專利名稱：具有金屬肽酶抑制活性的硫醇衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有金屬肽酶抑制活性的硫醇衍生物，更具體地，它涉及在治療心血管疾病中有用的N-巰基?；奖彼嵫苌?。
對金屬肽酶抑制分子研究的藥理學(xué)興趣來自所述酶對心臟循環(huán)系統(tǒng)水平所施加的作用。
具有血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制活性的化合物主要用于治療高血壓、心力衰竭和梗死后，因為它們抑制血管緊張肽Ⅱ(一種產(chǎn)生多種升高血壓作用的物質(zhì))的形成，這是一眾所周知的事實。
具有內(nèi)皮縮血管肽轉(zhuǎn)化酶(ECE)抑制活性的化合物用作抗血管收縮劑，因為它們抑制內(nèi)皮縮血管肽(一種具有血管收縮活性的21氨基酸肽)的形成。
相反，具有中性內(nèi)肽酶(NEP)(也稱為腦啡肽酶)抑制活性的化合物作為血管舒張劑是有用的，因為NEP酶不但引起內(nèi)源腦啡肽酶，而且還引起某些促尿鈉排泄因子如心房因子(ANF)(一種由心臟分泌的增加血管舒張和在腎水平上，增加利尿和尿鈉排泄的激素)的失活。
因此，即使是通過不同的作用機制對心血管系統(tǒng)施加其作用，具有金屬肽酶抑制活性的化合物通常是單獨或聯(lián)合用于治療高血壓、腎衰、充血性心力衰竭和局部缺血性心臟病。
在金屬肽酶的硫醇衍生物抑制劑中，Thiorphan〔(DL-(3-巰基-2-芐基丙?；?甘氨酸)〕(首先由Roques等人敘述于自然(Nature)，288卷，286-288頁，(1980)中)和卡托普利(Merck索引，第十一版，第1773號，267頁)分別被看成是NEP-抑制劑和ACE-抑制劑的母體化合物。
其它具有硫醇結(jié)構(gòu)的具有金屬肽酶抑制活性的分子敘述于文獻(xiàn)中。
美國專利4，401，677和4，199，512(兩者都以E．R．Squibb & Sons，Inc．的名義)分別敘述了具有腦啡肽酶抑制活性和ACE-抑制活性的巰基烷?；被?。
歐洲專利申請0419327(Societe Civile Bioproiect)敘述了分別具有腦啡肽酶和ACE抑制活性的氨基酸衍生物。
歐洲專利申請0449523(E．R．Squib & Sohs，Inc．)敘述了具有NEP-抑制活性的巰基或?；虼谆０贰?br> 國際專利申請WO 93／08162(Rhone-Poulenc Rorer S．A．-Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale(INSERM))敘述了具有混合的ACE／NEP抑制活性的β，β-二取代的α-巰基甲基丙酰基酰胺。
歐洲專利申請0524553〔Institut National de la Sante et de laRecherche Médicale(INSERM)〕敘述了具有中性內(nèi)肽酶和肽基二肽酶A抑制活性的?；鶐€基烷?；摹?br> 歐洲專利申請0566157(Schering Corporation)敘述了具有NEP-抑制活性的硫醇衍生物如N-巰基?；被?。
具有ACE-抑制和NEP-抑制活性的α-巰基?；倪€由S．S．Bhagwat等人敘述于Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，7，735-738，1995中。
在最后的這一工作中作者得出結(jié)論，盡管在具有α-巰基?；慕Y(jié)構(gòu)的分子中二苯基甲基基團(tuán)的存在帶來了令人感興趣的混合的ACE／NEP-抑制活性，但二苯基基團(tuán)被如α-或β-萘基的基團(tuán)的取代使活性顯著喪失。
現(xiàn)在我們已發(fā)現(xiàn)對血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶以及對中性內(nèi)肽酶(混合的或雙重的ACE／NEP抑制活性)具有顯著抑制活性的N-巰基?；奖彼嵫苌?，其在治療心血管病上特別有用。
因此，本發(fā)明的目的是式(Ⅰ)化合物以及其藥物可接受的鹽
其中R是巰基或在生物中可轉(zhuǎn)化成巰基基團(tuán)的R4COS基團(tuán)；R1是直鏈或支鏈的C2-C4烷基基團(tuán)或芳基或在烷基部分具有從1到6個碳原子的芳烷基基團(tuán)，其中芳基是苯基或具有1或2個選自氮、氧和硫的雜原子的5或6元芳雜環(huán)，其可被1或多個取代基取代或不取代，相同的或不同的，取代基是選自鹵素原子、羥基基團(tuán)、烷氧基、烷基、烷硫基、在烷基部分具有從1到6個碳原子的烷基磺?；蛲檠趸驶鶊F(tuán)、含1或多個氟原子的C1-C3烷基基團(tuán)、羧基基團(tuán)、硝基基團(tuán)、氨基或氨基羰基基團(tuán)、酰氨基基團(tuán)、氨基磺?；鶊F(tuán)、在烷基部分具有從1到6個碳原子的單-或二-烷基氨基或者單-或二-烷基氨基羰基基團(tuán)；R2是氫原子、直鏈或支鏈的C1-C4烷基或芐基基團(tuán)；R3是由具有1或2個選自氮、氧和硫的雜原子的5或6元芳雜環(huán)取代的苯基，作為苯基和雜環(huán)基團(tuán)，可以被一或多個取代基取代或不取代，可以相同或不同，如對R1所指出的；R4是直鏈或支鏈C1-C4烷基基團(tuán)或苯基；用星號標(biāo)記的碳原子是立體結(jié)構(gòu)中心。
式Ⅰ的化合物含兩個立體結(jié)構(gòu)中心，因此可以立體異構(gòu)體的形式存在。
因此，本發(fā)明的目的是以立體異構(gòu)混合物形式和以單一立體異構(gòu)體形式的式Ⅰ化合物。
本發(fā)明目的式Ⅰ化合物具有混合的ACE／NEP-抑制活性并且可用于治療心血管疾病。
盡管“混合的”和“雙重的”的兩個術(shù)語都無差異地使用，但是在文獻(xiàn)中對同時具有ACE和NEP-抑制活性的化合物更普遍地接受術(shù)語“雙重的”。
在本文中，術(shù)語“混合的”和“雙重的”被認(rèn)為是等同的。
在本說明書中，除非另外指明，對術(shù)語直鏈或支鏈烷基基團(tuán)，我們是指烷基如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、異丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、異戊基、叔戊基、正己基和異己基基團(tuán)；對術(shù)語直鏈或支鏈烷氧基，我們是指烷氧基如甲氧基、乙氧基、正丙氧基和異丙氧基；對術(shù)語鹵素原子，我們是指氟、鹵、溴或碘原子；對術(shù)語?；覀兪侵笍闹净蚍枷泗人崛缫宜?、丙酸、丁酸和苯甲酸衍生的?；鶊F(tuán)；對術(shù)語含1或2個選自氮、氧和硫中的雜原子的5或6元芳香雜環(huán)，我們是指如噻唑、異噁唑、噁唑、異噻唑、吡唑、咪唑、噻吩、吡咯、吡啶、嘧啶、吡嗪噠嗪和呋喃、選擇性地為苯并稠合的。
式Ⅰ化合物的藥物可接受的鹽的例子是與堿金屬或堿土金屬的鹽以及與藥物可接受的有機堿的鹽。
優(yōu)選的式Ⅰ化合物是其中R3是在4位取代有一雜環(huán)基團(tuán)的苯基的化合物。
在此類中更優(yōu)選的化合物是其中R1表示被一或多個取代基取代或不取代的芳烷基的式Ⅰ化合物，相同的或不同的，取代基選自鹵素原子、羥基、烷基或烷氧基。
在此類中更進(jìn)一步優(yōu)選的化合物是其中R1表示被一或多個取代基取代或不取代的苯基烷基的式Ⅰ化合物，相同的或不同的，取代基選自鹵素原子、羥基、烷基或烷氧基。
優(yōu)選的式Ⅰ化合物的藥物可接受的鹽的例子是與堿金屬如鈉、鋰和鉀的鹽。
對本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員很清楚地是其中R是在生物體中可轉(zhuǎn)化成巰基基團(tuán)的R4COS的式Ⅰ化合物和其中R2是烷基或芐基基團(tuán)的式Ⅰ化合物是其中分別R是巰基(R=SH)或R2是氫原子(R2=H)的相應(yīng)的式Ⅰ化合物的生物前體(前體藥物)。
