本發(fā)明涉及一種含喹唑啉類配體的Pt配合物及其制備方法和應用。
背景技術：
：：順鉑是臨床常使用的抗腫瘤化學藥物，是一種非特異性的細胞毒性藥物。其在抑制和殺傷異常增殖的腫瘤細胞的同時，對其它增殖較快的正常細胞也同樣產生抑制和殺傷作用，由此產生的毒副作用以及腫瘤細胞對藥物先天或獲得性的抗藥性等問題一直是制約細胞毒性化療藥物臨床應用的瓶頸。近十年來，針對腫瘤細胞特異的增殖、分化和凋亡機制，高選擇性的分子靶向治療藥物得到迅速發(fā)展。但是，許多對腫瘤細胞高表達的蛋白激酶有很好抑制活性的小分子化合物，由于水溶性差或毒副作用大，以及易產生抗藥性而不能被臨床應用。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服腫瘤藥物順鉑存在的毒副作用大的缺陷，提供一種能夠特異性靶向腫瘤或癌癥細胞的含喹唑啉類配體的Pt配合物及其制備方法和應用。本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過深入研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所提供的由通式[Pt(XYZ)C]+B-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物，具有很好的受體EGFR靶向性，該含喹唑啉類配體的Pt配合物能夠靶向性地作用于受體EGFR高表達的腫瘤或癌癥細胞，從而降低Pt配合物對正常細胞的毒副作用。并且， 特別令人感到驚喜的是，本發(fā)明提供的含喹唑啉類配體的Pt配合物除了具有較好的EGFR受體靶向性以外，還具有很高的腫瘤或癌癥細胞的增殖抑制活性，例如式(3-1)和式(3-2)所示結構的化合物，表現(xiàn)出的腫瘤或癌癥細胞的增殖抑制活性與順鉑的一樣甚至還要高，具有很好的藥用價值和市場前景。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種含喹唑啉類配體的Pt配合物，該Pt配合物由通式[Pt(XYZ)C]+B-表示，其中，XYZ是由下式(1a)或(1b)提供的三齒配位基：C是由下式(2)提供的單齒配位基；其中，R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'各自獨立地選自氫、C1-C3的烷基、羥基或鹵素；B-為Cl-、PF6-、[B(C6H5)4]-(四苯硼酸根)或BF4-；n為1-4的整數(shù)。本發(fā)明還提供了一種含喹唑啉類配體的Pt配合物的制備方法，該方法包括：(1)將式(1a)或(1b)所示結構的化合物與K2PtCl4進行第一配位反應，得到通式Pt(XYZ)Cl表示的Pt配合前體，(2)將通式Pt(XYZ)Cl表示的Pt配合前體與式(2)所示結構的化合物進行第二配位反應，得到通式[Pt(XYZ)C]+Cl-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物，其中，XYZ是由上式(1a)或(1b)提供的三齒配位基：C是由上式(2)提供的單齒配位基；R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'各自獨立地選自氫、C1-C3的烷基、羥基或鹵素；n為1-4的整數(shù)。本發(fā)明還提供了上述含喹唑啉類配體的Pt配合物或者上述制備方法所制得的含喹唑啉類配體的Pt配合物在制備作為EGFR抑制劑的藥物中的應用。本發(fā)明還提供了上述含喹唑啉類配體的Pt配合物或者上述制備方法所制得的含喹唑啉類配體的Pt配合物在制備腫瘤或癌癥藥物中的應用。本發(fā)明所提供的由通式[Pt(XYZ)C]+B-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物，具有很好的受體EGFR靶向性，該含喹唑啉類配體的Pt配合物能夠靶向性地作用于受體EGFR高表達的腫瘤或癌癥細胞，從而降低Pt配合物對正常細胞的毒副作用。同時，本發(fā)明所提供的由通式[Pt(XYZ)C]+B-表示的含 喹唑啉類配體的Pt配合物還具有優(yōu)良的腫瘤或癌癥細胞的增殖抑制活性。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。附圖說明附圖是用來提供對本發(fā)明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與下面的具體實施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構成對本發(fā)明的限制。在附圖中：圖1為測試例4中吉非替尼在外加EGF下的流式細胞術定量分析結果圖。圖2為測試例4中順鉑在外加EGF下的流式細胞術定量分析結果圖。圖3為測試例4中順鉑和吉非替尼的等濃度混合物在外加EGF下的流式細胞術定量分析結果圖。圖4為測試例4中式(3-1)結構所示的化合物在外加EGF下的數(shù)據(jù)流式細胞術定量分析結果圖。圖5為測試例4中吉非替尼在不加EGF下的流式細胞術定量分析結果圖。圖6為測試例4中順鉑在不加EGF下的流式細胞術定量分析結果圖。圖7為測試例4中順鉑和吉非替尼的等濃度混合物在不加EGF下的流式細胞術定量分析結果圖。圖8為測試例4中式(3-1)結構所示的化合物在不加EGF下的數(shù)據(jù)流式細胞術定量分析結果圖。圖9為測試例4中吉非替尼的激光共聚焦熒光成像圖。圖10為測試例4中順鉑的激光共聚焦熒光成像圖。圖11為測試例4中順鉑和吉非替尼的等濃度混合物的激光共聚焦熒光成像圖。圖12為測試例4中式(3-1)結構所示的化合物的激光共聚焦熒光成像圖。具體實施方式以下對本發(fā)明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。在本發(fā)明中，如等類似的結構上的取代基R可以在環(huán)上的任意位點進行取代，還可以在環(huán)上的多個位點進行取代，且在多個位點進行取代時，各個位點的取代基R可以相同或者不同。在本發(fā)明中，本領域技術人員應當理解的是，在原子上延伸而出的虛線，例如下式(1a)中，N上和苯環(huán)上延伸而出的虛線，表示的是金屬Pt的配位點，以式(1a)為例，表示金屬Pt與式(1a)配位時，將與虛線一端的氮原子和苯環(huán)進行配位。本發(fā)明提供一種含喹唑啉類配體的Pt配合物，該Pt配合物由通式[Pt(XYZ)C]+B-表示，其中，XYZ是由下式(1a)或(1b)提供的三齒配位基：C是由下式(2)提供的單齒配位基；其中，R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'各自獨立地選自氫、C1-C3的烷基、羥基或鹵素；B-為Cl-、PF6-、[B(C6H5)4]-或BF4-；n為1-4的整數(shù)。