本發(fā)明涉及藥物輔料領域，具體而言，本發(fā)明涉及一種自組裝蛋白及其制備方法和用途，該自組裝蛋白具有與胰高血糖樣素肽-1(GLP-1)形成復合物的能力，能夠增加藥物對生物體內降解因素的穩(wěn)定性，使GLP-1能夠口服吸收。

背景技術：

生物技術藥物(特別是核酸分子、蛋白質、多肽)作為藥物的研究取得了快速發(fā)展，在2009年的一份調查報告中，324種生物技術藥物(包括臨床試驗或者正在接受管理部門審查的藥物)幾乎覆蓋了150種疾病，包括癌癥、自身免疫性疾病以及艾滋病等傳染病。但是核酸分子、蛋白質和多肽也存在突出的問題，如給藥系統(tǒng)的不完善，穩(wěn)定性差，在體內半衰期短，生物利用率低等。通過修飾來優(yōu)化生物藥物的代謝動力學特性，以延長其半衰期是經常采用的方法，而修改過程中一些生物藥物會部分或全部失活。所以，尋找一種簡便的、穩(wěn)定的藥物載體將具有重要的意義。

技術實現要素：

本發(fā)明涉及使用具有特殊理化性質的多肽與其他極性藥物形成復合物，能夠有效提高藥物在血液中的半衰期及穩(wěn)定性。

本發(fā)明的一個目的是針對GLP-1在體內存留時間較短，提供了一種能與GLP-1形成復合物的自組裝蛋白，以增加GLP-1對生物體內降解因素的穩(wěn)定性，達到口服GLP-1藥物用于治療2型糖尿病目的。

本發(fā)明的另一個目的是提供了包括所述自組裝蛋白的載劑，及其在制備藥物組合物中的應用。

本發(fā)明的另一個目的是提供了自組裝蛋白與極性藥物形成的復合物與藥學上可接受的輔料(包括：載體材料、賦形劑、穩(wěn)定劑或稀釋劑等等)形成的藥物組合物及其制備方法。

結合本發(fā)明的目的對本發(fā)明逐一加以描述：

一種用以形成藥物復合物的自組裝蛋白，其特征在于，所述自組裝蛋白具有SEQ ID NO 1氨基酸殘基序列，其通式為：QQCTTGQLQCCESTSTANDPATSELLGLIGVVISDVDALVGLTCSPISVIGVGSGSAC TANPVCCDSSPIGGLVSIGCVPVNV SEQ ID NO 1

序列1中的自組裝蛋白的特點為人工發(fā)酵制備的83個氨基酸的蛋白，并且此蛋白具有自組裝功能。

作為本發(fā)明的進一步方案，所述自組裝蛋白與可接受鹽、酯、醚、酰胺或其混合物形成藥物復合物，用以制備藥物載體。

本發(fā)明所述的藥物組合物可以采用本領域公知的一般技術制備。

作為本發(fā)明的進一步方案，自組裝蛋白與其他藥物的分子摩爾比為10:1到1:100；優(yōu)選地，所述摩爾比為10:1～1:50。

在本發(fā)明的一個實施方案中，將自組裝蛋白能與其他藥物制成不同比例的復合物，以摩爾計算，從25:1到1:50，不同的比例得到的復合物具有不同的釋放特性。按照摩爾比例，稱取適量的藥物，溶于適量的生理鹽水、純水、PBS緩沖液、或含一定比例(20％以下)的有機溶劑的上述溶液中，稱取適量的自組裝蛋白，溶于適量的不同pH值的磷酸緩沖液中，在0－5℃溫度下，超聲混合1－15分鐘，或者攪拌1－3小時，或者放置過夜，溶液可以直接加輔料做成制劑，也可以冷凍干燥后再與其他輔料一起制成制劑。

