專利名稱：一種貽貝蒸煮液中多糖類化合物的提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種貽貝蒸煮液中多糖類化合物的提純方法，其屬于水產(chǎn)品深加工技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
多糖，又稱多聚糖，是單糖通過糖苷鏈連接而成的天然高分子化合物，其分子量一般為數(shù)萬(wàn)甚至達(dá)數(shù)百萬(wàn)，廣泛存在于高等動(dòng)植物細(xì)胞膜和微生物細(xì)胞壁中。活性多糖專指具有某種特殊生物活性的多糖化合物。自20世紀(jì)50年代末人們發(fā)現(xiàn)真菌多糖具有抗腫瘤活性以來，多糖的研究受到越來越廣泛的重視。目前，人類已在自然界中發(fā)現(xiàn)了幾百種多糖，并在研究多糖 資源的開發(fā)、多糖的提取分離、多糖結(jié)構(gòu)的分析、多糖藥理作用及臨床應(yīng)用，尤其在抗腫瘤和免疫作用、抗病毒、降血糖等作用方面，做了大量的工作。貽貝多糖經(jīng)過初步純化去掉部分雜質(zhì)后，要想得到高純度的單一組分多糖，需要經(jīng)過進(jìn)一步的純化處理。多糖的純化分級(jí)可以采用的方法很多，如:金屬絡(luò)合法、季銨鹽沉淀法、制備性區(qū)域電泳等。貽貝(Mytilus sp.)在貝類分類學(xué)上隸屬軟體動(dòng)物門，瓣鰓綱，異柱目，貽貝族，貽貝科，是一種營(yíng)足絲附著生活的雙殼類軟體動(dòng)物。貽貝分布廣泛，不同的氣候、緯度和海況有不同的品種，其主要經(jīng)濟(jì)種類有紫貽貝、翡翠貽貝和厚殼貽貝。貽貝除帶殼鮮銷外，力口工方式主要是制成罐頭或油炸、焙燒、水煮、汽蒸、煙熏和冷凍等產(chǎn)品。貽貝廢棄液是工業(yè)化大生產(chǎn)中處理貽貝原料所得到的液態(tài)副產(chǎn)品，包含貽貝軟體部分的水溶性物質(zhì)，如水溶性的蛋白質(zhì)、糖類、氨基酸、色素等。多糖類物質(zhì)是貽貝廢棄液中的主要成分之一。對(duì)這些廢棄的貽貝蒸煮液采用新技術(shù)進(jìn)行再加工，在提高原料利用率、減少浪費(fèi)和創(chuàng)造經(jīng)濟(jì)效益方面都具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中貽貝蒸煮液利用率較低而造成原料浪費(fèi)的不足，提供一種貽貝蒸煮液中多糖類化合物的提純方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下:一種貽貝蒸煮液中多糖類化合物的提純方法，其特征在于包括如下步驟:A、蛋白脫除，采用酶解法與Sevag法聯(lián)用來脫除原料液中的粗蛋白；酶解法:PH值為7.1，枯草桿菌中性蛋白酶加入量為0.52%(v/w)，溫度為41°C，氯化鈣加入量為0.74% (w/w)，酶反應(yīng)時(shí)間為3h ；Sevag法:氯仿與正丁醇的比例為5:1 (v/v)，料液比為4:1 (w/v),振搖時(shí)間為20min,經(jīng)過三次脫蛋白處理；B、醇沉，脫蛋白后的樣品中加入乙醇使最終溶液中乙醇濃度達(dá)到80% ；C、脫色，用活性炭脫色，最佳條件為:溫度50°C，PH值為3.0，時(shí)間為20min，粉末活性炭用量1% (w/v)；D、離子交換柱純化分級(jí)，貽貝多糖DEAE——纖維素離子交換柱純化分級(jí)，始緩沖液為20mmol/L磷酸鹽緩沖液，PH值為6.8，洗脫劑為O 2.0mol/L NaCl的緩沖液，溫度為
室溫；先用PH值為6.8，20mmol/L磷酸鹽緩沖液洗脫，自動(dòng)部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟蹤檢測(cè)收集液的0D.，洗至收集液中無(wú)多糖成分檢出，并收集所得峰組分；再用O
2.0mol/L NaCl的緩沖液洗脫，自動(dòng)部分收集器收集，苯酚——硫酸法跟蹤檢測(cè)收集液的OD490,并收集所得峰組分。E、凝膠柱層析，SephroseCL_6B凝膠柱純化分級(jí)時(shí),起始緩沖液為20mmol/L磷酸鹽緩沖液，PH值為6.8，洗脫劑為20mmol / L磷酸鹽緩沖液，pH值為6.8 ;溫度為室溫；用pH值為6.8，20mmol / L磷酸鹽緩沖液洗脫，利用自動(dòng)部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟蹤檢測(cè)收集液的OD49tl,并收集所得峰組分。F、濃縮凍干，即得多糖類化合物成品。本發(fā)明的 有益效果是:充分利用來源豐富、且未得到有效利用的貽貝加工下腳料一蒸煮液，具有提取率高、無(wú)污染、過程易控制等特點(diǎn)；通過脫蛋白、脫色、層析純化等操作提取得到多糖類化合物，有效提高了產(chǎn)品的品質(zhì)和原材料的利用率。