其中，C1-C3的烷基為甲基、乙基、丙基或異丙基；鹵素可以為氟、氯、溴、碘等。優(yōu)選地，環(huán)上的R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'為單取代的。更優(yōu)選地，R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'各獨立地選自氫、甲基、乙基、丙基或異丙基。最優(yōu)選地，R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'為氫。在本發(fā)明中，n為1、2、3或4，優(yōu)選地，n為2、3或4。在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實施方式中，R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'各自獨立地選自氫、甲基、乙基、丙基或異丙基，B-為PF6-，n為2、3或4。在本發(fā)明的另一種優(yōu)選的實施方式中，R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'為氫，B-為PF6-，n為2、3或4。當R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'為氫時，所表示的化合物如下式所示：以式(2-1)表示n為2時的上述式(2)所示結構的化合物；以式(2-2)表示n為3時的上述式(2)所示結構的化合物；以式(2-3)表示n為4時的上述式(2)所示結構的化合物。更優(yōu)選地，所述通式[Pt(XYZ)C]+B-為下式中的一種：特別是從獲得高EGFR受體靶向性和高腫瘤或癌癥細胞的增殖抑制活性上考慮，所述含喹唑啉類配體的Pt配合物最為優(yōu)選為上述式(3-1)～式(3-3)所示的配合物。在本發(fā)明的一種特別優(yōu)選的實施方式中，所述含喹唑啉類配體的Pt配 合物為式(3-1)～式(3-2)所示的配合物，這樣可以獲得與順鉑差不多的腫瘤或癌癥細胞的增殖抑制活性，甚至獲得比順鉑還要好的腫瘤或癌癥細胞的增殖抑制活性。本發(fā)明提供了一種含喹唑啉類配體的Pt配合物的制備方法，該方法包括：(1)將式(1a)或(1b)所示結構的化合物與K2PtCl4進行第一配位反應，得到通式Pt(XYZ)Cl表示的Pt配合前體，(2)將通式Pt(XYZ)Cl表示的Pt配合前體與式(2)所示結構的化合物進行第二配位反應，得到通式[Pt(XYZ)C]+Cl-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物，其中，XYZ是由上式(1a)或(1b)提供的三齒配位基：C是由上式(2)提供的單齒配位基；R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'各自獨立地選自氫、C1-C3的烷基、羥基或鹵素；n為1-4的整數(shù)。根據(jù)本發(fā)明，式(1a)和(1b)所示結構的化合物可以采用市售品，也可以通過本領域常規(guī)的方法優(yōu)化后合成得到，合成獲得時，例如可以采用參 考文獻(1)Constable,E.C.；Lewis,J.；Liptrot,M.C.；Raithby,P.R.InorganicaChimicaActa1990,178,47；(2)Kui,S.C.F.；Sham,I.H.T.；Cheung,C.C.C.；Ma,C.W.；Yan,B.P.；Zhu,N.Y.；Che,C.M.；Fu,W.F.Chemistry-aEuropeanJournal,2007,13,417.中記載的方法。以式(1a-1)所示結構的化合物的制備為例來說明式(1a)所示結構的化合物的制備方法，式(1a-1)所示結構的化合物的制備方法優(yōu)選采用下述反應路線進行：以式(1b-1)所示結構的化合物的制備為例來說明式(1a)所示結構的化合物的制備方法，式(1b-1)所示結構的化合物的制備方法優(yōu)選采用下述反應路線進行：其中C5H5N表示的是吡啶；(HCHO)m表示多聚甲醛，m例如可以為3以上的整數(shù)，reflux表示回流。根據(jù)本發(fā)明，式(2)所示結構的化合物可以采用本領域常規(guī)的方法進行制備，例如CN102452988A中所記載的方法。優(yōu)選地，式(2)所示結構的化合物的制備方法采用下述反應路線進行：根據(jù)本發(fā)明，所述含喹唑啉類配體的Pt配合物的制備方法的步驟(1) 將使得式(1a)或(1b)所示結構的化合物與Pt進行配位，以得到通式Pt(XYZ)Cl表示的Pt配合前體。上述式Pt(XYZ)Cl表示的Pt配合前體為下述式中的一種：其中，當R1、R2、R3、R1'、R2'和R3'為氫時，式Pt(XYZ)Cl表示的Pt配合前體為下式中的一種：其中，優(yōu)選地，式(1a)或(1b)所示結構的化合物與K2PtCl4的摩爾用量比為1：0.8-1.3。所述第一配位反應可以采用Pt配位反應中常規(guī)采用的溶劑，例如為乙腈、水和冰醋酸中的一種或多種，優(yōu)選采用的溶劑為冰醋酸或乙腈和水的混合液(體積比為2-1:1)。對所述式(1a)或(1b)所示結構的化合物在溶劑中的濃度并沒有特別的限定，只要可以得到所述Pt配合前 體即可，例如可以為0.01-0.02mmol/mL。優(yōu)選情況下，所述第一配位反應的條件包括：溫度為80-130℃(更優(yōu)選為90-130℃)，時間為20-48h(更優(yōu)選為24-48h)。根據(jù)本發(fā)明，所述含喹唑啉類配體的Pt配合物的制備方法的步驟(2)將使得通式Pt(XYZ)Cl表示的Pt配合前體與式(2)所示結構的化合物進行配位，即可得到本發(fā)明所需要的通式[Pt(XYZ)C]+Cl-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物。其中，在步驟(2)中，本發(fā)明對所述Pt配合前體與式(2)所示結構的化合物的摩爾用量比沒有特別的限定，只要能夠獲得上述通式[Pt(XYZ)C]+Cl-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物即可，例如所述Pt配合前體與式(2)所示結構的化合物的摩爾用量比為1：0.8-1.3。所述第二配位反應可以采用的溶劑例如為甲醇。對所述Pt配合前體在該溶劑中的濃度并沒有特別的限定，只要可以得到所述通式[Pt(XYZ)C]+Cl-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物即可，例如可以為0.001-0.002mmol/mL(更優(yōu)選為0.0015-0.002mmol/mL)。