一種副干酪乳桿菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物新資源及微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及一種副干酪乳桿菌及 其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 益生菌的菌株必須是公認(rèn)來源安全的微生物，無致病性；具有一定的耐酸和膽鹽 的性能，同時具有一定的粘附性，并且能在人的胃腸道存活一段時間；能夠?qū)λ拗鳟a(chǎn)生一種 或多種益生功效等。開發(fā)高活性益生菌菌株及其相關(guān)產(chǎn)品，是食品工業(yè)界的研究熱點之一。
[0003] 研究表明，益生菌在發(fā)酵過程中通過其胞外蛋白酶、膚酶（簇膚酶、氨膚酶）的水 解作用，將食物蛋白如乳蛋白中具有降壓活性的膚片段即ACE抑制膚釋放出來，從而具有 降血壓活性。同時某些益生菌也可W催化心谷氨酸脫簇產(chǎn)生丫-氨基下酸，從而達(dá)到降血 壓的目的。此外，某些益生菌的細(xì)胞壁成分也有降血壓活性。
[0004] 氧化作用對于許多生命體來說是必需的，但伴隨著氧化作用也會產(chǎn)生一些對機(jī)體 有害的物質(zhì)，運(yùn)些物質(zhì)與機(jī)體的衰老和疾病的產(chǎn)生有著密切的聯(lián)系。許多研究表明，益生菌 可W通過產(chǎn)生超氧化物歧化酶、谷脫甘膚過氧化物酶來清除徑基自由基和過氧化氨，并且 某些乳酸菌的無細(xì)胞提取物具有清除脂質(zhì)過氧化物的能力。因此，利用益生菌的抗氧化活 性來生產(chǎn)對人們有益的延緩氧化的產(chǎn)品具有很大意義。 陽〇化]生物防腐劑，一般來源于植物、動物及微生物，與化學(xué)防腐劑相比，具有天然、高 效、無毒或低毒等特點，并且不會破壞食品的原有風(fēng)味。乳酸菌被公認(rèn)為安全的食品級微生 物，并且由于它能產(chǎn)生乳酸、過氧化氨、雙乙酷、細(xì)菌素等代謝物質(zhì)或因營養(yǎng)競爭機(jī)制等而 具有抑菌作用，所W常用于生物保鮮。因此，利用菌株的抑菌活性來使食品保鮮和預(yù)防腐敗 是非常綠色安全的辦法。
[0006] 血清膽固醇水平偏高是引發(fā)屯、血管疾病的主要危險因素。大量的實驗表明，許多 不同種類的乳酸菌具有降低膽固醇的功效。積極開發(fā)具有降膽固醇活性的菌株并將其運(yùn)用 到工業(yè)化生產(chǎn)，對于人類健康來說頗具意義。
[0007] 本發(fā)明針對上述問題，成功從開菲爾粒中分離得到一株副干酪乳桿菌H9,實驗表 明，該菌株具有一定的胃腸耐受性和粘附性，并在抑菌、降膽固醇、降血壓和抗氧化等方面 均有功效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種副干酪乳桿菌（Xactobacillusparacasei)H9。
[0009] 本發(fā)明的目的也在于提供副干酪乳桿菌及其活性成分的應(yīng)用。
[0010] 所述副干酪乳桿菌菌株為H9,分類命名為Lactobacillusparacasei，在中國普通 微生物菌種保藏管理中屯、的保藏號為CGMCC No.4780。 W11]所述副干酪乳桿菌的16SrDNA基因序列如SEQIDNo. 1所示。
[0012]所述副干酪乳桿菌的生物學(xué)特性為：菌株在MRS瓊脂培養(yǎng)基上37°C培養(yǎng)4她，菌株 生長良好，菌落為乳白色圓形，菌落直徑為0. 5~1. 0mm，菌落邊緣整齊、有凸起；菌株革蘭 氏染色呈陽性，顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)多為短桿狀，且傾向于成鏈，無鞭毛，不運(yùn)動。
[0013] 所述副干酪乳桿菌能夠產(chǎn)生胞外黏多糖。
[0014] 所述的副干酪乳桿菌及其自產(chǎn)的胞外黏多糖在抗氧化方面的應(yīng)用。
[0015] 所述的副干酪乳桿菌及其自產(chǎn)的胞外黏多糖在易氧化食品、保健品、發(fā)酵飲料、寵 物食品中提高其抗氧化作用的應(yīng)用。
[0016] 所述副干酪乳桿菌在作為益生菌方面的應(yīng)用。
[0017] 所述副干酪乳桿菌單獨或與其他益生菌株復(fù)合在制備益生菌膠囊、益生菌菌片、 益生菌沖劑、益生菌發(fā)酵制品方面的應(yīng)用。
[0018] 所述的其他益生菌株為保加利亞乳桿菌、嗜熱乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿 菌中的一種及一種W上
[0019] 所述益生菌發(fā)酵制品為益生菌酸奶及其飲料、益生菌豆奶及其飲料。
[0020] 所述副干酪乳桿菌在抑菌作用方面的應(yīng)用。
[0021] 所述副干酪乳桿菌在制備生物保鮮劑、天然食品防腐劑和飼料添加劑中的應(yīng)用。
[0022] 所述的副干酪乳桿菌的綜合應(yīng)用為，將所述副干酪乳桿菌的抑菌、抗氧化活性和 作為益生菌中的兩種或兩種W上在食品、藥物組合物、保健品、發(fā)酵劑、發(fā)酵飲料、動物飼 料、寵物食品中的應(yīng)用。
