一種牛樟芝化合物組分分離提取方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于食(藥）用菌活性組分分離提取技術領域，具體設及一種牛憧芝化合物 組分分離提取方法。
【背景技術】
[0002] 牛憧芝又名牛憧茹，屬于非權(quán)菌目、多孔菌科、薄孔菌屬、多年生葦菌類，拉了名 為Antrodiacamphorata，是1990年才被生化界發(fā)表的新種。其生長區(qū)域為臺灣山區(qū)海拔 450-2000米山林間，只生長在臺灣特有百年W上的牛憧樹樹干腐朽之屯、材內(nèi)壁，或枯死倒 伏之牛憧樹木材潮濕表面，野生憧芝生長期在每年六至十月，采集極為不易。牛憧芝額的子 實體形態(tài)多變化，有板狀、鐘狀、馬蹄狀或塔狀；初生時鮮紅色，漸長變?yōu)榘咨⒌t褐色、淡 褐色或淡黃褐色。牛憧芝氣芳香味辛苦、平。有枯風行氣、化渺活血、溫中消結(jié)、解毒消腫、 鎮(zhèn)靜止痛、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、提升機體免疫力之效；對于治療胃腸疼痛、腹瀉嘔吐、食物 中毒、毒葦中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有獨特功能。牛憧芝是有許多 的生理活性成分，如多糖體、=祗類化合物、超氧歧化酶、腺巧、蛋白質(zhì)（含免疫蛋白）、維生 素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、纖維素、血壓穩(wěn)定物質(zhì)等。牛憧芝的有效成分中W= 祗類化合物為最特別，是其他茹菌無法相比的，=祗類化合物使牛憧芝具有抗癌、保肝等功 效。由于憧芝在臺灣被視為獨特而珍貴的藥用真菌，因此具有極高的研究和商業(yè)價值，也是 目前臺灣最昂貴的野生真菌，在港澳被稱為"神芝"，臺灣譽為"森林中的紅寶石"。
[0003] 研究表明，牛憧芝成分有多糖、祗類、醬體類化合物、馬來酸及班巧酸衍生物 等主要活性化合物，具有護肝、抗癌、調(diào)節(jié)免疫、去過敏、解毒和抗炎等功效。其中多醋 (Polysaccharides)，牛憧芝在子實體含有多醋體，具有免疫生理活性、預防及控制腫瘤等 生理活性，主要含e-D-glucan(e-D-葡聚糖））其作用是透過激發(fā)巨瞻細胞、T淋己細胞、 B淋己細胞W及自然殺手細胞等來增強免疫功能，進而達到抗腫瘤的效果。憧芝多醋體中 有強屯、、降血壓、降血糖等功效。=祗類化合物（Te巧enoids)，=祗類化合物是目前憧芝 子實體發(fā)現(xiàn)最多的祗類化學成分，一般被認為牛憧芝萃取物中苦味成份的主要來源。其中 多達10多種新發(fā)現(xiàn)=祗類為憧芝所獨有，實驗證實；該些=祗類化合物能抑制肝癌細胞的 增殖、毒殺老鼠血癌（P-388murineleukemia)細胞活性、抗副交感神經(jīng)作用、抗血清素活 性、活化神經(jīng)細胞生長能力等功能；比多醋體扮演著更重要的抗腫瘤活性調(diào)節(jié)角色。高血 壓患者往往因為血壓高，導致腦血管破裂而中風，S祗類化合物能有效的抑制Angiotensin ConveningEnzyme(AC巧的活性，進而降低血糖。e-D-葡聚醋具有預防腫瘤的免疫生理活 性，增強人體免疫功能，具有抗過敏的作用，幫助調(diào)解高血糖。近年來牛憧芝的藥理作用得 到醫(yī)學界的廣泛重視，提取分離牛憧芝化合物組分，研制開發(fā)新技術新產(chǎn)品前景十分廣闊。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種牛憧芝化合物組分分離提取方法，具有有效活性組分分 離效果好，純化純度高，成分不易被分解破壞、無有害化學試劑和重金屬殘留、提取效率高 等優(yōu)點。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案： 一種牛憧芝化合物組分分離提取方法；W牛憧芝子實體粉或菌絲體為原料，采用酶解、 超臨界C〇2萃取、離子交換色譜、膜分離超濾和層析法純化相結(jié)合的技術實現(xiàn)牛憧芝化合物 組分的分離提取。