優(yōu)選情況下，所述第二配位反應的條件包括：溫度為70-90℃(更優(yōu)選為75-80℃)，時間為3-6h(更優(yōu)選為4-6h)。根據(jù)本發(fā)明，為了獲得通式[Pt(XYZ)C]+PF6-、[Pt(XYZ)C]+[B(C6H5)4]-或[Pt(XYZ)C]+BF4-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物，優(yōu)選地，該方法還包括在步驟(2)所述第二配位反應后，在所述第二配位反應的產物中加入含PF6-、[B(C6H5)4]-或BF4-的鹽進行接觸反應。所述含PF6-、[B(C6H5)4]-或BF4-的鹽的摩爾用量與通式Pt(XYZ)Cl表示的Pt配合前體的摩爾用量比優(yōu)選為3-6：1(更優(yōu)選為4-6:1)。這樣的接觸反應可以是向上述第二配位反應的反應體系中直接加入含PF6-、[B(C6H5)4]-或BF4-的鹽，而不需要將通式[Pt(XYZ)C]+Cl-表示的含喹唑 啉類配體的Pt配合物提取出來，這樣可以節(jié)約步驟和成本。優(yōu)選地，所述接觸反應的條件包括：溫度為20-30℃，時間為20-40min。所述含PF6-、[B(C6H5)4]-或BF4-的鹽例如可以為六氟磷酸銨、六氟磷酸鈉、六氟磷酸鉀、四苯硼酸銨、四苯硼酸鈉、四苯硼酸鉀、四氟硼酸銨、四氟硼酸鈉和四氟硼酸鉀中的一種或多種，優(yōu)選為六氟磷酸銨。為了獲得更為純的產物，本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物的制備方法還可以包括采用乙腈對所得Pt配合物進行重結晶。本發(fā)明還提供了上述含喹唑啉類配體的Pt配合物或者上述制備方法所制得的含喹唑啉類配體的Pt配合物在制備作為EGFR抑制劑的藥物中的應用。特別是上述式(3-1)～式(3-4)所示的配合物可以作為較好的EGFR抑制劑。本發(fā)明還提供了上述含喹唑啉類配體的Pt配合物或者上述制備方法所制得的含喹唑啉類配體的Pt配合物在制備腫瘤或癌癥藥物中的應用。本發(fā)明對上述腫瘤或癌癥的類型并沒有特別的限定，通常能夠采用順鉑的地方，就可以采用本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物，但是本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物特別適用于EGFR受體含量較高的一些腫瘤或者癌癥細胞。優(yōu)選地，所述腫瘤或癌癥為肺癌、宮頸癌、表皮鱗癌、乳腺癌或前列腺癌。本發(fā)明所提供的由通式[Pt(XYZ)C]+B-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物，具有很好的受體EGFR靶向性，能夠使得所述含喹唑啉類配體的Pt配合物靶向性地作用于受體EGFR高表達的腫瘤或癌癥細胞，從而降低Pt配合物對正常細胞的毒副作用。同時，本發(fā)明所提供的由通式[Pt(XYZ)C]+B-表示的含喹唑啉類配體的Pt配合物還具有優(yōu)良的腫瘤或癌癥細胞的增殖抑制活性。特別令人意外的是，本發(fā)明所提供的某些由通式[Pt(XYZ)C]+B-表示 的含喹唑啉類配體的Pt配合物，例如式(3-1)、式(3-2)所示結構的配合物能夠達到與順鉑差不多的腫瘤或癌癥細胞的增殖抑制活性，甚至比順鉑的活性還要高，表現(xiàn)出非常優(yōu)越的藥用價值。以下將通過實施例對本發(fā)明進行詳細描述。制備例1本制備例用于說明式(1a-1)所示結構的化合物的制備。將苯乙酮(3mL,25.5mmol)、苯甲醛(2.6mL,25.5mmol)和氫氧化鈉(1.2g,30mmol)加入到50mL的水中室溫(約25℃)下攪拌反應12h。向反應混合物中加入2-乙?；拎?3mL,26.7mmol)和氫氧化鈉(9g,225mmol)，在80℃下繼續(xù)反應12h。反應停止后冷卻，置于-20℃過夜后倒出黃色油狀物，向殘留物中加入200mL乙醇和醋酸銨(18g，233.5mmol)，在80℃下回流8h后所得反應液為橘紅色澄清溶液。真空旋蒸除去乙醇，反應粗產物用硅膠柱層析分離(乙酸乙酯：石油醚體積比＝1:30)得到2.8g白色固體(產率：36％)，即為式(1a-1)所示結構的化合物。m.p.160-164℃。ESI-MS(m/z):309.2([M+H]+,C22H17N2requires309.1).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):8.75(d,J＝4.4Hz,1H),8.63(d,J＝8.0Hz,2H),8.37(d,J＝7.2Hz,2H),8.30(d,J＝1.2Hz,1H),8.05-7.98(m,3H),7.61-7.49(m,7H).13CNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δC(ppm):157.0,156.2,155.7,150.0,149.8,139.0,138.1,137.8,130.0,129.8,129.7,129.6,129.3,129.2,127.7,127.6,127.5,127.4,124.9,121.3,118.5,117.0.元素分析:calculatedforC22H16N2:C,85.69；H,5.23；N,9.08；Found:C,85.69；H,5.20；N,8.88.制備例2本制備例用于說明式(1b-1)所示結構的化合物的制備。(1)在氬氣保護下，將碘單質(8.4g,33.1mmol)溶于50mL吡啶中，將其滴加至12.6mL的2-乙?；拎ぶ?約30min加完)，然后在80℃下反應4h。冷卻過濾，濾餅用冷的吡啶洗滌，乙醇重結晶得到黃綠色的(2-吡啶基)吡啶碘鹽固體7g(產率65％)。ESI-MS(m/z):199.0(M+,[C12H11N2O]+,requires199.1).(2)將2-乙酰基萘(6g,35.3mmol)、二甲胺鹽酸鹽(3.0g,36.8mmol)、多聚甲醛(1.0g，11.1mmol，購自北京益利精細化學品有限公司，AR)和1mL濃鹽酸(濃度約36-38體積％)加到30mL乙醇中，并在90℃下回流反應5h。旋蒸除去乙醇，硅膠柱層析分離(二氯甲烷：甲醇體積比＝50:1)得到白色固體產物8.1g(產率：87％)，即3-二甲基胺-1-(2'-萘基)-丙酮鹽酸鹽。ESI-MS:m/z：228.1(M+,[C15H18NO]+requires228.1).