本發(fā)明目的的優(yōu)選的式Ⅰ化合物的特定的例子是N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-吡啶基)-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-吡啶基)-苯丙氨酸芐酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-呋喃基)-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(5-嘧啶基)-苯丙氨酸乙酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-吡嗪基)-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-噻吩基)-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-噻吩基)-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-呋喃基)-苯丙氨酸甲酯；N-〔3-苯基羰基硫代-2-(3-吡啶基甲基)丙?！?4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸甲酯；N-〔3-乙?；虼?2-(3-甲氧基苯基)甲基-丙酰〕-4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸甲酯；N-〔3-乙?；虼?2-(2-氟苯基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸甲酯；N-〔3-苯基羰基硫代-2-(2-噻吩基)甲基-丙酰〕-4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸甲酯；N-〔2-(2-呋喃基)甲基-3-苯基羰基硫代-丙?！?4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸甲酯；N-〔2-(3-甲基-5-異噁唑基)甲基-3-苯基羰基硫代-丙?！?4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸甲酯；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸；
N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-吡啶基)-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-吡啶基)-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-呋喃基)-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(5-嘧啶基)-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-吡嗪基)-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-噻吩基)-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-噻吩基)-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-呋喃基)-苯丙氨酸；N-〔3-巰基-2-(3-吡啶基甲基)丙?！?4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸；N-〔3-巰基-2-(3-甲氧基苯基)甲基-丙酰〕-4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸；N-〔3-巰基-2-(2-噻吩基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸；N-〔3-巰基-2-(3-甲基-5-異噁唑基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸；N-〔2-(2-氟苯基)甲基-3-巰基-丙?！?4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸；N-〔2-(2-呋喃基)甲基-3-巰基-丙酰〕-4-(2-噻唑基)-苯丙氨酸。
本發(fā)明目的的式Ⅰ化合物的制備是按照下列合成方法進(jìn)行的，包括式Ⅱ化合物
其中R和R1具有上面所述的意義；和式Ⅲ的苯丙氨酸衍生物之間的反應(yīng)
其中R2和R3具有上面所述的意義。
縮合反應(yīng)按照肽化學(xué)常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。
在進(jìn)行反應(yīng)之前，適當(dāng)?shù)乇Ｗo(hù)可能會干擾反應(yīng)的選擇性官能團(tuán)是有益的。
選擇性保護(hù)是根據(jù)常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。
在這點上，優(yōu)選使用其中R是R4COS基團(tuán)的化合物作為式Ⅱ的中間體，因而得到其中R=R4COS的相應(yīng)的式Ⅰ化合物，從其經(jīng)水解可得其中R=SH的式Ⅰ化合物。
按照所進(jìn)行的反應(yīng)和要保護(hù)的官能團(tuán)，選擇性保護(hù)的有效性的評價以及所采取的保護(hù)種類的選擇是處于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員的常識之內(nèi)。
選擇性保護(hù)基的去除是按照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行的。
作為在有機化學(xué)中保護(hù)基應(yīng)用的一般性參考資料參看TheodoraW．Greene和Peter G．M．Wuts的“有機合成中的保護(hù)基”，JohnWiley & Sons．Inc．，第二版，1991。
式Ⅱ化合物是已知或容易按照所述常規(guī)方法制備的，例如在以E．R．Squibb & Sons Inc．的名義的英國專利號1576161中所述的。
另一可供選擇地，式Ⅱ化合物可按照由M．C．Fournié-Zalusky等人在J．Med．Chem．1994，37，1070-1083中所述的合成方法制備。
并且式Ⅲ的中間體化合物是已知或容易按照已知方法制備。
例如，式Ⅲ化合物可按照由W．C．Shieh等人在J．Org．Chem．1992，57，379-381中所述的合成方法制備。
另一可選擇地，式Ⅲ化合物可按由D．S．Wilbur等人在Bioconjugate Chem．1993，4，574-580中所述的從鹵代雜環(huán)化合物和甲錫烷苯丙氨酸衍生物開始通過偶聯(lián)方法(交叉偶聯(lián))制備。
以單一立體異構(gòu)體形式的式Ⅰ化合物是通過立體選擇性合成或通過按照常規(guī)技術(shù)的立體異構(gòu)體混合物的分離制備的。
并且本發(fā)明目的的式Ⅰ化合物的鹽的制備是按照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行的。
本發(fā)明目的的式Ⅰ化合物具有混合的ACE／NEP-抑制活性并可用于治療心血管疾病。
式Ⅰ化合物的抑制活性是通過體外試驗(實施例8)評價的。
特別地，式Ⅰ化合物的抑制活性是通過與前述的Thiorphan和卡托普利相比評價的。
式Ⅰ化合物的體外抑制活性表示為IC50值，結(jié)果為nM濃度。
產(chǎn)生所述的活性與卡托普利所涉及的ACE-抑制活性相當(dāng)，大于與Thiorphan所涉及的NEP-抑制活性。
而且式Ⅰ化合物的抑制活性還通過來自體內(nèi)的試驗與已知化合物(實施例9)相比評價。
特別地，N-〔3-巰基-2-(3，4-亞甲二氧基苯基)甲基-丙?！?(S)-苯丙氨酸和N-〔3-巰基-2-(3，4-亞甲二氧基苯基)甲基-丙?！?(S)-酪氨酸，作為腦啡肽酶和ACE-抑制劑敘述于前述的歐洲專利申請0419327中，下文分別稱作化合物R-1和R-2，以及N-(3-巰基-2-甲基丙基)-L-酪氨酸和N-(3-巰基-2-甲基丙酰基)-L-色氨酸作為ACE-抑制劑敘述于美國專利4，199，512中和作為腦啡肽酶抑制劑敘述于美國專利4，401，677中，下文分別稱作化合物R-3和R-4，作為對比化合物。
特別地，來自體內(nèi)的ACE／NEP-抑制活是通過評價用試驗化合物靜脈或口服途徑處理的自發(fā)性高血壓鼠(SHR)的組織勻漿(對ACE和NEP活性分別為肺和腎)的酶活性確定的。
值得注意的是由式Ⅰ化合物在來自體內(nèi)的試驗中顯示的活性證實在體外試驗中顯示的混合活性(雙重活性)，也出現(xiàn)在口服給藥后。
而且產(chǎn)生了所述活性顯著地高于對比化合物活性的結(jié)果。
為了治療上實用，式Ⅰ化合物可配制成適于口服或不經(jīng)腸胃給藥的固體或液體藥物組合物。
因此，在與藥用載體的混合物中含治療有效量的式Ⅰ化合物的藥物組合物是本發(fā)明的進(jìn)一步的目的。
按照本發(fā)明的藥物組合物的特定的例子是片劑、包衣片、膠囊、顆粒劑、適于口服給藥的溶液或懸浮液、適于不經(jīng)腸胃給藥的溶液和懸浮液。
本發(fā)明目的的藥物組合物是按照常規(guī)技術(shù)制備的。
式Ⅰ化合物或相應(yīng)前體藥物的一日劑量將取決于數(shù)種因素如疾病的嚴(yán)重性、病人的個體反應(yīng)或制劑的種類，但通常為每公斤體重0．1mg到10mg之間，分成單劑量或多個日劑量。
為了闡述本發(fā)明，現(xiàn)在給出下面的實施例。
除非另外指明，閃式色譜法是通過使用Baker公司(編碼7024-00)的閃式色譜硅膠進(jìn)行的。
