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      人胎盤亞全能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的方法及其應(yīng)用與流程

      文檔序號:12056313閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種人胎盤亞全能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的方法,其特征在于,包括如下步驟:將人胎盤亞全能干細(xì)胞以5000細(xì)胞/孔接種于含有干細(xì)胞培養(yǎng)液的24孔板中,待細(xì)胞貼壁后,將干細(xì)胞培養(yǎng)液去除,再加入心肌細(xì)胞培養(yǎng)液,培養(yǎng)28天,每3天換液。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述人胎盤亞全能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的方法,其特征在于,干細(xì)胞培養(yǎng)液包括:DMEM培養(yǎng)基、羥乙基淀粉、人血清白蛋白、碳酸氫鉀、二乙胺四乙酸鈉鹽、亞硒酸鈉、轉(zhuǎn)鐵蛋白、透明質(zhì)酸、牛磺酸、胎盤生長因子、成纖維細(xì)胞因子、谷胱甘肽、硫辛酸、黃芪多糖、黨參多糖、大棗多糖。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述人胎盤亞全能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的方法,其特征在于,干細(xì)胞培養(yǎng)液中,羥乙基淀粉的濃度為3~3.5g/L,人血清白蛋白的濃度為1.8~2.3g/L,碳酸氫鉀的濃度為0.5~0.6g/L,二乙胺四乙酸鈉鹽的濃度為0.3~0.6μg/L,亞硒酸鈉的濃度為0.2~0.5μg/L,轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度為50~100mg/L,透明質(zhì)酸的濃度為2~5μg/L,?;撬岬臐舛葹?~8μg/L,胎盤生長因子的濃度為10~20μg/L,成纖維細(xì)胞因子的濃度為10~20μg/L,谷胱甘肽的濃度為50~80mg/L,硫辛酸的濃度為15~25mg/L,黃芪多糖的濃度為20~40mg/L,黨參多糖的濃度為30~60mg/L,大棗多糖的濃度為40~80mg/L。

      4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述人胎盤亞全能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的方法,其特征在于,心肌細(xì)胞培養(yǎng)液包括:RPMI-1640培養(yǎng)基,海藻糖,?;撬?,成纖維生長因子,內(nèi)皮細(xì)胞生長因子,碳酸氫鉀,氨基酸螯合硒,谷氨酰胺,黃體酮,輔酶I,硫辛酸,丹酚酸B,黃精多糖,人參皂苷。

      5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述人胎盤亞全能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的方法,其特征在于,心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中,海藻糖的濃度為2.5~3.5g/L,牛磺酸的濃度為1~1.2g/L,成纖維生長因子的濃度為25~40mg/L,內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的濃度為20~30μg/L,碳酸氫鉀的濃度為0.8~1.3g/L,氨基酸螯合硒的濃度為1~2μg/L,谷氨酰胺的濃度為50~80mg/L,黃體酮的濃度為10~20mg/L,輔酶I的濃度為60~120μg/L,硫辛酸的濃度為15~25mg/L,維生素的濃度為50~100mg/L,丹酚酸B的濃度為20~40mg/L,黃精多糖的濃度為15~30mg/L,人參皂苷的濃度為30~50mg/L。

      6.一種心肌細(xì)胞,其特征在于,采用如權(quán)利要求1-5任一項所述人胎盤亞全能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的方法制得。

      7.一種如權(quán)利要求6所述心肌細(xì)胞用于制備預(yù)防或治療心肌細(xì)胞功能障礙疾病的藥物組合物。

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