作為本發(fā)明的進一步方案，所述藥物組合物的劑型為凍干粉。

作為本發(fā)明的進一步方案，提供了劑型為凍干粉的藥物組合物的制備方法，其包括步驟：

1)取GLP-1和自組裝蛋白溶液適量，加入水溶性填充劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調節(jié)劑等，加入注射用水適量，調節(jié)pH值至3或7使其溶解，加水稀釋至適當濃度，加入0.1-0.5％活性炭，在0－10℃下攪拌10-20分鐘，除去活性炭，采用微孔濾膜過濾除菌，濾液進行分裝，采用冷凍干燥法，制得白色疏松塊狀物，封口即得。

與現有技術相比，本發(fā)明的積極效果是：

本發(fā)明的載劑能延長藥物在體內的濃度持續(xù)時間，保證GLP-1分子的口服穩(wěn)定性；

附圖說明

圖1表示實施例2中GLP-1與自組裝蛋白組合后具有口服降糖功能。

具體實施方式

下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。實施例僅為解釋性的內容，決不意味著它以任何方式限制本發(fā)明的范圍。

實施例1GLP-1多肽與自組裝蛋白的復合物

稱取90mg自組裝蛋白凍干粉溶于溶于1ml pH 3.0的磷酸緩沖液中，然后稱取0.3mg的GLP-1凍干粉，加入上述自組裝蛋白的溶液中，充分混勻后，在4℃溫度下，攪拌3小時，冷凍干燥得到復合物固體粉末。

實施例2GLP-1多肽與自組裝蛋白的復合物

稱取90mg自組裝蛋白凍干粉溶于溶于1ml pH 7.0的磷酸緩沖液中，然后稱取6mg的GLP-1凍干粉，加入上述自組裝蛋白的溶液中，充分混勻后，在4℃溫度下，攪拌3小時，冷凍干燥得到復合物固體粉末。

實施例3藥物組合物的制備

將加泊洛沙姆0.05g，甘露醇0.2g、乳糖0.1g、注射用水3ml置于10ml的容器中，攪拌使溶解，加1mol/L的枸櫞酸或氫氧化鈉調節(jié)pH至3.0，冷卻致5℃，取實施例3方法制備的復合物溶液5ml加入其中，繼續(xù)調補pH至3.0，加水至10ml。加入10mg活性碳，在5℃下攪拌20分鐘，過濾除去活性炭，采用微孔濾膜(Millipore,Inc)過濾除菌，濾液按每支0.2ml進行分裝，預凍2小時后，冷凍下減壓干燥12小時,至樣品溫度到5℃后，再干燥2小時，制得白色疏松塊狀物，封口即得復合物的藥物組合物，置于預充式的注射器中，規(guī)格為100ug/支，4℃以下保存。

實施例4自組裝蛋白與GLP-1組合物的體內半衰期實驗

本實施例使用SD大鼠5組，每組10只，其得自上海SLAC動物中心。

將大鼠血清與自組裝蛋白—GLP-1的復合物(折合GLP-1為1000μg/kg，GLP-1與自組裝蛋白的摩爾比例分別為10：1,1:1,1:10及1:25,分別于孵育后0.5、1、3、6、9、12、24、36、48、72及96小時后采用酶聯免疫吸附方法(ELISA)檢測大鼠血清中GLP-1的濃度，操作如下：血清與100mM的醋酸銨在室溫賦予10分鐘后，用GLP-1EIA試劑盒(Phoenix Pharmaceuticals,INC)對鼠血漿中的GLP-1的濃度進行測定。試驗方法參照公司說明書進行GLP-1濃度測定,并根據結果評價GLP-1穩(wěn)定性。

GLP-1及其復合物的體內藥代動力學結果見表1，結果顯示本發(fā)明的GLP-1復合物在體內的半衰期較單獨的GLP-1明顯延長，具有長效特性。

表1GLP-1及其復合物在大鼠體內的半衰期

實施例6自組裝蛋白與GLP-1復合物的口服降血糖實驗

取自組裝蛋白與GLP-1的復合物(摩爾比1：1和1：10)的樣品，口服給藥SD大鼠。大鼠每天口服葡萄糖(2g/kg)，在單次口服給藥后每日測定血糖水平，結果見圖1。

對于本領域技術人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性的實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內的所有變化囊括在本發(fā)明內。