實施例1N-叔丁氧羰基-4-(5-嘧啶基)-L-苯丙氨酸乙酯的制備。
5-嘧啶基硼酸(850mg；2毫摩爾)、N-叔丁氧羰基-4-三氟甲基磺?；?L-苯丙氨酸乙酯(450mg；2．2毫摩爾)、碳酸鈉(530mg)在水(2．59ml)中的溶液和甲苯∶乙醇=10∶4．5(20ml)混合液的混合物用氮氣脫氣30分鐘。
隨后，向其中加四(三苯基膦)鈀(0)(120mg；0．06毫摩爾)，反應(yīng)混合物在90℃加熱并在攪拌下保持3小時。
然后混合物保持在室溫并再加N-叔丁氧羰基-4-三氟甲基磺?；?L-苯丙氨酸乙酯(112mg)和四(三苯基膦)鈀(0)(30mg)。
混合物進(jìn)一步在90℃溫度加熱并在攪拌下保持另外18小時。
在室溫冷卻反應(yīng)混合物后，加乙酸乙酯(100ml)和水(40ml)。
分離各相并用硫酸鈉干燥有機相并在真空下蒸發(fā)。得到的殘余物經(jīng)閃式色譜法(硅膠，洗脫劑己烷∶乙酸乙酯=7∶3，氮氣壓力0．1大氣壓)純化，這樣得到了N-叔丁氧羰基-4-(5-嘧啶基)-L-苯丙氨酸乙酯(130mg；14％產(chǎn)率)，為無色油狀物。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)；δ(ppm)1．24(t，3H，CH2-CH3)；1．40[s，9H，C(CH3)3]；3．01-3．25(m，2H，CH2-CH)；4．19(q，2H，CH2-CH3)；4．52-4．65(m，1H，CH-COO)；5．06(d，1H，NH)；7．25-7．52(m，4H，亞苯基)；8．91(s，2H，N-CH-C-CH-N)；9．19(s，1H，N-CH-N)。
實施例2N-叔丁氧羰基-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯的制備將N-叔丁氧羰基-4-(三氟甲基磺?；?-L-苯丙氨酸甲酯(8g；32．3毫摩爾)和二(三苯基膦)氯化鈀(2．3g)加至2-三甲基甲錫烷基-噻唑(13．8g；32．3毫摩爾)在預(yù)先用氮氣脫氣的四氫呋喃∶甲苯=10∶1的混合物(50ml)的溶液中。
混合物回流24小時，隨后，再加2-三甲基甲錫烷基-噻唑(2g)。
在回流6小時后，加N-叔丁氧羰基-4-(三氟甲基磺酰基)-L-苯丙氨酸甲酯(2g)和二(三苯基膦)氯化鈀(700mg)。
產(chǎn)生的反應(yīng)混合物在攪拌下于70℃保持16小時，隨后在室溫下冷卻。
然后加水(200ml)至混合物中，用二氯甲烷(4×200ml)萃取之。
收集的有機相用硫酸鈉干燥并在真空下蒸發(fā)。
得到的殘余物經(jīng)閃式色譜法(硅膠，洗脫劑二氯甲烷∶乙酸乙酯=9∶1，氮氣壓力=0．1大氣壓)純化，這樣給出N-叔丁氧羰基-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯(2．3g；20％產(chǎn)率)。
1H-NMR(200 MHz，CDCl3)；δ(ppm)1．40[s，9H，C(CH3)3]；3．00-3．21(m，2H，CH2)；3．70(s，3H，COOCH3)；4．42-4．65(m，1H，CH-COO)；5．02(bd，1H，NH)；7．30(d，1H，S-CH-CH-N)；7．81(d，1H，S-CH-CH-N)；7．15-7．90(m，4H，亞苯基)。
實施例3N-叔丁氧羰基-4-(3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯的制備將3-溴吡啶(1．67g；10毫摩爾)和四(三苯基膦)鈀(0)(370mg；0．219毫摩爾)加至按照由D．S．Wilbur等人在BioconjugateChem．，1973，4，574-580中所述制備的N-叔丁氧羰基-4-(三丁基甲錫烷基)-L-苯丙氨酸甲酯(4g；7．03毫摩爾)在預(yù)先用氮氣脫氣的無水二甲基甲酰胺(30ml)的溶液中。
反應(yīng)混合物在攪拌下于室溫保持10分鐘，隨后在105℃加熱6小時。
再加四(三苯基膦)鈀(0)(0．0035毫摩爾)，反應(yīng)混合物在攪拌下于105℃保持8小時，然后在室溫冷卻。
向其中加水(100ml)，反應(yīng)混合物用己烷(3×150ml)萃取。
收集的有機相用飽和氟化鉀水溶液洗滌，硫酸鈉干燥并在真空下蒸發(fā)。
得到的殘余物用乙酸乙酯收集并過濾。
產(chǎn)生的溶液在真空下蒸發(fā)，殘余物經(jīng)閃式色譜法(硅膠，洗脫劑己烷∶乙酸乙酯=8∶2，氮氣壓力0．1大氣壓)純化給出N-叔丁氧羰基-4-(3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(1．5g；60％產(chǎn)率)，為無色油狀物。質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=3571H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)1．40[s，9H，C(CH3)3]；3．00-3．20(m，2H，CH2)；3．71(s，3H，COOCH3)；4．55(m，1H，CH-COO)；5．05(bd，1H，NH)；7．19-7．51(m，4H，亞苯基)；7．30-8．82(bm，4H，吡啶基)通過類似的操作方法制得下面的化合物N-叔丁氧羰基-4-(2-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=3571H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)1．40[s，9H，C(CH3)3]；3．03-3．21(m，2H，CH2-CH)；3．70(s，3H，COOCH3)；4．54-4．65(m，1H，CH-COO)；4．98(d，1H，CONH)；7．16-7．21(m，1H，N-C-CH-CH)；7．65-7．77(m，2H，N-CH-CH-CH)；7．19-7．93(m，4H，亞苯基)；8．63-8．68(m，1H，N-CH)。
N-叔丁氧羰基-4-(2-吡嗪基)-L-苯丙氨酸甲酯1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)1．40[s，9H，C(CH3)3]；3．02(m，2H，CH2)；3．70(s，3H，COOCH3)；4．53-4．70(m，1H，CH-COO)；5．03(bd，1H，NH)；7．21-7．98(m，4H，亞苯基)；8．49和8．62[2(bs，2H，N-CH-CH-N)]；9．00(s，1H，CH-N-CH-CH)；N-叔丁氧羰基-4-(2-噻吩基)-L-苯丙氨酸甲酯1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)1．41[s，9H，C(CH3)3]；2．98-3．18(m，2H，CH2)；3．71(s，3H，COOCH3)；4．53-4．64(m，1H，CH-COO)；4．98(bd，1H，NH)；7．02-7．28(m，3H，噻吩基)；7．10-7．54(m，4H，亞苯基)。
實施例44-(3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯二鹽酸鹽的制備將氯化亞砜(0．85ml；4．78毫摩爾)滴加至按照在實施例3中所述制備的N-叔丁氧羰基-4-(3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(1．4g；3．93毫摩爾)在甲醇(30ml)的溶液中。保持溫度在0℃。
滴加結(jié)束，使反應(yīng)混合物回到室溫并在攪拌下保持8小時。
然后在真空下蒸發(fā)溶劑給出4-(3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯二鹽酸鹽(820mg；71％產(chǎn)率)，就這樣用于下面的反應(yīng)中。
質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=257(游離堿)1H-NMR(200 MHz，D2O)δ(ppm) 3．11-332(m，2H，CH2)；3．67(s，3H，CH3)；4．31-4．37(m，1H，CH)；7．30-7．63(m，4H，亞苯基)；7．97(dd，1H，CH-N-CH-CH-CH)；8．59(d，1H，CH-N-CH-CH-CH)；8．65-8．71(m，1H，CH-N-CH-CH)；8．89(d，1H，CH-N-CH-CH-CH)。
