一種基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，將一定比例的苯乙烯類單體、交聯(lián)劑和致孔劑混合均勻后，注入反應(yīng)模具中，并升溫至一定溫度進(jìn)行原位共聚反應(yīng)一段時(shí)間，得到整體聚合物材料；將整體聚合物材料以索氏提取或連接至液相色譜泵沖洗的方法去除內(nèi)部的致孔劑，得到整體多孔材料；利用親水性的乙烯基單體對整體多孔材料的孔道表面進(jìn)行接枝聚合改性；將表面接枝的聚合物長鏈上的大量羥基逐步進(jìn)行衍生，并鏈接linker基團(tuán),得到鏈接linker的固相合成介質(zhì)。通過該方法制備的固相合成介質(zhì)具有微米級通孔，并具有高交聯(lián)度的非溶脹性，能夠應(yīng)用于大規(guī)模的多肽合成生產(chǎn)。
【專利說明】一種基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及聚合物材料【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，固相合成自Merrifield發(fā)明此方法以來，在多肽及核酸合成領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。通常合成成敗的關(guān)鍵在于對固相合成載體的選擇，目前，固相合成所用載體多為低交聯(lián)度(1-2%)的聚苯乙烯微球，該類微球在非極性有機(jī)溶劑中有較高的溶脹度，利于反應(yīng)物在其中進(jìn)行充分反應(yīng)和擴(kuò)散。但聚苯乙烯基質(zhì)本身的特點(diǎn)決定了其疏水的本性，導(dǎo)致該類基質(zhì)在極性溶劑中溶脹度低，同時(shí)在應(yīng)用于合成疏水性比較強(qiáng)的多肽分子時(shí)，由于基質(zhì)的強(qiáng)疏水性容易誘導(dǎo)多肽分子發(fā)生β折疊，從而降低合成效率和目標(biāo)物純度。
[0003]隨著生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，人們對多肽類藥物的需求的增加，相應(yīng)的對高效率合成技術(shù)的需要越來越迫切，所以開發(fā)一種高效率的固相合成介質(zhì)以適應(yīng)連續(xù)批量合成操作是當(dāng)務(wù)之急?，F(xiàn)有技術(shù)方案中有各種親水性較好的固相介質(zhì)，但均存在一定缺陷，例如:
[0004]I)以親水性較好的二乙二醇二甲基丙烯酯、二縮三丙二醇二丙烯酸酯和1，6己二醇二丙烯酸酯為交聯(lián)劑，代替二乙烯基苯(DVB)來交聯(lián)苯乙烯單體(St)制備改性聚苯乙烯微球介質(zhì)，在0011、匪?、01^、1'冊、01(:13中比Merrifield樹脂(PSt-DVB)的溶脹度有明顯的增加，合成困難序列酰基載體蛋白65-74獲得了比Merrifield樹脂更高的產(chǎn)率，但在合成過濾操作中，出現(xiàn)了微球破碎，主要由于此類交聯(lián)劑與DVB相比分子剛性下降，而導(dǎo)致樹脂機(jī)械強(qiáng)度下降，不利于連續(xù)操作。
[0005]2)將親水性大分子與疏水性介質(zhì)接枝共聚，如聚苯乙烯接枝聚乙二醇樹脂，在PSt微球介質(zhì)上接枝PEG大分子，與多肽反應(yīng)的位點(diǎn)位于PEG分子鏈的末端而遠(yuǎn)離PSt介質(zhì)本體，這樣PEG鏈隔離了介質(zhì)本體的疏水性，此外，這些介質(zhì)所接枝的PEG鏈，具有良好的溶解性能，能夠模擬溶液合成環(huán)境，可以促進(jìn)多肽分子的溶解，有利于減少殘缺肽產(chǎn)生；但由于將一定鏈長的PEG分子接枝于PSt微球介質(zhì)本體存在著一定位阻作用，導(dǎo)致此類介質(zhì)的取代度較低(0.2-0.3mmol/g)在規(guī)?；苽涠嚯膽?yīng)用中受到限制。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明的目的是提供一種基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，通過該方法制備的固相合成介質(zhì)具有微米級通孔，并具有高交聯(lián)度的非溶脹性，能夠應(yīng)用于大規(guī)模的多肽合成生產(chǎn)，滿足快速、高效、批次合成多肽的需要。
[0007]一種基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，所述制備方法包括:
[0008]步驟1、將一定比例的苯乙烯類單體、交聯(lián)劑和致孔劑混合均勻后，注入反應(yīng)模具中，并升溫至一定溫度進(jìn)行原位共聚反應(yīng)一段時(shí)間，得到整體聚合物材料；
[0009]步驟2、將步驟I得到的整體聚合物材料以索氏提取或連接至液相色譜泵沖洗的方法去除內(nèi)部的致孔劑，得到整體多孔材料；
[0010]步驟3、利用親水性的乙烯基單體對步驟2所得到的整體多孔材料的孔道表面進(jìn)行接枝聚合改性；
[0011]步驟4、將表面接枝的聚合物長鏈上的大量羥基逐步進(jìn)行衍生，并鏈接linker基團(tuán)，得到鏈接linker的固相合成介質(zhì)。
[0012]所述苯乙烯類單體包括聚乙烯基芐氯；
[0013]所述交聯(lián)劑包括:二乙烯基苯、乙二醇二甲基丙烯酸酯和二乙二醇二甲基丙烯酸酯中的一種或多種；
[0014]所述致孔劑由十二醇和環(huán)己醇按照質(zhì)量比1:1組成。
[0015]所述步驟I具體包括:
[0016]首先將苯乙烯類單體與交聯(lián)劑按照質(zhì)量比1:1?1:2進(jìn)行混合；
[0017]然后加入致孔劑，該致孔劑質(zhì)量為所述苯乙烯類單體與交聯(lián)劑質(zhì)量和的1.5倍；
[0018]再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈，將上述組分完全混合形成均勻溶液；
[0019]將所述溶液裝入一定形狀的反應(yīng)模具中，密封后放置于水浴鍋中，其中聚合溫度范圍為60?80°C，反應(yīng)時(shí)間為12?24h，最終制得整體聚合物材料。
[0020]在步驟2中以連接至液相色譜泵沖洗的方法去除內(nèi)部的致孔劑，具體包括:
[0021]將所述反應(yīng)模具連接于液相色譜泵，用甲醇、乙醇和乙腈中的一種或多種混合物的溶劑作為流動相，進(jìn)行沖洗以去除致孔劑；
[0022]其中，沖洗流速為0.2?0.5mL/min，流動相所采用的溶劑體積為50?100mL。
[0023]在步驟3中，利用親水性的乙烯基單體對步驟2所得到的整體多孔材料的孔道表面進(jìn)行接枝聚合改性，具體包括:
[0024]向步驟2所得到的整體多孔材料中加入一定比例的親水性單體、溶劑和原子轉(zhuǎn)移自由基聚合引發(fā)劑；
