本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一類新型一類A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物及其抗腫瘤作用。

背景技術(shù)：

黃酮類化合物廣泛存在于自然界中,具有多種藥理活性，具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等功效，研究表明，黃酮類化合物能抑制低氧誘導(dǎo)因子，從而降低腫瘤細胞糖酵解方面，尤其是，能抑制低氧誘導(dǎo)因子的黃酮類化合物結(jié)構(gòu)以5，7-二羥基黃酮或4’羥基黃酮為主，并且，醋酸黃酮為最早發(fā)現(xiàn)的血管阻斷劑。

大多數(shù)腫瘤血管阻斷劑是以微管蛋白的秋水仙堿結(jié)合位點為靶點，我們對這類化合物的化學結(jié)構(gòu)進行分析歸納，從CA4P，OXi4503，AVE8062，ZD2126，BNC-105，CKD-516等化合物的結(jié)構(gòu)中發(fā)現(xiàn)有共同的結(jié)構(gòu)基團為苯三甲氧基。

阿司匹林,又名乙酰水楊酸,是常用的歷史悠久的非甾體類抗炎藥,最早用于解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎;后發(fā)現(xiàn)可抑制血小板聚集而用于防治冠心病。隨著基礎(chǔ)和臨床研究的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)使用阿司匹林可減少消化道癌癥發(fā)生。研究表明，腫瘤細胞的能量主要來自糖酵解過程。乙酰水楊酸和水楊酸可抑制糖酵解途徑的3 個限速酶之一磷酸果糖激酶和乳腺癌細胞MCF-7的糖酵解水平，從而起到抗腫瘤的作用。

鑒于以上研究，我們設(shè)計新型的腫瘤微管蛋白/HIF-1α雙靶點抑制劑,擬以黃酮為母核結(jié)構(gòu)，在黃酮的A環(huán)引入三甲氧基，先合成A環(huán)三甲氧基4’-羥基黃酮，再通過酯化反應(yīng)在A環(huán)三甲氧基4’-羥基黃酮的4’-羥基位置上引入取代水楊酸，合成一系列A環(huán)三甲氧基4’-羥基黃酮取代水楊酸酯類化合物。此系列新型化合物可能同時具有抑制微管蛋白和HIF-lα的雙重作用，一藥多靶，具有低毒性和很好的抗炎、抗癌活性，為發(fā)現(xiàn)高效低毒的抗炎抗癌藥物提供研究基礎(chǔ)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于合成A環(huán)三甲氧基黃酮和A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物，得到有較強抗腫瘤、抗炎活性的化合物。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下。

圖1是A環(huán)三甲氧基黃酮化合物結(jié)構(gòu)通式圖, 式中：R₁,R₂,R₃=OCH₃或R₂,R₃,R₄=OCH₃ 。

圖2是A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物結(jié)構(gòu)通式圖，式中：R₁,R₂,R₃=OCH₃或R₂,R₃,R₄=OCH₃ ; R₅=OCH₃、CH₃、F、Cl、Br或I等。

一種制備上述A環(huán)三甲氧基黃酮化合物和A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物的方法如下。

步驟1: 在無水、無氧條件下，將3,4,5-三甲氧基苯酚、氯乙腈與無水氯化鋅(0.3g) 混合，加入氯仿-無水乙醚，用冰鹽浴冷卻，通入干燥氯化氫，2小時后將反應(yīng)瓶于冰箱中放置 1 天，再通氯化氫 2 小時，冰箱中放置 3 天，傾出乙醚，用熱水把粗提物轉(zhuǎn)到圓底燒瓶中，回流 1 小時，靜置過夜，用水重結(jié)晶得到淡黃色絮狀固體，真空干燥得到氯苯乙酮。

圖3是制備上述A環(huán)三甲氧基黃酮化合物和A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物的方法步驟1的反應(yīng)式圖。

