專利名稱：生長激素促分泌素的多晶型物的制作方法
背景技術(shù)：
從垂體中分泌的生長激素刺激能生長的身體的所有組織的生長。此外，已知生長激素對(duì)身體的代謝過程具有下面主要作用(1)在身體的所有細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成的速度增加；(2)在身體的細(xì)胞中碳水化合物的利用速度減??；(3)游離脂肪酸的移動(dòng)增大和利用脂肪酸的能量提高。生長激素分泌的不足可導(dǎo)致各種內(nèi)科疾病，例如侏儒癥。
已知有各種方法釋放生長激素。例如化學(xué)藥品，例如精氨酸、L-3，4-二羥基苯丙氨酸(L-DOPA)、胰高血糖素、抗利尿激素和胰島素誘導(dǎo)的血糖過低癥，以及活動(dòng)度，例如睡眠和運(yùn)動(dòng)，通過以某種方式作用于下丘腦直接引起從垂體中釋放生長激素，或降低生長激素釋放抑制因子的分泌，或提高已知的促分泌素生長激素釋放因子(GRF)，或未知的內(nèi)生生長激素釋放激素，或者所有這些因素。
在希望提高生長激素水平的情況下，一般通過提供外源生長激素，或給與GRF或刺激生長激素產(chǎn)生和／或釋放的肽化合物解決所述問題。兩種情況都需要化合物的肽基特性，所以需注射給藥。最初，生長激素的來源是尸體的垂體腺的提取物。結(jié)果得到的產(chǎn)物很昂貴，同時(shí)隨之也給生長激素受體帶來傳播與垂體腺來源有關(guān)的疾病之危險(xiǎn)。重組體生長激素是可得到的，同時(shí)不再有疾病傳染的任何危險(xiǎn)，但仍是很昂貴的產(chǎn)物，必須通過注射或鼻噴霧給藥。也已經(jīng)開發(fā)了刺激內(nèi)源生長激素釋放的其他化合物。
特別是一些螺環(huán)化合物作為非肽生長激素促分泌素在美國專利5，536，716，PCT專利申請(qǐng)WO94／13696和Proc．Natl．Acad．Sci．USA，927001-7005(1995．7．)中公開。這些化合物具有刺激固有的或內(nèi)生的生長激素釋放的能力。因此例如對(duì)于固有生長激素不足的人用于治療需要刺激生長激素產(chǎn)生或分泌的疾病，或用于為食用或羊毛而生產(chǎn)的動(dòng)物其中刺激生長激素結(jié)果將得到較大的產(chǎn)量更多的動(dòng)物。
具有下面結(jié)構(gòu)式的螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽是這里公開的優(yōu)選化合物
美國專利5，536，716和PCT專利公開WO94／13696公開了制備該化合物的方法(參見實(shí)施例18，19和55)。特別是實(shí)施例55說明通過從乙酸乙酯-乙醇-水中重結(jié)晶所制備的化合物的熔點(diǎn)是“166-168℃”。隨后該化合物鑒定為在這里稱為“Ⅱ型”的多晶型化合物。Proc．Natl．Acad．Sci．USA，92，7001-7005(1995．7．)說明以單水合物分離出的該化合物的熔點(diǎn)是168-170℃，但是僅公開了制備該化合物的很一般的方法，未公開怎樣結(jié)晶該化合物。
藥物化合物的形態(tài)對(duì)涉及開發(fā)合適劑型方面是有意義的，因?yàn)槿绻谂R床和穩(wěn)定性研究中形態(tài)不保持恒定，則應(yīng)用或測(cè)定的準(zhǔn)確劑量各批之間便不可比較。在藥物化合物為應(yīng)用而生產(chǎn)時(shí)，重要的是識(shí)別提供給各劑型中的形態(tài)，以保證生產(chǎn)過程中使用相同的形式，并且保證各劑型包含相同量的藥物。因此，絕對(duì)必要保證是以單一形態(tài)存在，或一些已知形態(tài)共同存在。此外，一些形態(tài)可以顯示熱力學(xué)或吸水穩(wěn)定性提高，和比藥物制劑中包含物的其他形態(tài)更為適宜。本發(fā)明中用語“多晶型化合物”的化學(xué)實(shí)體相同，但是結(jié)晶結(jié)構(gòu)不同。
發(fā)明概要本發(fā)明是關(guān)于多晶型化合物N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽，以及制備所述多晶型化合物的方法。
本發(fā)明還涉及含有上述多晶型化合物作為活性組分的藥物制劑，和上述多晶型化合物和其制劑在治療一些疾病中的用途。
本發(fā)明的多晶型化合物是生長激素的促分泌素，用于食用動(dòng)物促進(jìn)其生長，從而更有效地提供食用肉產(chǎn)物的生產(chǎn)，和用于人治療以生長激素分泌不足為特征的生理或內(nèi)科疾病，或治療通過生長激素的合成代謝作用可使之改善的內(nèi)科疾病。就藥物制劑中的內(nèi)含物的熱力學(xué)穩(wěn)定性和適合性方面而言，所述多晶型化合物優(yōu)于其他已知晶型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；輀3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽。
發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明是關(guān)于新的多晶型化合物N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽和制備所述多晶型化合物的方法。
化合物N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽具有下式結(jié)構(gòu)
該化合物是誘導(dǎo)人和動(dòng)物生長激素釋放的生長激素的促分泌素。該性能可用于促進(jìn)食用動(dòng)物的生長以更有效的提供食用肉產(chǎn)物的生產(chǎn)，和可用于人治療以生長激素分泌不足為特征的生理或內(nèi)科疾病，以及治療通過生長激素的合成代謝作用可改善的內(nèi)科疾病。
這些具體的多晶型化合物(在本發(fā)明中稱為“Ⅰ型”，“Ⅱ型”，“Ⅲ型”，“Ⅳ型”，“Ⅴ型”，“Ⅵ型”，“Ⅶ型”，“Ⅷ型”，“Ⅸ型”和“Ⅹ型”結(jié)晶的化合物)具有優(yōu)于該化合物其他晶型的性質(zhì)，以至它們更適宜包含在藥物制劑中。根據(jù)晶型的熱力學(xué)穩(wěn)定性和不吸濕特性，藥物開發(fā)的優(yōu)選晶型是Ⅰ型。而根據(jù)制劑的性質(zhì)，特別是就制片的壓縮性質(zhì)而言，藥物開發(fā)的其他優(yōu)選晶型是Ⅳ型。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Ⅳ型比其他晶型有更高的堆積密度。
本發(fā)明還涉及制備Ⅰ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽結(jié)晶的方法，包括在約50℃用甲磺酸(約1．1當(dāng)量)處理N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺的游離堿在含有乙醇(約8％(體積))的乙酸乙酯中的溶液，加熱至約55℃，并冷卻至約45℃。
然后，可任選將溫度升至約51℃，保持2-24小時(shí)。
本發(fā)明還關(guān)系到制備Ⅰ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的另一種方法，包括在約50-55℃將甲磺酸(約1．1當(dāng)量)和Ⅰ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基-丙酰胺甲磺酸鹽交替加入N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺的游離堿在含有乙醇(約8％(體積))的乙酸乙酯中的溶液中(其中加入的相對(duì)順序不嚴(yán)格要求)，接著在約55℃加熱約2-15小時(shí)，冷卻至約25-30℃，陳化約2-3小時(shí)。
本發(fā)明還涉及制備Ⅰ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的另一種方法，包括在約25℃攪拌Ⅱ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的異丙醇溶液約2-24小時(shí)。
本發(fā)明也涉及制備Ⅱ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的方法，包括在約50℃用甲磺酸(約1．1當(dāng)量)處理N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺的游離堿在含有乙醇(約8％(體積))的乙酸乙酯中的溶液，加熱至約55℃，并冷卻至室溫。
本發(fā)明還涉及制備Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的方法，包括將任意形態(tài)組成的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽溶于乙醇／水(優(yōu)選25∶75v／v)的溶液中；優(yōu)選在溫度40℃從溶液中蒸發(fā)溶劑；將得到的固體研磨成細(xì)粉；和將細(xì)粉暴露于約75％的相對(duì)濕度下。
本發(fā)明還涉及制備Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的另一種方法，包括從乙酸乙酯／乙醇／水(優(yōu)選24．8／1．6／1．95(v／v／v))的溶液中重結(jié)晶任意形態(tài)組成的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽。
本發(fā)明還涉及制備Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的另一種方法，包括在室溫下將Ⅰ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽暴露于大于約75％，優(yōu)選約88％的相對(duì)濕度下足夠長時(shí)間。
本發(fā)明還涉及制備Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的另一種方法，包括在約25℃下從Ⅰ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽在含有約2．8％(重量)水的乙酸異丙酯／乙醇(90∶10(v／v))中的漿液中分離。
本發(fā)明還涉及制備Ⅴ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的方法，包括在室溫下將Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽暴露于低于30％的相對(duì)濕度下。
本發(fā)明還涉及制備Ⅵ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的方法，包括在接近室溫?zé)o水分條件下，例如在約25℃的過濾的干燥氮?dú)夥障?，干燥V型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽。
本發(fā)明還涉及制備Ⅶ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的方法，包括從Ⅰ型或Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽在含有約1．5％(重量)水的乙酸異丙酯／乙醇(90∶10(v／v))中的漿液中分離。
本發(fā)明還涉及制備Ⅷ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的方法，包括在干燥惰性氣體，例如干燥氮?dú)夥障聦ⅱ餍偷腘-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽脫水足夠長時(shí)間。
本發(fā)明還涉及制備Ⅸ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的方法，包括制備任意形態(tài)組成的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的水溶液，接著在接近室溫和20％相對(duì)濕度下通過控制蒸發(fā)分離形成的固體。
本發(fā)明還涉及制備Ⅹ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的方法，包括在室溫和室內(nèi)濕度下干燥Ⅸ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽足夠長時(shí)間。
本發(fā)明還涉及制備X型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的另一種方法，包括將Ⅰ型N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽暴露于100％的相對(duì)濕度下約1-4天。
同樣，本發(fā)明還針對(duì)制備形態(tài)同一的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的方法，包括本說明書中記述的任何方法。
本發(fā)明的化合物，即新的多晶型化合物N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽，是生長激素促分泌素，將其用于食用動(dòng)物促進(jìn)其生長，因而更有效地提供食用肉產(chǎn)物的生產(chǎn)，和用于人治療以生長激素分泌不足為特征的生理或內(nèi)科疾病，和治療通過生長激素的合成代謝作用可加以改善的內(nèi)科疾病。因此，本發(fā)明還涉及含有多晶型化合物作為活性組分的藥物制劑，和所述多晶型化合物和其制劑在治療一些疾病中的用途。
差示掃描量熱池[DSC]在敞口杯中，在氮?dú)饬飨?，?0℃／分加熱時(shí)Ⅰ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的DSC曲線表示由于熔化簡單吸熱，峰值溫度約180℃和外推得出熔化開始溫度(熔點(diǎn))約170℃，締合熱約53J／g。
在敞口杯中，在氮?dú)饬飨?，?0℃／分加熱時(shí)，Ⅱ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的DSC曲線表示由于熔化簡單吸熱，峰值溫度約174℃和外推得出開始熔化溫度(熔點(diǎn))約165℃，締合熱約37J／g。