通過類似的操作方法制得下面的化合物4-(2-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯二鹽酸鹽質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=257(游離堿)1H-NMR(200 MHz，D2O)δ(ppm)3．12-3．33(m，2H，CH2)；3．64(s，3H，CH3)；4．30-4．37(m，1H，CH)；7．36-7．73(m，4H，亞苯基)；7．78-8．58(m，4H，吡啶基)4-(5-嘧啶基)-L-苯丙氨酸乙酯二鹽酸鹽1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)1．11(t，3H，CH2-CH3)；3．10-3．35(m，2H，CH2-CH)；4．04-4．20(m，2H，CH2-CH3)；4．22-4．35(m，1H，CH)；7．40-7．84(m，4H，亞苯基)；9．15(s，2H，N-CH-C-CH-N)；9．19(s，1H，N-CH-N)；4-(2-吡嗪基)-L-苯丙氨酸甲酯二鹽酸鹽質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=258(游離堿)1H-NMR(200MHz，DCl 1N)δ(ppm)3．45-3．67(m，2H，CH2)；3．98(s，3H，CH3)；4．65-4．72(m，1H，CH)；7．68-8．26(m，4H，亞苯基)；9．02(d，1H，CH-N-CH-CH)；9．44(dd，1H，CH-N-CH-CH)；9．54(d，1H，CH-N-CH-CH)；4-(2-噻吩基)-L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=262(游離堿)1H-NMR(200 MHz，D2O)δ(ppm)2．98-3．19(m，2H，CH2)；3．65(s，3H，CH3)；4．21-4．28(m，1H，CH)；6．96-7．28(m，3H，噻吩基)；7．08-7．52(m，4H，亞苯基)；4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯二鹽酸鹽1H-NMR(200MHz D2O)δ(ppm)3．10-3．32(m，2H，CH2-CH)；3．68(s，3H，CH3)；4．30-4．38(m，1H，CH)；7．30-7．80(m，4H，亞苯基)；7．70-7．91(m，2H，噻唑基)。
實施例52-異丁基-3-苯基羰基硫代-丙酸的制備2-異丁基-丙烯酸(6．34g；49毫摩爾)和硫代苯甲酸(5．96ml；51毫摩爾)的混合物在攪拌下于100℃加熱2小時。
然后反應(yīng)混合物用石油醚40-60℃(100ml)處理并在-70℃的干冰／丙酮浴中冷卻。
經(jīng)過濾并用石油醚在-70℃洗滌后，收集得一殘余物，其在減壓下干燥給出2-異丁基-3-苯基羰基硫代-丙酸(11．12g；85％產(chǎn)率)，為白色固體。
1H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)0．90-1．00(m，6H)；1．40-1．90(m，3H)；2．70-2．90(m，1H)；3．10-3．40(m，2H)；7．35-7．62(m，3H)；7．90-8．00(d，2H)。
通過類似的操作方法制得下面的化合物2-(3-甲氧基苯基)甲基-3-苯基羰基硫代-丙酸
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)2．32(s，3H)；2．80-3．15(m，5H)；3．77(s，3H)；6．70-6．80(m，3H)；7．14-7．25(m，1H)。
3-乙?；虼?2-(2-氟苯基)甲基-丙酸1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)2．31(s，3H)；2．90-3．20(m，5H)；6．95-7．30(m，4H)。
3-苯基羰基硫代-2-(2-噻吩基)甲基-丙酸芐胺鹽1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2．45-3．25(m，5H，s-CH2-CH-CH2)；3．90(s，2H，CH2-苯基)；6．85-7．91(m，13H，芳基)。
實施例6N-(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物1)的制備羥基苯并三唑(0．54g；4毫摩爾)在四氫呋喃(30ml)中的溶液以及隨后的二環(huán)己基碳二亞胺(0．825g；4毫摩爾)在二氯甲烷(15ml)中的溶液在攪拌下于0℃加至(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酸(1．2g；4毫摩爾)、如在實施例4中所述制備的4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯二鹽酸鹽(1．34g；4毫摩爾)、三乙胺(1．11ml；8毫摩爾)在四氫呋喃(20ml)和二氯甲烷(30ml)中的混合物中。
反應(yīng)混合物在攪拌下保持20小時，然后濾除二環(huán)己基脲并在減壓下蒸發(fā)溶劑。
用乙酸乙酯收集殘余物并且溶液用20％氯化鈉、5％碳酸氫鈉和再次20％氯化鈉水溶液洗滌。
在各相分離和有機相蒸發(fā)后，產(chǎn)生的白色固體經(jīng)閃式色譜法(硅膠，洗脫劑乙酸乙酯∶己烷=40∶60，氮氣壓力0．1大氣壓)純化，如此給出N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯(1．5g)。
m．p．98-1002質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=5451H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．63-3．35(m，7H，CH2-CH-CH2，CH2-C6H4-噻唑基)；3．68(s，3H，COOCH3)；4．75-4．85(m，1H，CH-COO)；5．78(d，1H，NH)；7．10-8．00(m，16H，芳基)。
通過類似的操作方法，從已知或如在實施例4和5中所述制備的化合物起始，得到了下面的化合物N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰〕-4-(2-呋喃基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物2)。
m．p．132-134℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=5281H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．60-3．35(m，7H，CH2-CH-CH2，CH2-C6H4-呋喃基)；3．58(s，3H，COOCH3)；4．71-4．81(m，1H，CH-COO)；5．73(d，1H，NH)；6．40-8．00(m，17H，芳基)。
N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰〕-4-(5-嘧啶基)-L-苯丙氨酸乙酯(化合物3)m．p．117-119℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=5541H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)∶1．18(t，3H，CH3-CH2)；2．65-3．35(m，7H，CH2-CH-CH2，CH2-C6H4-嘧啶基)；3．95-4．20(m，2H，COOCH2)；4．70-4．80(m，1H，CH-COO)；5．78(d，1H，NH)；7．05-8．00(m，14H，苯基，亞苯基)；8．68(s，2H，CH-N-CH-N-CH)；9．11(s，1H，N-CH-N)。
N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙?！?4-(2-吡嗪基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物4)m．p．145-147℃
