本發(fā)明涉及生物飼料
技術領域：
，具體涉及一種副干酪乳桿菌、制劑及其在豬飼料中的應用。
背景技術：
：在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，母豬承擔著繁殖仔豬和哺乳仔豬的重要任務，利用年限長，發(fā)揮作用大。但規(guī)?；i場的母豬，常常出現(xiàn)便秘、食欲下降、產(chǎn)仔性能差、泌乳量少、仔豬成活率低等問題，嚴重影響?zhàn)B殖場的生產(chǎn)成績和經(jīng)濟效益。乳酸菌具有調(diào)控動物腸道微生態(tài)平衡、促進營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收和促進機體健康的作用，合理飼用，可望提高母豬的綜合生產(chǎn)能力。副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)是乳酸桿菌屬(lactobacillus)中的種群之一，常應用于乳制品、保健食品、飲料、冰淇淋等生產(chǎn)。近幾年，農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄(2013)》允許副干酪乳桿菌應用于動物養(yǎng)殖，推動了在飼料養(yǎng)殖方面的應用。然而，有關副干酪乳桿菌制劑、及其制備方法及在飼料養(yǎng)殖中的先進技術比較少，公開號為cn103070287a的專利申請“副干酪乳桿菌發(fā)酵飼料及其制備方法、發(fā)酵設備和用途”，公開了副干酪乳桿菌液體發(fā)酵和副干酪乳桿菌固體發(fā)酵步驟，發(fā)酵飼料可減少斷奶仔豬腹瀉率、提高豬生長速度、改善飼料轉(zhuǎn)化利用效率；公開號為cn103039699b的專利申請“一種混合菌發(fā)酵飼料及其制備和應用方法”，公開了采用副干酪乳桿菌cicc20296、枯草芽孢桿菌accc10619和釀酒酵母cicc32236，分別進行液體發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液按體積比1:1:1混合后，再進行固體發(fā)酵培養(yǎng)，按一定比例添加到斷奶仔豬飼料中，提高了斷奶仔豬生產(chǎn)性能。以上專利中涉及的副干酪乳桿菌主要用于發(fā)酵飼料的制備，其制備過程需要有發(fā)酵設備，發(fā)酵過程耗費的時間較長，生產(chǎn)操作較為繁瑣，目前尚未有涉及副干酪乳桿菌的凍干制劑制備方法，也沒有涉及到質(zhì)量穩(wěn)定的凍干制劑直接按比例添加于飼料中且能提高母豬繁殖性能的方法。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的在于針對生產(chǎn)實踐中的實際問題和需求，開發(fā)研制出一種新型的副干酪乳桿菌，該副干酪乳桿菌具有較強的耐酸、耐膽鹽和抑制有害細菌等特性。本發(fā)明的另一個目的在于提供由該副干酪乳桿菌制備得到的副干酪乳桿菌制劑及其制備方法。本發(fā)明的又一個目的在于提供所述副干酪乳桿菌按比例直接添加到豬飼料中的應用。為實現(xiàn)本發(fā)明第一個目的提供一種副干酪乳桿菌菌株，從健康仔豬中篩選出一株性能優(yōu)良的副干酪乳桿菌菌株，將該副干酪乳桿菌菌株于2015年10月22日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101)進行保藏，菌株名稱為副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019，保藏編號為：cgmccno.11532。所述副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019(cgmccno.11532)為革蘭氏陽性桿菌，單個或成對排列，無芽孢。在mrs平板培養(yǎng)基上菌落為乳白色不透明，圓形，隆起，邊緣整齊。本發(fā)明提供的副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019(cgmccno.11532)除具有上述生長特征之外，還具有耐酸、耐膽鹽和抑菌特性，具體如下:1)所述副干酪乳桿菌在ph＝2的環(huán)境中作用2小時的存活率為97.58％，4小時的存活率為76.22％，在ph為3和4的酸性環(huán)境中作用2小時的存活率達99％以上，4小時的存活率達85％以上。2)所述副干酪乳桿菌在0.1％和0.2％的膽鹽環(huán)境中，37℃孵育3h，存活率分別為82.25％和56.08％。