[0006] 具體步驟如下： (1) 將合格牛憧芝干燥至水分含量《8%，粉碎，過20-30目篩； (2) 將牛憧芝粉用純化水浸泡，料液比為1 ;10-12,調(diào)節(jié)抑=4. 5-5. 5,溫度50-60°C，時 間化；加入淀粉酶和木聚糖酶，攬拌均勻，超聲輔助酶解2-化；將料液升溫至100°C，滅酶 2-3min，然后將料液采用100目膜過濾，得酶解提取液（1); (3) 在步驟（2)的濾渣中加入其重量10倍的純化水，攬拌均勻，再加入纖維素酶，酶解 2-3h，將料液升溫至100°C，滅酶2-3min，然后將料液采用100目膜過濾，得酶解提取液（2); (4) 將酶解提取液（1)和酶解提取液（2)合并，混合均勻，0. 09MI^a減壓濃縮至可溶性固 形物含量為10-12%，濃縮液的濃度化ix=16. 0-18. 0〇/〇 ; (5) 將濃縮液采用超臨界C〇2萃取，條件為；萃取蓋壓力25-30MPa，萃取溫度50-55°C， 分離溫度40°C，I級分離蓋壓力8-lOMPa，II級分離蓋壓力6MPa，C〇2流速2-2.化/min,萃取 時間4-化，分離蓋收集得到牛憧芝化合物組分的綜合萃取物； (6) 采用離子交換色譜和凝膠層析進行分離，吸附部分得a-葡聚糖巧酶，未吸附部分 得0-葡聚糖巧酶； (7) 采用膜分離超濾技術分離提取純多糖部分； (8) 采用硅膠薄層層析分離，經(jīng)脫水分饋，得=祗類化合物。
[0007] 步驟（2)中所述的淀粉酶的酶活力為20萬U/g，木聚糖酶的酶活力為12萬U/g， 用量分別為牛憧芝粉重量的0. 1-0. 2% ;超聲波頻率為25-30曲Z。
[000引步驟（3)中所述的纖維素酶的酶活力為20萬U/g，用量為濾渣重量的0. 2-0. 3%。
[0009] 步驟（6)的具體步驟如下；（1)將葡聚糖凝膠在7-10倍量的蒸饋水中充分溶脹 1-2小時；（2)將凝膠裝填入垂直的層析柱中，柱長100cm，直徑5cm; (3)萃取物濃縮液體積 為凝膠總床體積的15%-20%，萃取物濃縮液與洗脫液的相對粘度為1. 5-2。
[0010] 步驟（7)的工藝參數(shù)如下：超濾膜為中空纖維式納米膜，中空纖維外徑 0. 4-2. 0mm，內(nèi)徑0. 3-1. 4mm，過濾精度0. 005-0. 01ym;超濾溫度為25°C，抑值接近浸提介 質(zhì)的抑，超濾壓力為0. 15-0. 18MPa。
[0011] 步驟（8)的具體步驟如下；（1)用95wt. %己醇溶液浸潰化，溫度40-45°C，回流2 次，將體積比為10 ;3 ;1的甲苯-己酸己醋-己酸作為展開劑；（2)采用梯度洗脫，收集的規(guī) 格；上液量200g，200-300目的硅膠50g，50ml收一饋分。
[0012] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點在于：本發(fā)明具有有效活性組分分離效果好，純化純度高，成分 不易被分解破壞、無有害化學試劑和重金屬殘留、提取效率高等優(yōu)點，可W同時脫除多糖液 中的鹽分和水，實現(xiàn)對多糖和=祗類化合物稀溶液的純化和分離，作為新原料、中間體應用 于功能食品、保健食品、藥品、化妝品等產(chǎn)業(yè)的研究開發(fā)。本發(fā)明具有很高的工業(yè)應用價值， 是一項既環(huán)保、經(jīng)濟又可工業(yè)化生產(chǎn)的現(xiàn)代生物醫(yī)藥活性物質(zhì)的制備技術。
【附圖說明】
[0013] 圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0014] 實施例1;牛憧芝組分分離 原料；牛憧樹極木為培養(yǎng)基材栽培的牛憧芝。培養(yǎng)時間為二年。
[00巧]步驟； (1)將牛憧芝子實體凈選除雜，干燥至水分《8%，粉碎20-30目，稱量牛憧芝子實體粉 碎粉lOOOg。
[0016] (2)將步驟（1)的牛憧芝粉粹粉，按料液比為1 ;10-12,調(diào)節(jié)pH4. 5-5. 5,溫度 50-60°C，用純化水浸泡化后，再加入淀粉酶1. 5g和木聚糖酶1. 5g，攬均，酶反應2-化。所 述的淀粉酶酶活力為20萬U/g，木聚糖酶酶活力為12萬U/g，用量分別為粉粹粉重量的 0. 15%;上述酶解過程在超聲輔助條件下進行，超聲波頻率25-30曲Z。酶解反應后將料液升 溫至100°C，滅酶2-3min，然后將料液采用100目膜過濾，得酶解提取液（I)備用。
[0017] (3)將步驟（2)的濾渣加純化水10倍，加入纖維素酶2.5g，反應2-化，所述的纖維 素酶，酶活力為20萬U/g，用量為濾渣重量的0.25%。酶解反應后將料液升溫至100°C，滅 酶2-3min，然后將料液采用100目膜過濾，得酶解提取液（II)備用。
[001引（4)將步驟（2)的酶解提取液（I)和步驟（2)的酶解提取液（II)合并，進 行混合均勻濃縮，壓力0. 09MPa，減壓濃縮至可溶性固形物含量為10-12%，濃縮液的濃度 化ix=16. 0-18. 00/0。
[0019]