質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=5401H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．65-3．35(m，7H，CH2-CH-CH2，CH2-C6H4-吡嗪基)；3．61(s，3H，COOCH3)；4．75-4．85(m，1H，CH-COO)；5．78(d，1H，NH)；7．10-8．00(m，14H，苯基，亞苯基)；8．48-8．75(m，3H，CH-N-CH-CH-N)；N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙?！?4-(3-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物5)m．p．132-134℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=5391H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．66-2．79(m，1H，CH2-CH-CH2)；2．88-3．35(m，6H，CH2-CH-CH2，CH2-C6H4-吡啶基)；3．61(s，3H，COOCH3)；4．75-4．85(m，1H，CHCOO)；5．77(d，1H，NH)；7．07-7．99(m，16H，CH-CH-CH-N，苯基，亞苯基)；8．51-8．64(m，2H，CH-N-CH)；N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙?！?4-(2-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物6)m．p．123-125℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=5391H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．63-2．77(m，1H，CH2-CH-CH2)；2．85-3．35(m，6H，CH2-CH-CH2，CH2-C6H4-吡啶基)；3．56(s，3H，COOCH3)；4．75-4．85(m，1H，CHCOO)；5．75(d，1H，NH)；7．09-7．99(m，16H，CH-CH-CH-N，苯基，亞苯基)；8．61-8．65(m，1H，N-CH-CH)；N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙?！?4-(2-噻吩基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物7)質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=5441H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．64-336(m，7H，CH2-CH-CH2，CONH-CH-CH2)；3．58(s，3H，COOCH3)；4．74-4．83(m，1H，CH-COO)；5．74(d，1H，NH)；6．97-7．99(m，17H，芳基)；N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙?！?4-(3-噻吩基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物8)質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=5441H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．63-3．35(m，7H，CH2-CH-CH2，NH-H-CH2)；3．58(s，3H，COOCH3)；4．73-4．85(m，1H，CH-COO)；5．70-5．76(bd，1H，NH)；7．00-7．62(m，15H，苯基，亞苯基，CH-CH-S)；7．93-8．00(m，2H，CH-S-CH)；N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰〕-4-(3-呋喃基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物9)m．p．115-117℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=5281H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．62-3．36(m，7H，CH2-CH-CH2，NH-CH-CH2)；3．58(s，3H，COOCH3)；4．71-4．82(m，1H，CH-COO)；5．72(bd，1H，NH)；6．50-8．00(m，17H，芳基)；N-〔3-苯基羰基硫代-2-(3-吡啶基甲基)丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯-立體異構(gòu)體A(化合物10)質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=546TCL(乙酸乙酯∶石油醚=95∶5)，Rf=0．331H-NMR(200 MHz，CDCl3)；δ(ppm)2．60-3．38(m，7H，CH2-CH-CH2，NH-CH-CH2)；3．60(s，3H，COOCH3)；4．79-4．90(m，1H，CH-COO)；6．21(bd，1H，NH)；7．29-7．81(m，2H，噻唑基)；6．75-8．48(m，13H，苯基，亞苯基，吡啶基)N－〔3-苯基羰基硫代-2-(3-吡啶基甲基)丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯-立體異構(gòu)體B(化合物11)質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=546TLC(乙酸乙酯∶石油醚=95∶5)，Rf=0．241H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．61-3．25(m，7H，CH2-CH-CH2，NH-CH-CH2)；3．60(s，3H，COOCH3)；4．80-4．91(m，1H，CH-COO)；6．09(bd，1H，NH)；7．27-7．80(m，2H，噻唑基)；7．10-8．40(m，13H，苯基，亞苯基，吡啶基)；N-〔2-異丁基-3-苯基羰基硫代-丙酰〕-4-( 2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物12)1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)0．80-0．95(m，6H)；1．30-1．80(m，3H)；2．40-2．60(m，1H)；3．00-3．30(m，4H)；3．70(d，3H)；4．90-5．05(m，1H)；6．00-6．15(bt，1H)；7．10-8．00(m，11H)；N-〔3-乙酰基硫代-2-(3-甲氧基苯基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物13)1H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)2．30(d，3H)；2．45-3．20(m，7H)；3．63(d，3H)；3．75(d，3H)；4．70-4．93(m，1H)；5．70-5．90(dd，1H)；6．60-6．85(m，4H)；7．17-7．32(m，3H)；7．68-7．90(m，3H)；N-〔3-乙?；虼?2-(3-氟苯基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物14)1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)2．29(s，3H)；2．55-3．20(m，7H)；3．65(2s，3H)；4．70-4．90(m，1H)；5．80-6．00(2d，1H)；6．70-7．32(m，3H)；N-〔3-苯基羰基硫代-2-(2-噻吩基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯(化合物15)1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)2．68-3．37(m，7H)；3．60-3．61(2s，3H，COOCH3)；4．31-4．45(m，1H，CH-COOCH3)；6．01-6．10(2d，1H，NH)；6．80-8．00(m，14H)；實施例7N-〔(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸(化合物16)的制備如在實施例6中所述制備的N-〔(2S)-3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯(1．4g；2．57毫摩爾)懸浮于經(jīng)氮氣冒泡脫除氧氣的乙醇(30ml)中。
于5℃向此懸浮液中滴加氫氧化鈉1N(7．7ml)的脫氣水溶液并在加完后，再滴加脫氣乙醇(20ml)。
反應(yīng)混合物于室溫攪拌下保持4小時，然后于0℃冷卻并用鹽酸5％(10ml)酸化。
反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干并用乙腈和水收集殘余物，隨后過濾，如此給出N-〔(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸(1g)。