在敞口杯中，在氮?dú)饬飨?，?0℃／分加熱時(shí)，Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的DSC曲線表示在約45℃失水吸熱，接著由于Ⅵ型結(jié)晶熔化吸熱，峰值溫度約134℃，外推得出熔化開始溫度(熔點(diǎn))約129℃，締合熱約23J／g。
DSC數(shù)據(jù)[試樣在氮?dú)夥障乱?0℃／分的速度加熱(外推得出熔化開始溫度)]Ⅰ型170℃(熔化吸熱)Ⅱ型165℃(熔化吸熱)Ⅵ型129℃(熔化吸熱)Ⅰ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽是相對(duì)無水的多晶型化合物，具有下列特性熔點(diǎn)169℃，在異丙醇中的溶解度4．6mg／mL。
Ⅱ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽是無水的多晶型化合物，具有下列特性熔點(diǎn)158℃，在異丙醇中的溶解度12．3mg／mL。
Ⅲ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽是水合物，具有下列特性失水吸熱峰值溫度46℃，接著微熔／分解吸熱，外推得出熔點(diǎn)開始溫度123℃。
Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽是水合物，具有下列特性失水吸熱峰值溫度45℃，接著熔化／分解吸熱，外推得出熔化開始溫度129℃(據(jù)推測(cè)由于Ⅵ型結(jié)晶的熔化／分解)。
Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽看來是吸濕的水合物，每摩爾N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽含有3．5摩爾水。
Ⅴ型的N[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽看來是吸濕的水合物，每摩爾N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽含有1摩爾水。
Ⅵ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽看來是無水的多晶型化合物，其特征是熔點(diǎn)129℃。
Ⅶ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽是水合物，具有下列特性廣泛失水吸熱峰值溫度60℃，接著熔化／分解吸熱，外推得出熔化開始溫度144℃(推測(cè)由于Ⅷ型結(jié)晶的熔化／分解)。
Ⅷ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽是無水的多晶型化合物，其特征是熔點(diǎn)144℃。
Ⅹ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的特征是廣泛失水吸熱峰值溫度49℃。
Ⅹ-射線粉末衍射(XRPD)Ⅹ-射線粉末衍射研究廣泛用于說明分子結(jié)構(gòu)、結(jié)晶度和多晶現(xiàn)象。用具有銅Kα輻射的philips APD3720自動(dòng)粉末衍射儀采集Ⅹ-射線粉末衍射(XRPD)圖象。用保持在室溫下的試樣從2°至40°(2θ)范圍測(cè)定。
Ⅰ型結(jié)晶的特征是在約6．5，14．7，16．9，17．1，17．9，19．5，21．1，21．7和22．0°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
Ⅱ型結(jié)晶的特征是在約4．8，11．8，17．5，19．4，21．6，21．9，22．5和22．7°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
Ⅲ型結(jié)晶的特征是在約13．8，14．1，18．0，18．8，19．5，20．1，20．6，21．8和25．7°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
Ⅳ型結(jié)晶的特征是在約16．0，16．2，18．3，20．1，21．0和24．2°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
V型結(jié)晶的特征是在約14．8，17．1，17．6，19．0，19．1，19．4，20．6，21．5和21．8°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
Ⅵ型結(jié)晶的特征是在約9．8，14．0，14．8，17．1，17．6，19．0，19．5，20．6和21．6°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
Ⅶ型結(jié)晶的特征是在約9．1，11．3，17．1，17．4，20．0，22．1和24．5°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
Ⅷ型結(jié)晶的特征是在約11．5，11．6，18．1，19．6，22．5，24．7和24．8°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
Ⅸ型結(jié)晶的特征是在約8．0，12．1，15．3，15．8，19．6，19．7，21．1，22．3和23．7°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
Ⅹ型結(jié)晶的特征是在約15．5，15．8，18．0，18．4，18．6，19．4，20．7，20．8，23．9和24．8°(2θ)出現(xiàn)主要反射Ⅹ-射線粉末衍射圖象。
這些XRPD圖象證明所有Ⅰ-Ⅹ型結(jié)晶是不同的晶形。
顯微鏡觀察法在單色偏振光放大100倍條件下進(jìn)行多晶型化合物觀察。Ⅰ型和Ⅱ型結(jié)晶是針狀顆粒。Ⅰ型和Ⅱ型結(jié)晶在偏振光下看來是雙折射的。
吸濕性在暴露于不同的控制濕度時(shí)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型結(jié)晶的固體試樣的總揮發(fā)量(由TGA分析測(cè)定)列于下面表中。發(fā)現(xiàn)Ⅰ型結(jié)晶含有0．97wt％水；Ⅱ型結(jié)晶含有0．56wt％水；Ⅲ型結(jié)晶含有4．5-5．0wt％水；Ⅳ型結(jié)晶含有9．5-10．0wt％水。
吸濕性通過將固體化合物保存于恒定相對(duì)濕度的室中測(cè)定。在室溫下無水的Ⅰ型和Ⅱ型結(jié)晶相比較表明Ⅱ型結(jié)晶是吸濕的，并表明在65％RH(相對(duì)濕度)下水分開始大大增加。除了在大于76％RH存放外，Ⅰ型結(jié)晶的水分未表現(xiàn)出顯著增加。結(jié)果列于下面的表1和2中。
表1室溫(48小時(shí))Ⅰ型Ⅱ型％RH％增加／減少％增加／減少0 -0．02 +0．0811-0．05 +0．0233 -+0．3347+0．21 +0．3965+0．37 ＞10．0a76+0．12 ＞10．0a100 ＞12．0＞10．0a，b(a=試樣變成粘性半固體)(b=在暴露于環(huán)境濕度下時(shí)轉(zhuǎn)化為Ⅳ型)
表2室溫(96小時(shí))Ⅰ型％RH％增加／減少7 +0．422+0．347+0．568+0．688+12．9*100+23．9*(*=潮解的物質(zhì))通過在室溫及室內(nèi)相對(duì)濕度下將水合的Ⅲ型和Ⅳ型的N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽存放48小時(shí)，評(píng)價(jià)水合的Ⅲ型和Ⅳ型結(jié)晶。Ⅲ型結(jié)晶表示在33％RH下48小時(shí)后水分增加。雖然直到在100％RH下存放Ⅳ型結(jié)晶也未明顯增加水分，但是在11％RH或低于11％RH下存放時(shí)Ⅳ型結(jié)晶失去水合水。結(jié)果列于下面表3中。
表3室溫(48小時(shí))Ⅲ型 Ⅳ型％RH％增加／減少％增加／減少0- -7．811-0．15 -4．933+2．23 +0．347+3．99 +0．766 - +1．476+3．76 +1．5100 - +5．3該數(shù)據(jù)表明Ⅰ型化合物是相對(duì)無水的。
溶解度室溫下蒸餾水中I型結(jié)晶的溶解度＞100mg／mL。在緩沖溶液(pH4-9)中Ⅱ型結(jié)晶的溶解度(RT)＞100mg／mL。在乙醇／水混合物中Ⅰ型結(jié)晶的溶解度如下所示溶解度％乙醇／H2O(mg／mL)25／75 ＞10050／50 ＞10075／25 ＞90100％乙醇 ＞90熱穩(wěn)定性-純化合物純固體化合物的穩(wěn)定性通過在玻璃螺絲帽管形瓶中將藥物存放于暗處測(cè)定。試樣用HPLC分析，定量分析母體化合物。使用的恒溶劑洗脫法概述如下柱Beckman Ultrasphere ODS(250×4．6mm，5μ)流動(dòng)相0．1％TEA，pH4．0，H3PO4∶乙腈(65∶35)流速 1．0mL／min檢測(cè)波長 228nm試驗(yàn)時(shí)間 14min柱溫度室溫注入體積20μL N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽(50μg／mL)如下所示，Ⅰ型和Ⅱ型結(jié)晶計(jì)算結(jié)果均按重量計(jì)。
Ⅰ型結(jié)晶初始％℃6周 17周40100．198．760100．7101．380100．799．4
Ⅱ型結(jié)晶初始％℃1周 2周 4周 8周12周244099．7100．799．5- 100．1 100．16099．499．6 100．3 100．0 101．0 100．88099．2100．399．299．8 100．4 --這些結(jié)果表明純固體的Ⅰ型和Ⅱ型結(jié)晶具有良好的熱穩(wěn)定性。制備目的化合物的方法概述如下方案Ⅰ
方案Ⅰ(續(xù))
如方案1所述，在加氫之前CBZ-螺二氫吲哚1用Darco(20％(重量))處理。激烈攪拌下在乙醇中于65℃用10％ Pd／C進(jìn)行催化加氫。
在二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)和1-羥基苯并三唑(HOBt)存在下，使1b在乙酸異丙酯和水中的溶液與市售N-BOC-O-芐基-D-絲氨酸偶合。在過濾出二環(huán)己基脲(DCU)副產(chǎn)物后，分離兩相濾液，有機(jī)層依次用1M氫氧化鈉水溶液，0．5M鹽酸水溶液和最后用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。如果在iPrOAc／H2O中的游離胺溶液用DCC和HOBT處理，接著在室溫下加入所述氨基酸并反應(yīng)3-5小時(shí)，可改進(jìn)該偶合作用。然后真空濃縮反應(yīng)混合物，并將溶劑乙酸異丙酯換成乙醇。該溶劑轉(zhuǎn)換一般通過快速“加入和放出”3倍物料體積溶劑以除去乙酸異丙酯。
通過在35-40℃在乙醇中用甲磺酸(MsOH)(3當(dāng)量)處理，除去11的BOC-基。在乙酸異丙酯和1M氫氧化鈉水溶液之間分配，得到12。
12與N-BOC-α-氨基異丁酸的偶合最好在DCC和HOBt(各1．1當(dāng)量)存在下，在兩相溶劑體系，乙酸異丙酯／水(1∶1)中進(jìn)行。通過過濾、除去DCU、分層和依次用1M氫氧化鈉水溶液，0．5M鹽酸水溶液和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌有機(jī)層，得到14。
為了隨后用甲磺酸解離BOC基，將混合物中的溶劑轉(zhuǎn)換成乙醇。14脫保護(hù)基比11脫保護(hù)基更難，需要濃的乙醇／甲磺酸溶液，和加熱至35-40℃。在萃取處理(EtOAc-NaOH)后，分離游離胺15。有機(jī)層用1N NaOH充分洗滌，以保證完全除去甲磺酸。
游離堿15的乙酸乙酯溶液真空濃縮至小體積，通過“加入和放出”2倍物體體積90／10乙酸乙酯／乙醇，接著2倍物料體積乙酸乙酯進(jìn)行共沸干燥。得到干燥的稍微混濁的游離堿15的乙酸乙酯溶液，用DarcoG60(25％(重量))在室溫下處理約10小時(shí)。加濾劑過濾分離Darco，得到游離堿15。
由15生成甲磺酸鹽16的反應(yīng)在約50℃，在EtOAc中用1．1當(dāng)量MsOH進(jìn)行。游離堿15用8％(體積)EtOH和1當(dāng)量H2O處理，并加熱至55℃直到全部溶解。冷卻至室溫并攪拌得到的漿液4小時(shí)，得到稱為Ⅱ型結(jié)晶的結(jié)晶物質(zhì)16[在IPA中的溶解度=12mg／mL]。
進(jìn)行Ⅱ型結(jié)晶向Ⅰ型結(jié)晶的轉(zhuǎn)化，其中按上述方法在EtOAc-EtOH中形成鹽，但是將初始鹽溶液(55℃)冷卻至45℃，而不是冷卻至室溫。結(jié)晶在所述溫度下開始出現(xiàn)，漿液隨時(shí)間變得更稠。將溫度升至51℃，漿液陳化過夜。預(yù)期完全轉(zhuǎn)化為16的Ⅰ型結(jié)晶。
優(yōu)選通過在50-55℃下將I型結(jié)晶的種晶加入游離堿在EtOAc-EtOH中的溶液中，接著陳化，進(jìn)行Ⅱ型結(jié)晶向Ⅰ型結(jié)晶的轉(zhuǎn)化。因此，游離堿15可以在50-55℃下在8％乙醇的乙酸乙酯溶液中用1．1當(dāng)量甲磺酸處理。然后整批反應(yīng)混合物用約2％(重量)Ⅰ型的甲磺酸鹽16接種，然后在55℃陳化過夜。將該批反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并陳化2-3小時(shí)。產(chǎn)物在室溫和氮?dú)夥障逻^濾分離，在35℃真空干燥，篩分，得到甲磺酸鹽16。
通過在約50℃將MsOH(1．1eq)和I型結(jié)晶的種晶加入游離堿在EtOAc-EtOH中的溶液中的步驟改變，也可以生成甲磺酸鹽16，因而MsOH和種晶的加入順序并不嚴(yán)格要求。
本發(fā)明的多晶型化合物作為生長激素的促分泌素的用途，可以用現(xiàn)有技術(shù)中的已知方法，例如Smith等在Science．260，1640-1643(1993)中描述的測(cè)試方法(參見其中圖2的內(nèi)容)證明。用上述測(cè)試方法，本發(fā)明的所有多晶型化合物均具有生長激素的促分泌素的活性。上述結(jié)果表示本發(fā)明的多晶型化合物作為生長激素的促分泌素的固有活性。
