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      一株豬流行性腹瀉病毒及其分離培養(yǎng)方法與流程

      文檔序號(hào):11125990閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一株野生型豬流行性腹瀉病毒(PEDV,Porcine epidemic diarrhea virus),名稱為PEDV/CH/BJ/2014,其微生物保藏編號(hào):CGMCC No.10111。

      2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒,其特征在于,病毒纖突蛋白S基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;ORF3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示;囊膜蛋白M基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示;核衣殼蛋白N基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示。

      3.權(quán)利要求1或2所述豬流行性腹瀉病毒的分離培養(yǎng)方法,其特征在于,步驟為:

      1)用含10%FBS,1%青鏈霉素的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)Vero細(xì)胞長至單層;

      2)用無菌1×PBS洗滌細(xì)胞2次,加入適量無血清DMEM;

      3)取PEDV病毒液接種于Vero細(xì)胞上,并在DMEM中添加胰酶至終濃度3~5μg/mL形成吸附液;

      4)于37℃和5%濃度CO2的條件下吸附1.5h,吸附完成后棄掉吸附液,加入含有濃度為5~10μg/mL胰蛋白酶的無血清DMEM作為維持液,于37℃,5%濃度CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

      5)連續(xù)培養(yǎng)48~72h或細(xì)胞病變達(dá)80%后,收獲細(xì)胞培養(yǎng)物置于-80℃冰箱,反復(fù)凍融3次,取適量細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行接毒傳代,重復(fù)步驟1)、2)、3)、4)。

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