[0025]在65?80°C的反應(yīng)溫度下對材料表面進(jìn)行接枝聚合反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為4?12h ;
[0026]然后對反應(yīng)后的材料進(jìn)行清洗，得到表面帶有大量羥基的親水接枝改性材料。
[0027]所述親水性單體包括:甲基丙烯酸羥乙酯、甲基丙烯酸聚乙二醇酯、單甲氧基聚乙二醇甲基丙烯酸酯、丙烯酸聚乙二醇酯和單甲氧基聚乙二醇丙烯酸酯中的一種或者多種的混合物；
[0028]所述溶劑包括:去離子水、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜和二氧六環(huán)中的一種或多種的混合物；
[0029]所述原子轉(zhuǎn)移自由基聚合引發(fā)劑具體包括組分:氯化亞銅和催化劑配體；其中，所述催化劑配體包括:2, 2-聯(lián)二吡啶、四甲基乙二胺、N, N, N, ’ N, ” N, -五甲基二亞乙基三胺和1，1,4, 7，10，10’ -六甲基三亞乙基四胺中的一種或多種的混合物。
[0030]所述親水性單體的加入比例為步驟2所得到的整體多孔材料質(zhì)量的3?6倍；
[0031]所述原子轉(zhuǎn)移自由基聚合引發(fā)劑中的氯化亞銅的加入比例為所述親水性單體摩爾數(shù)的I?10%，且所述氯化亞銅和催化劑配體的摩爾比為1:1。
[0032]在步驟4中，所述將表面接枝的聚合物長鏈上的大量羥基逐步進(jìn)行衍生，并鏈接linker基團(tuán)，得到鏈接linker的固相合成介質(zhì)，具體包括:
[0033]將步驟3得到的表面接枝的聚合物長鏈上的大量羥基分別逐步進(jìn)行衍生，依次為鹵化、胺化和偶聯(lián)linker基團(tuán)，得到鏈接linker的固相合成介質(zhì)。
[0034]所述鹵化過程具體包括:
[0035]將二氯亞砜按照與步驟3改性后的材料質(zhì)量比為10:1的比例加入到步驟3改性后所得的材料中；同時(shí)加入二氯甲烷作為溶劑，其加入體積為二氯亞砜體積的2倍，其中反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h ;在反應(yīng)完畢后，以二氯甲烷沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物；
[0036]所述胺化過程具體包括:
[0037]首先將鄰苯二甲酰亞胺加入上述鹵化后的材料中，同時(shí)加入二甲基甲酰胺作為溶劑，在120°C下反應(yīng)12h ;然后將酰肼加入上述反應(yīng)后所得的材料中，同時(shí)加入乙醇作為溶劑，在60°C下反應(yīng)12h ;最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料；
[0038]所述偶聯(lián)linker基團(tuán)的過程具體包括:
[0039]將linker試劑按照該linker試劑與所述胺化后的整體材料質(zhì)量比為5:1的質(zhì)量比加入到所述胺化后的整體材料中，同時(shí)加入二甲基甲酰胺作為溶劑；再加入縮合劑1-羥基苯并二氣挫、2-1H-苯并二偶?xì)釲-1-基-N, N, N’，N’，-四甲基異脈六氣化憐、二異丙基乙胺，具體按照與所述linker試劑摩爾比1:1:1:1的比例加入；然后在室溫下反應(yīng)2h。
[0040]所述linker試劑包括:對羥甲基苯甲酸、對羥甲基苯氧乙酸和對羥甲基苯乙酸中的一種或多種。
[0041 ] 由上述本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以看出，通過該方法制備的固相合成介質(zhì)具有微米級通孔，并具有高交聯(lián)度的非溶脹性，能夠應(yīng)用于大規(guī)模的多肽合成生產(chǎn)，滿足快速、高效、批次合成多肽的需要。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0042]為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他附圖。
[0043]圖1為本發(fā)明實(shí)施例所提供基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法流程不意圖；
[0044]圖2為本發(fā)明所舉實(shí)例合成ACP 65-74粗產(chǎn)品的純度分析HPLC色譜圖；
[0045]圖3為本發(fā)明所舉實(shí)例中合成ACP 65-74粗產(chǎn)品的純度分析HPLC另一色譜圖；
[0046]圖4為本發(fā)明所舉實(shí)例中合成ACP 65-74粗產(chǎn)品的純度分析HPLC的另一色譜圖；
[0047]圖5為本發(fā)明所舉實(shí)例中合成ACP 65-74粗產(chǎn)品的純度分析HPLC的另一色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0048]下面結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0049]下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明實(shí)施例作進(jìn)一步地詳細(xì)描述，如圖1所示為本發(fā)明實(shí)施例所提供基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法流程示意圖，所述制備方法包括:
[0050]步驟1、將一定比例的苯乙烯類單體、交聯(lián)劑和致孔劑混合均勻后，注入反應(yīng)模具中，并升溫至一定溫度進(jìn)行原位共聚反應(yīng)一段時(shí)間，得到整體聚合物材料；
[0051]在該步驟中，所述苯乙烯類單體包括聚乙烯基芐氯；
[0052]所述交聯(lián)劑包括:二乙烯基苯、乙二醇二甲基丙烯酸酯和二乙二醇二甲基丙烯酸酯中的一種或多種；具體實(shí)現(xiàn)中的典型組合是聚乙烯基芐氯與二乙烯基苯共聚、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚的整體材料，其孔徑范圍為0.5?10 μ m。
[0053]所述致孔劑由十二醇和環(huán)己醇按照質(zhì)量比1:1組成。
[0054]舉例來說，首先可以將苯乙烯類單體(例如聚乙烯基芐氯)與交聯(lián)劑按照質(zhì)量比為1:1?1:2進(jìn)行混合；優(yōu)選1: 1.2?1: 1.8，例如可以按照1: 1.3、1: 1.4、1: 1.5或1: 1.6的質(zhì)量比混合。
[0055]然后加入致孔劑，該致孔劑質(zhì)量為苯乙烯類單體與交聯(lián)劑質(zhì)量和的1.5倍；
[0056]再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBN)，具體可以按照反應(yīng)單體量的1% (質(zhì)量比)加入，將上述組分完全混合形成均勻溶液；