本發(fā)明的釋放生長激素的化合物作為唯一的手段用于體外了解在垂體水平上如何調(diào)節(jié)生長激素的分泌。這包括用于評(píng)價(jià)設(shè)想的和已知的影響生長激素分泌的許多因素，例如年齡、性別、營養(yǎng)因素、葡萄糖、氨基酸、脂肪酸，以及禁食和非禁食狀況等。另外，本發(fā)明的化合物可用于評(píng)價(jià)其他激素如何改變生長激素釋放活性。例如已經(jīng)證實(shí)生長激素釋放抑制因子抑制生長激素釋放。重要的且需要研究的有關(guān)影響生長激素釋放的其他重要激素包括性腺激素，例如睪酮、雌二醇，和黃體酮；腎上腺激素，例如皮質(zhì)醇和其他皮質(zhì)激素類，腎上腺素和去甲腎上腺素；胰和胃腸激素，例如胰島素、胰高血糖素、促胃液激素、腸促胰液肽；血管作用肽，例如韓蛙皮素、神經(jīng)激肽；和甲狀腺激素，例如甲狀腺素和三碘甲狀腺原氨酸。本發(fā)明的化合物還用于研究某些垂體激素，如生長激素和內(nèi)啡肽對(duì)垂體可能產(chǎn)生負(fù)面或正面反饋?zhàn)饔?，以改善生長激素釋放?？茖W(xué)上的特殊重要性是使用這些化合物來說明介導(dǎo)生長激素釋放的亞細(xì)胞機(jī)理。
本發(fā)明的化合物可以施用于動(dòng)物，包括人，使之在體內(nèi)釋放生長激素。例如所述化合物可施用于有重要商業(yè)價(jià)值的動(dòng)物，例如豬、牛、羊，等等，加速和提高動(dòng)物生長的速度和程度，以改善飼料效率和提高所述動(dòng)物奶產(chǎn)量。此外，本發(fā)明的化合物也可以用于人體內(nèi)作為診斷手段直接測(cè)定垂體是否能釋放生長激素。例如本發(fā)明的化合物可施用于兒童體內(nèi)?？梢詼y(cè)定給藥前和給藥后所取血清試樣的生長激素。比較每個(gè)試樣中生長激素的量，這是直接測(cè)定病人垂體釋放生長激素能力的手段。
因此，在本發(fā)明范圍內(nèi)還包括藥物組合物，其中含有至少一種本發(fā)明的化合物作為活性組分并結(jié)合藥物載體或稀釋劑。所述藥物組合物的活性組分除了包括至少一種本發(fā)明的化合物或具有不同活性的其他組分，例如允許抗菌素生長的物質(zhì)，或治療骨質(zhì)疏松的藥劑或與使分解代謝副作用減至最小的皮質(zhì)甾類結(jié)合，或與提高效率和使副作用減至最小的其他藥物活性物質(zhì)組合外，還可任選包括合成代謝劑。
生長促進(jìn)劑和合成代謝劑包括(但不限于)TRH、二乙基己烯雌酚、雌激素、β-興奮劑、茶堿、促蛋白合成甾醇、腦啡肽、E系列前列腺素、美國專利3，239，345中公開的化合物，例如右環(huán)十四酮酚，和美國專利4，036，979中公開的化合物，例如氧苯噻脲，和美國專利4，411，890公開的肽。
本發(fā)明的化合物還與其他生長激素的促分泌素共同使用，所述生長激素的促分泌素例如美國專利4，411，890和PCT公開WO89／07110，WO89／07111和B-HT 920中描述的生長激素釋放肽GHRP-6，GHRP-1，以及WO93／04081中描述的hexarelin和GHRP-2，或生長激素釋放激素(GHRH，也稱為GRF)和其類似物，或生長激素和其類似物，或生長調(diào)節(jié)素包括IGF-1和IGF-2或α腎上腺素興奮劑，例如氯壓定或5-羥色胺5HTID興奮劑，例如sumitriptan或抑制生長激素釋放抑制劑或其釋放的藥劑，例如毒扁豆堿和吡啶斯的明。本發(fā)明的化合物尤其可以與生長激素釋放因子、其類似物、IGF-1或IGF-2結(jié)合。例如，本發(fā)明的化合物可以與IGF-1結(jié)合治療或預(yù)防肥胖癥。此外，本發(fā)明的化合物可以與視黃酸共同使用以改善由內(nèi)在老化引起的肌肉和皮膚的疾病。
本發(fā)明還涉及制備刺激人和動(dòng)物生長激素釋放的藥物的方法，包括將本發(fā)明的多晶型化合物與藥物載體或稀釋劑混合。
正如本領(lǐng)域技術(shù)熟練的人員熟知的那樣，生長激素已知的和潛在的用途是不同的和多種多樣的。為了刺激內(nèi)源生長激素的釋放，本發(fā)明化合物的施用可以具有與生長激素本身相同的作用和用途。因此本發(fā)明化合物的這些不同的用途可以概述如下刺激中老年人生長激素釋放；治療成年人生長激素不足；預(yù)防糖皮質(zhì)激素分解代謝的副作用；治療骨質(zhì)疏松癥；刺激免疫系統(tǒng)加速傷口愈合；加速骨折的修復(fù)；治療生長發(fā)育遲緩；治療急性或慢性腎衰竭或功能不全；治療生理上的身材矮小，包括生長激素不足的兒童；治療與慢性疾病有關(guān)的身材矮??；治療肥胖癥及與其有關(guān)的發(fā)育遲緩；治療與Prader-Willi綜合癥和Turner氏綜合癥有關(guān)的生長發(fā)育遲緩；加速燒傷病人和大型手術(shù)如胃腸手術(shù)后的康復(fù)和縮短住院時(shí)間；治療子宮生長發(fā)育遲緩和骨骼發(fā)育異常；治療外周神經(jīng)病；替代應(yīng)激反應(yīng)病人的生長激素；治療骨軟骨發(fā)育不良、Noonans綜合癥、精神分裂癥、抑郁癥、Alzheimer氏病、被延誤的傷口愈合和精神喪失；治療肺機(jī)能障礙和呼吸器依賴性；治療大型手術(shù)后蛋白質(zhì)分解代謝應(yīng)答減弱；治療呼吸障礙綜合癥；減少由于慢性病如癌或艾滋病引起的惡病質(zhì)和蛋白質(zhì)損失；使TPN(腸胃外營養(yǎng)總量)異常患者快速增加體重和蛋白質(zhì)增積；治療血胰島素過多癥，包括胰島細(xì)胞增殖癥；輔助治療排卵誘導(dǎo)作用和預(yù)防及治療胃和十二指腸潰瘍；刺激胸腺發(fā)育和防止與年齡有關(guān)的胸功能衰退；病人長期的血液透析的輔助治療；治療免疫抑制病人和提高接種后的抗體反應(yīng)；增加人的總淋巴細(xì)胞數(shù)，特別是使由于身體創(chuàng)傷，如封閉性頭傷或由感染，如細(xì)菌或病毒感染，特別是由人的免疫缺陷病毒感染引起的T4／T8細(xì)胞比例過低的人T4／T8細(xì)胞比例提高；改善肌肉韌力活動(dòng)性，保持皮膚厚度，維持代謝體內(nèi)平衡，維持虛弱的中老年人的腎體內(nèi)平衡；刺激成骨細(xì)胞、骨再構(gòu)，和軟骨生長；刺激伴生動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，和治療伴生動(dòng)物的老化病癥；家畜生長促進(jìn)劑；和刺激羊毛生長。另外，本發(fā)明的化合物用于提高飼料效率，促進(jìn)生長，提高奶產(chǎn)量和改善家畜肉質(zhì)量。同樣，本發(fā)明的化合物用于需要較高生長激素水平合成代謝作用得以治愈的疾病或癥狀的治療方法，包括施用本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的化合物特別用于預(yù)防或治療選自下列的疾病骨質(zhì)疏松癥；分解代謝病；免疫缺陷，包括T4／T8細(xì)胞比例低于正常水平的個(gè)體的免疫缺陷；髖關(guān)節(jié)骨折；中老年人的肌肉骨骼損傷；成年人或兒童生長激素不足；肥胖癥；由于慢性病如艾滋病或癌引起的惡病質(zhì)和蛋白質(zhì)損失；和在需要時(shí)治療由大型外科手術(shù)，損傷或燒傷正恢復(fù)的病人。
此外，本發(fā)明的化合物可用于治療由促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子或由與應(yīng)激反應(yīng)和焦慮有關(guān)的失調(diào)誘導(dǎo)或加重的疾病，包括應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)的抑郁癥和頭痛，腹腸綜合癥，免疫抑制，HIV感染，Alzheimer氏病，胃腸病，神精性厭食癥，出血應(yīng)激反應(yīng)，藥物和酒精脫癮綜合癥，藥癮，和生育力問題。
本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，現(xiàn)有許多用于試圖治療上面列舉的疾病或指征的化合物。其中一些上面描述過的治療劑與本發(fā)明的生長激素促分泌素組合，得到附加的、補(bǔ)償?shù)?、且通常是增效的性質(zhì)，提高這些各種治療劑的生長促進(jìn)作用、合成代謝和合乎需要的性質(zhì)。在這些組合中，所述治療劑和本發(fā)明的生長激素促分泌素于藥劑中之劑量范圍，分別是這些化合物和促分泌素單獨(dú)使用時(shí)的有效劑量乘以1／100至1所得之劑量。
抑制骨吸收的組合療法，預(yù)防骨質(zhì)疏松癥和提高骨折的愈合，可用二膦酸鹽與本發(fā)明的生長激素促分泌素的組合來舉例說明。二膦酸鹽的這些用途已經(jīng)由Hamdy，N．A．T．，在Trends in Endocrinol．Metab．，4，19-25(1993)中題為“代謝骨病中二膦酸鹽的作用”一文中加以綜述。具有這些用途的二膦酸鹽包括阿侖膦酸鹽(alendronate)、替魯膦酸鹽、二甲基-APD、利塞膦酸鹽、依替膦酸鹽、YM-175、氯膦酸鹽、帕米膦酸鹽和BM-210995。根據(jù)二膦酸鹽的效力以其日口服量0．1mg-5g和本發(fā)明的生長激素促分泌素日用量0．01mg／kg體重-20mg／kg體重給藥于病人，可得到骨質(zhì)疏松癥的有效治療。
在使用阿侖膦酸鹽的情況下，為了有效的治療骨質(zhì)疏松癥，將日口服量0．1mg-50mg阿侖膦酸鹽與0．01mg／kg體重-20mg／kg體重本發(fā)明的生長激素促分泌素組合。骨質(zhì)疏松癥和其他骨病癥也可以用本發(fā)明的化合物與降鈣素、雌激素、雷洛昔芬和鈣補(bǔ)充物，例如檸檬酸鈣結(jié)合治療。
用本發(fā)明的化合物與促蛋白質(zhì)合成甾醇，例如羥甲希龍、甲睪酮(methyltesterone)、氟甲睪酮和司坦唑醇結(jié)合，特別在治療老年男性病人中得到合成代謝效果。
本發(fā)明的化合物可以通過口，胃腸外(例如，肌肉內(nèi)，腹膜內(nèi)，靜脈內(nèi)或皮下注射，或植入)，鼻，陰道，直腸，舌下或局部給藥途徑給藥，可以配制成適合于各種給藥途徑的劑型。
口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在上述固體劑型中，活性化合物與至少一種惰性的可藥用載體，如蔗糖、乳糖或淀粉混合。上述劑型還可以含有惰性稀釋劑以外的常用添加物質(zhì)，例如潤滑劑，如硬脂酸鎂。在膠囊劑、片劑和丸劑的情況下，所述劑型還可以含有緩沖劑。片劑和丸劑還可以用腸衣制備。
口服的液體劑型包括可藥用的乳劑、溶液、懸浮液、糖漿劑和酏劑、含有本技術(shù)領(lǐng)域中普通使用的惰性稀釋劑，如水。除了上述惰性稀釋劑外，組合物中還可以含有佐劑，例如濕潤劑、乳化劑、懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑和香味劑。
胃腸外給藥的本發(fā)明制劑包括消毒水溶液或非水溶液，懸浮液或乳液。非水溶劑或賦形劑的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油，例如橄欖油和玉米油、明膠，和可注射的有機(jī)酯，例如油酸乙酯。上述劑型還可以含有佐劑，例如防腐劑、濕潤劑、乳化劑和分散劑。上述劑型可用下述方法消毒，例如，以隔菌濾器過濾，將消毒劑加入組合物中，照射組合物，加熱組合物。上述制劑也可以配制成消毒固體組合物形式，可在使用前直接溶于消毒水或某些其他消毒的可注射介質(zhì)中。
直腸或陰道給藥的組合物優(yōu)選栓劑，其中除了活性組分外還含有賦形劑，例如可可脂或栓劑蠟。
鼻和舌下給藥的組合物也用現(xiàn)有技術(shù)中熟知的一般賦形劑制備。
本發(fā)明的化合物可以以能提供最佳藥物效能的劑量給藥于需要治療的患者(動(dòng)物或人)。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到任何具體應(yīng)用中所需之量隨不同患者而異，不僅與選擇的具體化合物或組合物有關(guān)，而且也與給藥途徑，被治療的病癥性質(zhì)，病人的年齡和身體狀況，同時(shí)進(jìn)行的藥療法，或病人隨后的特定飲食和本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識(shí)的其他因素有關(guān)，但歸根到底所述適宜劑量還要由主治醫(yī)生決定。
本發(fā)明的組合物中活性組分的劑量可以改變，但是活性組分的量必須保證能得到合適的劑型。選擇的劑量取決于希望的治療效果，給藥途徑，治療周期。一般，對(duì)病人和動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物，給藥劑量是每天0．0001-10mg／kg體重，以得到生長激素的有效釋放。優(yōu)選給藥劑量每天約0．001-約25mg／kg體重；更優(yōu)選給藥劑量每天約0．01-約10mg／kg體重。
本發(fā)明的多晶型化合物的制備方法用下列實(shí)施例說明。下列實(shí)施例為舉例說明本發(fā)明之目的而給出，并不應(yīng)構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍和精神之限制。
實(shí)施例1N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺步驟A1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]鹽酸鹽在0℃下向1．20g(5．8mmol)1＇-甲基-1，2-二氫-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶](按照H．Ong，等在J．Med．Chem．，23，981-986(1983)中描述的方法制備的)在20mL無水二氯甲烷中的溶液中加入三乙胺(0．90mL；6．4mmol)和甲磺酰氯(0．49mL；6．35mmol)，攪拌30min。將反應(yīng)混合物倒入15mL飽和碳酸氫鈉水溶液中，并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。合并的有機(jī)相用鹽水(20mL)洗滌，用無水碳酸鉀干燥、過濾，減壓下除去溶劑，得到1．44g甲磺酰胺衍生物，淺黃色油狀物，不用提純即可使用。
在0℃下向上述粗產(chǎn)物在20mL無水1，2-二氯乙烷中的溶液中加入1．0mL(9．30mmol)氯甲酸1-氯乙基酯，然后在室溫下攪拌30分鐘，最后在回流下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物濃縮至約為原體積的三分之一，用20mL無水甲醇稀釋，回流1．5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，和濃縮至約為原體積的一半。過濾沉淀物，用少量冷甲醇洗滌。得到1．0g哌啶HCl鹽，白色固體。濃縮濾液，加入少量甲醇，接著加入乙醚。沉淀的物質(zhì)再過濾一次，用冷甲醇洗滌，和干燥。得到另外的0．49g所需產(chǎn)物?？偖a(chǎn)量1．49g(70％)。1H NMR(CDCl3，200MHz)δ7．43-7．20(m，3H)，7．10(dd，1H)，3．98(bs，2H)，3．55-3．40(bd，2H)，3．35-3．10(m，2H)，2．99(s，3H)，2．15(t，2H)，2．00(t，2H)。