(3)將步驟(1)所得的(2-吡啶基)吡啶碘鹽(1.8g,5.5mmol)、步驟(2)所得的3-二甲基胺-1-(2'-萘基)-丙酮鹽酸鹽(1.4g,5.3mmol)和過量的醋酸銨(10.2g,132.3mmol)加入到150mL的甲醇中，在80℃下回流12h。冷卻過濾，濾餅用水和冷的甲醇洗滌，硅膠柱層析分離(乙酸乙酯：石油醚體積比＝1:20)得到白色固體0.4g(產率28％)，即式(1b-1)所示結構的化合物。m.p.115-119℃.ESI-MS(m/z):283.2([M+H]+,C20H15N2requires283.1).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):8.80(s,1H),8.74(d,J＝4.0Hz,1H),8.68(d,J＝8.0Hz,1H),8.44(dd,J1＝J2＝1.6Hz,1H),8.39(d,J＝8.0 Hz,1H),8.22(d,J＝7.6Hz,1H),8.11-7.98(m,2H),7.52-7.49(m,1H).13CNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δC(ppm):155.8,155.8,155.6,149.8,138.9,137.8,136.3,133.8,133.6,129.2,128.8,128.1,127.3,127.0,126.5,124.9,124.8,121.3,121.2,119.7.元素分析:calculatedforC20H14N2:C,85.08；H,5.00；N,9.92；Found:C,85.19；H,5.14；N,9.75.制備例3本制備例用于說明式(2-1)所示結構的化合物的制備。(1)將4-(3'-氯-4'-氟苯氨基)-6-羥基-7-甲氧基喹唑啉(6g,18.8mmol)、無水碳酸鉀(12g,86.8mmol)和1,2-二溴乙烷(6mL,69.3mmol)加入到250mL的DMF中，在80℃下攪拌反應8h。然后冷卻到室溫(約25℃)，過濾，收集濾液，真空旋蒸除去溶劑，殘余物用乙醇重結晶，硅膠柱層析分離(乙酸乙酯：石油醚體積比＝5:2)得到白色固體3.6g(產率45％)。(2)然后將咪唑(266mg,3.9mmol)、4-叔丁基溴化銨(TBAB)(31mg,0.1mmol)和NaOH(468mg,11.7mmol)加入到50mL乙腈中，并加熱到90℃回流1h，然后加入步驟(1)所制得的白色固體(1g,2.34mmol)并繼續(xù)在90℃回流5h。冷卻到室溫(約25℃)，過濾，收集濾液，旋蒸得到黃色油狀物。向其中加入40mL的水和40mL的乙酸乙酯，超聲，靜置1h。在兩層之間出現(xiàn)淡黃色固體。過濾，濾餅分別用水和乙酸乙酯洗滌，真空干燥，得到式(2-1)所示結構的化合物：淡黃色粉末(0.6g，收率62％)。m.p.259-261℃.ESI-MS(m/z):414.2([M+H]+,C20H18ClFN5O2requires414.1).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):9.53(s,1H),8.47(s,1H),8.06(dd,J1＝4.0Hz,J2＝2.4Hz,1H),7.77(s,1H),7.74-7.71(m, 2H),7.41(t,J1＝J2＝9.2Hz,1H),7.29(s,1H),7.19(s,1H),6.91(s,1H),4.48(t,J1＝J2＝5.2Hz,2H),4.38(t,J1＝4.8Hz,J2＝5.6Hz,2H),3.93(s,3H).元素分析:calculatedforC20H17ClFN5O2:C,58.05；H,4.14；N,16.9；Found:C,58.04；H,4.20；N,16.32.制備例4本制備例用于說明式(2-2)所示結構的化合物的制備。(1)將4-(3'-氯-4'-氟苯氨基)-6-羥基-7-甲氧基喹唑啉(6g,18.8mmol)和無水碳酸鉀(12g,86.8mmol)加入到300mL的丙酮中，在72℃下回流0.5h。然后加入1,3-二溴丙烷(7.6mL,74.6mmol)繼續(xù)在72℃下回流10h。冷卻至室溫(約25℃)，減壓過濾，收集濾液，真空旋蒸除去丙酮，殘留物用乙醇重結晶，硅膠柱層析分離(乙酸乙酯：石油醚體積比＝5:2)得到白色固體3g(產率36％)。(2)然后將咪唑(258mg,3.8mmol)、4-叔丁基溴化銨(TBAB)(30mg,0.1mmol)和NaOH(454mg,11.3mmol)加入到50mL乙腈中，加熱到90℃回流1h，然后加入步驟(1)所制得的白色固體(1.0g,2.27mmol)并繼續(xù)在90℃回流5h。冷卻到室溫(約25℃)，過濾，收集濾液，旋蒸得到黃色油狀物。向其中加入40mL的水和40mL的乙酸乙酯，超聲，靜置1h。在兩層之間會出現(xiàn)淡黃色固體。過濾，濾餅分別用水和乙酸乙酯洗滌，真空干燥得到式(2-2)所示結構的化合物：淡黃色粉末(0.7g，收率72％)。m.p.201-203℃.ESI-MS(m/z):428.2([M+H]+,C21H20ClFN5O2requires428.1).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):9.51(s,1H),8.50(s,1H),8.10(dd,J1＝2.4Hz,J2＝2.8Hz,1H),7.79-7.75(m,2H),7.64(s,1H),7.43 (t,J1＝J2＝9.2Hz,1H),7.22(s,2H),6.91(s,1H),4.20(t,J1＝J2＝6.8Hz,2H),4.08(t,J1＝J2＝6.0Hz,2H),3.97(s,3H),2.33-2.27(m,2H).13CNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δC(ppm):156.5,155.0,153.2,148.5,147.6,137.8,129.1,123.9,122.7,119.8,119.3,119.2,117.0,116.8,109.2,107.9,103.5,66.2,56.4,43.4,30.6.元素分析:calculatedforC21H19ClFN5O2·H2O:C,56.57；H,4.75；N,15.71；Found:C,56.51；H,4.61；N,15.46.實施例1本實施例用于說明本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物及其制備方法。(1)將式(1a-1)所示結構的化合物(75mg,0.24mmol)和K2PtCl4(100mg,0.24mmol)加入到乙腈和水的混合物中(15ml體積比1:1)，在90℃下回流24h。冷卻過濾，濾餅用乙腈和水的混合物洗滌，二氯甲烷重結晶得到橘紅色晶體(81mg，收率為62％)，即式(5-1-1)所示結構的化合物。