3)所述副干酪乳桿菌對3種豬常見致病菌，如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等有較強的抑制作用，抑菌圈直徑在17～27mm。本發(fā)明的第二個目的提供一種豬源副干酪乳桿菌制劑，所述制劑含有副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019，保藏號為：cgmccno.11532。其中，優(yōu)選地，所述副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019的活菌數(shù)可為1×1011cfu/g及以上。如上所述的豬源副干酪乳桿菌制劑，可作為一種飼料添加劑使用。本發(fā)明還提供所述副干酪乳桿菌制劑的制備方法，其為在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵副干酪乳桿菌zlp019，將所述發(fā)酵液進行離心、乳化凍干，制備成的凍干粉為副干酪乳桿菌制劑。優(yōu)選地，所述的制備方法可具體包括如下步驟：(1)發(fā)酵培養(yǎng)：以1％的接種量將所述副干酪乳桿菌zlp019接種于mrs液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)16～24小時，如此活化2代后得到種子培養(yǎng)物；將種子培養(yǎng)物以1％的接種量接種于裝有液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，設定溫度37℃、轉(zhuǎn)速100rpm，維持恒定ph5.5，當發(fā)酵至14小時時開始補料，加入補料液，之后每隔2小時進行一次，共補料5次；當發(fā)酵液ph不再降低時，終止發(fā)酵，得到發(fā)酵液；(2)發(fā)酵液離心：將上述得到的發(fā)酵液離心，得到菌泥；(3)乳化凍干：將步驟(2)得到的菌泥與1/3所述發(fā)酵液體積的凍干保護劑混合，高剪切分散乳化機乳化后，分裝于冷凍盤中，厚度1.5～2.5cm，預凍3小時，設置真空冷凍干燥機冷凝溫度-50℃、真空度10pa，凍干24小時后，即得含副干酪乳桿菌的凍干制劑。優(yōu)選地，所述液體培養(yǎng)基由如下濃度的物質(zhì)組成：葡萄糖30g/l，蛋白胨10g/l，牛肉膏10g/l，乙酸鈉5g/l，酵母浸粉10g/l，k2hpo4·3h2o2g/l，檸檬酸氫二銨2g/l，mgso4·7h2o0.5g/l，mnso40.2g/l，吐溫-801ml/l，ph6.5，121℃滅菌15min備用。所述補料液為葡萄糖溶液，濃度為300g/l。優(yōu)選地，所述凍干保護劑為含有質(zhì)量百分比濃度分別為14％的脫脂乳、8％的海藻糖、5％的糊精、1.5％的l-半胱氨酸、1％的谷氨酸鈉、0.5％的羧甲基纖維素鈉，其余為水。本發(fā)明還提供了上述制備的豬源副干酪乳桿菌制劑作為添加劑在飼料中的應用。優(yōu)選地，應用于豬飼料中，更優(yōu)選地，用于妊娠后期和哺乳階段母豬的飼料中。進一步，所述應用為在基礎日糧中添加副干酪乳桿菌zlp019制劑，所述副干酪乳桿菌zlp019在每千克母豬全價料中的活菌數(shù)為2×109cfu。本發(fā)明還提供了一種凍干保護劑，其含有質(zhì)量百分比濃度分別為14％的脫脂乳、8％的海藻糖、5％的糊精、1.5％的l-半胱氨酸、1％的谷氨酸鈉、0.5％的羧甲基纖維素鈉、70％的水。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明的副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019，cgmccno.11532，具有良好的耐酸、耐膽鹽和抑菌特性。由該菌制成的凍干制劑，可以直接作為添加劑添加到妊娠后期和哺乳階段的母豬飼料中，副干酪乳桿菌zlp019在哺乳母豬全價飼料中的活菌數(shù)為2×109cfu/kg，哺乳母豬平均日采食量提高4.48％，便秘率降低8.51個百分點；哺乳仔豬平均日增重提高8.90％，斷奶成活率提高8.65個百分點，腹瀉率降低31.92個百分點；母豬糞便中有害細菌，如大腸桿菌數(shù)、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的活菌數(shù)顯著減少。由此可見，副干酪乳桿菌zlp019飼喂妊娠后期和哺乳階段的母豬，能夠提高母豬的繁殖性能，提高哺乳仔豬的日增重和斷奶成活率，還可減少糞便中有害細菌排放，有利于養(yǎng)殖環(huán)境友好。