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-2-甲基丙酰胺向0．35g(1．15mmol)(2R)-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-3-[2-(苯基甲氧基)乙基]1-丙酸在13mL二氯甲烷中的溶液中，加入1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]鹽酸鹽(0．325g；1．07mmol)，0．18mL(1．63mmol)N-甲基嗎啉，0．15g(1．18mmol)1-羥基苯并三唑(HOBT)，攪拌15min。加入EDC(0．31g；1．62mol)，繼續(xù)攪拌1小時(shí)。再加入60μl N-甲基嗎啉，攪拌45分鐘。將反應(yīng)混合物倒入5mL水中，分離出有機(jī)層。有機(jī)層用5mL 0．5N鹽酸水溶液和5mL飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。混合的有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥，濃縮，得到0．627g產(chǎn)物，黃色泡沫狀物，不用提純即可使用。
向0．627g(1．07mmol)上述產(chǎn)物在5mL二氯甲烷中的溶液中加入1．0mL三氟乙酸，和在室溫下攪拌75分鐘。再加入1．00mL三氯乙酸，攪拌10分鐘。濃縮反應(yīng)混合物，用5．0mL二氯甲烷稀釋，通過傾入10mL10％碳酸鈉水溶液中小心地堿化。分離有機(jī)層，水層進(jìn)一步用2×15mL二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用5mL水洗滌。用碳酸鉀干燥，過濾，濃縮，得到0．486g胺，淺黃色泡沫狀物，不用提純即可使用。
將0．26g(1．28mmol)2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-2-甲基-丙酸；0．173g(1．28mmol)1-羥基苯并三唑(HOBT)和EDC(0．245g，1．28mmol)加入0．486g(1．01mmol)上述胺和10mL二氯甲烷中，在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物倒入5．0mL水中，分離有機(jī)層。水層用5mL二氯甲烷反萃取。合并的有機(jī)層用5mL 0．5N鹽酸水溶液，5mL飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，濃縮，得到0．751g粗產(chǎn)物，為黃色泡沫狀物。該粗產(chǎn)物的二氯甲烷溶液在25g硅膠柱中進(jìn)行色譜分離，首先用己烷／丙酮／二氯甲烷(70／25／5)洗脫，然后用己烷／丙酮／二氯甲烷(65／30／5)洗脫。得到0．63g標(biāo)題化合物，白色固體。1H NMR(CDCl3400MHz)該化合物以3∶2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物存在。δ7．40-7．10(m，6H)，7．06(d，1／3H)，7．02(t，1／3H)，6．90(t，1／3H)，6．55(d，1／3H)，5．15(m，1H)，4．95(bs，1H)，4．63(bd，1／3H)，4．57-4．40(m，2 2／3H)，4．10(bd，1／3H)，4．00(bd，1／3H)，3．82(t，1H)，3．78-3．62(m，2H)，3．60-3．50(m，1H)，3．04(q，1H)，2．87(s，1H)，2．86(s，2H)，2．80-2．60(m，1H)，1．90(bs，1H)，2．85-2．75(m，1H)，1．82-1．60(m，3H)，1．55-1．45(m，1H)，1．45(s，4H)，1．42(s，2H)，1．39(s，9H)。
步驟CN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽將2．5mL三氟乙酸加入0．637g(0．101mmol)步驟B中得到的中間體在5mL二氯甲烷中的溶液中，在室溫下攪拌30分鐘。反應(yīng)混合物濃縮成油狀物溶于10mL乙酸乙酯中，用8mL 10％碳酸鈉水溶液洗滌。水層再用5mL乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用10mL水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾和濃縮，得到0．152g游離堿，白色泡沫狀物。
在0℃下向0．512g上述游離堿在5mL乙酸乙酯中的溶液中加入0．2mL鹽酸在乙酸乙酯中的飽和溶液，攪拌1．5小時(shí)。氮?dú)夥障逻^濾出白色沉淀，用乙醚洗滌，干燥，得到0．50g標(biāo)題化合物，白色固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)該化合物以3∶2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體形式存在。δ7．40-7．28(m，4H)，7．25-7．17(m，2H)，7．08(t，1／3H)，7．00(t，1／3H)，6．80(d，1／3H)，5．16(ddd，1H)，4．60-4．42(m，3H)，4．05(t，1H)，3．90(bs，2H)，3．83-3．70(m，2H)，3．30-3．15(m，1HO，2．97(s，1H)，2．95(s，2H)，2．90-2．78(m，1H)，1．96(t，1／3H)，1．85-1．65(m，4H)，1．63(s，2H)，1．60(s，4H)。
實(shí)施例2N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺步驟A(2R)-[[[2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基-2-(苯基甲氧基)乙基]-1-丙酸烯丙基酯在CH2Cl2中在EDC和DMAP存在下，用(2R)-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-3-(苯基甲氧基)乙基]-丙酸和烯丙醇進(jìn)行偶合反應(yīng)制備上述化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7．25(s，5H)，5．8(m，1H)，5．2(dd，2H，5．0(bs，1H)，4．7(m，1H)，4．6(m，2H)，4．4(dd，2H)，3．9(dd，1H)，3．6(dd，1H)，1．45(d，6H)，1．39(s，9H)。
步驟B(2R)-[[[2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基-2-(苯基甲氧基)乙基]-1-丙酸攪拌下，步驟A中得到的粗制中間體(6．7g，15．9mmol)，四(三苯膦)合鈀(1．8g，0．1eq)和三苯膦(1．25g，0．3eq)的溶液中加入2-乙基己酸鉀(35mL，0．5M的EtOAc溶液)。反應(yīng)混合物在室溫和氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)，然后用乙醚(100mL)稀釋，倒入冰水中。分離有機(jī)層，用檸檬酸(20％)酸化水層，然后用EtOAc萃取。EtOAc萃取液用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾和蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，固體。
1H NMR(400Hz，CD3OD)δ7．3(s，5H)，4．7(m，1H)，4．5(s，2H)，4．0(m，1H)，3．6(m，1H)，1．4(d，6H)，1．3(s，9H)。
步驟CN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-2-甲基丙酰胺將EDC(1．03g，5．20mmol)加入1．0g(3．44mmol)1-甲磺?；輀二氫吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽，1．44g(3．78mmol)(2R)-[[2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基)氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]-氨基-2-(苯基甲氧基)乙基]-1-丙酸，N-甲基嗎啉(0．58mL，5．20mmol)，和1-羥基苯并三唑(HOBT)(0．58g，3．78mmol)在50mL二氯甲烷中的溶液中，在室溫下攪拌16小時(shí)。反應(yīng)混合物用另外的50mL二氯甲烷稀釋，用碳酸氫鈉水溶液(50mL)洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾和濃縮。將粗制油狀剩余物快速色譜分離(50g硅膠)得到2．148g(90％)希望的物質(zhì)，無色泡沫狀物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)該化合物以3∶2的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體形式存在。δ7．40-7．10(m，6H)，7．06(d，1／3H)，7．02(t，1／3H)，6．90(t，1／3H)，6．55(d，1／3H)，5．15(m，1H)，4．95(bs，1H)，4．63(bd，1／3H)，4．57-4．40(m，22／3H)，4．10(bd，1／3H)，4．00(bd，1／3H)，3．82(t，1H)，3．78-3．62(m，2H)，3．60-3．50(m，1H)，3．04(q，1H)，2．87(s，1H)，2．86(s，2H)，2．80-2．60(m，1H)，1．90(bs，1H)，2．85-2．75(m，1H)，1．82-1．60(m，3H)，1．55-1．45(m，1H)，1．45(s，4H)，1．42(s，2H)，1．39(s，9H)。
步驟DN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽將5mL三氟乙酸加入2．148g(3．41mmol)步驟C中得到的中間體在10mL二氯甲烷中的溶液中，攪拌1小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，用100mL 5％碳酸鈉水溶液堿化，用二氯甲烷(3×50mL)萃取。mL合并的有機(jī)相用鹽水(50mL)洗滌，用無水碳酸鉀干燥，過濾，和濃縮，得到無色泡沫狀物。在0℃下向所述泡沫物在25mL乙酸乙酯中的溶液中加入4mL 1M鹽酸的乙酸乙酯溶液。過濾出沉淀物，首先用乙酸乙酯洗滌，然后用乙酸乙酯／乙醚(1∶1)洗滌，干燥，得到1．79g(93％)標(biāo)題化合物，無色固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)該化合物以3∶2的旋轉(zhuǎn)混合物形式存在。δ7．40-7．28(m，4H)，7．25-7．17(m，2H)，7．08(t，1／3H)，7．00(t，1／3H)，6．80(d，1／3H)，5．16(ddd，1H)，4．60-4．42(m，3H)，4．05(t，1H)，3．90(bs，2H)，3．83-3．70(m，2H)，3．30-3．15(m，1HO，2．97(s，1H)，2．95(s，2H)，2．90-2．78(m，1H)，1．96(t，1／3H)，1．85-1．65(m，4H)，1．63(s，2H)，1．60(s，4H)。
實(shí)施例3N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽該化合物通過用甲磺酸處理實(shí)施例5步驟D中得到的游離堿制備。標(biāo)題化合物從乙酸乙酯／乙醇／水中重結(jié)晶得到，m． p．=166-168℃。隨后該試樣鑒定為多晶型化合物Ⅱ型，其特征是X-射線粉末衍射圖象在約4．7，11．6，17．4，19．2和21．6(2θ)有主要反射。在氮?dú)饬飨略诔诒幸?0℃／分鐘的DSC顯示，由于熔化單純吸熱，峰值溫度約174℃，外推得出熔化開始溫度(熔點(diǎn))約165℃，締合熱約37J／g。
實(shí)施例4
哌啶-4-甲酸-N-氨基甲酸芐酯(3)原料哌啶-4-甲酸(2)T．C．I 4．02kg(31．1mol)氯甲酸芐酯(Schweitzerhall)6．91kg(40．5mol)K2CO310．1kg(72．9mol)水40．2L在N2氣氛和機(jī)械攪拌下，將4-哌啶甲酸(2)和K2CO3溶于在100L 4頸燒瓶中的40．2L水中，溶液冷卻至10℃。加入氯甲酸芐酯，保持溫度9-14℃，在加完后混合物加熱至22℃，陳化58小時(shí)。在4小時(shí)內(nèi)加完，這時(shí)pH是9．0。在陳化58小時(shí)后pH不變。
將反應(yīng)混合物加入200L提取器中，用3×13kg(15L)IPAC和1×12L EtOAc洗滌。水層用8L甲苯萃取。在洗滌后通過HPLC分析芐醇含量從3．8％降低至1．4％。HPLC分析Dupont Zorbax 25cm RXC8柱，流速1．5mL／min，在254nm檢測(cè)；恒洗脫液混合物含有35％MeCN和65％的0．1％H3PO4水溶液。保留時(shí)間3=6．9min，芐醇=3．3min，甲苯=17．3min。
水相用37％HCl水溶液酸化至pH1．8。在加入HCl時(shí)釋放二氧化碳，但是氣體釋放容易控制。加入HCl時(shí)間短于1小時(shí)，需要10L濃HCl。水相用3×6．6L甲苯萃取。甲苯萃取液用2kg硫酸鈉干燥，通過Solka-flocTM填料過濾。合并的濾液重17．8kg。氨基甲酸酯3的粗產(chǎn)量是7．89kg(97％)(稱重的各份濾液蒸發(fā)至干得到的)。濾液通過l0μ管內(nèi)的濾器送入l00L燒瓶中。提取液在10mbar和25℃以下濃縮至體積18L。氨基甲酸酯3的最終濃度是440g／L。甲苯濾液的濃度適于共沸除去最終的微量水(最終的KF=170mg／L)。產(chǎn)物純度99．1％(面積)，僅有的雜質(zhì)芐醇0．9％(面積)。