步驟2:將化合物氯苯乙酮與對羥基苯甲醛混合，加入95%乙醇，搖勻，慢慢加入 10%NaOH，然后劇烈搖動片刻，室溫下攪拌反應(yīng) 2天，用10%HCl調(diào)pH7，再于室溫下攪拌反應(yīng) 2 天，抽濾，用 95%乙醇重結(jié)晶即得到亮黃色絮狀固體，真空干燥得到亮黃色固體，即得到上述本發(fā)明的A環(huán)三甲氧基黃酮化合物。

圖4是制備上述A環(huán)三甲氧基黃酮化合物和A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物的方法步驟2的反應(yīng)式圖。

步驟3: 將取代水楊酸溶解于蒸餾水中，37℃水浴加熱，用30%NaOH調(diào)節(jié)溶液PH為10，攪拌30min，緩慢滴加硫酸二甲酯，反應(yīng)片刻溶液PH變?yōu)?，再用30%NaOH調(diào)節(jié)溶液PH為10，反應(yīng)1h后，緩慢滴加硫酸二甲酯，反應(yīng)片刻溶液PH變?yōu)?，再用30%NaOH調(diào)節(jié)溶液PH為10，反應(yīng)1h，在80℃水浴條件下水解15min，冷卻至室溫，用10%HCl調(diào)節(jié)pH為5，有沉淀生成，蒸餾水洗滌沉淀，將沉淀真空干燥；將干燥后的沉淀溶于二氯甲烷，加入DMF和氯化亞砜，40℃油浴加熱回流0.5h，減壓蒸除二氯甲烷和氯化亞砜，用10mL丙酮溶解，加入A環(huán)三甲氧基4’-羥基黃酮化合物，滴加三乙胺，反應(yīng)3h，抽濾，回收丙酮，用硅膠柱柱層析純化，洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4，真空干燥得到淡黃色或黃色固體，得到上述本發(fā)明的A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物。

圖5是制備上述A環(huán)三甲氧基黃酮化合物和A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物的方法步驟3的反應(yīng)式圖。

實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的新型A環(huán)三甲氧基黃酮化合物和A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物，具有良好的抗腫瘤活性，大部分化合物的抗腫瘤活性優(yōu)于白楊素，個別活性優(yōu)秀的化合物抗腫瘤活性超過5-氟尿嘧啶，因此本發(fā)明化合物可以用于制備抗腫瘤藥物。

本發(fā)明化合物的藥理活性使其可以用于制備抗腫瘤藥物。該藥物組合物可以是固體形式或是液體形式。

具體實施方式

通過以下實施例進一步詳細說明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實施例的任何限制。

實施例1：5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮。

圖6是5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮的結(jié)構(gòu)式圖。

在無水、無氧條件下，將3,4,5-三甲氧基苯酚 (2.208g, 0.012mol)、氯乙腈(1.5mL, 0.024mol)與無水氯化鋅(0.3g) 混合，加入氯仿-無水乙醚（1:1）50m L，用冰鹽浴冷卻，通入干燥氯化氫，2小時后將反應(yīng)瓶于冰箱中放置 1 天，再通氯化氫 2 小時，冰箱中放置 3 天，傾出乙醚，用熱水把粗提物轉(zhuǎn)到圓底燒瓶中，回流 1 小時，靜置過夜，用水重結(jié)晶，用水重結(jié)晶得到淡黃色絮狀固體，真空干燥得到淡黃色固體，即得到化合物 2'-羥基-4',5',6'-三甲氧基-2-氯苯乙酮 1。將2'-羥基-4',5',6'-三甲氧基-2-氯苯乙酮 ( 10mmol)與對羥基苯甲醛 (11mmol) 混合，加入95%乙醇，搖勻，慢慢加入 10%NaOH，然后劇烈搖動片刻，室溫下攪拌反應(yīng) 2天，用10%HCl調(diào)p H7，再于室溫下攪拌反應(yīng) 2 天，抽濾，用 95%乙醇重結(jié)晶即得到亮黃色絮狀固體，真空干燥后得到此目標化合物。亮黃色固體0.75g，收率34%。M.P.:172~175°C. ¹H NMR (400 MHz, cdcl₃) δ7.79-7.75(d,2H),6.91-6.86(d,2H),6.73(s,1H), 6.53(s,1H), 4.24(s,3H), 3.96(s,3H),3.81(s,3H)。