m.p.356-360℃.ESI-MS(m/z):502.3([M-Cl]+,C22H15N2Ptrequires502.1).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):8.87(d,J＝4.4Hz,1H),8.71(d,J＝8.0Hz,1H),8.47(d,J＝0.4Hz,1H),8.34(t,J1＝0.8Hz,J2＝J3＝1.2Hz,1H),8.29(s,1H),8.11-8.09(m,2H),7.88(t,J1＝6.0Hz,J2＝6.8Hz,1H),7.78(d,J＝6.8Hz,1H),7.60-7.59(m,3H),7.47(d,J＝7.2Hz,1H),7.14-7.05(m,2H).元素分析:calculatedforC22H15ClN2Pt·H2O:C,47.53；H,3.08；N,5.04；Found:C,47.66；H,2.80；N,5.33.(2)將式(2-1)所示結構的化合物(0.11mmol)和步驟(1)所得的式(5-1-1)所示結構的化合物(0.1mmol)加入并溶于60mL甲醇中，在80℃下回流直到溶液變澄清(約4h)。冷卻，用0.22μm濾頭過濾，向所得濾液中加入0.4mmol六氟磷酸銨，室溫(約25℃)攪拌30min。過濾，濾餅用甲醇洗滌，乙腈重結晶，真空干燥得到黃色固體(94mg，收率為89％)，即為式(3-1)所示結構的化合物。m.p.192-196℃.ESI-MS(m/z):916.3(M+,C42H32ClFN7O2Ptrequires916.2).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):9.46(s,1H),8.77(s,2H),8.54(s,1H),8.47(s,1H),8.35(t,J1＝J2＝8.0Hz,2H),8.10(d,J＝8.0Hz,2H),8.07(d,J＝4.0Hz,1H),7.88(d,J＝8.0Hz,2H),7.78-7.76(m,2H),7.61(m,4H),7.47(s,1H),7.33(t,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.21(s,1H),7.10(t,J1＝4.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),6.96(t,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),6.51(d,J＝8.0Hz,1H),4.77(s,2H),4.64(s,2H),3.85(s,3H).13CNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δC(ppm):165.7,162.8,157.0,156.4,155.3,154.9,153.4,152.8,152.3,148.9,147.9,147.7,141.4,141.1,141.0,137.2,137.2,136.2,133.0,131.2,131.0,129.6,128.8,128.2,126.4,125.2,123.4,123.2,122.3,122.2,119.3,119.1,117.7,117.2,117.0,116.8,109.1,108.2,104.1,68.2,56.5,48.0.元素分析:calculatedforC42H32ClF7N7O2PPt·H2O:C,46.74；H,3.18；N,9.08；Found:C,46.45；H,3.54；N,8.83.實施例2本實施例用于說明本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物及其制備方法。根據(jù)實施例1所述的方法，所不同的是，步驟(2)中采用的是式(2-2)所示結構的化合物(0.11mmol)代替式(2-1)所示結構的化合物進行反應，得到黃色固體(56mg，收率為52％)，即為式(3-2)所示結構的化合物。m.p.186-189℃.ESI-MS(m/z):929.2(M+,C43H34ClFN7O2Ptrequires929.2).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):9.46(s,1H),8.72(d,J＝4.0Hz,1H),8.69(s,1H),8.53(s,1H),8.48(s,1H),8.30-8.27(m,2H),8.09-8.05(m,4H),7.84(d,J＝4.0Hz,3H),7.61(s,1H),7.51(s,1H),7.40-7.36(t,J1＝J2＝8.0Hz,1H),7.17(s,1H),7.01(d,J＝4.0Hz,1H),6.94(d,J＝4.0Hz,1H),6.49(d,J＝8.0Hz,1H),4.47(s,2H),4.19(s,2H),3.91(s,3H),2.52-2.49(m,2H).13CNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δC(ppm):165.7,162.8,156.8,156.4,155.2,155.0,153.2,152.6,148.4,147.8,147.6,141.2,141.1,140.7,137.2, 137.1,136.1,133.0,131.2,131.0,130.0,129.5,128.8,128.1,126.3,125.1,125.0,123.6,122.5,122.4,119.3,119.1,117.6,117.1,117.0,116.8,109.2,108.0,104.1,66.7,56.4,45.6,29.7.元素分析:calculatedforC43H34ClF7N7O2PPt·H2O:C,47.24；H,3.32；N,8.83；Found:C,46.99；H,3.33；N,8.58.實施例3本實施例用于說明本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物及其制備方法。根據(jù)實施例1所述的方法，所不同的是步驟(1)的制備過程如下：將K2PtCl4(100mg,0.24mmol)和式(1b-1)所示結構的化合物(68mg,0.24mmol)加入到35mL冰醋酸中，在130℃下回流24h至K2PtCl4基本溶解，反應液由無色溶液變?yōu)殚冱S色渾濁。冷卻過濾，濾餅依次用水和丙酮洗滌，二氯甲烷重結晶得到黃色晶體(89mg,72％yield)，即式(5-2-1)所示結構的化合物。m.p.358-362℃.ESI-MS(m/z):476.5([M-Cl]+,C20H13N2Ptrequires476.1).