實(shí)施例5
哌啶-4-甲酰氯-N-氨基甲酸芐酯(4)原料7．89kg(30．0mol)哌啶-4-甲酸-N-氨基甲酸芐酯在17．9L甲苯中的溶液(MW=263．30)草酰氯(MW=126．93)3．94 kg(31．0mol)DMF(MW=73．10)10mL甲苯 12L將5mL DMF和10L甲苯加入上面步驟中得到的氨基甲酸芐酯3的甲苯溶液中。在20分鐘內(nèi)加入草酰氯。慢通氮?dú)饬飨略?8℃將反應(yīng)混合物陳化16小時(shí)。反應(yīng)混合物的HPLC分析表明有1．3％羧酸3未反應(yīng)。反應(yīng)混合物加熱至26℃，加入5mL DMF?；旌衔镪惢?．5小時(shí)。1．0mL反應(yīng)混合物的等分試樣用5．0mL叔丁胺驟冷，蒸發(fā)后用HPLC分析，其條件是25cm Dupont Zorbax RXC8柱，50℃，流速1mL／min，在220nm檢測(cè)；恒洗脫液組成42％MeCN和58％的0．1％H3PO4水溶液。該方法表明殘留＜0．05％酸3(根據(jù)A判斷)和＞3％(面積)B(＞1％(mol)(COCl)2)。
混合物在10mbar和溫度20-25℃下濃縮，直到除去5L溶劑。上述t-BuNH2驟冷后濃甲苯溶液的典型的HPLC分析結(jié)果如下保留時(shí)間面積％鑒定物2．1＜0．5％ 羧酸37．8＜0．5％ 芐氯11．0 ＞99％叔丁基甲酰胺A12．1 NA甲苯12．7 ＜0．5％ 二叔丁基草酰胺B實(shí)施例6
哌啶-4-甲醛-1-氨基甲酸芐酯(5)原料3．38kg(12．0mol)哌啶-4-甲酰氯-N-氨基甲酸芐酯(4)在5．54kg甲苯中的溶液(MW=281．74)DIEA(KF=18mg／L) 1．55kg(15．0mol)10％Pd／C(KF＜20mg／g) 101g苯硫基甲烷(MW=124．21，d=1．058) 0．56g將DIEA和苯硫基甲烷加入從上面步驟得到的(4)的甲苯溶液中，催化劑懸浮于該混合物中。所述混合物立即放入5加侖高壓釜中，在20℃和40psi H2下加氫。18小時(shí)后反應(yīng)吸收了理論量70％的氫，用叔丁胺驟冷等分試樣HPLC分析表明，還有14．2％(面積)酰氯2。HPLC條件同上述條件。保留時(shí)間5=8．1分鐘。
將第二批催化劑(101g)和苯硫基甲烷(0．54g)以在1375mL甲苯中的漿液形式加入加氫器中。在23小時(shí)后用叔丁胺驟冷等分試樣進(jìn)行HPLC分析表明，還有1．8％(面積)酰氯2。混合物用氮?dú)馇宕?，通過Solka-flocTM過濾分離催化劑和沉淀的DIEA·HCl。濾餅用10L甲苯洗滌。濾液通過10μ管線內(nèi)濾器加入50L萃取器中，用2×7．2L 1MHCl水溶液和2×7．2L水洗滌。混合物在10mbar和溫度25-30℃下濃縮，直到剩余5L為止。
保留時(shí)間面積％鑒定物2．1＜2 羧酸36．6＜1 二聚物218．1＞95 醛5用HPLC分析醛3的檢測(cè)收率是94％。
實(shí)施例7
CBZ-螺二氫吲哚(9)原料1．71kg(6．89mol)哌啶-4-甲醛-1-氨基甲酸芐酯(5)在21．4kg甲苯中的溶液苯肼 900mL，981g(9．15mol)三氟乙酸(TFA)2．20 L，3．26kg(28．6mol)NaBH4300g(7．93mol)甲苯 34．4kgMeCN7．0LMeOH7．0L上面步驟中得到的粗制醛5的溶液通過10μ管線內(nèi)濾器加入100L反應(yīng)器中，該反應(yīng)器裝有冷卻或加熱用的特氟隆(Teflon)涂層的銅盤管和機(jī)械攪拌器。加入甲苯(34．4kg)和MeCN(7L)，將得到的溶液冷卻至0℃。分幾次加入苯肼，溫度保持在-1～3℃，同時(shí)連續(xù)地將氮?dú)馔ㄈ敕磻?yīng)混合物。
加入苯肼直到TLC和HPLC分析表明醛5完全耗盡并出現(xiàn)稍微過量(＜5％)苯肼。TLC條件Silica，E．Merck Kieselgel G60 F254 0．25mm；乙醚／戊烷(4／1)；展開劑硫酸高鈰，14％鉬酸銨在10％硫酸水溶液中的溶液，然后加熱；Rf醛5=0．52，苯腙7=0．61，苯肼6=0．21，HPLC條件25cm Dupont Zorbax RXC8柱，30℃，流速1．0mL／min，在254nm檢測(cè)；梯度程序時(shí)間乙腈∶水0 57∶4310 65∶3515 75∶2518 75∶25保留時(shí)間苯肼6=4．5分鐘，甲苯=7．2分鐘，苯腙7=11．4分鐘。
反應(yīng)混合物在0-2℃陳化30分鐘，加入TFA，保持溫度2-7℃。反應(yīng)混合物在30分鐘內(nèi)加熱至50℃，保持17小時(shí)。停止通過反應(yīng)混合物噴氮?dú)?，而在反?yīng)混合物上面保持緩慢的氮?dú)饬?。?℃下，第1個(gè)小時(shí)內(nèi)顏色逐漸變暗至深綠色，生成較少量白色結(jié)晶的沉淀(三氟乙酸銨)。在17小時(shí)后HPLC分析(與上述條件相同)表明，反應(yīng)混合物含有91．6％(面積)二氫吲哚8和1．5％未反應(yīng)的苯腙。陳化混合物更長時(shí)間未提高二氫吲哚8的測(cè)試收率。
將反應(yīng)混合物冷卻至12℃，加入7．0L MeOH。分幾次(每次＜20g)加入NaBH4，保持溫度低于15℃。共加30分鐘。添加時(shí)觀察到緩和地釋放氫，但是容易控制，實(shí)際上未起泡。在添加接近結(jié)束時(shí)顏色很快從綠色變?yōu)楹稚?，然后變?yōu)轷r橙色。分離出小量(＜100mL)重相(可能是含水的鹽)。HPLC分析(與上述條件相同)表明所有二氫吲哚8均被消耗(90．4％(面積)CBZ-二氫吲哚9)；保留時(shí)間假吲哚8=7．5min，二氫吲哚9=8．2min。TLC乙酸乙酯作溶劑，硫酸高鈰／鉬酸銨染色或1％茴香醛染色；保留因子假吲哚8=0．18，CBZ-二氫吲哚9=0．33。
顏色由綠色變?yōu)槌壬硎敬_實(shí)接近反應(yīng)終點(diǎn)。完成反應(yīng)所需的NaBH4的量取決于溫度和NaBH4的加入速度，但是產(chǎn)物收率和質(zhì)量實(shí)際上不受影響，只要反應(yīng)完成。在30分鐘內(nèi)將反應(yīng)混合物冷卻至5℃。然后加入8L 3％NH4OH水溶液(8L)以使水相pH到7．4，陳化混合物，使其沉降，溫度升至15℃。分離出下面的混濁黃色水相。有機(jī)相用4L 3％NH4OH水溶液，2×4L水，和2×4L鹽水洗滌。洗滌后有機(jī)相的重量是53．5kg，測(cè)試收率是94％。
將洗滌的甲苯溶液與另外兩次類似處理的反應(yīng)物洗滌有機(jī)相混合。三次反應(yīng)中使用的醛總量是5．06kg(20．5mol)。在合并的有機(jī)相中測(cè)定的CBZ-二氫吲哚9的總重量是5．91kg(18．3mol，測(cè)試收率90％)。合并的有機(jī)相用5kg硫酸鈉干燥，用250g Darco G60碳處理30分鐘，通過Solka-flocTM過濾。濾液在10mbar和＜25℃下真空濃縮，直至剩余物接近干燥。通過緩慢放出將溶劑完全轉(zhuǎn)換為30L IPAC，在200mbar和50-60℃下再濃縮至14L。將混合物加熱至回流以便得到透明均勻的深橙色溶液。1H NMR分析表明在溶劑轉(zhuǎn)換后該溶液含有約6％(mol)剩余的甲苯。
將溶液冷卻至68℃，用4g結(jié)晶的CBZ-二氫吲哚9接種。在6小時(shí)內(nèi)使溶液逐漸冷卻至26℃，在20-26℃陳化9小時(shí)。在1小時(shí)內(nèi)使?jié){液冷卻至2℃，在2℃陳化1小時(shí)。過濾分離產(chǎn)物，濾餅用2×2L5℃IPAC和2×2L 5℃MTBE洗滌。產(chǎn)物在放出氮?dú)庀略?0℃的真空烘箱中干燥，得到4．37kg(74％)標(biāo)題化合物9，淺褐色結(jié)晶粉末。產(chǎn)物的HPLC分析表明純度是99．5％(面積)。母液(11L)和洗滌液還含有1．15kg(19％)產(chǎn)物9和約3％Cbz-哌啶-4-甲酸苯酰肼(保留時(shí)間=4．8min)。
實(shí)施例8
CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺(1)原料CBZ-二氫吲哚91．69kg(5．23mol)甲磺酰氯 599g(5．23mol)Et3N(KF=151)635g(6．27mol)THF(KF=41) 12L22L燒瓶中加入固體CBZ-螺二氫吲哚9，然后通過10μ管內(nèi)濾器將11．5L THF和Et3N加入上述燒瓶中。得到的均勻溶液冷卻到0℃。1L滴液漏斗中加入甲磺酰氯和500mL THF。將MsCl的THF溶液加入溫度保持在0-4℃的反應(yīng)混合物中。加入時(shí)間5小時(shí)，放熱。在加入過程中生成白色沉淀，可能是三乙胺鹽酸鹽。HPLC分析表明加入結(jié)束時(shí)反應(yīng)完成(未檢測(cè)出9)。
HPLC條件25cm Dupont Zorbax RXC8柱，流速1．5mL／min，在254nm檢測(cè)。梯度程序時(shí)間(min)0．1％aq．H3PO4∶MeCN070∶30370∶3012 20∶8025 20∶80保溫時(shí)間9=7．6min，1=13．6min。
在加完后反應(yīng)混合物加熱至18℃，陳化16小時(shí)。在加入結(jié)束和陳化16小時(shí)期間反應(yīng)混合物外觀和HPLC圖無變化。將反應(yīng)混合物在1小時(shí)內(nèi)加入50L燒瓶中的強(qiáng)烈攪拌的30L水和200mL 37％HCl水溶液的溶液中。該燒瓶中的溫度從22℃升至28℃。產(chǎn)物以淺褐色粘性固體分離出，變成顆粒狀固體。含水懸浮液冷卻至22℃，陳化1小時(shí)。過濾懸浮液，濾餅用2×4L MeOH／水(50／50)洗滌。HPLC分析表明母液中有不到0．1％CBZ-螺二氫吲哚甲磺酰胺1。
濾餅用4L MeOH／水(50／50)洗滌，其中加入50mL 28％ NH4OH水溶液。濾餅用2×4L MeOH／水(50／50)洗滌，固體在50℃(并放出氮?dú)庀略谡婵蘸嫦渲懈稍?，得?．03kg(97％)標(biāo)題產(chǎn)物1，灰白色粉末。HPLC分析表明該固體含有93％(面積)化合物1。
實(shí)施例9
分離中間體CBZ-螺假吲哚(8)的任選方法原料哌啶-4-甲醛-1-氨基甲酸芐酯(5)12．37g(0．050mol)苯肼 5．41g(0．050mol)三氟乙酸(TFA)11．56mL，17．10g(0．150mol)二氯甲烷 500mL將CBZ-醛5溶于1L燒瓶中的二氯甲烷中，所述燒瓶裝有特氟隆涂層的磁力攪拌棒。得到的溶液冷卻至0℃。在5分鐘內(nèi)借助稱重的注射器加入苯肼，保持溫度在-1～3℃，同時(shí)連續(xù)地使氮?dú)馔ㄟ^反應(yīng)混合物。TLC和HPLC分析表明CBZ-醛5完全消耗和出現(xiàn)微過量苯肼(＜2％)。TLC條件Silica，E．Merck Kieselgel G60 F254 0．25mm；乙醚／戊烷(4／1)；展開劑0．5硫酸高鈰，14％鉬酸銨在10％硫酸水溶液中的溶液，然后加熱；Rf醛5=0．52，苯腙7=0．61，苯肼6=0．21。HPLC條件25cm Dupont Zorbax RXC8柱，30℃，流速1．0mL／min，在254nm檢測(cè)梯度程序時(shí)間(min)乙腈∶水0 57∶4310 65∶3515 75∶2518 75∶25保留時(shí)間苯肼6=4．5分鐘，甲苯=7．2分鐘，苯腙=11．4分鐘。
反應(yīng)混合物在0-2℃陳化10分鐘，用注射器加入TFA，同時(shí)保持溫度2-7℃。在30分鐘內(nèi)將反應(yīng)混合物加熱至35℃，保持17小時(shí)。停止噴氮?dú)馊敕磻?yīng)器，在反應(yīng)混合物上面保持緩慢的氮?dú)饬?。?5℃的第一小時(shí)內(nèi)，顏色逐漸變暗成為玫瑰紅色，然后變深綠色，生成較少量的白色結(jié)晶狀沉淀(三氟乙酸銨)。在陳化17小時(shí)后HPLC分析(與上述條件相同)表明反應(yīng)混合物含有93％(面積)假吲哚8和＜0．5％未反應(yīng)的苯腙。陳化所述混合物更長時(shí)間不會(huì)提高假吲哚8測(cè)試收率。將反應(yīng)混合物冷卻至10℃，充分?jǐn)嚢柘录尤牒?0mL28-30％氫氧化銨，90mL水和150g碎冰的混合物?；旌衔锏念伾?yōu)槌燃t色。分離有機(jī)相，用400mL水洗滌兩次，然后用100mL飽和NaCl水溶液洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，通過5g氧化硅填料過濾，蒸發(fā)濾液，得到15．84g(99％)假吲哚8，淺橙色油狀物。
實(shí)施例10
制備CBZ-螺二氫吲哚甲磺酰胺(1)的方法，不分離中間體CBZ-螺二氫吲哚(9)步驟1CBZ-螺二氫吲哚(9)
原料哌啶-4-甲醛-1-氨基甲酸芐酯(5)49．5g(0．20mol)苯肼(Aldrich)23．7g(0．22mol)三氟乙酸(TFA)75．4g(0．66mol)甲苯(KF＜250mg／L) 654mLMeCN(KF＜250mg／L) 13．3mLNaBH411．3g，(0．30mol)甲苯 20mLMeOH50mL用654mL甲苯和13．3mL MeCN制備2％(體積)MeCN的甲苯溶液。在裝有機(jī)械攪拌器的2L三口燒瓶中，617mL上述溶液中通入細(xì)氮?dú)饬?分鐘脫氣。將苯肼和TFA加入混合物中，同時(shí)繼續(xù)脫氣。
將CBZ-醛5溶于上面制備的剩余溶液(50mL)中，使氮?dú)馔ㄟ^所述溶液進(jìn)行脫氣，同時(shí)使氮?dú)馔ㄟ^加料漏斗。燒瓶中的溶液加熱至35℃。在2小時(shí)內(nèi)將醛溶液緩慢地加入苯肼-TFA中?；旌衔镌?5℃陳化16小時(shí)。
HPLC條件25cm Dupont Zorbax RXC8柱，50℃流速1mL／min，在220nm檢測(cè)；恒洗脫液55％ MeCN，45％的0．1％ H3PO4水溶液。陳化16小時(shí)后典型的HPLC分析結(jié)果保留時(shí)間(分)面積％ 鑒定1．60．1-0．5苯肼64．1＜0．1 二聚物214．7＜0．1 醛55．0NA 螺二氫吲哚96．3NA 甲苯6．997 螺假吲哚810．3 ＜0．2 苯腙7共2-3其他雜質(zhì)＜0．2％將混合物冷卻至-10℃，加入MeOH。在30分鐘內(nèi)將硼氫化鈉在20mL甲苯中的懸浮液分成小份(每份1mL)加入，注意溫度不超過-2℃。