附圖說明圖1為副干酪乳桿菌zlp019的菌落形態(tài)。圖2為副干酪乳桿菌zlp019的16srrna基因進化樹圖譜。圖3為副干酪乳桿菌zlp019的phes基因進化樹圖譜。圖4為副干酪乳桿菌zlp019的生長曲線。具體實施方式下面結(jié)合實施例詳細介紹本發(fā)明，應理解，本發(fā)明要求保護的范圍不受所述具體實施方案的限制，本發(fā)明提供的具體實施例僅作為進一步說明本發(fā)明的例子，本領域技術人員參照本案說明書的描述對本發(fā)明的具體實施方式進行修改或者對部分技術特征進行等同替換，這些無需創(chuàng)造性勞動的改進和替換也應落入本發(fā)明所附權利要求書的保護范圍之內(nèi)。若未特別說明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規(guī)技術手段。實施例1副干酪乳桿菌的分離篩選與鑒定選擇健康保育豬宰殺，無菌操作取出腸道、刮取腸粘膜，與無菌生理鹽水混勻，十倍稀釋至10-5、10-6、10-7，各取0.1ml涂布于mrs平板培養(yǎng)基上，厭氧罐法37℃培養(yǎng)24～48小時。從中挑取乳白色菌落進行初步篩選，凡是革蘭氏染色陽性、h2o2酶試驗陰性、接觸酶陰性的菌株可初步確定為乳酸菌，將初篩得到的菌株進行耐酸耐膽鹽、抑菌等特性分析試驗，最終篩選出一株性能優(yōu)良的乳酸菌菌株zlp019，送至中國普通微生物菌種保藏中心(cgmcc)進行鑒定，經(jīng)細胞形態(tài)學特征、生理生化特性、16srrna序列和phes基因序列等試驗數(shù)據(jù)綜合分析表明，該菌鑒定為lactobacillusparacasei。zlp019為革蘭氏陽性桿菌，單個或成對排列，無芽孢。其在mrs平板培養(yǎng)基上的菌落特征如附圖1所示，為乳白色不透明，圓形，隆起，邊緣整齊。該菌生理生化特性的鑒定結(jié)果見表1，16srrna基因序列如seqidno.1所示，phes基因序列如seqidno.2所示。通過對該菌的16srrna基因進行進化樹分析，其進化樹圖譜如圖2所示；對該菌的phes基因進行進化樹分析，其進化樹圖譜如圖3所示。上述結(jié)果表明，本發(fā)明提供的副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019不同于現(xiàn)有副干酪乳桿菌，為新菌株。表1副干酪乳桿菌zlp019的生理生化特征實驗項目結(jié)果實驗項目結(jié)果實驗項目結(jié)果甘油-肌醇-菊糖+赤蘚醇-甘露醇+松三糖+d-阿拉伯糖-山梨醇+棉子糖-l-阿拉伯糖-α-甲基-d-甘露糖甙-2-酮基-葡萄糖酸鹽-d-核糖+α-甲基-d-葡萄糖甙-β-甲基-木糖甙-d-木糖-n-甲酰-葡糖胺+木糖醇-l-木糖-苦杏仁甙+阿東醇-糖原-熊果甙+d-松二糖+d-半乳糖+七葉靈+d-來蘇糖-d-葡萄糖+纖維二糖+d-塔格糖+d-果糖+麥芽糖+d-巖藻糖-d-甘露糖+乳糖-l-巖藻糖-l-山梨糖-蜜二糖-d-阿拉伯糖醇-l-鼠李糖-蔗糖+l-阿拉伯糖醇-衛(wèi)矛醇+海藻糖+淀粉-注：:“+”，呈陽性；“-”，呈陰性。將該副干酪乳桿菌菌株于2015年10月22日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101)進行保藏，菌株名稱為副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019，保藏編號為cgmccno.11532。其中，mrs固體培養(yǎng)基配方：蛋白胨1g，牛肉膏1g，酵母膏0.5g，檸檬酸氫二胺0.2g，葡萄糖2g，k2hp040.2g，乙酸鈉0.2g，吐溫-800.1ml，硫酸鎂0.058g，硫酸錳0.02g，瓊脂2g，水100m1，ph6-6.5，121℃高壓滅菌15min。實施例2副干酪乳桿菌的特性研究1、副干酪乳桿菌的生長曲線將活化的實施例1獲得的副干酪乳桿菌以1％的接種量接入mrs液體培養(yǎng)基，采用全自動微生物生長曲線分析儀檢測od600值，繪制生長曲線，其結(jié)果如圖2所示，其中橫坐標為培養(yǎng)時間，單位為小時，縱坐標為吸光度od600值。實驗結(jié)果表明，副干酪乳桿菌在mrs培養(yǎng)基中生長迅速，在4h左右進入對數(shù)期，11h左右進入穩(wěn)定期。2、耐酸性能測定將活化的副干酪乳桿菌按1％接種量分別接入到ph為2、3和4的mrs液體培養(yǎng)基中，分別37℃保溫2、4和6h，以0h為對照，測定活菌數(shù)，計算存活率，結(jié)果見表2。