實施例2：4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-甲氧基苯甲酸酯。

圖7是4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-甲氧基苯甲酸酯結(jié)構(gòu)式圖。

將水楊酸（5mmol）溶解于15mL蒸餾水中，37℃水浴加熱，用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，攪拌30min，緩慢滴加2 mL硫酸二甲酯，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h后，再次緩慢滴加硫酸二甲酯1 mL，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h，在80℃水浴條件下水解15 min，TLC監(jiān)測反應(yīng)進程（展開劑為乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4），冷卻至室溫，用10% HCl調(diào)節(jié)pH為5，有白色沉淀生成，蒸餾水洗滌沉淀，將沉淀真空干燥；將干燥后的沉淀溶于10mL二氯甲烷，加入兩滴DMF和0.5mL氯化亞砜，40℃油浴加熱回流0.5 h，減壓蒸除二氯甲烷和氯化亞砜，用10mL丙酮溶解，加入實施例1得到的5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮80mg，逐滴加入1mL三乙胺，反應(yīng)3 h，抽濾，回收丙酮，硅膠柱柱層析純化，洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4，得到化合物4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-甲氧基苯甲酸酯。淡黃色粉末，產(chǎn)率為56%。M.P.:172~175°C.¹HNMR(400MHz,cdcl₃)δ8.03-8.00(d,1H),7.93-7.89(d,1H),7.59-7.53(t,1H), 7.31-7.27(d,2H), 7.07-7.02(t,2H),6.76(s,1H), 6.55(s,1H), 4.25(s,3H),3.98(s,3H),3.94(s,3H),3.81(s,3H)。

實施例3：4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2,3,5-三氯-6-甲氧基苯甲酸酯。

圖8是4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2,3,5-三氯-6-甲氧基苯甲酸酯結(jié)構(gòu)式圖。

將3,5,6-三氯水楊酸（5mmol）溶解于15mL蒸餾水中，37℃水浴加熱，用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，攪拌30min，緩慢滴加2 mL硫酸二甲酯，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h后，再次緩慢滴加硫酸二甲酯1 mL，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h，在80℃水浴條件下水解15 min，TLC監(jiān)測反應(yīng)進程（展開劑為乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4），冷卻至室溫，用10% HCl調(diào)節(jié)pH為5，有白色沉淀生成，蒸餾水洗滌沉淀，將沉淀真空干燥；將干燥后的沉淀溶于10mL二氯甲烷，加入兩滴DMF和0.5mL氯化亞砜，40℃油浴加熱回流0.5 h，減壓蒸除二氯甲烷和氯化亞砜，用10mL丙酮溶解，加入實施例1得到的5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮80mg，逐滴加入1mL三乙胺，反應(yīng)3 h，抽濾，回收丙酮，硅膠柱柱層析純化，洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4，得到化合物4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2,3,5-三氯-6-甲氧基苯甲酸酯。黃綠色粉末，產(chǎn)率為39%。M.P.:172~175°C.¹HNMR(400MHz,cdcl₃)δ7.96-7.91(d,1H),7.61(s,1H),7.36-7.30(d,2H),6.76(s,1H), 6.54(s,1H), 4.25(s,3H),4.00-3.95(d,6H),3.81(s,3H)。

實施例4：4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基4-氯-2-甲氧基苯甲酸酯。

圖9是4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基4-氯-2-甲氧基苯甲酸酯結(jié)構(gòu)式圖。