[0057]將上述溶液裝入一定形狀的反應(yīng)模具中，密封后放置于水浴鍋中，控制聚合溫度范圍在60?80°C，反應(yīng)時(shí)間控制在12?24h，最終制得整體聚合物材料。
[0058]具體實(shí)現(xiàn)中，上述聚合溫度范圍進(jìn)一步優(yōu)選在65?75°C內(nèi)，例如為62°C、65°C、71°C、75°C或 78°C。
[0059]另外，具體實(shí)現(xiàn)中，該整體聚合物材料的形狀取決于所述反應(yīng)模具的形狀，也可以根據(jù)后期應(yīng)用固相合成的裝置而任意設(shè)計(jì)，例如可以為盤狀或者其他多邊形，本實(shí)例優(yōu)選為柱狀。
[0060]步驟2、將步驟I得到的整體聚合物材料以索氏提取或連接至液相色譜泵沖洗的方法去除內(nèi)部的致孔劑，得到整體多孔材料；
[0061]在該步驟中，通過連接至液相色譜泵沖洗的方法去除內(nèi)部的致孔劑的過程具體為:
[0062]首先將所述反應(yīng)模具連接于液相色譜泵，用甲醇、乙醇和乙腈中的一種或多種混合物的溶劑作為流動相，進(jìn)行沖洗以去除致孔劑，這里溶劑優(yōu)選為乙醇；
[0063]其中，在沖洗過程中，沖洗流速為0.2?0.5mL/min,流動相所采用的溶劑體積為50?100mL，該方法主要是針對在色譜柱管作為模具制備的整體聚合物材料。
[0064]步驟3、利用親水性的乙烯基單體對步驟2所得到的整體多孔材料的孔道表面進(jìn)行接枝聚合改性；
[0065]在該步驟中，具體操作可以為:首先向步驟2所得到的整體多孔材料中加入一定比例的親水性單體、溶劑和原子轉(zhuǎn)移自由基聚合引發(fā)劑；
[0066]在65?80°C的反應(yīng)溫度下對材料表面進(jìn)行接枝聚合反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為4?12h ;具體實(shí)現(xiàn)中，反應(yīng)溫度可以為68°C、70°C、75°C或78V ;反應(yīng)時(shí)間可以為4h、6h、8h、1h和12h，進(jìn)一步優(yōu)選為6?10h。
[0067]然后對反應(yīng)后的材料進(jìn)行清洗，得到表面帶有大量羥基的親水接枝改性材料。
[0068]在具體實(shí)現(xiàn)中，所述親水性單體可以包括:甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)、甲基丙烯酸聚乙二醇酯(分子量范圍為Mn = 370?1600) (PEGMA)、單甲氧基聚乙二醇甲基丙烯酸酯(分子量范圍包括Mn = 470?2500) (mPEGMA)、丙烯酸聚乙二醇酯(分子量范圍為Mn=375?1600) (PEGA)和單甲氧基聚乙二醇丙烯酸酯(分子量范圍為Mn = 375?1600)(mPEGA)中的一種或者多種的的混合物。例如可以是HEMA和mPEGMA的混合物，PEGMA和mPEGA的混合物，HEMA和mPEGA的混合物，或HEMA、mPEGA、PEGMA的混合物。本實(shí)例中優(yōu)選為聚乙二醇丙烯酸酯(PEGA)。
[0069]所述溶劑可以包括:去離子水、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)和二氧六環(huán)中的一種或多種的混合物。
[0070]所述原子轉(zhuǎn)移自由基聚合引發(fā)劑包括組分:氯化亞銅和催化劑配體；其中，所述催化劑配體可以包括:2, 2-聯(lián)二吡啶(Bpy)、四甲基乙二胺(TMEDA)、N，N, N, ’ N, ”N，”’ -五甲基二亞乙基三胺(PMDETA)和1，1,4, 7, 10, 10’ -六甲基三亞乙基四胺(HMETETA)中的一種或多種的混合物。
[0071]另外，具體實(shí)現(xiàn)中，所述親水性單體的加入比例為步驟2所得到的整體多孔材料質(zhì)量的3?6倍；即材料質(zhì)量:親水性單體質(zhì)量=1:3?6 (g/g)，例如該親水性單體的加入比例可以是整體多孔材料質(zhì)量的3.5、4、4.5、5、5.5,5.6,5.7,5.8,5.9倍，本實(shí)例優(yōu)選為3.5?5.5倍，進(jìn)一步優(yōu)選為4?5倍；
[0072]所述原子轉(zhuǎn)移自由基聚合引發(fā)劑中的氯化亞銅的加入比例為所述親水性單體摩爾數(shù)的I?10%，且所述氯化亞銅和催化劑配體的摩爾比為1:1。
[0073]步驟4、將表面接枝的聚合物長鏈上的大量羥基逐步進(jìn)行衍生，并鏈接linker基團(tuán)，得到鏈接linker的固相合成介質(zhì)。
[0074]在該步驟中，具體是將步驟3所得的表面接枝的聚合物長鏈上的大量羥基分別逐步進(jìn)行衍生，分別依次為鹵化、胺化、偶聯(lián)linker，最后得到連接linker的固相合成介質(zhì)。
[0075]其中，所述鹵化過程具體包括:
[0076]將二氯亞砜(SOCl2)按照與步驟3改性后的材料質(zhì)量比為10:1的比例加入到步驟3改性后所得的材料中；同時(shí)加入二氯甲烷(DCM)作為溶劑，其加入體積為二氯亞砜SOCl2體積的2倍，其中反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h ;在反應(yīng)完畢后，以二氯甲烷DCM沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物；
[0077]所述胺化過程具體包括:
[0078]首先將鄰苯二甲酰亞胺加入上述鹵化后的材料中，同時(shí)加入二甲基甲酰胺DMF作為溶劑，在120°C下反應(yīng)12h ;然后將酰肼加入上述反應(yīng)后所得的材料中，同時(shí)加入乙醇作為溶劑，在60°C下反應(yīng)12h ;最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料；
[0079]所述偶聯(lián)linker基團(tuán)的過程具體包括:
[0080]將linker試劑按照該linker試劑與所述胺化后的整體材料質(zhì)量比為5:1的質(zhì)量比加入到所述胺化后的整體材料中，同時(shí)加入二甲基甲酰胺DMF作為溶劑；再加入縮合劑1-羥基苯并三氮唑(HOBt)、2-(1H-苯并三偶氮L-1-基-N，N，N’，N’，-四甲基異脲六氟化磷(HBTU)、二異丙基乙胺(DIEA)，具體按照與所述linker試劑摩爾比1:1:1:1的比例加入；然后再室溫下反應(yīng)2h。
[0081]具體實(shí)現(xiàn)中，所述linker試劑可以包括:對羥甲基苯甲酸(HMBA)、對羥甲基苯氧乙酸(HMPA)和對羥甲基苯乙酸(HMPAM)中的一種或多種。但此方法中不限于以上列舉的幾種，包括凡是可以和氨基發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)的linker試劑。