面積％鑒定0．1-1苯肼685-90 CBZ-螺二氫吲哚9＜0．1CBZ-螺假吲哚8共10-15 其他雜質(zhì)(＜3％ea．)在1小時(shí)內(nèi)將溫度升至10℃，加入6％氨水(200mL)。攪拌混合物10分鐘，再沉降10分鐘，排除下面水相。將乙腈(20mL)和MeOH(20mL)加入有機(jī)相中，用150mL 15％鹽水洗滌。發(fā)現(xiàn)有機(jī)相含CBZ-螺二氫吲哚9，測(cè)試收率92％。
步驟2CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺(1)原料CBZ-螺二氫吲哚(9)(MW=322．51)(0．184mol)甲磺酰氯 21．1g(0．184mol)DIEA(KF=150mg／L) 29．7g，40．1mL(0．230mol)THF(KF=41mg／L) 150mL從上面步驟1中得到的粗CBZ-螺二氫吲哚9的溶液在1L 3口燒瓶中濃縮(60-70℃，150-200Torr)，直到留下250g剩余物。加入THF和DIEA，得到的均勻溶液冷卻至0℃。125mL滴液漏斗中裝入甲磺酰氯和50mL THF。在2小時(shí)內(nèi)向反應(yīng)混合物中加入MsCl的THF溶液，保持溫度0-4℃，混合物在5-8℃陳化2小時(shí)。加入過程中稍有熱放出。該過程中生成白色沉淀，可能是DIEA-鹽酸鹽。HPLC條件與上面的相同。HPLC分析表明反應(yīng)在加完后1小時(shí)結(jié)束(沒有檢測(cè)出來)，來自9的測(cè)試收率是94％。保留時(shí)間1=7．8分鐘。陳化2小時(shí)后反應(yīng)混合物的典型HPLC分析結(jié)果面積％鑒定＜0．1CBZ-螺二氫吲哚990-92 CBZ-磺酰胺1共8-10其他雜質(zhì)(＜2％ea．)
將混合物加熱至20℃，加入200mL 1M HCl水溶液。混合物加熱至50℃，分離水相。有機(jī)相依次用100mL水，100mL 5％碳酸氫鈉水溶液，和100mL水洗滌。將有機(jī)相加入裝有機(jī)械攪拌器和蒸餾柱的1L三口燒瓶中，在大氣壓下蒸餾混合物(約400mL)，直到收集150mL餾出物為止。頂部溫度達(dá)到107℃，釜溫110℃。不斷加入正丙醇繼續(xù)蒸餾，其正丙醇加入速度以保持釜中體積不變?yōu)闇?zhǔn)(約350mL)。當(dāng)加入正丙醇總量達(dá)525mL時(shí)停止蒸餾，總共收集餾出物800mL。
在溶劑轉(zhuǎn)換過程中，頂溫和釜溫均從94℃升至98℃。在97．2℃形成的甲苯和n-PrOH共沸物由47．5％甲苯和52．5％n-PrOH組成。在3小時(shí)內(nèi)使混合物逐漸冷卻至20℃，陳化12小時(shí)。發(fā)現(xiàn)母液含有2％甲苯和4mg／mL磺酰胺。該磺酰胺在甲苯和n-PrOH的各種混合物中的溶解度用HPLC分析測(cè)定甲苯的n-PrOH溶液％化合物1的溶解度mg／mL0 2．365 3．02104．23207．512510．3過濾結(jié)晶的漿液，用3×100mL n-PrOH洗滌。產(chǎn)物在50℃下在真空烘箱中干燥16小時(shí)，同時(shí)放出氮?dú)?，得到的化合?為65．5g(從醛5得收率82％)，棕黃色固體，純度93．5％(重量)。
該固體典型的HPLC分析結(jié)果面積％鑒定＜0．1CBZ-螺二氫吲哚9＞99 CBZ-磺酰胺1共＜1 其他雜質(zhì)(＜0．2％ea．)為了再提純，在60℃下將40．0g從n-PrOH中結(jié)晶的磺酰胺化合物的試樣溶于134mL EtOAc中，在60℃下用8．0g Darco G-60碳處理1小時(shí)。加入2．0g SolkaflocTM后，漿液通過4．0g SolkaflocTM填料過濾，該填料在60℃用90mL EtOAc洗滌。在加入所述碳前溶液是棕色。無堵塞地良好過濾，得到金黃色濾液。濾液在500mL燒瓶中在大氣壓下蒸餾(釜溫80-85℃)，直到留下100g(100mL)剩余物為止。3小時(shí)內(nèi)將該溶液冷卻至35℃。在35℃和充分?jǐn)嚢柘?小時(shí)內(nèi)加入116mL環(huán)己烷?；旌衔镌?小時(shí)內(nèi)冷卻至20℃，20℃陳化12小時(shí)。35℃結(jié)晶出大量磺酰胺化合物，混合物變稠。20℃加入環(huán)己烷使攪拌困難。陳化后發(fā)現(xiàn)上清液每克中含有2．5mg化合物1。過濾結(jié)晶的漿液，濾餅用77mL 2∶1環(huán)己烷／EtOAc和2×77mL環(huán)己烷洗滌。產(chǎn)物在真空烘箱中在50℃下干燥16小時(shí)，同時(shí)放出氮?dú)?，得?4．2g化合物1(MW=400．3)，為白色結(jié)晶固體(從粗制1回收率85％，從5回收率70％，純度＞99．9％(重量)。
實(shí)施例11
螺二氫吲哚-甲磺酰胺的HCl鹽(1a)原料CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺(1) 941g(2．35mol)Pearlman催化劑20％Pd(OH)2／C188gTHF 8LMeOH 7L將催化劑懸浮于7L MeOH中，加入5加侖高壓釜中，接著其中加入化合物1在8L THF中的溶液?；旌衔镌?5℃在80 psi H2下加氫。2．5小時(shí)后在30分鐘內(nèi)將溫度升至35℃。
HPLC分析表明CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺完全消耗掉。HPLC條件25cm Dupont Zorbax RXC8柱，流速1．5mL／min，在254nm檢測(cè)。梯度程序
時(shí)間(min)0．1％H3PO4∶MeCN水溶液070∶30370∶3012 20∶8025 20∶80保留時(shí)間螺二氫吲哚=7．6分鐘，CBZ-螺二氫吲哚-甲磺酰胺=13．6分鐘混合物用氮?dú)馇逑?，在仍加熱的同時(shí)通過Solka-flocTM過濾除去催化劑。催化劑用4L THF和2L MeOH洗滌。在10mbar和25℃以下將淺黃色濾液濃縮成粘稠油狀物。以15L EtOAc之量通過緩慢放出完成溶劑的轉(zhuǎn)換。再濃縮至干燥。剩余物固化為硬的灰白色物質(zhì)。加入MeOH(1．5L)，混合物加熱至70℃，得到均勻的溶液。該溶液在70℃時(shí)加入10．5L 20℃的EtOAc。溫度降低至40℃，混合物保持均勻狀態(tài)。
隨后的試驗(yàn)表示可更方便的將MeOH-THF濾液的溶劑轉(zhuǎn)換為MeOH，濃縮至希望的體積，然后加入EtOAc。這可防止一旦EtOAc溶液濃縮時(shí)剩余物固化。
將用大約等體積氮?dú)庀♂屵^的氯化氫通入所述溶液。在15分鐘內(nèi)溫度升至60℃，生成白色鹽酸鹽沉淀。用氮?dú)庀♂孒Cl僅僅為避免反應(yīng)混合物倒吸，不一定必要。
混合物用冰浴冷卻，繼續(xù)加入氯化氫1小時(shí)。溫度逐漸降低到20℃。將懸浮液陳化2小時(shí)，同時(shí)溫度降低至10℃。過濾分離結(jié)晶的產(chǎn)物，濾餅用3L EtOAc洗滌。真空烘箱中于35℃將其干燥，得到1．18kg(86％)標(biāo)題產(chǎn)物1a，灰白色結(jié)晶固體，用HPLC分析的純度＞99．5％(面積)。HPLC條件25cm Dupont Zorbax RXC8柱，流速1．5mL／min，在230nm檢測(cè)；恒洗脫液35％MeCN，65％的0．1％乙酸銨水溶液。保留時(shí)間1a=5．4分鐘。
實(shí)施例12
螺二氫吲哚-甲磺酰胺(游離堿形式)(1b)將250mL由CBZ加氫得到的含有4．67g 1b(游離堿)的濾液的等分試樣濃縮至約10mL。剩余物溶于20mL EtOAc中，該溶液再濃縮至約10mL。該操作再重復(fù)一次，剩余物中加入10mL EtOAc。開始生成結(jié)晶沉淀。一次加入MTBE(20mL)，另外的結(jié)晶的固體沉淀出，但是上清液還含有大量在放置時(shí)不沉淀的溶解的產(chǎn)物。強(qiáng)力攪拌下在2小時(shí)內(nèi)于混合物中滴加己烷(70mL)。必須緩慢的加入己烷以防止呈油狀而得不到胺。
攪拌的混合物陳化1小時(shí)，過濾。濾餅用20mL 1∶1的MTBE-己烷洗滌，然后用20mL己烷洗滌。產(chǎn)物在氮?dú)饬飨赂稍铮玫?．86g(82％)游離胺1b，為灰白色結(jié)晶／固體，純度＞99．5％(面積)。HPLC條件25cm Dupont Zorbax RXC8柱，流速1．5mL／min，在230nm檢測(cè)；恒洗脫液35％ MeCN，65％的0．1％乙酸銨水溶液。保留時(shí)間1b=5．4分鐘。
實(shí)施例13A
螺二氫吲哚-甲磺酰胺(游離堿形式)(1b)原料CBZ-螺二氫吲哚-磺酰胺化合物(1) 833．5gr(2．08mol)Pd(OH)2／C(20％(重量)Pd(OH)2)124．5(15％)THF 6．5LMeOH 19．5LNH4OH(濃的) 60mL由于設(shè)備限制加氫分3次進(jìn)行；這里所述方法僅就一次而言。將CBZ-螺二氫吲哚磺酰胺化合物溶于THF(6．5L，KF=53μg／μl)，然后加入MeOH(KF=18μg／mL，4L)，再加入催化劑，將漿液轉(zhuǎn)移到5加侖高壓釜中。剩余的MeOH(2．5L)用于洗滌。在50psi下混合物加熱至40℃保持24小時(shí)。催化劑填充量和反應(yīng)時(shí)間隨原料化合物1純度而變化。此處原料需要≥15％催化劑和較長反應(yīng)時(shí)間，而較純的螺二氫吲哚原料僅需要5％催化劑和4-6小時(shí)反應(yīng)時(shí)間。
反應(yīng)完成(用LC分析化合物1不到0．1％(面積))后，混合物通過Solka FlocTM過濾，濾餅用含有NH4OH(0．5％，60mL)的MeOH(13L)洗滌。合并的濾液(分析表明含有1587g螺二氫吲哚胺1b)真空濃縮，得到的固體在40L甲苯／THF(3∶1)和0．5N NaOH(18L)間分配。雖然容易分層，但是在水層中仍可看到重沉淀。含水懸浮液用CH2Cl2(15L)萃取。緩慢分離水層和有機(jī)層。加入CH2Cl2之前將THF與使水層飽和的足夠的NaCl一起加入水層中。但是產(chǎn)物不能溶解，需要使用CH2Cl2。
將合并的甲苯、THF和CH2Cl2層在間歇式濃縮器中濃縮。剩余物用7L CH3CN沖洗。最后加入10L CH3CN，溶液在N2氣下放置過夜。
實(shí)施例13B
螺二氫吲哚-甲磺酰胺(游離堿形式)(1b)原料CBZ-螺二氫吲哚磺酰胺化合物(1)3g(7．49mol)Darco G-60 600g乙酸乙酯 36L無水乙醇 189L10％ Pd／C 450g氨溶液 500mLSolka FlocTM2．5kg乙酸異丙酯 65L在60-65℃和氮?dú)夥障拢瑢BZ-螺二氫吲哚(1)(1kg)和Darco G60(200g)在乙酸乙酯(9L)中的混合物攪拌和加熱8小時(shí)。在60-65℃過濾除去Darco，固體用熱的乙酸乙酯(3L)洗滌，合并濾液和洗滌液。LC(wt／wt)分析證明Darco的損失可忽略不計(jì)。用20L Buchi裝置真空蒸發(fā)乙酸乙酯溶液至干燥，然后用無水乙醇(2×5L)沖洗。該物料在加熱至65-70℃的無水乙醇中形成漿液，加入20L高壓釜中。該物料用無水乙醇(1L)洗滌。將10％鈀／炭(75g，7．5％(重量))在無水乙醇(750mL)中的漿液加入高壓釜中，用另一份無水乙醇(250mL)洗滌。
強(qiáng)力攪拌和40psi氫氣壓下，在65℃將上述物料加氫3小時(shí)，加入第二部分10％鈀／炭(75g)。該物料再加氫2小時(shí)，密封過夜。所述物料(仍是熱的，60-65℃)加入20L Buchi裝置中，通過“加入和放出”無水乙醇(共18L)并真空脫氣以除去甲酸。
再重復(fù)上述操作兩次，在10加侖襯玻璃容器中將三批物料合并，混合物料通過加入和蒸餾(真空)無水乙醇(2×10L)再脫氣。所述物料中加入Solka flocTM(0．5kg)，用乙醇(10L)漂洗。Estrella濾器中裝載Solka flocTM(2kg)在乙醇(20L)中的漿液。得到的混合物加熱到60-65℃，然后在該溫度下經(jīng)加熱的過濾器用泵加入兩個(gè)稱過皮重的不銹鋼罐中。開始用的容器、過濾器、泵和管線用氨水(500mL)在無水乙醇(25L)的熱(60-65℃)混合物清洗。在該兩個(gè)不銹鋼罐中將濾液和洗滌液混合。
然后將所述物料用含有10微米心子的管內(nèi)濾器轉(zhuǎn)移進(jìn)容器中，然后真空濃縮至體積縮小(～15L)。通過“加入和放出”3批乙酸異丙酯(共45L)用乙酸異丙酯替換乙醇，同時(shí)保持物料體積～15L。當(dāng)溶劑替換完成時(shí)，用GC分析物料含有不到1％的剩余乙醇。所述物料通過加入乙酸異丙酯(20L)稀釋至～33L，螺二氫吲哚-胺1b(用LC分析，1．855kg)的乙酸異丙酯溶液用于所述方法的下一步驟中。
實(shí)施例14A
Boc-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(11)原料螺二氫吲哚-胺(1b)1587g(5．966mol)氨基酸(10) 1938g(6．563mol)
DCC 1334．5g(6．563mol)HOBT 884g(6．563mol)
CH3CN 25L0．5NNaOH 18L0．5NHCl 18LNaHCO3(飽和的) 18LiPrOAc 28L室溫和N2氣氛下，在CH3CN或iPrOAc／H2O(25L)中的螺二氫吲哚-胺1b依次用固體HOBT(884g，1．1eq)，熔融的DCC(1334．5g，1．1eq)(在熱水中于60℃加熱約1小時(shí))，和最后用固體氨基酸10(1938g)處理?；旌衔飻嚢?小時(shí)，在攪拌時(shí)出現(xiàn)DCU重沉淀，LC分析表明剩余約0．5％(面積)胺1b。加入IPAc(9L)，通過SolkaflocTM過濾漿液，濾餅用IPAc(19L)洗滌。合并的有機(jī)溶液依次用0．5N NaOH(18L)，0．5N HCl(18L)和飽和NaHCO3(18L)洗滌。最后的水洗滌得到的乳狀液放掉。
將得到的有機(jī)層真空濃縮，剩余物溶于MeOH或EtOH中(最終體積10L)。測(cè)試產(chǎn)量3026g(89％)。
使用其它的肽偶合劑如羰基二咪唑，或生成混合酐，例如碳酸仲丁酯，得到的化合物11和／或14收率差，且前者出現(xiàn)高度差向異構(gòu)化。其他肽偶合試劑是相當(dāng)昂貴的。