m．p．180-182℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=4271H-NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ(ppm)1．80-1．88(m，1H，SH)；2．22-2．84(m，5H，CH2-CH-CH2)；2．86-3．18(m，2H，CH2-CH-COO)；4．46-4．57(m，1H，CH-COO)；7．10-7．25(m，5H，苯基)；7．32-7．84(m，4H，亞苯基)；7．74(d，1H，N-CH=CH-S)；7．89(d，1H，N-CH=CH-S)；8．35(d，1H，NH)；12．76(s，1H，COOH)；通過類似的操作方法制得下面的化合物N-〔(2R)-3-巰基-2-苯基甲基丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸(化合物17)1H-NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2．15-2．23(m，1H，SH)；2．31-2．74(m，5H，CH2-CH-CH2)；2．78-3．07(m，2H，CH2-CH-COO)；4．42-4．53(m，1H，CH-COO)；7．02-7．80(m，9H，苯基和亞苯基)；7．75(d，1H，N-CH=CH-S)；7．90(d，1H，N-CH=CH-S)；8．36(d，1H，NH)；N-[(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙酰]-4-(2-呋喃基)-L-苯丙氨酸(化合物18)m．p．153-155℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=4101H-NMR(200 MHz，CDCl3)δ(ppm)1．40(t，1H，SH)；2．45-3．25(m，7H，CH2-CH-CH2，CH2-CH-COO)；4．80-4．90(m，1H，CH-COO)；5．86(d，1H，NH)；6．42-7．42(m，3H，呋喃基)7．07-7．57(m，9H，苯基，亞苯基)；N-〔(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙?！?4-(5-嘧啶基)-L-苯丙氨酸(化合物19)m．p．193-195℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=4221H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)1．81(bm，1H，SH)；2．21-3．20(m，7H，CH2-CH-CH2，CH2-C6H4-嘧啶基)；4．46-4．57(m，1H，CH-COO)；7．06-7．29(m，5H，苯基)；7．36-7．72(m，4H，亞苯基)；8．33(d，1H，NHCO)；9．08(s，2H，N-CH-C-CH-N)；9．15(s，1H，N-CH-N)；N-〔(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙酰〕-4-(2-吡嗪基)-L-苯丙氨酸(化合物20)m．p．176-178℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=4221H-NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ(ppm)1．84(bt，1H，SH)；2．21-3．21(m，7H，CH2-CH-CH2，CH2-CH-COO)；4．48-4．59(m，1H，CH-COO)；7．10-7．26(m，5H，苯基)；7．37-8．05(m，4H，亞苯基)；8．37(d，1H，NHCO)；8．58(d，1H，CH-N-CH-CH-N)；8．68-8．70(m，1H，CH-N-CH-CH-N)；9．21(d，1H，C-CH-N)；12．78(b，1H，COOH)；N-〔(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙?！?4-(3-吡啶基)-L-苯丙氨酸(化合物21)m．p．146-148℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=4211H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)1．69-1．89(b，1H，SH)；2．23-3．18(m，7H，CH2-CH-CH2，CH2-亞苯基)；4．45-4．56(m，1H，CH-COO)；7．09-7．26(m，5H，苯基)；7．42-7．48(m，1H，CH-N-CH-CH-CH)；7．62-7．33(m，4H，亞苯基)；7．98-8．04(m，1H，CH-N-CH-CH-CH)；8．30(d，1H，CONH)；8．53(dd，1H，CH-N-CH-CH-CH)；8．83(d，1H，CH-N-CH-CH-CH)；N-〔(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙酰〕-4-(2-吡啶基)-L-苯丙氨酸(化合物22)m．p．157-159℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=4211H-NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ(ppm)1．87(b，1H，SH)；2．23-3．19(m，7H，S-CH2-CH-CH2，CONH-CH-CH2)；4．44-4．45(m，1H，CH-COO)；7．09-7．93(m，8H，N-CH-CH-CH-CH-苯基)；7．30-7．99(m，4H，亞苯基)；8．29(d，1H，CONH)；8．61-8．65(m，1H，C-N-CH)；N-〔(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙?！?4-(2-噻吩基)-L-苯丙氨酸(化合物23)m．p．152-154℃1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)1．34-1．43(m，1H，SH)；2．44-3．26(m，7H，S-CH2-CH-CH2，CONH-CH-CH2)；4．80-4．89(m，1H，NH-CH-COO)；5．81(d，1H，NH)；7．02-7．52(m，12H，芳基)；
N-〔(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙?！?4-(3-噻吩基)-L-苯丙氨酸(化合物24)m．p．169-171℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=426TLC(乙酸乙酯∶己烷∶乙酸=50∶50∶5)，Rf=0．441H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)1．84(bs，1H，SH)；2．23-3．13(m，7H，S-CH2-CH-CH2，NH-CH-CH2)；4．42-4．53(m，1H，NH-CH-COO)；7．12-7．80(m，12H，芳基)；8．30(d，1H，JHH=8．2Hz，NH)；N-〔(2S)-3-巰基-2-苯基甲基丙?！?4-(3-呋喃基)-L-苯丙氨酸(化合物25)m．p．140-142℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=410TLC(乙酸乙酯∶己烷∶乙酸=50∶50∶5)，Rf=0．421H-NMR(200MHz，CDCl3)δ(ppm)1．79-1．90(m，1H，SH)；2．22-3．11(m，7H，S-CH2-CH-CH2，NH-CH-CH2)；4．41-4．53(m，1H，NH-CH-COO)；7．11-7．50(m，9H，苯基，亞苯基)；6．91-8．12(m，3H，呋喃基)；8．30(d，1H，JHH=8．2Hz，NH)；N-〔3-巰基-2-(3-吡啶基甲基)丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸-立體異構(gòu)體A(化合物26)m．p．193-196℃質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=428TLC(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸=85∶15∶1．5)，Rf=0．531H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2．37-3．05(m，7H，S-CH2-CH-CH2，NH-CH-CH2)；4．36-4．47(m，1H，NH-CH-COO)；7．76-7．90(m，2H，噻唑基)；7．10-8．