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):8.96(d,J＝4.0Hz,1H),8.51(d,J＝8.0Hz,1H),8.33(t,J1＝J3＝1.2Hz,J2＝0.8Hz,1H),8.23-8.15(m,4H),7.91(t,J1＝J2＝6.4Hz,1H),7.81(t,J1＝7.2Hz,J2＝8.4Hz,2H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.44(t,J1＝6.8Hz,J2＝7.2Hz,1H),7.37(t,J1＝7.6Hz,J2＝6.8Hz,1H).元素分析:calculatedforC20H13ClN2Pt:C,46.93；H,2.56；N,5.47；Found:C,46.68；H,2.52；N,5.45.步驟(2)則是采用步驟(1)所得的式(5-2-1)所示結構的化合物代替式(5-1-1)所示結構的化合物進行反應，得到黃色固體(82mg，收率為79％)，即為式(3-3)所示結構的化合物。m.p.190-194℃.ESI-MS(m/z):889.3(M+,C40H30ClFN7O2Ptrequires889.2).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):9.50(s,1H),8.83(s,1H),8.52(d,J＝8.0Hz,1H),8.47(s,1H),8.37-8.32(m,1H),8.28(s,1H),8.24 -8.21(t,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,2H),8.07(d,J＝4.0Hz,1H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.92(s,1H),7.86(s,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,2H),7.64(t,J1＝J2＝8.0Hz,1H),7.57(s,1H),7.37-7.30(m,2H),7.23(t,J1＝J2＝8.0Hz,2H),7.16(s,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),4.83(s,2H),4.68(s,2H),3.77(s,3H).13CNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δC(ppm):164.3,162.8,156.6,156.4,154.9,254.4,253.4,148.7,148.0,147.7,146.8,141.1,137.1,137.1,135.0,134.7,131.4,129.6,129.2,128.8,127.8,127.0,126.0,125.5,124.8,123.4,123.3,122.3,122.2,121.0,119.3,119.1,117.0,116.8,109.1,108.2,104.0,68.4,56.4,48.0.元素分析:calculatedforC40H30ClF7N7O2PPt:C,46.41；H,2.92；N,9.47；Found:C,46.44；H,3.32；N,9.58.實施例4根據(jù)實施例3所述的方法，所不同的是，步驟(2)中采用的是式(2-2)所示結構的化合物(0.11mmol)代替式(2-1)所示結構的化合物進行反應，得到黃色固體(79mg，收率為72％)，即為式(3-4)所示結構的化合物。m.p.184-187℃.ESI-MS(m/z):904.2(M+,C41H32ClFN7O2Ptrequires904.2).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δH(ppm):9.41(s,1H),8.79(s,1H),8.51(d,J＝8.0Hz,1H),8.46(s,1H),8.27-8.25(m,3H),8.22-8.20(d,J＝8.0Hz,1H),8.09(d,J＝4.0Hz,1H),8.02(dd,J1＝J2＝4.0Hz,1H),7.89(d,J＝12.0Hz,2H),7.75-7.72(m,2H),7.67(t,J1＝4.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.60(s,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.32-7.29(m,2H),7.18-7.13(m,2H),6.80(s,1H),4.53(t,J1＝J2＝4.0Hz,2H),4.23(t,J1＝J2＝4.0Hz,2H),3.88(s,3H),2.56-2.53(m,2H).13CNMR(400MHz,DMSO-d6,Me4Si)δC(ppm):164.3,162.8,156.5,156.3,155.0,154.3,153.2,148.8,148.4,147.6,146.7,141.0,140.8,137.1,137.1,135.1,134.7,131.4,130.0,129.2,128.6,127.8,127.0,125.4,124.7,123.5,122.6,122.4,122.3,121.0,119.3,119.1,117.0,116.7,109.2,108.0,104.1,66.7,56.3,45.6,29.7.元素分析:calculatedforC41H32ClF7N7O2PPt:C,46.93；H,3.07；N, 9.34；Found:C,46.78；H,3.30；N,9.53.測試例1：酶聯(lián)免疫吸附實驗(EnzymeImmunosorbentAssay,ELISA)應用酶聯(lián)免疫吸附實驗(EnzymeImmunosorbentAssay,ELISA)分別測定式(3-1)-式(3-4)、式(2-1)、式(2-2)所示結構的化合物和Gefitinib(吉非替尼)的激酶抑制活性(濃度分別為40μM(微摩爾/升)、4μM、400nM(納摩爾/升)、40nM、4nM、400pM(皮摩爾/升)、40pM、4pM)。使用CST公司的蛋白激酶檢測試劑盒：PTP1B(Tyr66)BiotinylatedPeptide作為激酶EGFR(EpidermalGrowthFactorReceptor)的底物。分別加入由式(3-1)～式(3-4)、式(2-1)、式(2-2)所示結構的化合物和Gefitinib(吉非替尼)，使用SpectramaxM5(USA,MolecularDevices)型酶標儀，采用分光光度法，測定特定波長450nm處的光吸收OD值，根據(jù)下式計算化合物對細胞的抑制生長率，通過OriginPro8.0數(shù)據(jù)處理軟件由上述抑制生長率的數(shù)值得到δ曲線，考察本發(fā)明所合成的化合物的激酶抑制劑對激酶底物的磷酸化反應的抑制程度，從而得到IC50值(即對激酶底物的磷酸化抑制程度達到50％時的激酶抑制劑的濃度值)。