酮類、地黃腦苷類、留乙醇類、氨基酸類等近百種，其中含量最高的是糖 類成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，地黃中的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)之一甘露三糖具有促進(jìn)造血細(xì)胞的增 殖、提高免疫力、降血糖等作用。
[0004] 地黃市場(chǎng)需求量一直很大，市場(chǎng)行情上漲，但是《中國(guó)藥典》目前不能有效地質(zhì)控 地黃，為了有效地保證地黃質(zhì)量，必須進(jìn)一步明確地黃的活性成分，得到不同成分單體。
[0005] 1971年Tomoda等采用鮮地黃，用熱乙醇和熱水提取，以陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和陰離子 交換樹(shù)脂交換得到中性部分，水蘇糖含量達(dá)到64. 9 %，但沒(méi)有得到甘露三糖單體的報(bào)道。
[0006] 目前文獻(xiàn)報(bào)道，地黃中甘露三糖的分離純化方法有水提醇析法、水蘇糖水解反應(yīng) 法、酶催化水解反應(yīng)法。
[0007] 水提醇析法：加4倍水，沸水浸提6 h，提取2次，將水提液進(jìn)行70 %醇析處理 后水蘇糖的含量大大降低，有利于甘露三糖的分離，為甘露三糖的精制提供了有效的工 藝參數(shù)。（郭威，溫學(xué)森，王少云，趙宇."地黃中活性成分甘露三糖提取工藝研究"，ACTA UNIVERSITATIS TRADITIONIS MEDICALIS SINENSIS PHARMACOLOGIAEQUE SHANGHAI, 2007, 21 (6) :32-35) 水蘇糖水解反應(yīng)法：先用鮮地黃制備得到水蘇糖，在PH2. 5、90 °C和24 h條件下，水蘇 糖水解成為甘露三糖，90. 63 %的水蘇糖可以水解。水蘇糖降解生成三糖的方式有兩種：一 是生成半乳糖和棉子糖，二是生成果糖和甘露三糖。（武衛(wèi)紅，溫學(xué)森，趙宇."甘露三糖的 制備及其工藝優(yōu)化"，中藥材，2007,30 (7):848-853)。
[0008] 酶催化水解反應(yīng)法：使用β -D-呋喃糖苷酶水解水蘇糖，得到白色粉末狀的甘露 三糖，酶催化水解反應(yīng)具有專屬性高，條件溫和，但需嚴(yán)格控制pH條件、酶的純度，否則無(wú) 法得到純度很高的單體。（TomodaM, et al. Water soluble constituents of Rehmanniae Radix, Cabohydrates and acids of Rehmannia glutinosa， hueingensis. Cheml Pharml Bull，1971，19 ( 7) :1455 ;姚新生，等·天然藥物化學(xué)·北京：人民衛(wèi)生出版社，2001: 831) 綜觀上述，從地黃中直接分離制備甘露三糖單體難度大，存在制備繁瑣、甘露三糖單體 純度低等問(wèn)題。如何快速、高效從地黃藥材中分離純化得到甘露三糖單體成分是目前地黃 研究熱點(diǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 為此，本發(fā)明另僻蹊徑，其目的旨在提供一種用活性炭梯度洗脫從地黃提取甘露 三糖單體的 方法。該方法具有簡(jiǎn)便、快速、低成本的特點(diǎn)。
[0010] 本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)： 一種用活性炭梯度洗脫從地黃提取甘露三糖單體的方法，包括如下步驟： (1) 稱取地黃根，清洗干凈，粉碎； (2) 用干凈地黃根量的10倍量的水超聲提取或水煎煮提取，每次1 h，合并所得藥液，濾 過(guò)； (3) 濾液減壓濃縮干燥，得干浸膏； (4) 活性炭做為色譜柱固定相，取活性炭用水拌勻，濕法裝柱，所用柱內(nèi)徑為3. 5 cm， 柱長(zhǎng)40 cm ; (5) 稱取浸膏，用重蒸水完全溶解后，在常壓下在1- 6 ml/min的流速下上活性炭色譜 柱，色譜柱中活性炭的重量為浸膏重量的1 -12倍； (6) 待上樣完畢，在3- 8 ml/min的流速下，先用重蒸水沖洗至無(wú)色，再用5 %、10 %、20 %、 15 %乙醇梯度洗脫4倍-5倍量柱體積，收集15 %乙醇流份； (7) 將15 %乙醇洗脫溶液在壓力-5. 7 MPa，溫度-70 °C減壓冷凍干燥；或壓力為，溫度 30 °C，減壓低溫加熱干燥得甘露三糖單體產(chǎn)品。
[0011] 甘露三糖單體分子結(jié)構(gòu)式為：

【權(quán)利要求】
1. 一種用活性炭梯度洗脫從地黃提取甘露三糖單體的方法，包括如下步驟： a. 稱取地黃根，清洗干凈，粉碎； b. 用干凈地黃根量的10倍量的水超聲提取或水煎煮提取，每次1 h，合并所得藥液，濾 過(guò)； c. 濾液減壓濃縮干燥，得干浸膏； d. 活性炭做為色譜柱固定相，取活性炭用水拌勻，濕法裝柱，所用柱內(nèi)徑為3. 5 cm， 柱長(zhǎng)40 cm ; e. 稱取浸膏，用重蒸水完全溶解后，在常壓下在1- 6 ml/min的流速下上活性炭色譜 柱，色譜柱中活性炭的重量為浸膏重量的1 -12倍； f. 待上樣完畢，在3- 8 ml/min的流速下，先用重蒸水沖洗至無(wú)色，再用5 %、10 %、20 %、 15 %乙醇梯度洗脫4倍-5倍量柱體積，收集15 %乙醇流份； g. 將15 %乙醇洗脫溶液在壓力-5. 7 MPa，溫度-70 °C減壓冷凍干燥；或壓力為-0· 070 MPa，溫度30 °C，減壓低溫加熱干燥得甘露三糖單體產(chǎn)品。
【文檔編號(hào)】C07H1/08GK104059111SQ201410209371
【公開(kāi)日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年5月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月19日
【發(fā)明者】邱建國(guó), 李茂星, 賈正平, 張汝學(xué), 張泉龍 申請(qǐng)人:邱建國(guó), 李茂星, 賈正平