33(m，9H，NH，吡啶基，亞苯基)；N-〔3-巰基-2-(3-吡啶基甲基)丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸-立體異構(gòu)體B(化合物27)質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=428TLC(二氯甲烷∶甲醇∶乙酸=85∶15∶1．5)，Rf=0．471H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2．28-3．20(m，7H，S-CH2-CH-CH2，NH-CH-CH2)；4．20-4．35(m，1H，NH-CH-COO)；7．70-7．90(m，2H，噻唑基)；7．17-8．40(m，9H，NH，吡啶基，亞苯基)；N-(2-異丁基-3-巰基-丙酰)-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸(化合物28)1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)0．50-1．44(m，9H)；1．68-2．25(m，4H)；2．79-3．22(m，2H)；4．50-4．63(m，1H)；7．34-7．85(m，4H)；7．73-7．90(m，2H)；8．27-8．39(2d，1H)；質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=393N-〔3-巰基-2-(3-甲氧基苯基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸(化合物29)質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=4571H-NMR(200MHz，DMSO-d6+D2O)δ(ppm)2．20-3．21(m，7H)；3．70(d，3H)；4．48(m，1H)；6．55-6．86(m，3H)；7．00-7．40(m，3H)；7．65-7．95(m，4H)；8．27-8．45(bt，CONH)；N-〔3-巰基-2-(2-氟苯基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸(化合物30)質(zhì)譜(C．I．)(M+H)+=4451H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2．20-3．18(m，8H)；4．35-4．55(m，1H)；6．85-7．35(m，6H)；7．65-7．90(m，4H)；8．35(d，1H)；N-〔3-巰基-2-(2-噻吩基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸(化合物31)
1H-NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ(ppm)1．82-3．19(m，8H，CH2-CH2-CH2；NH-CH-CH2)；4．44-4．5(m，1H，CH-COO)；6．62-7．91(m，9H，芳基)；8．42(d，1H，NH)；N-〔3-巰基-2-(2-呋喃基)甲基-丙酰〕-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸(化合物32)1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)1．79-3．18(m，8H，S-CH2-CH2-CH2；NH-CH-CH2)；4．43-4．58(m，4H，CH-NH)；5．79-7．47(m，3H，呋喃基)；7．30-7．85(m，4H，亞苯基)；7．73-7．91(m，2H，噻唑基)；8．40-8．46(2d，1H，NH)；N-〔3-巰基-2-(3-甲基-5-異噁唑基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸(化合物33)1H-NMR(200MHz，DMSO-d6)δ(ppm)2．00-2．12(2S，3H，CH3-異噁唑基)；2．28-3．19(m，8H，S-CH2-CH2-CH2；CH2-亞苯基)；4．43-4．59(m，1H，CH-NH)；5．75-6．03(2s，1H，異噁唑基)；7．29-7．86(m，4H，亞苯基)；7．74-7．90(m，2H，噻唑基)；8．46-8．53(2d，1H，NH)；實施例8藥理活性的體外評價a)NEP-抑制活性NEP-抑制活性是在按照由T Maeda等人在Biochim．Biophys．Acta 1983，731(1)，115-120中所述的方法制備的鼠腎皮質(zhì)膜中評價的。
從重約300g的雄性Sprague-Dawley鼠中取出腎并在4℃保持。
小心解剖腎皮質(zhì)，切細(xì)碎并懸浮于1∶15重量／體積的勻漿緩沖液(含1mM MgCl2、30mMNaCl、0．02％NaN3的10mM磷酸鈉，pH7．4)中。
然后用Ultra-Turrax勻漿器對組織冷勻漿30秒鐘。使大約10ml勻漿在10ml蔗糖(41％重量／體積)中分層并于4℃在固定角轉(zhuǎn)頭上以31200rpm離心30分鐘。從緩沖液／蔗糖的界面收集膜，用50mMTRIS／HCl緩沖液(pH7．4)洗滌兩次并重新懸浮于同一緩沖液中，以小等分試樣于-80℃貯存直到使用。
NEP-抑制活性是通過使用由C．Llorens等人在Eur．J．Pharmacol．，69，(1981)，113-116中所述的如同下文報導(dǎo)的方法評價。
如上所述制備的膜懸浮物等分試樣(濃度5μg／ml的蛋白質(zhì))在氨肽酶抑制劑(苯丁抑制素-1mM)的存在下于30℃預(yù)溫育10分鐘。
加〔3H〕〔Leu5〕-腦啡肽酶(15nM)和緩沖液TRIS／HClpH7．4(50mM)以達(dá)到最終體積100μl。
通過加HCl0．1M(100μl)終止孵育(于30℃20分鐘)。
代謝物〔3H〕Tyr-Gly-Gly通過在聚苯乙烯柱(Porapak Q)上色譜定量。
在用式Ⅰ化合物和用比較化合物處理的膜制品相對于未處理的膜制品的代謝物生成的抑制百分?jǐn)?shù)表示為IC50(nM)值。
b)ACE-抑制活性ACE-抑制活性是按照由B．Holmquist等人在AnalyticalBiochemistry 95，540-548(1979)中報導(dǎo)的文獻(xiàn)的方法評價。
50μM的ACE(250mU／ml從家兔的肺中純化，EC 3．4．15．1SIGMA)用50μl的式Ⅰ化合物或者參比化合物或相關(guān)載體在恒溫小池中于37℃預(yù)溫育。
通過加呋喃基丙烯酰苯丙氨酰甘氨酰氨酸0．8mM(FAPGG-SIGMA)使反應(yīng)開始。
同時，通過使用帶有計算δA／分鐘和酶動力學(xué)曲線的回歸系數(shù)程序的Beckman DU-50分光光度計，連續(xù)記錄340nm的吸收5分鐘。
在用式Ⅰ化合物和用比較化合物處理的制品相對于未處理的制品的酶抑制百分?jǐn)?shù)表示為IC50(nM)值。
與化合物16、18-25、27-33和對比化合物Thiorphan和卡托普利的ACE-抑制活性和NEP-抑制活性有關(guān)的IC50(nM)值報導(dǎo)于下面的表1中。
表1化合物16、18-25、27-33和Thiorphan以及卡托普利的ACE-抑制和NEP-抑制活性，表示為IC50(nM值)
表1中報導(dǎo)的數(shù)據(jù)顯示本發(fā)明目的的式Ⅰ化合物具有顯著的混合的ACE／NEP抑制活性。
所述活性與涉及ACE抑制活性的卡托普利的活性相當(dāng)，而大于涉及NEP抑制活性的Thiorphan的活性。
實施例9“來自體內(nèi)”的藥理活性評價a)NEP-抑制活性來自體內(nèi)的NEP-抑制活性是按照由M．Orlowsky等人在Biochemistry 1981，20，4942-4950的文獻(xiàn)中報導(dǎo)的方法評價。
式Ⅰ化合物的抑制活性是在自發(fā)性高血壓鼠(SHR)靜脈注射(0．6和21μmol／kg)5分鐘后和口服給藥(30μmol／kg)試驗化合物30分鐘、60分鐘和4小時后的腎中評價。
在從SHR中取出腎后，將腎組織勻漿化并在戊二酰-丙氨酰-丙氨酰-苯丙氨酰-2-萘基酰胺(GAAP)作為底物和氨肽酶M的存在下，在pH7．6于37℃孵育15分鐘。
通過加10％三氯乙酸水溶液使反應(yīng)終止。釋出的2-萘胺通過加堅牢紫醬染料(2ml)測定。
酶反應(yīng)速率通過測量相對于由2-萘胺與堅牢紫醬絡(luò)合所得標(biāo)準(zhǔn)品在524nm(OD524)的光密度的增加確定。
試驗化合物的NEP-抑制活性表示為在SHR腎中的NEP-抑制百分?jǐn)?shù)。
b) ACE-抑制活性來自體內(nèi)的ACE-抑制活性是通過使用放射試驗法，如同由J．W．Ryan等人在Biochem．J．(1977)，167，501-504文獻(xiàn)中報導(dǎo)的評價。