實驗結果是三次獨立的平行實驗的平均值，變動一般為±15％。各化合物的物化性質和酶活性抑制測試結果IC50值如下表1所示。表1化合物3-13-23-33-42-12-2GefitinibIC50(nM)103.386.2101.885.457.469.694.0注：在ATP的濃度為200μM下測定的IC50值(n＝3)；在臨床上目前使用的分子靶向抗癌藥物Gefitinib(吉非替尼)，在ATP濃度為5μM測試條件下，體外EGFR抑制活性IC50為33nM(參見文獻A.E.Wakeling,S.P.Guy,J.R.Woodburn,S.E.Ashton,B.J.Curry,A.J.Barkerand K.H.Gibson,CancerRes.,2002,62,5749-5754.)；在本發(fā)明中，以吉非替尼做陽性對照，在ATP濃度為200μM的條件下，測試了目標化合物的對EGFR抑制活性。從表1測試結果中，可以看出目標化合物IC50均具有很強的EGFR抑制活性，與吉非替尼的活性相當甚至更強。活性最好的式(2-1)所示的化合物其IC50為57.4nM。式(3-1)-式(3-4)所示結構的含鉑配合物與相應的配體式(2-1)和式(2-2)相比，可以看出鉑及其引入其他配位基團對喹唑啉類的配體的EGFR抑制活性影響較小。當結構中連接喹唑啉類的配體和鉑基之間的連接碳鏈較長時，化合物的EGFR抑制活性相對較高。測試例2：對多種腫瘤細胞增殖抑制實驗1、外加EGF條件下細胞增殖抑制活性實驗分別將細胞株A549(人肺腺癌細胞株)、HeLa(人子宮頸癌細胞株)、A431(人皮膚鱗癌細胞株)和MCF-7(人乳腺癌細胞株株)培養(yǎng)于含10體積％fetalbovineserum(FBS,Hyclone,USA)的DMEM培養(yǎng)基(Gibco,USA)中。2-3天后收集處于對數(shù)生長期的細胞，接種于96孔板(A549：2000細胞/孔/100μL；HeLa：4000細胞/孔/100μL；A431：8000細胞/孔/100μL；MCF-7：4000細胞/孔/100μL；HEK293：4000細胞/孔/100μL，含100ng/mLEGF的DMEM)培養(yǎng)24h，然后分別加入梯度濃度的化合物(200、100、50、25、12.5、6.25、1μM/L)。相同體積的含有100ng/mLEGF的1體積％二甲基亞砜(Dimethylsulfoxide，DMSO)的DMEM設為實驗對照組；空白組為只有培養(yǎng)液但不加細胞。各濃度組分別設4個平行孔。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，MTT法檢測細胞的存活率。結果如表2(+EGF列)所示。2、無外加EGF條件下的細胞增值抑制活性實驗分別將細胞株A549、HeLa、A431和MCF-7培養(yǎng)于含10體積％fetalbovineserum(FBS,Hyclone,USA)的DMEM培養(yǎng)基(Gibco,USA)，上述細 胞購自北京協(xié)和醫(yī)院細胞資源中心，置于CO2恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)3-5天后用于實驗。收集處于對數(shù)生長期的細胞，接種于96孔板(A549：2000細胞/孔/100μL；HeLa：4000細胞/孔/100μL；A431：8000細胞/孔/100μL；MCF-7：4000細胞/孔/100μL；HEK293：4000細胞/孔/100μL)培養(yǎng)24h，相同體積的含1體積％二甲基亞砜(Dimethylsulfoxide，DMSO)的DMEM設為實驗對照組；結果如表2(-EGF列)所示。其中，MTT法檢測化合物細胞增值抑制活性實驗：收集處于對數(shù)生長期的細胞懸浮液，接種于96孔細胞培養(yǎng)板中(細胞個數(shù)：A549：2×104個/mL；HeLa：4×104個/mL；A431：8×104個/mL；MCF-7：4×104個/mL；HEK293：4×104個/mL)，每孔100μL，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后，分別加入梯度濃度的待測化合物(200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、1μM、0.1μM、0.01μM)，每孔200μL。所測的化合物如表2中所示，其中，還測試了吉非替尼(Gefitinib)和順鉑(Cisplatin)混合物(摩爾比為1:1)對MCF-7的抑制數(shù)據(jù)。除了順鉑外，其他所有化合物的每個濃度都含有1％DMSO。相同體積的含有1％DMSO的培養(yǎng)基或含有100ng/mLEGF的1％DMSO的培養(yǎng)基設為實驗對照組，只有培養(yǎng)液但不加細胞設為空白對照組，每個濃度做四組平行實驗。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，吸棄含藥物的培養(yǎng)基，用200μL/孔的PBS(除了HEK293細胞)洗一遍，每孔加入100μL含0.5mg/mLMTT的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)4h。在顯微鏡下觀察細胞板底部有晶體生成)，吸棄含MTT的培養(yǎng)基，每孔加入100μL的DMSO。將細胞培養(yǎng)板移至酶標儀，振蕩后在570nm測吸光度值。生長抑制率(IR)計算公式如下所示：IR％＝[1-(實驗組OD值-空白組OD值)/(對照組OD值-空白組OD值)]×100％。并采用Origin8.0軟件用抑制率和濃度做曲線擬合計算化合物的IC50值。表2注：a.表示未測定.在表2中，EGFR在A549、HeLa、A431和MCF-7細胞中都是過表達的，式(3-1)-式(3-3)所示結構的化合物對四種細胞增殖的抑制活性是非常好的，均高于它們不含EGFR抑制單元的前體化合物即式(5-1-1)、式(5-2-1)所示結構的化合物，這說明金屬鉑與EGFR抑制單元配位能夠增加它們對腫瘤細胞增殖的抑制活性。特別值得說明的是式(3-1)和式(3-2)所示結構的化合物的活性甚至比順鉑的要高。其中，在沒有EGF存在時，本發(fā)明的式(3-1)和式(3-2)所示結構的化合物對MCF-7細胞增殖的抑制活性是順鉑的約2倍以上，在有EGF的存在下，它對MCF-7細胞增殖的抑制活性是順鉑和吉非替尼等濃度混合后活性的約6倍以上，這也說明本發(fā)明 的這種多靶點的組合分子優(yōu)于單靶點的兩個分子的物理混合。