將4-氯水楊酸（5mmol）溶解于15mL蒸餾水中，37℃水浴加熱，用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，攪拌30min，緩慢滴加2 mL硫酸二甲酯，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h后，再次緩慢滴加硫酸二甲酯1 mL，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h，在80℃水浴條件下水解15 min，TLC監(jiān)測反應(yīng)進程（展開劑為乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4），冷卻至室溫，用10% HCl調(diào)節(jié)pH為5，有白色沉淀生成，蒸餾水洗滌沉淀，將沉淀真空干燥；將干燥后的沉淀溶于10mL二氯甲烷，加入兩滴DMF和0.5mL氯化亞砜，40℃油浴加熱回流0.5 h，減壓蒸除二氯甲烷和氯化亞砜，用10mL丙酮溶解，加入實施例1得到的5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮80mg，逐滴加入1mL三乙胺，反應(yīng)3 h，抽濾，回收丙酮，硅膠柱柱層析純化，洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4，得到化合物4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基4-氯-2-甲氧基苯甲酸酯。淡黃色粉末，產(chǎn)率為47%。M.P.:172~175°C.1HNMR(400MHz,cdcl3)δ8.02-7.99 (d,1H), 7.92-7.87(d,1H),7.31-7.27(d,2H), 7.06-7.02(t,2H), 6.75(s,1H),6.53(s,1H),4.24(s,3H),3.98(s,3H), 3.94 (s,3H), 3.81(s,3H)。

實施例5：4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基5-氯-2-甲氧基苯甲酸酯。

圖10是4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基5-氯-2-甲氧基苯甲酸酯結(jié)構(gòu)式圖。

將5-氯水楊酸（5mmol）溶解于15mL蒸餾水中，37℃水浴加熱，用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，攪拌30min，緩慢滴加2 mL硫酸二甲酯，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h后，再次緩慢滴加硫酸二甲酯1 mL，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h，在80℃水浴條件下水解15 min，TLC監(jiān)測反應(yīng)進程（展開劑為乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4），冷卻至室溫，用10% HCl調(diào)節(jié)pH為5，有白色沉淀生成，蒸餾水洗滌沉淀，將沉淀真空干燥；將干燥后的沉淀溶于10mL二氯甲烷，加入兩滴DMF和0.5mL氯化亞砜，40℃油浴加熱回流0.5 h，減壓蒸除二氯甲烷和氯化亞砜，用10mL丙酮溶解，加入實施例1得到的5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮80mg，逐滴加入1mL三乙胺，反應(yīng)3 h，抽濾，回收丙酮，硅膠柱柱層析純化，洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4，得到化合物4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基5-氯-2-甲氧基苯甲酸酯。淡黃色粉末，產(chǎn)率為41%。M.P.:172~175°C.1HNMR(400MHz,cdcl3)δ8.12-8.09(d,1H), 7.93-7.89(d,2H),7.65-7.61(t,2H), 7.29-7.25(t,2H), 6.95-6.91(d,1H),6.76(s,1H),6.55(s,1H),4.25(s,3H),3.98(s,3H),3.94(s,3H), 3.81(s,3H)。

實施例6：4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-甲氧基-4-甲基苯甲酸酯。

圖11是4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-甲氧基-4-甲基苯甲酸酯結(jié)構(gòu)式圖。

將4-甲基水楊酸（5mmol）溶解于15mL蒸餾水中，37℃水浴加熱，用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，攪拌30min，緩慢滴加2 mL硫酸二甲酯，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h后，再次緩慢滴加硫酸二甲酯1 mL，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h，在80℃水浴條件下水解15 min，TLC監(jiān)測反應(yīng)進程（展開劑為乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4），冷卻至室溫，用10% HCl調(diào)節(jié)pH為5，有白灰色沉淀生成，50℃蒸餾水洗滌沉淀，將沉淀真空干燥；將干燥后的沉淀溶于10mL二氯甲烷，加入兩滴DMF和0.5mL氯化亞砜，40℃油浴加熱回流0.5 h，減壓蒸除二氯甲烷和氯化亞砜，用10mL丙酮溶解，加入實施例1得到的5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮80mg，逐滴加入1mL三乙胺，反應(yīng)3 h，抽濾，回收丙酮，硅膠柱柱層析純化，洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4，得到化合物4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-甲氧基-4-甲基苯甲酸酯。淡黃色粉末，產(chǎn)率為47%。M.P.:172~175°C.1HNMR(400MHz,cdcl3)δ8.00-7.96(d,1H), 7.91-7.87(d,1H),7.31-7.27(d,2H), 7.07-7.02(t,2H), 6.76(s,1H),6.55(s,1H),4.25(s,3H),3.98(s,3H),3.94(s,3H),3.81(s,3H),2.57(s,3H)。