[0082]按照上述制備方法制得的固相合成介質(zhì)，由于聚苯乙烯類共聚物微球材料在高度交聯(lián)后，具有較好的機(jī)械強(qiáng)度和耐溶劑溶脹性，因此適合應(yīng)用于連續(xù)流體操作裝置中；且由于在該介質(zhì)表面接枝具有多功能團(tuán)的聚合物長鏈，達(dá)到了降低材料表面疏水性及增加功能基團(tuán)的作用，在固相合成多肽應(yīng)用領(lǐng)域有很高的價(jià)值。例如聚乙烯基芐氯與乙二醇二甲基丙烯酸酯(PCMS-EDMA)整體柱(交聯(lián)度為50%質(zhì)量比，孔徑為0.5?10 μ m)經(jīng)過接枝聚合物長鏈改性后，能夠繼續(xù)保持原有的大孔結(jié)構(gòu)，可以耐受較高的壓力操作，同時(shí)接枝的聚合物長鏈能夠進(jìn)一步的衍生，連接固相合成用的linker，用作固相合成介質(zhì)，從而能夠應(yīng)用于大規(guī)模的多肽合成生產(chǎn)，滿足快速、高效、批次合成多肽的需要。
[0083]下面以具體實(shí)例對上述制備方法進(jìn)行詳細(xì)說明:
[0084]實(shí)例一、I) PCMS-EDMA整體柱基質(zhì)的制備
[0085]準(zhǔn)確稱取乙烯基芐氯(CMS)和乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)各0.5g，偶氮二異丁腈(AIBN)0.005g，致孔劑十二醇與環(huán)己醇各0.75g ；
[0086]將上組分在1mL錐形瓶中混合均勻，然后將該溶液注入不銹鋼色譜柱管中密封后，放于65°C水浴鍋中進(jìn)行反應(yīng)12h，降溫結(jié)束反應(yīng)。
[0087]2)去除致孔劑
[0088]將步驟I)得到的整體柱連接于液相色譜泵上，用甲醇作為流動相，用50mL以0.2mL/min的流速沖洗至其中的致孔劑完全去除。
[0089]3) PCMS-EDMA整體柱表面介質(zhì)聚合HEMA
[0090]按照質(zhì)量比4:1 (HEMA: PCMS-EDMA)的比例加入HEMA單體，以及溶劑DMF 20mL,同時(shí)加入占HEMA單體摩爾數(shù)I %的氯化亞銅(CuCl)和與CuCl相同摩爾數(shù)的催化劑配體Bpy ；
[0091]混合均勻后利用連續(xù)流體合成裝置將上述反應(yīng)通過整體柱材料，在溫度65°C下，反應(yīng)6h ;結(jié)束反應(yīng)，再用20mL DMF沖洗柱體以去除其他可溶性雜質(zhì)，制得親水單體改性的整體材料。
[0092]4)衍生步驟3)所得親水改性整體材料，偶聯(lián)linker
[0093]a，將二氯亞砜(SOCl2)按照10:1質(zhì)量比(SOCl2與步驟3所得材料質(zhì)量之比)加入親水改性整體材料中，同時(shí)加入二氯甲烷(DCM)作為溶劑，其加入體積為SOCl2體積的2倍，將該反應(yīng)液利用流體連續(xù)裝置通過步驟3)所得的柱體，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h，反應(yīng)完畢后，以DCM沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物；
[0094]b，將鄰苯二甲酰亞胺按照與上述氯化后的材料相同質(zhì)量的比例加入DMF中配制成均勻溶液，同樣采用連續(xù)流體裝置將該溶液通過上述步驟a得到的柱體中，120°C下反應(yīng)12h，反應(yīng)完畢后，用DMF沖洗柱體；
[0095]C，將等質(zhì)量的酰肼(與上述步驟3所得材料的質(zhì)量相等)加入20mL乙醇中，配制成均勻溶液，同樣利用流體連續(xù)裝置將上述溶液通過上述步驟b所得的材料中，在60°C下反應(yīng)12h，最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料；
[0096]d，將linker試劑(對羥甲基苯甲酸和HMBA)按照5:1質(zhì)量比加入到胺化后的整體材料中，并加入20mL DMF ;另外，加入與HMPA等摩爾比的HOBt、HBTU, DIEA，室溫下反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢后，以20mL DMF沖洗柱體以去除其他雜質(zhì)，制得偶聯(lián)linker的固相合成介質(zhì)。
[0097]最后所得固相合成介質(zhì)的表面形貌用掃描電鏡進(jìn)行觀察，可以看到接枝修飾后的柱體表面仍然保持微米級的通孔，證明該固相合成介質(zhì)能較好的使用于流體連續(xù)合成裝置中。
[0098]實(shí)施例二、
[0099]I) PCMS-DVB整體柱基質(zhì)的制備
[0100]準(zhǔn)確稱取CMS和DVB各0.5g，AIBN 0.005g，致孔劑十二醇與環(huán)己醇各0.75g，將上組分在1mL錐形瓶中混合均勻，然后將該溶液注入不銹鋼色譜柱管中；密封后，放于68°C水浴鍋中進(jìn)行反應(yīng)14h，降溫結(jié)束反應(yīng)。
[0101]2)去除致孔劑
[0102]將步驟I)得到的整體柱連接于液相色譜泵上，用乙醇作為流動相，50mL以0.3mL/min的流速沖洗至致孔劑去除完全。
[0103]3) PCMS-DVB整體柱表面介質(zhì)聚合HEMA與mPEGA
[0104]按照質(zhì)量比4:4:1 (HEMA: mPEGA:PCMS-DVB)比例加入 HEMA、mPEGMA (Mn = 470)單體，溶劑DMF 20mL,同時(shí)加入占單體HEMA摩爾數(shù)的2%的氯化亞銅(CuCl)和與CuCl相同摩爾數(shù)的配體Bpy ；
[0105]混合均勻后，利用連續(xù)流體合成裝置將上述反應(yīng)通過整體柱材料，在溫度70°C下，反應(yīng)8h ;結(jié)束反應(yīng)，再用20mL DMF沖洗柱體以去除其他可溶性雜質(zhì)，制得親水單體改性的整體材料。
[0106]4)衍生步驟3)所得親水改性整體材料，偶聯(lián)linker
[0107]a，將二氯亞砜(SOCl2)按照10:1質(zhì)量比(SOCl2與步驟3)所得材料質(zhì)量之比)加入步驟3)所得的材料中，同時(shí)加入二氯甲烷(DCM)作為溶劑，其加入體積為SOCl2體積的2倍，將該反應(yīng)液利用流體連續(xù)裝置通過步驟3)所得的柱體，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h，反應(yīng)完畢后，以DCM沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物；
[0108]b，將鄰苯二甲酰亞胺按照與上述氯化后的材料相同質(zhì)量的比例加入DMF中配制成均勻溶液，同樣采用連續(xù)流體裝置將該溶液通過上述步驟a得到的柱體中，120°C下反應(yīng)12h，反應(yīng)完畢后，用DMF沖洗柱體；