具體實(shí)施例方式以下對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。一種貽貝蒸煮液中多糖類化合物的提純方法，包括如下步驟:取貽貝蒸煮液濃縮液500ml，采用酶法與Sevag法聯(lián)用來脫除粗蛋白，酶法的具體條件為:PH值為7.1，枯草桿菌中性蛋白酶加入量0.52% (v / W)，溫度41°C，氯化鈣加入量0.74% (w / w)，酶反應(yīng)時(shí)間3h;滅酶后采用Sevag法，具體條件為:氯仿與正丁醇的比例為5:1 (V / V),料液比為4:1 (w / V),振搖時(shí)間為20min。然后采用醇沉法提取,具體條件為:脫蛋白后的樣品中加入乙醇使最終溶液中乙醇濃度達(dá)到80%，樣品干燥后保存。取
干燥樣水溶后DEAE-纖維素離子交換柱法純化分級(jí)，條件為:始緩沖液:20mmol / L磷
酸鹽緩沖液，PH值為6.8，洗脫劑為O — 2.0mol / L NaCl的緩沖液，溫度為室溫。先用pH值為6.8，20mmol / L磷酸鹽緩沖液洗脫，利用自動(dòng)部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟蹤檢測(cè)收集液的OD49tl,洗至收集液中無(wú)多糖成分檢出，并收集所得峰組分。再用0-2.0mol /LNaCl的緩沖液洗脫，利用自動(dòng)部分收集器收集，苯酚——硫酸法跟蹤檢測(cè)收集液的0D.，并收集所得峰組分。再采用Sephix)SeCL-6B (是專業(yè)術(shù)語(yǔ))凝膠柱純化分級(jí)，條件為:起始緩沖液為20mmol / L磷酸鹽緩沖液，其pH值為6.8，洗脫劑為20mmol / L磷酸鹽緩沖液，其pH值為6.8，溫度為室溫。用pH值為6.8，20mmol / L磷酸鹽緩沖液洗脫，利用自動(dòng)部分收集器收集，苯酚一硫酸法跟蹤檢測(cè)收集液的0D.，并收集所得峰組分。將所得組分凍干后得到多糖類化合物。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種貽貝蒸煮液中多糖類化合物的提純方法，其特征在于包括如下步驟: A、蛋白脫除，采用酶解法與Sevag法聯(lián)用來脫除原料液中的粗蛋白； 酶解法:PH值為7.1，枯草桿菌中性蛋白酶加入量為0.52%(v/w)，溫度為41°C，氯化鈣加入量為0.74% (w/w)，酶反應(yīng)時(shí)間為3h ； Sevag法:氯仿與正丁醇的比例為5:1 (v/v),料液比為4:1 (w/v),振搖時(shí)間為20min,經(jīng)過三次脫蛋白處理； B、醇沉，脫蛋白后的樣品中加入乙醇使最終溶液中乙醇濃度達(dá)到80%； C、脫色，用活性炭脫色，最佳條件為:溫度50°C，pH值為3.0，時(shí)間為20min，粉末活性炭用量 1% (w/v)； D、離子交換柱純化分級(jí)，貽貝多糖DEAE—纖維素離子交換柱純化分級(jí)，始緩沖液為20mmol/L磷酸鹽緩沖液，PH值為6.8，洗脫劑為O 2.0moI/L NaCl的緩沖液，溫度為室溫； 先用PH值為6.8，20mmol/L磷酸鹽緩沖液洗脫，利用自動(dòng)部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟蹤檢測(cè)收集液的0D.，洗至收集液中無(wú)多糖成分檢出，并收集所得峰組分；再用O .2.0mol/L NaCl的緩沖液洗脫，利用自動(dòng)部分收集器收集，苯 )——硫酸法跟蹤檢測(cè)收集液的OD49tl,并收集所得峰組分。
E、凝膠柱層析，SephroseCL-6B凝膠柱純化分級(jí)時(shí),起始緩沖液為20mmol/L磷酸鹽緩沖液，PH值為6.8，洗脫劑為20mmol / L磷酸鹽緩沖液，pH值為6.8 ;溫度為室溫；用pH值為6.8，20mmol / L磷酸鹽緩沖液洗脫，利用自動(dòng)部分收集器收集，苯酹——硫酸法跟蹤檢測(cè)收集液的OD49tl,并收集所得 峰組分。
F、濃縮凍干，即得多糖類化合物成品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種貽貝蒸煮液中多糖類化合物的提純方法，其屬于水產(chǎn)品深加工技術(shù)領(lǐng)域。它解決了貽貝蒸煮液利用率較低而造成原料浪費(fèi)的不足，其主要包括如下步驟蛋白脫除——醇沉——脫色——離子交換柱純化分級(jí)——凝膠柱層析——濃縮凍干。本發(fā)明充分利用來源豐富、且未得到有效利用的貽貝加工下腳料——蒸煮液，具有提取率高、無(wú)污染、過程易控制等特點(diǎn)；通過脫蛋白、脫色、層析純化等操作提取得到多糖類化合物，有效提高了產(chǎn)品的品質(zhì)和原材料的利用率。
文檔編號(hào)C08B37/00GK103204950SQ20131014285
公開日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2013年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月23日
發(fā)明者李蘋蘋, 劉艷蔚, 任秀娟, 胡樹凱, 李進(jìn)偉, 遲君德 申請(qǐng)人:李蘋蘋