[0023] 本發(fā)明的有益效果為：獲得的副干酪乳桿菌（Xactobacillusparacasei)H9為一 株新的副干酪乳桿菌。該副干酪乳桿菌化actobacillusparacasei)H9表現(xiàn)出良好的產(chǎn)黏 多糖的能力，而黏多糖被認(rèn)為具有抗癌功能，并增加酸奶的粘稠度；對大腸桿菌、沙口氏菌 和金黃色葡萄球菌能進(jìn)行有效抑制；具有良好的熱穩(wěn)定性、降膽固醇活性、降血壓活性和抗 氧化活性。
[0024] 生物材料保藏說明
[00巧]分類命名：畐[J干酪乳桿菌（Xactobacillusparacasei);菌株編號：H9 [00%] 保藏機(jī)構(gòu)：中國普通微生物菌種保藏管理中屯、
[0027] 保藏機(jī)構(gòu)簡稱：CGMCC
[0028] 地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號
[0029] 保藏日期：2011年4月26日
[0030] 保藏中屯、登記入冊編號：CGMCCNO. 4780。
【附圖說明】
[0031] 圖1.副干酪乳桿菌（Xactobacillusparacasei)H9的顯微鏡圖。
[0032] 圖2.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0033] 圖3.H9菌株對不同膽鹽濃度腸液的耐受性曲線圖。
[0034] 圖4.不同解育時間對H9菌株黏附化CO-2細(xì)胞數(shù)量的影響柱狀圖。
[0035] 圖5.膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0036] 圖6.不同時間下副干酪乳桿菌H9對膽固醇降解率的曲線圖。
[0037] 圖7.膚濃度與ACE抑制率關(guān)系曲線圖。
[00測圖8.不同濃度下，副干酪乳桿菌冊自產(chǎn)的胞外黏多糖清除DPPH自由基能力曲線 圖。
[0039] 圖9.副干酪乳桿菌H9和ATCC4356菌株清除DPPH自由基能力柱狀圖。其中，A:H9 菌株菌懸液，B:H9菌株無細(xì)胞提取液，C:ATCC4356菌懸液，D:ATCC4356無細(xì)胞提取液，E: 煮沸5min后的H9菌株菌懸液，F(xiàn):煮沸5min后的ATCC4356菌株菌懸液；圖中柱狀圖上方 不同字母表示組間有顯著性差異（P<〇. 05)。
[0040] 圖10.副干酪乳桿菌H9和ATCC4356菌株抑制脂質(zhì)過氧化能力柱狀圖。其中，A:H9 菌株菌懸液，B:H9菌株無細(xì)胞提取液，C:ATCC4356菌懸液，D:ATCC4356無細(xì)胞提取液，E: 煮沸5min后的H9菌株菌懸液，F(xiàn):煮沸5min后的ATCC4356菌株菌懸液；圖中柱狀圖上方 不同字母表示組間有顯著性差異（P<〇. 05)。
【具體實施方式】
[0041]W下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0042] 實施例1:副干酪乳桿菌（Xactobacillusparacasei)H9的分離與菌株鑒定。1、 開菲爾粒的活化 陽0創(chuàng)W 10% (w/v)的全脂滅菌乳為培養(yǎng)基，接入5% (w/v)的開菲爾粒，在30°C下靜置 培養(yǎng)1化后，把開菲爾粒從發(fā)酵液中過濾出來，再接入新鮮的全脂滅菌乳中。如此重復(fù)培養(yǎng) 兩到Ξ次。
[0044] 2、產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的分離和篩選
[0045] 分別稱取活化好的Ξ株開菲爾粒約1. Og，采用常規(guī)梯度稀釋涂布分離，用MRS培 養(yǎng)基（含那他霉素）在37°C培養(yǎng)4她。觀察平板上的菌落，挑取形態(tài)較好并且典型的單菌 落，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢，將得到的革蘭氏陽性菌株進(jìn)行斜面保存；分別挑取一環(huán)保存的 革蘭氏陽性菌接入5血滅菌脫脂乳中，30°C下靜置培養(yǎng)，凝乳后再將其接入95血滅菌乳 中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，觀察凝乳時間和發(fā)酵乳的狀態(tài)和氣味，得到典型菌株；通過形態(tài)學(xué)和16S rDNA序列分析鑒定，發(fā)現(xiàn)該菌株為為副干酪乳桿菌，屬于乳桿菌屬，命名為H9。H9菌株的 16SrDNA序列長度為1535kp，全長序列如SEQID NO.1所示。
[0046] 實施例2 :副干酪乳桿菌（Xactobacillusparacasei)H9產(chǎn)胞外黏多糖能力的測 定
[0047] 1、胞外黏多糖的提取分離 W48] 在20血的發(fā)酵乳中加入10血2 % (w/v)的氯化鋼溶液，混合均勻。用高速冷凍離 屯、機(jī)離屯、，離屯、條件為：離屯、力15, 000Xg，溫度4°C，時間20min;取上清液，向上清液中加 入15% (m/v)的Ξ氯乙酸，靜置lOmin左右離屯、，離屯、條件為：離屯、力2