[0109]C，將等質(zhì)量的酰肼(與上述步驟3)所得材料的質(zhì)量相等)加入20mL乙醇中，配制成均勻溶液，同樣利用流體連續(xù)裝置將上述溶液通過上述步驟b所得的材料中，60°C下反應(yīng)12h，最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料；
[0110]d，將linker試劑(對羥甲基苯氧乙酸，HMPA)按照5:1質(zhì)量比加入到胺化后的整體材料中，并加入20mL DMF ;另外，加入與HMPA等摩爾比的HOBt、HBTU, DIEA，室溫下反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢后，以20mL DMF沖洗柱體以去除其他雜質(zhì)，制得偶聯(lián)linker的固相合成介質(zhì)。
[0111]最后所得固相合成介質(zhì)的表面形貌用掃描電鏡進(jìn)行觀察，可以看到接枝修飾后的柱體表面仍然保持微米級的通孔，證明該固相合成介質(zhì)能較好的使用于流體連續(xù)合成裝置中。
[0112]實(shí)施例三、
[0113]I) PCMS-EDMA整體柱基質(zhì)的制備
[0114]準(zhǔn)確稱取CMS和EDMA分別為0.5g和lg，AIBN 0.005g，致孔劑十二醇與環(huán)己醇各1.13g，將上組分在1mL錐形瓶中混合均勻，然后將該溶液注入不銹鋼色譜柱管中；密封后，放于70°C水浴鍋中進(jìn)行反應(yīng)20h，降溫結(jié)束反應(yīng)。
[0115]2)去除致孔劑
[0116]將步驟I)得到的整體柱連接于液相色譜泵上，用乙腈作為流動相，50mL以0.5mL/min的流速沖洗至致孔劑去除完全。
[0117]3) PCMS-EDMA整體柱表面介質(zhì)聚合PEGA
[0118]按照質(zhì)量比4.5:1(PEGA:PCMS-EDMA)比例加入 PEGA(Mn = 1600)單體，溶劑 DMF20mL,同時(shí)加入占單體PEGA摩爾數(shù)的5%的氯化亞銅(CuCl)和與CuCl相同摩爾數(shù)的配體PMDETA ；
[0119]混合均勻后，利用連續(xù)流體合成裝置將上述反應(yīng)通過整體柱材料，在溫度80°C下，反應(yīng)1h ;結(jié)束反應(yīng)，再用20mL DMF沖洗柱體以去除其他可溶性雜質(zhì)，制得親水單體改性的整體材料。
[0120]4)衍生步驟3)所得親水改性整體材料，偶聯(lián)linker
[0121]a，將二氯亞砜(SOCl2)按照10:1質(zhì)量比(SOCl2與步驟3)所得材料質(zhì)量之比)加入步驟3)所得的材料中，同時(shí)加入二氯甲烷(DCM)作為溶劑，其加入體積為SOCl2體積的2倍，將該反應(yīng)液利用流體連續(xù)裝置通過步驟3)所得的柱體，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h，反應(yīng)完畢后，以DCM沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物；
[0122]b，將鄰苯二甲酰亞胺按照與上述氯化后的材料相同質(zhì)量的比例加入DMF中配制成均勻溶液，同樣采用連續(xù)流體裝置將該溶液通過上述步驟a得到的柱體中，120°C下反應(yīng)12h，反應(yīng)完畢后，用DMF沖洗柱體；
[0123]C，將等質(zhì)量的酰肼(與上述步驟3)所得材料的質(zhì)量相等)加入20mL乙醇中，配制成均勻溶液，同樣利用流體連續(xù)裝置將上述溶液通過上述步驟b所得的材料中，60°C下反應(yīng)12h，最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料；
[0124]d，將linker試劑(對羥甲基苯乙酸，HMPAM)按照5:1質(zhì)量比加入到胺化后的整體材料中，并加入20mL DMF ;另外，加入與HMPA等摩爾比的HOBt、HBTU, DIEA，室溫下反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢后，以20mL DMF沖洗柱體以去除其他雜質(zhì)，制得偶聯(lián)linker的固相合成介質(zhì)。
[0125]最后所得固相合成介質(zhì)的表面形貌用掃描電鏡進(jìn)行觀察，可以看到接枝修飾后的柱體表面仍然保持微米級的通孔，證明該固相合成介質(zhì)能較好的使用于流體連續(xù)合成裝置中。
[0126]實(shí)施例四、
[0127]I) PCMS-DVB整體柱基質(zhì)的制備
[0128]準(zhǔn)確稱取CMS和EDMA分別為0.5g和1.0g, AIBN 0.005g，致孔劑十二醇與環(huán)己醇各1.12g，將上組分在1mL錐形瓶中混合均勻，然后將該溶液注入不銹鋼色譜柱管中；密封后，放于75°C水浴鍋中進(jìn)行反應(yīng)24h，降溫結(jié)束反應(yīng)。
[0129]2)去除致孔劑
[0130]將步驟I)得到的整體柱連接于液相色譜泵上，用乙醇作為流動相，50mL以0.4mL/min的流速沖洗至致孔劑去除完全。
[0131 ] 3) PCMS-DVB整體柱表面介質(zhì)聚合PEGA和mPEGA
[0132]按照質(zhì)量比5:5:1 (PEGA: mPEGA: PCMS-DVB)比例加入 PEGA (Mn = 375)、mPEGA (Mn=1600)單體，溶劑DMF 20mL,同時(shí)加入占單體PEGA摩爾數(shù)的10%的氯化亞銅(CuCl)和與CuCl相同摩爾數(shù)的配體TMEDA ；
[0133]混合均勻后，利用連續(xù)流體合成裝置將上述反應(yīng)通過整體柱材料，在溫度75°C下，反應(yīng)1h ;結(jié)束反應(yīng)，再用20mL DMF沖洗柱體以去除其他可溶性雜質(zhì)，制得親水單體改性的整體材料。
[0134]4)衍生步驟3)所得親水改性整體材料，偶聯(lián)linker
[0135]a，將二氯亞砜(SOCl2)按照10:1質(zhì)量比(SOCl2與步驟3)所得材料質(zhì)量之比)加入步驟3)所得的材料中，同時(shí)加入二氯甲烷(DCM)作為溶劑，其加入體積為SOCl2體積的2倍，將該反應(yīng)液利用流體連續(xù)裝置通過步驟3)所得的柱體，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h，反應(yīng)完畢后，以DCM沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物；
[0136]b，將鄰苯二甲酰亞胺按照與上述氯化后的材料相同質(zhì)量的比例加入DMF中配制成均勻溶液，同樣采用連續(xù)流體裝置將該溶液通過上述步驟a得到的柱體中，120°C下反應(yīng)12h，反應(yīng)完畢后，用DMF沖洗柱體；