表2副干酪乳桿菌耐酸性能(％)結(jié)果說明，此副干酪乳桿菌在ph＝2的酸性環(huán)境中作用2h的存活率為97.58％，4小時的存活率為76.22％；在ph為3和4的酸性環(huán)境中作用2小時的存活率均達到99％以上，作用4小時的存活率均達到85％以上。說明該副干酪乳桿菌具有很強的耐酸性，能夠很好的耐受動物的胃酸環(huán)境。2、耐膽鹽性能測定將活化的副干酪乳桿菌按1％接種量分別接入到含有0.1％、0.2％和0.3％豬膽鹽的mrs液體培養(yǎng)基中，37℃保溫3、6h，以0h的活菌數(shù)為對照，計算存活率，結(jié)果見表3。表3副干酪乳桿菌耐膽鹽性能測定(％)結(jié)果說明，此菌在0.1％膽鹽環(huán)境中作用3h，其存活率為82.25％；在0.2％膽鹽的環(huán)境中作用3h，其存活率為56.08％；在0.3％的膽鹽濃度下作用3h，其存活率僅為10.47％。說明該副干酪乳桿菌對于0.1％的膽鹽具有較高的耐受性。3、抑菌試驗采用牛津杯法，檢測副干酪乳桿菌發(fā)酵液對3種常見的豬致病菌的抑菌效果，結(jié)果見表4。表4副干酪乳桿菌抑菌試驗由結(jié)果可以看出，該乳酸菌對這3種有害細菌：大腸桿菌(c838901，可購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所)、霍亂沙門氏菌(c78-4，可購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所)、金黃色葡萄球菌(c56023，可購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所)具有較強的抑制作用，抑菌圈直徑達到17～27mm。4、藥敏試驗對副干酪乳桿菌進行了26種抗生素(oxoid藥敏紙片)的藥敏試驗，結(jié)果見表5。表5副干酪乳桿菌藥敏試驗注：s為敏感；i為中度敏感；r為耐藥。由表5可以看出，該菌對氨芐西林、四環(huán)素、阿莫西林、阿奇霉素、多粘菌素e、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松、恩諾沙星、阿米卡星、慶大霉素、克林霉素、利福平、氟苯尼考、氯霉素等敏感，對氧氟沙星中度敏感，對新諾明、紅霉素、桿菌肽、頭孢氨芐、頭孢唑肟、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、卡那霉素、鏈霉素、制霉菌素等抗生素有耐藥性。實施例3副干酪乳桿菌制劑的制備1、副干酪乳桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)將實施例1得到的副干酪乳桿菌(lactobacillusparacasei)zlp019(保藏號：cgmccno.11532)以1％的接種量接種于mrs液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)16～24小時，如此活化2代后得到種子培養(yǎng)物；將種子培養(yǎng)物以1％的接種量接種于裝有30l液體培養(yǎng)基的50l發(fā)酵罐中，設定溫度37℃、轉(zhuǎn)速100rpm，維持恒定ph5.5，當發(fā)酵至14小時時開始補料，向發(fā)酵罐中一次加入200ml補料液，之后每隔2小時進行一次補料，共補料5次；當發(fā)酵液ph不再降低時，終止發(fā)酵。其中，液體培養(yǎng)基組成為：葡萄糖30g/l，蛋白胨10g/l，牛肉膏10g/l，乙酸鈉5g/l，酵母浸粉10g/l，k2hpo4·3h2o2g/l，檸檬酸氫二銨2g/l，mgso4·7h2o0.5g/l，mnso40.2g/l，吐溫-801ml/l，ph6.5，121℃滅菌15min備用。所述補料液為葡萄糖溶液，濃度為300g/l，115℃滅菌15min備用。2、發(fā)酵液離心將所述步驟1得到的發(fā)酵液在19000rpm條件下以管式離心機分離菌體，得到菌泥；3、凍干制劑的制備將菌泥與1/3發(fā)酵液體積的凍干保護劑混合，采用高剪切分散乳化機3000r/min乳化30min后進行凍干，即得副干酪乳桿菌凍干制劑。其中，凍干條件為將乳化后的菌懸液分裝于冷凍盤中，厚度1.5～2.5cm，預凍3小時，設置冷凝溫度-50℃、真空度10pa，凍干時間24小時。其中，凍干保護劑由如下質(zhì)量百分比濃度的物質(zhì)組成：脫脂乳14％、海藻糖8％、糊精5％、l-半胱氨酸1.5％、谷氨酸鈉1％、羧甲基纖維素鈉0.5％，其余為水。