推測其理由為，本發(fā)明所得到的含喹唑啉類配體的Pt配合物除了能夠通過阻斷EGFR的信號轉導來抑制腫瘤生長外，還可以通過其他的途徑抑制腫瘤細胞的生長，如通過作用于DNA，干擾DNA的合成以及復制，導致細胞凋亡等。測試例3：對正常細胞的毒性試驗1、外加EGF條件下細胞毒性實驗根據(jù)測試例2的方法，所不同的是，采用的細胞株為HEK293(正常的人胚腎細胞293)，結果如表3(+EGF列)所示。2、無外加EGF條件下的細胞毒性實驗根據(jù)測試例2的方法，所不同的是，采用的細胞株為HEK293(正常的人胚腎細胞293)，結果如表3(+EGF列)所示。表3通過表2和3的數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物對腫瘤細胞增殖的抑制活性是對正常細胞HEK293的四倍甚至更多，這也進一步證實本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物能夠通過對腫瘤細胞的高選擇性，來降低對正常細胞的毒性。測試例4：細胞凋亡活性測試(1)流式細胞術檢測將式(3-1)結構所示的化合物在DMSO中溶解至濃度為4mM，用0.22μm有機系濾頭過濾，備用。在6孔板中，接種1毫升/孔含100ng/mLEGF(或者不加EGF)的MCF-7細胞懸浮液，細胞密度為2×105個/mL，在37℃ 培養(yǎng)24h。然后加入濃度為20μM(DMSO的含量為0.5重量％)的式(3-1)結構所示的化合物至細胞培養(yǎng)皿，繼續(xù)在37℃孵育24h。將20μM(0.5％DMSO)的吉非替尼、順鉑以及二者的混合物(20μM順鉑和20μM吉非替尼等濃度混合)作陽性對照。以上化合物和對照組均同時做加100ng/mlEGF和不加EGF的兩個組別。孵育停止后，移除含藥物的培養(yǎng)基，PBS洗滌一次，胰蛋白酶消化細胞。棄去胰酶，每孔用1mL冷的PBS將細胞沖下來轉移至離心管中，離心30秒，移除上清，再次用500μL/管冷PBS洗滌后離心。每管加入500μL的結合緩沖液洗滌離心。采用AnnexinV-PE/7-AAD雙染細胞凋亡檢測方法，測試樣品經(jīng)過AnnexinV-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒處理后在流式細胞儀上進行檢測。測試樣品分為兩組：一組為加100ng/mlEGF；另一組不加EGF。每組測試樣經(jīng)不同化合物處理，即吉非替尼、順鉑、吉非替尼和順鉑等濃度混合物以及式(3-1)結構所示的化合物。各測試樣加入試劑盒染料孵育10min后，用400目細胞過濾網(wǎng)濾除非單個細胞，然后移至流式細胞儀上進行熒光輔助細胞篩選分析，收集數(shù)據(jù)，最后用FlowJo軟件對所得的數(shù)據(jù)進行定量分析，加100ng/mlEGF的結果見圖1-4所示，不加EGF的結果見圖5-8。(2)激光共聚焦熒光成像分析在共聚焦皿中接種1毫升含100ng/mLEGF的MCF-7細胞懸浮液，細胞密度為3×104個/mL，在37℃培養(yǎng)24h。然后加入20μM(0.5重量％DMSO)含100ng/mLEGF的化合物3-1，繼續(xù)在37℃孵育24h。20μM(0.5％DMSO)含100ng/mLEGF的吉非替尼和順鉑以及二者的混合物(20μM順鉑和20μM吉非替尼混合)。在37℃下孵育24h后，除去含藥物的培養(yǎng)基，PBS溶液洗滌三次。然后在避光的條件下，每個培養(yǎng)皿中加入1mL含25μg·mL-1的Hoechst33342培養(yǎng)基，在37℃孵育10min，再次用PBS溶液洗滌三次， 加入無色的基礎培養(yǎng)基DMEM。將共聚焦皿移至激光掃描共聚焦顯微鏡的樣品臺上成像。激光掃描共聚焦顯微成像的激發(fā)波長選定為405nm，發(fā)射波長425-500nm。用FV10-ASW3.1Viewer軟件打開并處理所得到的圖像，如圖9-12所示。流式細胞術的定量分析結果如圖1-8所示，圖1和圖5分別為吉非替尼在外加EGF和不加EGF下的流式細胞術定量分析結果，圖2和圖6分別為順鉑在外加EGF和不加EGF下的流式細胞術定量分析結果，圖3和圖7分別為順鉑和吉非替尼的等濃度混合物在外加EGF和不加EGF下的流式細胞術定量分析結果，圖4和圖8分別為式(3-1)結構所示的化合物在外加EGF和不加EGF下的數(shù)據(jù)流式細胞術定量分析結果。通過對比圖1-8中的左下角表示的活細胞百分比、右下角表示的早期凋亡細胞百分比、右上角表示的晚期凋亡細胞百分比以及左上角表示的壞死細胞百分比可以看出，式(3-1)結構所示的化合物相比于吉非替尼、順鉑及其混合物都更能誘導腫瘤細胞凋亡，從而更進一步證明了本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物可以表現(xiàn)出更為優(yōu)越的腫瘤細胞增殖抑制活性。激光共聚焦熒光成像的結果如圖9-12所示的，其中，圖9為吉非替尼的激光共聚焦熒光成像圖，圖10為順鉑的激光共聚焦熒光成像圖，圖11為順鉑和吉非替尼的等濃度混合物的激光共聚焦熒光成像圖，圖12為式(3-1)結構所示的化合物的激光共聚焦熒光成像圖。通過圖9-12的對比，也可以非常鮮明的看出，圖12相對于圖9-11來說，其細胞核邊緣更加不規(guī)則，染色體濃集，著色較重，細胞核固縮，核小體碎片增加，表明式(3-1)結構所示的化合物相比于吉非替尼、順鉑及其混合物具有更強的誘導腫瘤細胞凋亡能力，從而更進一步證明了本發(fā)明的含喹唑啉類配體的Pt配合物可以表現(xiàn)出更為優(yōu)越的腫瘤細胞增殖抑制活性。以上詳細描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實 施方式中的具體細節(jié)，在本發(fā)明的技術構思范圍內，可以對本發(fā)明的技術方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護范圍。另外需要說明的是，在上述具體實施方式中所描述的各個具體技術特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重復，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發(fā)明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應當視為本發(fā)明所公開的內容。當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3