[0137]C，將等質(zhì)量的酰肼(與上述步驟3)所得材料的質(zhì)量相等)加入20mL乙醇中，配制成均勻溶液，同樣利用流體連續(xù)裝置將上述溶液通過上述步驟b所得的材料中，60°C下反應(yīng)12h，最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料；
[0138]d，將linker試劑(對羥甲基苯氧乙酸，HMPA)按照5:1質(zhì)量比加入到胺化后的整體材料中，并加入20mL DMF ;另外，加入與HMPA等摩爾比的HOBt、HBTU, DIEA，室溫下反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢后，以20mL DMF沖洗柱體以去除其他雜質(zhì)，制得偶聯(lián)linker的固相合成介質(zhì)。
[0139]最后所得固相合成介質(zhì)在連續(xù)流體連續(xù)裝置上進(jìn)行ACP 65-74合成測試，其ACP65-74粗產(chǎn)品的純度用高效液相色譜(HPLC)分析，如圖2所示為本發(fā)明所舉實(shí)例合成ACP65-74粗產(chǎn)品的純度分析HPLC色譜圖，從圖2中可知:該實(shí)例中多肽純度為91 %。
[0140]實(shí)施例五、
[0141]1)PCMS-DEDMA整體柱基質(zhì)的制備
[0142]準(zhǔn)確稱取CMS和DEDMA分別為0.5g和0.9g，AIBN 0.005g，致孔劑十二醇與環(huán)己醇各1.05g，將上組分在1mL錐形瓶中混合均勻，然后將該溶液注入不銹鋼色譜柱管中；密封后，放于75°C水浴鍋中進(jìn)行反應(yīng)20h，降溫結(jié)束反應(yīng)。
[0143]2)去除致孔劑
[0144]將步驟I)得到的整體柱連接于液相色譜泵上，用乙醇作為流動相，50mL以0.5mL/min的流速沖洗至致孔劑去除完全。
[0145]3) PCMS-DEDMA整體柱表面介質(zhì)聚合PEGMA
[0146]按照質(zhì)量比6:1(PEGMA:PCMS-DEDMA)比例加入 PEGMA(Mn = 370)單體，溶劑 DMF20mL,同時(shí)加入占單體PEGMA摩爾數(shù)的8%的氯化亞銅(CuCl)和與CuCl相同摩爾數(shù)的配體 Bpy ；
[0147]混合均勻后，利用連續(xù)流體合成裝置將上述反應(yīng)通過整體柱材料，在溫度65°C下，反應(yīng)1h ;結(jié)束反應(yīng)，再用20mL DMF沖洗柱體以去除其他可溶性雜質(zhì)，制得親水單體改性的整體材料。
[0148]4)衍生步驟3)所得親水改性整體材料，偶聯(lián)linker
[0149]a，將二氯亞砜(SOCl2)按照10:1質(zhì)量比(SOCl2與步驟3)所得材料質(zhì)量之比)加入步驟3)所得的材料中，同時(shí)加入二氯甲烷(DCM)作為溶劑，其加入體積為SOCl2體積的2倍，將該反應(yīng)液利用流體連續(xù)裝置通過步驟3)所得的柱體，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h，反應(yīng)完畢后，以DCM沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物；
[0150]b，將鄰苯二甲酰亞胺按照與上述氯化后的材料相同質(zhì)量的比例加入DMF中配制成均勻溶液，同樣采用連續(xù)流體裝置將該溶液通過上述步驟a得到的柱體中，120°C下反應(yīng)12h，反應(yīng)完畢后，用DMF沖洗柱體；
[0151]C，將等質(zhì)量的酰肼(與上述步驟3)所得材料的質(zhì)量相等)加入20mL乙醇中，配制成均勻溶液，同樣利用流體連續(xù)裝置將上述溶液通過上述步驟b所得的材料中，60°C下反應(yīng)12h，最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料；
[0152]d，將linker試劑(對羥甲基苯氧乙酸，HMPA)按照5:1質(zhì)量比加入到胺化后的整體材料中，并加入20mL DMF ;另外，加入與HMPA等摩爾比的HOBt、HBTU, DIEA，室溫下反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢后，以20mL DMF沖洗柱體以去除其他雜質(zhì)，制得偶聯(lián)linker的固相合成介質(zhì)。
[0153]最后所得固相合成介質(zhì)在連續(xù)流體連續(xù)裝置上進(jìn)行ACP 65-74合成測試，其ACP65-74粗產(chǎn)品的純度用高效液相色譜(HPLC)分析，如圖3所示為本發(fā)明所舉實(shí)例中合成ACP65-74粗產(chǎn)品的純度分析HPLC另一色譜圖，從圖3可知:該實(shí)例中多肽純度為81%。
[0154]實(shí)施例六、
[0155]I) PCMS-DEDMA整體柱基質(zhì)的制備
[0156]準(zhǔn)確稱取CMS和DEDMA分別為0.5g和0.9g，AIBN 0.005g，致孔劑十二醇與環(huán)己醇各0.9g，將上組分在1mL錐形瓶中混合均勻，然后將該溶液注入不銹鋼色譜柱管中；密封后，放于75°C水浴鍋中進(jìn)行反應(yīng)20h，降溫結(jié)束反應(yīng)。
[0157]2)去除致孔劑
[0158]將步驟I)得到的整體柱連接于液相色譜泵上，用乙醇作為流動相，50mL以0.5mL/min的流速沖洗至致孔劑去除完全。
[0159]3) PCMS-DEDMA整體柱表面介質(zhì)聚合PEGMA和mPEGA
[0160]按照質(zhì)量比3:3:1 (PEGMA: mPEGMA: PCMS-DEDMA)比例加入 PEGMA (Mn = 1600)、mPEGA (Mn = 1600)單體，溶劑去離子水20mL,同時(shí)加入占單體PEGMA摩爾數(shù)的3%的氯化亞銅(CuCl)和與CuCl相同摩爾數(shù)的配體Bpy ；
[0161]混合均勻后，利用連續(xù)流體合成裝置將上述反應(yīng)通過整體柱材料，在溫度65°C下，反應(yīng)7h ;結(jié)束反應(yīng)，再用20mL去離子水沖洗柱體以去除其他可溶性雜質(zhì)，制得親水單體改性的整體材料。
[0162]4)衍生步驟3)所得親水改性整體材料，偶聯(lián)linker
[0163]a，將二氯亞砜(SOCl2)按照10:1質(zhì)量比(SOCl2與步驟3)所得材料質(zhì)量之比)加入步驟3)所得的材料中，同時(shí)加入二氯甲烷(DCM)作為溶劑，其加入體積為SOCl2體積的2倍，將該反應(yīng)液利用流體連續(xù)裝置通過步驟3)所得的柱體，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h，反應(yīng)完畢后，以DCM沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物；