實施例7：4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-甲氧基-5-溴苯甲酸酯。

圖12是4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-甲氧基-5-溴苯甲酸酯結(jié)構(gòu)式圖。

將5-溴水楊酸（5mmol）溶解于15mL蒸餾水中，37℃水浴加熱，用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，攪拌30min，緩慢滴加2 mL硫酸二甲酯，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h后，再次緩慢滴加硫酸二甲酯1 mL，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h，在80℃水浴條件下水解15 min，TLC監(jiān)測反應(yīng)進程（展開劑為乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4），冷卻至室溫，用10% HCl調(diào)節(jié)pH為5，有白色沉淀生成，蒸餾水洗滌沉淀，將沉淀真空干燥；將干燥后的沉淀溶于10mL二氯甲烷，加入兩滴DMF和0.5mL氯化亞砜，40℃油浴加熱回流0.5 h，減壓蒸除二氯甲烷和氯化亞砜，用10mL丙酮溶解，加入實施例1得到的5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮80mg，逐滴加入1mL三乙胺，反應(yīng)3 h，抽濾，回收丙酮，硅膠柱柱層析純化，洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4，得到化合物4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-甲氧基-5-溴苯甲酸酯。黃色粉末，產(chǎn)率為50%。M.P.:172~175°C.1HNMR(400MHz,cdcl3)δ8.12-8.09(d,1H), 7.93-7.89(d,2H),7.65-7.61(t,2H), 7.29-7.25(t,2H), 6.95-6.91(d,1H),6.76(s,1H),6.55(s,1H),4.25(s,3H),3.98(s,3H),3.94(s,3H),3.81(s,3H)。

實施例8：4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基3,5-二溴-2-甲氧基苯甲酸酯。

圖13是4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基3,5-二溴-2-甲氧基苯甲酸酯結(jié)構(gòu)式圖。

將3,5-二溴水楊酸（5mmol）溶解于15mL蒸餾水中，37℃水浴加熱，用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，攪拌30min，緩慢滴加2 mL硫酸二甲酯，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h后，再次緩慢滴加硫酸二甲酯1 mL，反應(yīng)至溶液pH變?yōu)?，再用30% NaOH調(diào)節(jié)溶液pH為10，反應(yīng)1 h，在80℃水浴條件下水解15 min，TLC監(jiān)測反應(yīng)進程（展開劑為乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4），冷卻至室溫，用10% HCl調(diào)節(jié)pH為5，有白色沉淀生成，蒸餾水洗滌沉淀，將沉淀真空干燥；將干燥后的沉淀溶于10mL二氯甲烷，加入兩滴DMF和0.5mL氯化亞砜，40℃油浴加熱回流0.5 h，減壓蒸除二氯甲烷和氯化亞砜，用10mL丙酮溶解，加入實施例1得到的5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮80mg，逐滴加入1mL三乙胺，反應(yīng)3 h，抽濾，回收丙酮，硅膠柱柱層析純化，洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4，得到化合物4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基3,5-二溴-2-甲氧基苯甲酸酯。淡黃色粉末，產(chǎn)率為43%。M.P.:172~175°C.1HNMR(400MHz,cdcl3)δ8.12-8.09(d,1H), 7.93-7.89(d,2H),7.65-7.62(t,2H), 7.30-7.26(t,2H), 6.95-6.92(d,1H),6.54(s,1H),4.25(s,3H),3.98(s,3H),3.94(s,3H),3.81(s,3H)。