Boc-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(11)原料螺二氫吲哚-胺(1b) 1．855kg(6．96mol)乙酸異丙酯 29L二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)1．58kg(7．65mol)1-羥基苯并三唑(HOBt) 1．03kg(7．62mol)N-Boc-O-芐基-D-絲氨酸 2．26kg(7．65mol)1M氫氧化鈉水溶液 26L0．5M鹽酸水溶液26L飽和碳酸氫鈉水溶液 26L無水乙醇 50L將水(20L)加入在反應(yīng)器中攪拌的螺二氫吲哚-胺1b(1．855kg)在乙酸異丙酯(33L)中的溶液中。然后在室溫和氮?dú)夥障乱来渭尤胂铝谢瘜W(xué)產(chǎn)品DCC(1．58kg，1．1eq)，HOBt(1．03kg，1．1eq)，最后N-Boc-O-芐基-D-絲氨酸(2．26kg，1．1eq)。試劑用乙酸異丙酯(7L)漂洗。將混合物在室溫和氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)，此時(shí)LC分析表明產(chǎn)物／原料比是99．4／0．6。然后混合物通過只用布和紙板的Estrella過濾器過濾，用泵送至另一容器中。輸送物料的容器用乙酸異丙酯(22L)漂洗，該乙酸異丙酯又用于漂洗濾器、泵和管線，然后放入所述接收容器中。將所述容器中的二相混合物攪拌10分鐘，然后沉降15分鐘。分離出下面的水層，有機(jī)溶液在室溫下放置過夜。
第二天，有機(jī)溶液用1M氫氧化鈉水溶液(26L)，0．5M鹽酸水溶液(26L)和最后用飽和碳酸氫鈉水溶液(26L)洗滌。LC分析得到測(cè)試產(chǎn)量3．787kg，從7．49mol(3kg)起始CBZ-螺二氫吲哚(1)計(jì)算的總收率為93％?；旌衔镎婵諠饪s(內(nèi)部溫度=13-15℃，夾套溫度=40℃，真空度=29”)至小體積(～15L)，通過“加入和放出”乙醇(50L)將溶劑轉(zhuǎn)換為乙醇，同時(shí)保持體積～15L。GC分析表明剩余＜1％乙酸異丙酯。該溶液用于所述方法的下一步驟。
實(shí)施例15A
O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(游離堿形式)(12)原料芐基絲氨酸螺二氫吲哚(11)3026g(5．57mol)甲磺酸(MsOH) 1．16L(17．9mol)MeOH 10LiPrOAc 24L0．5NNaOH 35L在約30-40分鐘內(nèi)在10L MeOH(或EtOH)中的Boc-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚11加入純的MsOH(1．16L)處理，(起始溫度16℃，最終溫度28℃)。在N2氣氛下將暗紅色溶液陳化過夜。然后混合物泵送入含有24L iProAc和35L 0．5N NaOH的100L萃取器中。水層的pH是7。加入NaOH(6M)直到pH≥10．5。隨著pH增加顏色由紅色變?yōu)辄S色。分離各層，有機(jī)層(24L)用NMR分析表明在iPrOAc中含有13％(mol)MeOH[5％(體積)]。LC測(cè)定為2．48kg。
實(shí)施例15B
O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(游離堿形式)(12)原料BOC-O-芐基絲氨酸螺3．787kg(6．96mol)二氫吲哚(11)甲磺酸2．006kg(20．87mol)乙酸異丙酯38L1M氫氧化鈉水溶液 16L50％氫氧化鈉水溶液1．6L將甲磺酸(2．006kg，1．355L，～3eq)加入反應(yīng)器中攪拌的BOC-O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(11)(3．787kg)在乙醇中的溶液(總體積～15L)中?；旌衔锛訜嶂?5-40℃。7小時(shí)后LC表明已無原料，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫過夜。第二天，攪拌下將水(44L)加入混合物中，混合物冷卻至～5℃，攪拌30分鐘，然后通過管內(nèi)濾器(裝入10μ心子)過濾入貯罐中。然后整批料倒吸到反應(yīng)器中。用水(10L)清洗反應(yīng)器和管線，洗滌水進(jìn)入所述貯罐中，洗滌水用于清洗并送回反應(yīng)器中，加入乙酸異丙酯(38L)，接著加入1M氫氧化鈉水溶液(16L)。該批料冷卻至10-15℃，下面水層的pH約7，加入50％氫氧化鈉水溶液(1．6L)(pH＞10)?；旌衔镌?0-15℃攪拌25分鐘，然后沉降10-15分鐘。分離下面的水層(78．1kg)。LC分析表明水溶液中含有28．4g化合物12(理論量的0．85％)。有機(jī)溶液的體積=51L。LC分析表明得到3．057kg產(chǎn)物，從3kg，7．49mol CBZ-螺二氫吲哚磺酰胺化合物(1)計(jì)算的總收率是92％。該溶液用于下一步驟中。
實(shí)施例16A
Boc-氨基異丁酰O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(14)原料螺二氫吲哚-胺(12) 2481g(5．57mol)氨基酸肽(13) 1247．1g(6．16mol)
DCC 1266．7g(6．16mol)HOBT 827g(6．16mol)IPAc 52LH2O37L0．5NNaOH 36L0．5NHCl36L飽和的NaHCO336L用IPAc稀釋胺12的IPAc溶液至總體積39L，加入37L水。在室溫和氮?dú)夥障聝上嗷旌衔镆来斡霉腆wHOBT(827g)，熔融的DCC(1266．7g)，和氨基酸13處理。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，攪拌時(shí)LC分析表明原料12逐漸消失(＜0．3％(面積))。通過Solka FlocTM過濾混合物，固體用13L IPAc洗滌。物料以兩相混合物形式存放過夜。
將混合物加入100L萃取器中，分離水層，有機(jī)層依次用36L 0．5NNaOH，0．5N HCl和飽和NaHCO3洗滌。測(cè)試產(chǎn)量3160g(由螺二氫吲哚計(jì)算的收率是81％，體積測(cè)定誤差±5％)。濃縮溶液至小體積，用乙醇(2×4L)沖洗。在需要時(shí)中間體化合物14可以通過加入水結(jié)晶出來進(jìn)行分離。
使用其它肽偶合劑如羰基二咪唑或形成混合酐，例如碳酸仲丁酯，得到低產(chǎn)率高度差向異構(gòu)化的14。而其他肽偶合劑很昂貴。
實(shí)施例16B
Boc-氨基異丁酰O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(14)原料螺二氫吲哚胺(12) 3．057kg(6．89mol)二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)1．56kg(7．56mol)1-羥基苯并三唑(HOBt) 1．02kg(7．55mol)Boc-2-氨基異丁酸(13) 1．54kg(7．58mol)乙酸異丙酯 32L1M氫氧化鈉水溶液 38L0．5M鹽酸水溶液38L飽和碳酸氫鈉水溶液 38L無水乙醇 45L在室溫和氮?dú)夥諗嚢柘聦⑺?49L)加入反應(yīng)器中的螺二氫吲哚12(3．057kg)在乙酸異丙酯中的溶液中(總體積～51L)。然后依次加入下列化學(xué)品DCC(1．56kg，～1．1eq)，HOBt(1．02kg，～1．1eq)和最后N-Boc-2-氨基異丁酸13(1．54kg，～1．1eq)。將混合物在室溫下強(qiáng)力攪拌2小時(shí)。此時(shí)LC分析表明反應(yīng)完成。用泵經(jīng)過Estrella濾器過濾混合物進(jìn)入另一容器中。使用乙酸異丙酯(22L)洗滌容器、過濾器、泵和管線，流入接受容器中。然后兩相混合物攪拌5分鐘，分層。下面的水層(水溶液重量=51．1kg)順利地分離出。有機(jī)溶液依次用1M氫氧化鈉水溶液(38L)，0．5M鹽酸水溶液(38L)，和最后用飽和碳酸氫鈉水溶液(38L)順利洗滌。
有機(jī)溶液用泵經(jīng)管內(nèi)濾器(含有10μ心子)送入為使溶劑轉(zhuǎn)換為乙醇的另一容器中。用乙酸異丙酯(10L)洗滌所述容器，再洗滌泵、過濾器和管線，進(jìn)入接受容器中。將濾液和洗滌液合并?？傮w積=75L(用水位指示器測(cè)量)。LC分析得到4．395kg Boc-氨基異丁酰O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(14)，即從7．49mol起始的CBZ-螺二氫吲哚磺酰胺(1)計(jì)算總收率是93％。
混合物真空濃縮至小體積(～15L)，通過“加入和放出”無水乙醇(共45L)將乙酸異丙酯轉(zhuǎn)換為乙醇。在溶劑轉(zhuǎn)換結(jié)束時(shí)，GC分析表明剩余＜1％乙酸異丙酯。含有4．395kg化合物14的溶液(25L)用于下一步驟。需要時(shí)，中間體化合物14可以通過加入水結(jié)晶出來進(jìn)行分離。
實(shí)施例17A
氨基異丁酰O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(15)原料Boc螺二氫吲哚(14)3160g(5．03mol)甲磺酸(MsOH) 979mL(15．1mol)EtOH6．2LH2O 30L1NNaOH 11L
EtOAc 26LDaro 60活性炭1Kg將Boc螺二氫吲哚14溶于6．2L EtOH中，用MsOH(979mL)處理。溫度從20℃升至30℃，反應(yīng)進(jìn)行一夜。在20℃12小時(shí)后，還有15％(面積)原料，這樣將混合物加熱至35℃保持6小時(shí)。在反應(yīng)完成(化合物14＜0．1％(面積))時(shí)，將反應(yīng)混合物冷卻至20℃，加入30L H2O，溶液用裝有聚丙烯濾布的玻璃漏斗過濾出剩余的DCU。將混合物轉(zhuǎn)移到100L萃取器中，加入26L EtOAc。水層加入冷卻的1NNaOH(11L)和1L 50％NaOH堿化。需要加入冰以保持溫度低于14℃。較高溫度將導(dǎo)致明顯乳化問題。
有機(jī)層在50℃和約21″Hg下蒸餾，直到KF＜1000μg／mL。較低的KF使成鹽步驟中碳處理更有效和回收更好。在700g規(guī)模生產(chǎn)時(shí)KF能降為160μg／mL。溶液用乙酸乙酯稀釋至總體積31L(LC測(cè)定為2．40kg)。加入活性炭(Darco G-60)，混合物攪拌24小時(shí)?；旌衔锿ㄟ^Solka FlocTM過濾，濾餅用乙酸乙酯(16L)洗滌，經(jīng)測(cè)定為3．24kg。
實(shí)施例17B
氨基異丁酰O-芐基絲氨酸螺二氫吲哚(15)原料Boc螺二氫吲哚(14)4．395kg(6．99mol)甲磺酸 2．017kg(20．99mol)乙酸乙酯 185L
1M氫氧化鈉水溶液 16L50％氫氧化鈉水溶液2．6LDarco G-60900gSolka FlocTM2．5Kg在室溫下將甲磺酸(2．017kg，1．36L，～3eq)加入反應(yīng)器中攪拌的Boc螺二氫吲哚14(4．395kg)在乙醇中的溶液(總體積～25L)中?；旌衔锛訜嶂?5-40℃，攪拌過夜。第二天，混合物仍含有～1．1％(面積)原料，這樣繼續(xù)反應(yīng)4小時(shí)，LC表明產(chǎn)物／原料比例是99．6／0．4?；旌衔镎婵諠饪s至體積～15L，然后用水(44L)稀釋?；旌衔锢鋮s至5℃，攪拌30分鐘，然后用泵通過Sparkler管內(nèi)濾器(含有10μ心子)過濾至另一容器中以除去少量剩余的DCU。
所述容器，泵，濾器和管線用水(10L)洗滌，洗滌水放入所述容器中。將乙酸乙酯(36L)加入所述容器中，攪拌的混合物冷卻至10℃。在10℃加入冷的(5-10℃)1M氫氧化鈉水溶液(16L)和冷的(5-10℃)50％氫氧化鈉水溶液(2．6L)并將溫度升至14℃。得到的混合物在＜14℃攪拌15分鐘，然后分離出下面的水層。
混合物真空濃縮至體積～20L，加入乙酸乙酯(35L)和乙醇(5L)的混合物，同時(shí)保持體積～20L。蒸餾結(jié)束時(shí)KF是9160mg／mL。通過“加入和放出”乙酸乙酯(共40L)將溶劑轉(zhuǎn)換為乙酸乙酯。蒸餾結(jié)束時(shí)，KF是446mg／mL?；旌衔镉靡宜嵋阴?10L)稀釋。
將Darco G-60(900g)加入渾濁的混合物中?；旌衔镉靡宜嵋阴?6L)洗滌?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜。第二天，將Solka FlocTM(0．5kg)加入在容器中攪拌的混合物中，然后在小量乙酸乙酯中攪拌Solka FlocTM(2．0kg))，裝填入Estrella濾器中。過量的溶劑通過含有10μ心子的Sparkler管內(nèi)濾器用泵抽出。漿液用泵從容器中經(jīng)過濾器，再通過另一濾器送入2×40L不銹鋼貯罐中。目測(cè)看出液體清澈透明。容器用乙酸乙酯(22L)洗滌，用該乙酸乙酯通過上述路線進(jìn)行洗滌放入不銹鋼罐中。將兩個(gè)罐中的物料都送入反應(yīng)器中，將溶液充分混合。
混合物(58L)KF是2950mg／mL，用真空濃縮再干燥至體積20-25L。加入乙酸乙酯(25L)將整批料稀釋至體積46L(用水位指示器測(cè))。KF是363mg／mL。加入乙酸乙酯(17L)將混合物稀釋至體積62L，用于所述方法的最后步驟。
實(shí)施例18A
螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽(16)原料胺(15) 2340g(4．43mol)甲磺酸(MsOH) 316mL(4．88mol)EtOAc 60LEtOH 4．8L8％EtOH的EtOAc溶液 20L將上面步驟中得到的15的溶液體積用乙酸乙酯調(diào)節(jié)至60L，加入EtOH(4．8L)。在45℃，將MsOH(316mL)在3L EtOAc中加入。將496g標(biāo)題化合物Ⅰ型種晶(使用占游離胺重量10％的種晶)加入深紅色均勻的溶液中。溫度升至約48℃，反應(yīng)混合物在52℃陳化1．5小時(shí)。分析表明完全轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(Ⅰ型)。(若使用小于10％種晶則需要更長的陳化時(shí)間(＞3小時(shí)))。使?jié){液冷卻至20℃過夜，在N2氣氛下離心過濾。濾餅用20L 8％EtOH的EtOAc溶液洗滌。在過濾過程中N2是必需的，因?yàn)闈窠Y(jié)晶吸水性很強(qiáng)。混合物在真空和35℃下干燥，得到2．7kg(總收率56％)標(biāo)題化合物(I型)(純度99．9％(面積)；對(duì)映體＜0．1％)。
也可將Ⅱ型結(jié)晶轉(zhuǎn)化為Ⅰ型結(jié)晶，其中按上述方法通過加入MsOH在EtOAc-EtOH中形成鹽，初始鹽溶液(55℃)冷卻至45℃未完成轉(zhuǎn)換。在該溫度下結(jié)晶開始出現(xiàn)，隨著時(shí)間漿液變得更稠。溫度升至51℃，使?jié){液陳化過夜?？深A(yù)期完全轉(zhuǎn)化為16的Ⅰ型結(jié)晶。該方法也可以用于制備16的Ⅰ型結(jié)晶種晶。