[0164]b，將鄰苯二甲酰亞胺按照與上述氯化后的材料相同質(zhì)量的比例加入DMF中配制成均勻溶液，同樣采用連續(xù)流體裝置將該溶液通過上述步驟a得到的柱體中，120°C下反應(yīng)12h，反應(yīng)完畢后，用DMF沖洗柱體；
[0165]C，將等質(zhì)量的酰肼(與上述步驟3)所得材料的質(zhì)量相等)加入20mL乙醇中，配制成均勻溶液，同樣利用流體連續(xù)裝置將上述溶液通過上述步驟b所得的材料中，60°C下反應(yīng)12h，最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料；
[0166]d，將linker試劑(對羥甲基苯氧乙酸，HMPA)按照5:1質(zhì)量比加入到胺化后的整體材料中，并加入20mL DMF ;另外，加入與HMPA等摩爾比的HOBt、HBTU, DIEA，室溫下反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢后，以20mL DMF沖洗柱體以去除其他雜質(zhì)，制得偶聯(lián)linker的固相合成介質(zhì)。
[0167]最后所得固相合成介質(zhì)在連續(xù)流體連續(xù)裝置上進(jìn)行ACP 65-74合成測試，其ACP65-74粗產(chǎn)品的純度用高效液相色譜(HPLC)分析，如圖4為本發(fā)明所舉實(shí)例中合成ACP65-74粗產(chǎn)品的純度分析HPLC的另一色譜圖，從圖4可看出:該實(shí)例中多肽純度為72%。
[0168]實(shí)施例七、
[0169]I) PCMS-EDMA整體柱基質(zhì)的制備
[0170]準(zhǔn)確稱取CMS和EDMA分別為0.5g和0.7g，AIBN 0.005g，致孔劑十二醇與環(huán)己醇各0.9g，將上組分在1mL錐形瓶中混合均勻，然后將該溶液注入不銹鋼色譜柱管中；密封后，放于70°C水浴鍋中進(jìn)行反應(yīng)20h，降溫結(jié)束反應(yīng)。
[0171]2)去除致孔劑
[0172]將步驟I)得到的整體柱連接于液相色譜泵上，用乙醇作為流動相，50mL以0.3mL/min的流速沖洗至致孔劑去除完全。
[0173]3) PCMS-EDMA整體柱表面介質(zhì)聚合PEGMA和mPEGA
[0174]按照質(zhì)量比6:6:1 (PEGMA: mPEGMA: PCMS-EDMA)比例加入 PEGMA (Mn = 1600)、mPEGA (Mn = 375)單體，溶劑DMSO 20mL,同時(shí)加入占單體PEGMA摩爾數(shù)的5%的氯化亞銅(CuCl)和與CuCl相同摩爾數(shù)的配體HMETETA ；
[0175]混合均勻后，利用連續(xù)流體合成裝置將上述反應(yīng)通過整體柱材料，在溫度65°C下，反應(yīng)7h ;結(jié)束反應(yīng)，再用20mL DMSO沖洗柱體以去除其他可溶性雜質(zhì)，制得親水單體改性的整體材料。
[0176]4)衍生步驟3)所得親水改性整體材料，偶聯(lián)linker
[0177]a，將二氯亞砜(SOCl2)按照10:1質(zhì)量比(SOCl2與步驟3)所得材料質(zhì)量之比)加入步驟3)所得的材料中，同時(shí)加入二氯甲烷(DCM)作為溶劑，其加入體積為SOCl2體積的2倍，將該反應(yīng)液利用流體連續(xù)裝置通過步驟3)所得的柱體，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h，反應(yīng)完畢后，以DCM沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物；
[0178]b，將鄰苯二甲酰亞胺按照與上述氯化后的材料相同質(zhì)量的比例加入DMF中配制成均勻溶液，同樣采用連續(xù)流體裝置將該溶液通過上述步驟a得到的柱體中，120°C下反應(yīng)12h，反應(yīng)完畢后，用DMF沖洗柱體；
[0179]C，將等質(zhì)量的酰肼(與上述步驟3)所得材料的質(zhì)量相等)加入20mL乙醇中，配制成均勻溶液，同樣利用流體連續(xù)裝置將上述溶液通過上述步驟b所得的材料中，60°C下反應(yīng)12h，最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料；
[0180]d，將linker試劑(對羥甲基苯乙酸，HMPAM)按照5:1質(zhì)量比加入到胺化后的整體材料中，并加入20mL DMF ;另外，加入與HMPA等摩爾比的HOBt、HBTU, DIEA，室溫下反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢后，以20mL DMF沖洗柱體以去除其他雜質(zhì)，制得偶聯(lián)linker的固相合成介質(zhì)。
[0181]最后所得固相合成介質(zhì)在連續(xù)流體連續(xù)裝置上進(jìn)行ACP 65-74合成測試，其ACP65-74粗產(chǎn)品的純度用高效液相色譜(HPLC)分析，如圖5所示為本發(fā)明所舉實(shí)例中合成ACP65-74粗產(chǎn)品的純度分析HPLC的另一色譜圖，從圖5中可知:該實(shí)例中多肽純度為59%。
[0182]進(jìn)一步的，為檢驗(yàn)改性聚乙烯基芐氯與乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚(PCMS-EDMA)整體材料的固相合成效率，測定了該介質(zhì)的在多肽合成中的合成效率，將改性后的PCMS-EDMA整體柱(規(guī)格為Φ 4.6 X 50mm)連接于自行設(shè)計(jì)的連續(xù)流體固相合成裝置中，進(jìn)行酰基載體蛋白片段65-74 (ACP 65-74)的合成測試，結(jié)果表明該改性PCMS-EDMA整體柱的合成效率大大提升，提高了多肽粗產(chǎn)品的純度，最高純度甚至可達(dá)90%以上。
[0183]綜上所述，通過本發(fā)明所述方法制備的固相合成介質(zhì)具有微米級通孔，并具有高交聯(lián)度的非溶脹性。由于聚苯乙烯類共聚整體材料具有0.5?10 μm的微米級的通孔，具有高交聯(lián)度，機(jī)械性能好的特點(diǎn)，適合在連續(xù)流體操作技術(shù)中進(jìn)行固相合成；另外，用親水性單體進(jìn)行接枝聚合改性表面后，賦予材料表面大量的羥基，大大提高了載量，同時(shí)由于聚合物長鏈在材料孔道表面呈伸展?fàn)顟B(tài)，能夠增強(qiáng)反應(yīng)位點(diǎn)與反應(yīng)試劑之間的接觸幾率，所以可以顯著提高合成效率，能夠應(yīng)用于大規(guī)模的多肽合成生產(chǎn)，滿足快速、高效、批次合成多肽的需要。