實施例9：4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-乙酰氧基苯甲酸酯。

圖14是4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-乙酰氧基苯甲酸酯結(jié)構(gòu)式圖。

將乙酰水楊酸（5mmol）溶解于10mL二氯甲烷，加入兩滴DMF和0.5mL氯化亞砜，40℃油浴加熱回流0.5 h，減壓蒸除二氯甲烷和氯化亞砜，用10mL丙酮溶解，加入實施例1得到的5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮80mg，逐滴加入1mL三乙胺，反應(yīng)3 h，抽濾，回收丙酮，硅膠柱柱層析純化，洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=1:1~1:4，得到化合物4-（5,6,7-三甲氧基-4-氧代-4H-色烯-2-基）苯基2-乙酰氧基苯甲酸酯。淡黃色粉末，產(chǎn)率為37%。M.P.:172~175°C.1HNMR(400MHz,cdcl3)δ8.05-8.01(d,1H), 7.92-7.87(d,2H),7.60-7.53(t,1H), 7.32-7.27(t,2H),7.08-7.03(d,1H),6.76(s,1H),6.55(s,1H),4.25(s,3H), 3.98(s,3H), 3.94(s,3H),3.81(s,3H)。

實施例10：本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性試驗。

對本發(fā)明的化合物進行腫瘤細胞增殖抑制試驗，試驗方法采用常規(guī)的MTT法。

細胞株選用MGC-803(人胃癌細胞)、HepG2(人肝癌細胞)和MCF-7（人乳腺癌細胞）。培養(yǎng)液為DMEM+15％ NBS+ 雙抗。

樣品液配制：用DMSO(Merck) 溶解后，加入PBS(-) 配成1mmol/mL 的溶液或均勻的混懸液，然后用DMSO的PBS(-) 稀釋，最終濃度分別為384μmol/L、192μmol/L、96μmol/L、48μmol/L、24μmol/L、12μmol/L、6μmol/L、3μmol/L。

將上市的抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶以同樣的條件配成對照品溶液。

96 孔板每孔加入濃度為3×10⁴ 個/mL 的細胞懸液100μL，即8000個細胞/ 孔，置37℃、5％ CO₂ 培養(yǎng)箱內(nèi)。48小時后，分別加入樣品液和對照品液，10μL/ 孔，37℃作用48小時。每孔加入5mg/mL 的MTT(3-(4，5- 二甲基噻唑-2- 基)-2，5- 二苯基四唑翁溴化物)溶液20μL，作用4 小時后加入溶解液DMSO，100μL/ 孔，置培養(yǎng)箱內(nèi)，次日用MK-2 全自動酶標儀測570nm OD 值。計算半數(shù)抑制濃度IC₅₀。

試驗結(jié)果詳見圖14，其中，化合物是指相應(yīng)實施例中制備的A環(huán)三甲氧基黃酮化合物和A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物，如化合物a表示在實施例1 中所得到的5,6,7-三甲氧基-4’-羥基黃酮化合物，同理類推。

圖15是A環(huán)三甲氧基4’-羥基黃酮和A環(huán)三甲氧基4’-羥基黃酮取代水楊酸酯類化合物對腫瘤細胞MGC-803、HepG2和MCF-7的的半數(shù)抑制濃度IC₅₀ ( 單位：μmol/L) 表格。

以上實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，A環(huán)三甲氧基黃酮化合物和A環(huán)三甲氧基黃酮取代水楊酸酯類化合物在體外對MGC-803(人胃癌細胞)、HepG2(人肝癌細胞)和MCF-7（人乳腺癌細胞）細胞均顯示出一定程度的抑制活性。其中化合物c、d、f、g對MGC-803細胞的生長具有較好的抑制作用，活性強于陽性對照藥物5-氟尿嘧啶?；衔颿、f對HepG2細胞的生長具有較好的抑制作用，活性強于陽性對照藥物5-氟尿嘧啶。化合物c對MCF-7細胞的生長具有較好的抑制作用，活性強于陽性對照藥物5-氟尿嘧啶。