實(shí)施例18B
螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽(16)原料胺(15)3．1kg(5．86mol)甲磺酸620g(6．45mol)乙酸乙酯 37L無水乙醇 8．7L螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽(Ⅰ型) 70g(0．11mol)將無水乙醇(6．4L)加入反應(yīng)器中的胺(15)(3．1kg)在乙酸乙酯中的溶液中(總體積～62L)?；旌衔锛訜嶂?0℃，50-54℃，～5分鐘內(nèi)加入甲磺酸(620g，412mL，1．1eq)在乙酸乙酯(11L)中的溶液?；旌衔镉寐輀3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽(I型)(70g)接種，得到的漿液攪拌下，在55℃和氮?dú)夥障录訜徇^夜。
第2天，將漿液冷卻到15-20℃，保持2小時(shí)，然后在氮?dú)夥障碌渭佑?0cm聚丙烯濾布上。固體產(chǎn)物用無水乙醇(2．3L)在乙酸乙酯(26L)中的混合物洗滌。取出白色固體產(chǎn)物，在Apex烘箱中，35℃真空干燥適當(dāng)時(shí)間(約兩天)，用Jackson-Crockatt篩篩分干燥的螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽(3．352kg)，得到3．347kg(包括種晶70g)，產(chǎn)量=3．277kg。
HPLC條件在Zorbax RX-C8(4．6mm×25cm)中LC保留時(shí)間，λ=210nm，流速=1．5mL／min?；衔?60∶40 CH3CN-H2O(1％H3PO4)RT=5．Omin化合物1b 35∶65 CH3CN-H2O(O．1w％NH4OAc)RT=6．2min化合物10 60∶40 CH3CN-H2O(0．1H3PO4)RT=2．9min化合物11 60∶40 CH3CN-H2O(0．1％H3PO4)RT=5．4min化合物12 40∶60 CH3CN-H2O[pH 5．25 NaH2PO4(6．9g／L of H2O)(用NaOH調(diào)節(jié)pH)]RT=5．6min化合物1460∶40％CH3CN-H2O(0．1％H3PO4)RT=4．65min化合物1540∶60％CH3CN-H2O[pH=5．25 NaH2PO4(6．9g／L of H2O)]用NaOH調(diào)節(jié)pH)RT=4．9min在Zorbax RX-C8(4．6mm×25cm)中LC保留時(shí)間λ=210nm，流速=1．2mL／min，柱溫度=48℃，溶劑A=0．05％磷酸+0．01％三乙胺水溶液，溶劑B=乙腈梯度系統(tǒng)時(shí)間％A％B0min95 535min 10 9038min 95 540min 95 5
保留時(shí)間(min)化合物1 25．2化合物1b8．5化合物1020．5化合物1126．3化合物1214．8化合物1425．6化合物1515．7實(shí)施例19Ⅰ型N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽結(jié)晶的制備按照實(shí)施例18A的方法，可進(jìn)行Ⅱ型結(jié)晶向Ⅰ型結(jié)晶的轉(zhuǎn)化，其中通過加入MsOH在EtOAc-EtOH中生成鹽，初始鹽溶液(55℃)冷卻至45℃。在該溫度下結(jié)晶開始出現(xiàn)，隨著時(shí)間延長漿液變成更稠。溫度升至51℃，漿液陳化過夜?？善谕耆D(zhuǎn)化為Ⅰ型結(jié)晶。
實(shí)施例20Ⅰ型N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽結(jié)晶的制備在約25℃攪拌Ⅱ型N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的異丙醇溶液約2-24小時(shí)，進(jìn)行Ⅱ型結(jié)晶向Ⅰ型結(jié)晶的轉(zhuǎn)化。
實(shí)施例21Ⅳ型N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽結(jié)晶的制備在42℃和攪拌下將8．4gN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的任意形態(tài)試樣溶于24．8mL乙酸乙酯，1．6mL乙醇和1．95mL水的混合物中。在溫度40℃從溶液中蒸發(fā)溶劑，得到的固體用研缽研磨成細(xì)粉，將細(xì)粉暴露在約75％的相對(duì)濕度下，得到標(biāo)題所述Ⅳ型結(jié)晶。
實(shí)施例22Ⅳ型N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽結(jié)晶的制備將N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的任意形態(tài)試樣從乙酸乙酯／乙醇／水(24．8／1．6／1．95(v／v／v))的溶液中重結(jié)晶，得到標(biāo)題所述Ⅳ型結(jié)晶。
實(shí)施例23Ⅳ型N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽結(jié)晶的制備在約25℃將Ⅰ型N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽結(jié)晶在含有約2．8％(重量)水的乙酸異丙酯／乙醇(90∶10(v／v))中的漿液攪拌過夜，分離得到的固體。
在本發(fā)明被介紹及參考一些具體實(shí)施方案舉例說明后，本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到可對(duì)其程序和方法做出各種修改、變化、改進(jìn)、替換、刪除，或增加，均不背離本發(fā)明的精神和范圍。例如，可用本文列舉的具體劑量之外的有效劑量，來作為以本發(fā)明上述化合物治療哺乳動(dòng)物任何適應(yīng)癥的不同效應(yīng)之結(jié)果。同樣，根據(jù)選擇的具體活性化合物或是否存在藥物載體，以及制劑的類型和使用的給藥方式，可觀察到不同的具體藥物學(xué)反應(yīng)，而根據(jù)本發(fā)明的目的和實(shí)踐可以構(gòu)想出此種預(yù)期的變化和差別。因此，本發(fā)明試圖由后面所附權(quán)利要求來加以限定，并且應(yīng)對(duì)該權(quán)利要求之寬度作出合理解釋。
權(quán)利要求
1．指定為Ⅰ型結(jié)晶的多晶型化合物N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的多晶型化合物，其特征是在氮?dú)夥障拢诓钍緬呙枇繜崞鞒刂?，?0℃／分鐘的速度加熱時(shí)熔化吸熱，外推得出開始熔化溫度約170℃。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的多晶型化合物，其特征是其X射線粉末衍射圖象在約6．5，14．7，16．9，17．1，17．9，19．5，21．1，21．7和22．0°(2θ)處有主要反射。
4．指定為Ⅳ型結(jié)晶的多晶型化合物N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽。
5．根據(jù)權(quán)利要求4的多晶型化合物，其特征是在氮?dú)夥障略诓钍緬呙枇繜崞鞒刂幸?0℃／分鐘的速度加熱時(shí)，在溫度約45℃吸熱失水，接著吸熱，外推得出開始溫度約129℃。
6．根據(jù)權(quán)利要求4的多晶型化合物，其中每摩爾N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽含有約3．5摩爾水。
7．根據(jù)權(quán)利要求4的多晶型化合物，其特征是其Ⅹ-射線粉末衍射圖象在約16．0，16．2，18．3，20．1，21．0和24．2°(2θ)處有主要反射。
8．藥物組合物，含有可藥用載體和有效量權(quán)利要求1的多晶型化合物。
9．用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物，含有二膦酸鹽化合物和權(quán)利要求1的多晶型化合物相結(jié)合。
10根據(jù)權(quán)利要求9的藥物組合物，其中二膦酸鹽化合物是阿侖膦酸鹽(alendronate)。
11．藥物組合物，含有可藥用載體和有效量權(quán)利要求4的多晶型化合物。
12．用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物，含有二膦酸鹽化合物和權(quán)利要求4的多晶型化合物相結(jié)合。
13．根據(jù)權(quán)利要求12的藥物組合物，其中二膦酸鹽化合物是阿侖膦酸鹽(alendronate)。
14．提高人或動(dòng)物內(nèi)生生長激素水平的方法，包括將有效量的權(quán)利要求1的多晶型化合物施用于所述人或動(dòng)物。
15．提高人或動(dòng)物內(nèi)生生長激素水平的方法，包括將有效量的權(quán)利要求1的多晶型化合物和另外的生長激素促分泌素施用于所述人或動(dòng)物。
16．根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中另外的生長激素促分泌素選自生長激素釋放肽GHRP-6；生長激素釋放肽GHRP-2；生長激素釋放肽GHRP-1；B-HT920；生長激素釋放因子；生長激素釋放因子類似物；IGF-1和IGF-2。
17．提高飼料效率，促進(jìn)家畜生長，提高其奶產(chǎn)量和改進(jìn)其肉體質(zhì)量的方法，包括將有效量的權(quán)利要求1的多晶型化合物施用于所述家畜。
18．治療或預(yù)防選自下列疾病骨質(zhì)疏松癥，分解代謝病，免疫缺陷，包括具有低于正常水平T4／T8細(xì)胞比例的個(gè)體的免疫缺陷，髖關(guān)節(jié)骨折，中老年人的肌肉骨骼損傷，成年人和兒童生長激素不足，肥胖癥，由于慢性病如艾滋病或癌引起的惡病質(zhì)和蛋白質(zhì)損失的方法；以及在需要時(shí)治療由大型外科手術(shù)、損傷或燒傷后康復(fù)期病人的方法，包括將有效量權(quán)利要求1的多晶型化合物施用于所述病人。
19．治療骨質(zhì)疏松癥的方法，包括將二膦酸鹽化合物和權(quán)利要求1的多晶型化合物相結(jié)合施用于患有骨質(zhì)疏松癥的病人。
20．根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中二膦酸鹽化合物是阿侖膦酸鹽(alendronate)。
21．提高人或動(dòng)物內(nèi)生生長激素水平的方法，包括將有效量的權(quán)利要求4的多晶型化合物施用于所述人或動(dòng)物。
22．提高人或動(dòng)物內(nèi)生生長激素水平的方法，包括將有效量的權(quán)利要求1的多晶型化合物和另外的生長激素促分泌素施用于所述人或動(dòng)物。
23．根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其中另外的生長激素促分泌素選自生長激素釋放肽GHRP-6；生長激素釋放肽GHRP-2；生長激素釋放肽GHRP-1；B-HT920；生長激素釋放因子；生長激素釋放因子類似物；IGF-1和IGF-2。
24．提高飼料效率，促進(jìn)家畜生長，增加其奶產(chǎn)量和改進(jìn)其肉體質(zhì)量的方法，包括將有效量權(quán)利要求4的多晶型化合物施用于所述家畜。
25．治療或預(yù)防選自下列疾病骨質(zhì)疏松癥，分解代謝病，免疫缺陷，包括具有低于正常水平T4／T8細(xì)胞比例的個(gè)體的免疫缺陷，髖關(guān)節(jié)骨折，中老年人的肌肉骨骼損傷，成年人和兒童生長激素不足，肥胖癥，由于慢性病如艾滋病或癌引起的惡病質(zhì)和蛋白質(zhì)損失的方法，以及在需要時(shí)治療由大型外科手術(shù)、損傷或燒傷后康復(fù)期病人的方法，包括將有效量的權(quán)利要求4的多晶型化合物施用于病人。
26．治療骨質(zhì)疏松癥的方法，包括將二膦酸鹽化合物和權(quán)利要求4的多晶型化合物相結(jié)合施用于患有骨質(zhì)疏松癥的病人。
27．根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中二膦酸鹽化合物是阿侖膦酸鹽(alendronate)。
28．制備權(quán)利要求1指定為Ⅰ型結(jié)晶的多晶型化合物的方法，包括在約25℃攪拌Ⅱ型N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺?；?螺[3H-吲哚-3，4＇-哌啶]-1＇-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽的異丙醇溶液約2-24小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于多晶型化合物N－[1(R)－[(1,2－二氫－1－甲磺酰基螺[3H－吲哚－3,4′－哌啶]－1′－基)羰基]－2－(苯基甲氧基)乙基]－2－氨基－2－甲基丙酰胺甲磺酸鹽,它是生長激素的促分泌素,用于食用動(dòng)物促進(jìn)其生長,從而更有效地提供食用肉產(chǎn)物的生產(chǎn),和用于人治療以生長激素分泌不足為特征的生理或內(nèi)科疾病,和治療需要將生長激素的合成代謝作用加以改善的內(nèi)科疾病。就藥物制劑中所含物的熱力學(xué)穩(wěn)定性和適應(yīng)性而言,本發(fā)明的多晶型化合物優(yōu)于其他已知晶型的化合物N－[1(R)－[(1,2－二氫－1－甲磺酰基螺[3H－吲哚－3,4′－哌啶]－1′－基)羰基]－2－(苯基甲氧基)乙基]－2－氨基－2－甲基丙酰胺甲磺酸鹽。本發(fā)明還涉及制備這些多晶型化合物的方法,含有這些多晶型化合物作為活性組分的藥物制劑,以及所述多晶型化合物和其制劑在治療某些疾病中的用途。
文檔編號(hào)C07D471/10GK1205703SQ96199328
公開日1999年1月20日 申請(qǐng)日期1996年10月23日 優(yōu)先權(quán)日1995年10月27日
發(fā)明者J·P·德拉佩, D·C·杜波斯特, M·J·考夫曼, J·A·麥考萊, J·L·范德里拉, R·J·瓦索羅納 申請(qǐng)人:麥克公司