[0184]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括: 步驟1、將一定比例的苯乙烯類單體、交聯(lián)劑和致孔劑混合均勻后，注入反應(yīng)模具中，并升溫至一定溫度進(jìn)行原位共聚反應(yīng)一段時(shí)間，得到整體聚合物材料； 步驟2、將步驟I得到的整體聚合物材料以索氏提取或連接至液相色譜泵沖洗的方法去除內(nèi)部的致孔劑，得到整體多孔材料； 步驟3、利用親水性的乙烯基單體對步驟2所得到的整體多孔材料的孔道表面進(jìn)行接枝聚合改性； 步驟4、將表面接枝的聚合物長鏈上的大量羥基逐步進(jìn)行衍生，并鏈接linker基團(tuán)，得到鏈接linker的固相合成介質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于， 所述苯乙烯類單體包括聚乙烯基芐氯； 所述交聯(lián)劑包括:二乙烯基苯、乙二醇二甲基丙烯酸酯和二乙二醇二甲基丙烯酸酯中的一種或多種； 所述致孔劑由十二醇和環(huán)己醇按照質(zhì)量比1:1組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于，所述步驟I具體包括: 首先將苯乙烯類單體與交聯(lián)劑按照質(zhì)量比1:1?1:2進(jìn)行混合； 然后加入致孔劑，該致孔劑質(zhì)量為所述苯乙烯類單體與交聯(lián)劑質(zhì)量和的1.5倍； 再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈，將上述組分完全混合形成均勻溶液； 將所述溶液裝入一定形狀的反應(yīng)模具中，密封后放置于水浴鍋中，其中聚合溫度范圍為60?80°C，反應(yīng)時(shí)間為12?24h，最終制得整體聚合物材料。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于，在步驟2中以連接至液相色譜泵沖洗的方法去除內(nèi)部的致孔劑，具體包括: 將所述反應(yīng)模具連接于液相色譜泵，用甲醇、乙醇和乙腈中的一種或多種混合物的溶劑作為流動相，進(jìn)行沖洗以去除致孔劑； 其中，沖洗流速為0.2?0.5mL/min，流動相所采用的溶劑體積為50?100mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于，在步驟3中，利用親水性的乙烯基單體對步驟2所得到的整體多孔材料的孔道表面進(jìn)行接枝聚合改性，具體包括: 向步驟2所得到的整體多孔材料中加入一定比例的親水性單體、溶劑和原子轉(zhuǎn)移自由基聚合引發(fā)劑； 在65?80°C的反應(yīng)溫度下對材料表面進(jìn)行接枝聚合反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為4?12h ; 然后對反應(yīng)后的材料進(jìn)行清洗，得到表面帶有大量羥基的親水接枝改性材料。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于， 所述親水性單體包括:甲基丙烯酸羥乙酯、甲基丙烯酸聚乙二醇酯、單甲氧基聚乙二醇甲基丙烯酸酯、丙烯酸聚乙二醇酯和單甲氧基聚乙二醇丙烯酸酯中的一種或者多種的混合 物； 所述溶劑包括:去離子水、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜和二氧六環(huán)中的一種或多種的混合物； 所述原子轉(zhuǎn)移自由基聚合引發(fā)劑具體包括組分:氯化亞銅和催化劑配體；其中，所述催化劑配體包括:2, 2-聯(lián)二吡啶、四甲基乙二胺、N, N, N, ’ N, ”N，-五甲基二亞乙基三胺和1，1,4, 7，10，10’ -六甲基三亞乙基四胺中的一種或多種的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于， 所述親水性單體的加入比例為步驟2所得到的整體多孔材料質(zhì)量的3?6倍； 所述原子轉(zhuǎn)移自由基聚合引發(fā)劑中的氯化亞銅的加入比例為所述親水性單體摩爾數(shù)的1?10%，且所述氯化亞銅和催化劑配體的摩爾比為1:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于，在步驟4中，所述將表面接枝的聚合物長鏈上的大量羥基逐步進(jìn)行衍生，并鏈接linker基團(tuán)，得到鏈接linker的固相合成介質(zhì)，具體包括: 將步驟3得到的表面接枝的聚合物長鏈上的大量羥基分別逐步進(jìn)行衍生，依次為鹵化、胺化和偶聯(lián)linker基團(tuán)，得到鏈接linker的固相合成介質(zhì)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于，所述鹵化過程具體包括: 將二氯亞砜按照與步驟3改性后的材料質(zhì)量比為10:1的比例加入到步驟3改性后所得的材料中；同時(shí)加入二氯甲烷作為溶劑，其加入體積為二氯亞砜體積的2倍，其中反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為12h ;在反應(yīng)完畢后，以二氯甲烷沖洗材料表面，以去除副產(chǎn)物； 所述胺化過程具體包括: 首先將鄰苯二甲酰亞胺加入上述鹵化后的材料中，同時(shí)加入二甲基甲酰胺作為溶劑，在120°C下反應(yīng)12h ;然后將酰肼加入上述反應(yīng)后所得的材料中，同時(shí)加入乙醇作為溶劑，在60°C下反應(yīng)12h ;最后用乙醇進(jìn)行清洗，清洗完畢后得到胺化后的整體材料； 所述偶聯(lián)linker基團(tuán)的過程具體包括: 將linker試劑按照該linker試劑與所述胺化后的整體材料質(zhì)量比為5:1的質(zhì)量比加入到所述胺化后的整體材料中，同時(shí)加入二甲基甲酰胺作為溶劑；再加入縮合劑1-羥基苯并二氣挫、2-1H-苯并二偶?xì)釲-1-基-N, N, N’，N’，-四甲基異脈六氟化磷、二異丙基乙胺，具體按照與所述linker試劑摩爾比1:1:1:1的比例加入；然后在室溫下反應(yīng)2h。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述基于整體聚合物材料的固相合成介質(zhì)的制備方法，其特征在于， 所述linker試劑包括:對羥甲基苯甲酸、對羥甲基苯氧乙酸和對羥甲基苯乙酸中的一種或多種。
【文檔編號】C08F8/20GK104497214SQ201510026037
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2015年1月19日 優(yōu)先權(quán)日:2015年1月19日
【發(fā)明者】張榮月, 潘一廷, 冀德坤, 劉才 申請人:北京石油化工學(xué)院