用此配方，副干酪乳桿菌的凍干保護率可達88.20％。其中，凍干保護率計算公式為：凍干保護率(％)＝(凍干后菌粉活菌數(shù)×凍干后菌粉重量)/(凍干前菌懸液活菌數(shù)×凍干前菌懸液體積)×100。取制備好的副干酪乳桿菌凍干制劑，用無菌生理鹽水進行梯度稀釋后，采用mrs平板培養(yǎng)基培養(yǎng)測活菌數(shù)，測得凍干粉中副干酪乳桿菌的活菌數(shù)為1.20×1011cfu/g。4、副干酪乳桿菌凍干制劑貯存穩(wěn)定性測定將上述制備的副干酪乳桿菌凍干制劑用鋁箔袋真空包裝，-18℃保存1個月、6個月、12個月后，取菌粉用無菌生理鹽水進行梯度稀釋后，采用mrs平板培養(yǎng)基測活菌數(shù)。由表6可知，副干酪乳桿菌凍干制劑低溫保存12個月后，活菌存活率仍可達到83.66％，制劑質(zhì)量穩(wěn)定。表6副干酪乳桿菌凍干制劑貯存性能測定實施例4副干酪乳桿菌制劑在母豬生產(chǎn)中的應用1、試驗動物與分組選用健康、胎次相近、妊娠85天的長大二元母豬100頭，隨機分成對照組和試驗組2個組，每組50個重復，每個重復1頭母豬。對照組正常飼喂，試驗組在飼喂基礎日糧基礎上添加豬源副干酪乳桿菌凍干制劑(全價料的活菌終濃度為2×109cfu/kg)。其中，母豬的基礎日糧參照《豬飼養(yǎng)標準》(2004)配制，具體營養(yǎng)成分實測值見表7。母豬飼養(yǎng)于同一棟圈舍，飼養(yǎng)管理和免疫程序等按豬場統(tǒng)一制度執(zhí)行。試驗時間為母豬妊娠第85天開始，至哺乳仔豬28日齡斷奶為止。表7基礎日糧營養(yǎng)成分實測值(％)3、試驗管理試驗期間，每日觀察豬群生長情況，記錄飼料消耗和母豬產(chǎn)仔、窩重、腹瀉等；試驗結(jié)束后，每組采取10份母豬新鮮糞樣，測定糞中乳酸菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等的活菌數(shù)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用spss18.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，結(jié)果以平均值±標準差表示。4、結(jié)果與分析4.1豬源副干酪乳桿菌制劑對母豬繁殖性能的試驗結(jié)果見表8。表8豬源副干酪乳桿菌制劑對母豬繁殖性能的影響注：同肩標注不同代表差異顯著，小寫字母不同表示差異顯著(p<0.05)。與對照組相比，試驗組仔豬出生個體重提高了7.01％(p<0.05)，斷奶個體重提高了8.33％(p<0.05)，斷奶成活率提高了8.65個百分點(p<0.05)，哺乳仔豬日增重提高了8.90％(p<0.05)，哺乳母豬日采食量提高了4.48％(p<0.05)，哺乳仔豬腹瀉率降低了31.92個百分點，哺乳母豬便秘率降低了8.51個百分點。由此可見，豬源副干酪乳桿菌制劑飼喂妊娠后期和哺乳階段的母豬，能夠提高母豬繁殖性能，促進仔豬健康和成活率提高。4.2豬源副干酪乳桿菌制劑對哺乳母豬糞便微生物的影響結(jié)果9。表9豬源副干酪乳桿菌制劑對哺乳母豬糞便微生物的影響注：同肩標注不同代表差異顯著，小寫字母不同表示差異顯著(p<0.05)。由表9可知，與對照組相比，試驗組母豬糞便中乳酸菌數(shù)顯著提高(p<0.05)，大腸桿菌數(shù)和沙門氏菌數(shù)顯著減少(p<0.05)。由此可見，豬源副干酪乳桿菌制劑飼喂母豬，能夠降低糞便中的有害細菌，對腸道健康和養(yǎng)殖環(huán)境改善有積極作用。綜上，本副干酪乳桿菌制劑飼喂妊娠后期和哺乳階段的母豬，能夠提高母豬的繁殖性能，提高哺乳仔豬的日增重和斷奶成活率，促進母豬腸道健康，減少糞便中的有害菌排放，有利于養(yǎng)殖環(huán)境友好。sequencelisting<110>北京市農(nóng)林科學院<120>一種副干酪乳桿菌、制劑及其在豬飼料中的應用<130><160>2<170>patentinversion3.5<210>1<211>1401<212>dna<213>副干酪乳桿菌（lactobacillusparacasei）zlp019的16srrna基因片段<400>1ttgatgatcggtgcttgcaccgagattcaacatggaacgagtggcggacgggtgagtaac60acgtgggtaacctgcccttaagtgggggataacatttggaaacagatgctaataccgcat120agatccaagaaccgcatggttcttggctgaaagatggcgtaagctatcgcttttggatgg180acccgcggcgtattagctagttggtgaggtaatggctcaccaaggcgatgatacgtagcc240gaactgagaggttgatcggccacattgggactgagacacggcccaaactcctacgggagg300cagcagtagggaatcttccacaatggacgcaagtctgatggagcaacgccgcgtgagtga360agaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttggagaagaatggtcggcagagtaactgt420tgtcggcgtgacggtatccaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggt480aatacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggcggttt540tttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagcgcatcggaaactgggaaac600ttgagtgcagaagaggacagtggaactccatgtgtagcggtgaaatgcgtagatatatgg660aagaacaccagtggcgaaggcggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagca720tgggtagcgaacaggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgaatgctaggt780gttggagggtttccgcccttcagtgccgcagctaacgcattaagcattccgcctggggag840tacgaccgcaaggttgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcat900gtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatctttttgatcacc960tgagagatcaggtttccccttcgggggcaaaatgacaggtggtgcatggttgtcgtcagc1020tcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatgactagttgcc1080cagcatttagttgggcactctagtaagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggat1140gacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggatggtac1200aacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatctcttaaagccattctcagttcggactg1260taggctgcaactcgcctacacgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgc1320ggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgagagtttgtaacac1380ccgaagccggtggcgtaaccc1401<210>2<211>394<212>dna<213>phes基因序列<400>2caagtccaatgcaggcgcggacaatggaaaagcacgactttaccaaaggaccgctgaaaa60tgattagccctggggtggtttatcgacgtgatgacgacgatgctactcatagccatcagt120ttcaccagatggaaggactcgtcattgacaagcatataaccatggctgatctaaagggaa180ccttgttggccatgtgccaacacgtgtttggtaaagatcggacaattcgcttgcggccaa240gttattttccatttacggagccatccgttgaagttgatgtttcctgttttcgttgcggcg300gtaaaggttgcccggtttgcaaatataccggttggattgaagtgttaggtgccggcatgg360tgcatcccaatgtgctacgggcagcgaacattga394當前第1頁12