式Ⅰ化合物的抑制活性是在自發(fā)性高血壓鼠(SHR)靜脈注射(0．6和21μmol／kg)5分鐘后和口服給藥(30μmol／kg)試驗化合物30分鐘、60分鐘和4小時后的肺中評價。
在從SHR中取出肺后，將肺組織勻漿化并在〔3H〕Hyp-甘氨酰-甘氨酸底物存在下于37℃孵育2小時。
通過加鹽酸使反應(yīng)終止。
用乙酸乙酯萃取釋出的放射性標(biāo)記的hyppuric acid并按照常規(guī)方法通過液體閃爍光譜測定法計數(shù)。
試驗化合物的ACE-抑制活性表示為在SHR肺中的ACE-抑制百分?jǐn)?shù)。
作為例子，在靜脈和口服給藥化合物16和比較化合物R-1、R-2、R-3及R-4后的來自體內(nèi)的試驗獲得的基底酶活性百分?jǐn)?shù)報導(dǎo)于下面表2中。
表2化合物16和化合物R-1、R-2、R-3和R-4的來自體內(nèi)的ACE-抑制和NEP-抑制百分?jǐn)?shù)
表2中報導(dǎo)的數(shù)據(jù)證實本發(fā)明目的的式Ⅰ化合物在靜脈給藥以及口服給藥后具有顯著的ACE／NEP-抑制活性。
而且，來自體內(nèi)的式Ⅰ化合物的ACE／NEP-抑制活性產(chǎn)生比比較化合物明顯更高的結(jié)果。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ化合物和其藥物可接受的鹽
其中R是巰基或在生物中可轉(zhuǎn)化成巰基的R4COS；R1是直鏈或支鏈C2-C4烷基或芳基或在烷基部分具有從1到6個碳原子的芳烷基基團(tuán)，其中芳基是苯基或具有1或2個選自氮、氧和硫的雜原子的5或6元雜芳基，其可被1或多個取代基取代或不取代，相同的或不同的，取代基選自鹵素原子、羥基基團(tuán)、烷氧基、烷基、烷硫基、在烷基部分具有從1到6個碳原子的烷基磺?；蛲檠趸驶鶊F(tuán)、含1或多個氟原子的C1-C3烷基基團(tuán)、羧基基團(tuán)、硝基基團(tuán)、氨基或氨基羰基基團(tuán)、酰氨基基團(tuán)、氨基磺酰基基團(tuán)、在烷基部分具有從1到6個碳原子的單-或二-烷基氨基或者單-或二-烷基氨基羰基基團(tuán)；R2是氫原子、直鏈或支鏈C1-C4烷基或芐基基團(tuán)；R3是由具有1或2個選自氮、氧和硫的雜原子的5或6元芳雜環(huán)取代的苯基，作為苯基和雜環(huán)基團(tuán)，可以被一或多個取代基取代或不取代，可以相同或不同，如對R1所指出的；R4是直鏈或支鏈C1-C4烷基基團(tuán)或苯基基團(tuán)；用星號標(biāo)記的碳原子是立體結(jié)構(gòu)中心；
2．根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物，其中R3是在4位被一雜環(huán)基取代的苯基基團(tuán)。
3．根據(jù)權(quán)利要求2的式Ⅰ化合物，其中R1表示選擇性地被一或多個取代基取代的芳烷基，相同或不同的，取代基選自鹵素原子、羥基、烷基或烷氧基。
4．根據(jù)權(quán)利要求3的式Ⅰ化合物，其中R1表示選擇性地被1或多個取代基取代的苯基烷基，相同或不同的，取代基選自鹵素原子、羥基、烷基或烷氧基基團(tuán)。
5．根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物，以與選自鈉、鋰和鉀的堿金屬的鹽的形式。
6．根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物的制備方法，包括在式Ⅱ化合物
其中R和R1具有上面報導(dǎo)的意義；與式Ⅲ的苯丙氨酸衍生物之間的反應(yīng)
其中R2和R3具有上面報導(dǎo)的意義。
7．根據(jù)權(quán)利要求1的含治療有效量的摻在藥用載體中的式Ⅰ化合物的藥物組合物。
8．根據(jù)權(quán)利要求6的藥物組合物，用于治療心血管疾病。
9．一種心血管疾病治療方法，包括給予治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的化合物。
10．選自下列的化合物及其立體異構(gòu)體(2S)或(2R)N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-吡啶基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-吡啶基)-L-苯丙氨酸芐酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-呋喃基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(5-嘧啶基)-L-苯丙氨酸乙酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-吡嗪基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-噻吩基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-噻吩基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(3-苯基羰基硫代-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-呋喃基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-〔3-苯基羰基硫代-2-(3-吡啶基甲基)丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-吡啶基)-L-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-吡啶基)-L-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-呋喃基)-L-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(5-嘧啶基)-L-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-吡嗪基)-L-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(2-噻吩基)-L-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-噻吩基)-L-苯丙氨酸；N-(3-巰基-2-苯基甲基丙酰)-4-(3-呋喃基)-L-苯丙氨酸；N-〔3-巰基-2-(3-吡啶基甲基)丙酰〕-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸；N-〔3-乙?；虼?2-(3-甲氧基苯基)甲基-丙酰〕-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-〔3-乙酰基硫代-2-(2-氟苯基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-〔3-苯基羰基硫代-2-(2-噻吩基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-〔2-(2-呋喃基)甲基-3-苯基羰基硫代-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-〔2-(3-甲基-5-異噁唑基)甲基-3-苯基羰基硫代-丙酰〕-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸甲酯；N-〔3-巰基-2-(3-甲氧基苯基)甲基-丙酰〕-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸；N-〔3-巰基-2-(2-噻吩基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸；N-〔3-巰基-2-(3-甲基-5-異噁唑基)甲基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸；N-〔2-(2-氟苯基)甲基-3-巰基-丙酰〕-4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸；N-〔2-(2-呋喃基)甲基-3-巰基-丙?！?4-(2-噻唑基)-L-苯丙氨酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及了式Ⅰ化合物,其中R、R
文檔編號C07D333/24GK1206411SQ96199354
公開日1999年1月27日 申請日期1996年12月17日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月28日
發(fā)明者F·佩拉希尼, M·范圖西, G·諾希尼, S·羅馬格納諾, F·森坦戈羅, C·塞莫拉羅 申請人:薩寶集團(tuán)公司