本發(fā)明涉及乳酸菌、乳酸菌組合物、乳酸菌的制造方法、乳酸菌的耐酸性提高方法、乳酸菌的篩選方法及發(fā)酵乳的制造方法，更詳細(xì)而言，涉及提供乳酸菌及含有其的乳酸菌組合物、乳酸菌的制造方法、乳酸菌的耐酸性提高方法、乳酸菌的篩選方法以及使用這些乳酸菌和/或乳酸菌組合物的發(fā)酵乳的制造方法。

背景技術(shù)：

1、乳酸菌是自古以來被用于制造酸奶等發(fā)酵乳、泡菜等發(fā)酵食品的微生物，近年來，作為給宿主帶來基于消化道內(nèi)菌群調(diào)節(jié)的整腸效果、免疫功能改善效果及抗腫瘤效果之類的各種有益效果的益生菌而備受關(guān)注。

2、但是，現(xiàn)有的乳酸菌通常耐酸性差，例如經(jīng)口攝取的乳酸菌的腸道內(nèi)存活率會由于胃酸、膽汁酸之類的酸而降低，因此存在如下問題：乳酸菌不能在腸道內(nèi)充分發(fā)揮上述作為益生菌的本來所具有的效果。因此，以往進(jìn)行了一些以提高乳酸菌的耐酸性為目的的研究。例如，日本特開2005-160號公報(bào)(專利文獻(xiàn)1)記載了通過破壞包括乳酸菌在內(nèi)的微生物的hrca基因來提高微生物在人及動物體內(nèi)的存活性的方法。另外，例如日本特開2001-204468號公報(bào)(專利文獻(xiàn)2)記載了以得到酸性條件下乳酸生產(chǎn)率也高的微生物為目標(biāo)的包含重組載體的耐酸性產(chǎn)乳酸微生物，所述重組載體整合有來自屬于雙歧桿菌屬或乳桿菌屬的微生物的乳酸脫氫酶基因及啟動子。

3、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

4、專利文獻(xiàn)

5、專利文獻(xiàn)1：日本特開2005-160號公報(bào)

6、專利文獻(xiàn)2：日本特開2001-204468號公報(bào)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明要解決的問題

2、但是，關(guān)于與乳酸菌的耐酸性有關(guān)的因子，報(bào)道的數(shù)量并不充分。因此，例如作為乳酸菌是否具有優(yōu)異的耐酸性的試驗(yàn)，以往會進(jìn)行人工胃液耐受性試驗(yàn)(in?vitro)、利用動物進(jìn)行消化道通過性試驗(yàn)，但是這些方法也具有難以一次性對大量的乳酸菌種進(jìn)行試驗(yàn)的問題。因此，期望對與乳酸菌的耐酸性有關(guān)的因子進(jìn)行進(jìn)一步研究。

3、本發(fā)明是鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)所具有的課題而作出的，目的在于，提供對胃酸等酸的耐受性足夠優(yōu)異的乳酸菌及含有其的乳酸菌組合物、對酸的耐受性提高的乳酸菌的制造方法、乳酸菌的耐酸性提高方法、對酸的耐受性足夠優(yōu)異的乳酸菌的篩選方法、以及使用這些乳酸菌和/或乳酸菌組合物的發(fā)酵乳的制造方法。

4、用于解決問題的方案

5、本發(fā)明人們?yōu)榱藢?shí)現(xiàn)上述目的進(jìn)行了深入研究，成功地分離出在耐酸性試驗(yàn)中顯示高存活率的乳酸菌。接著，為了探索乳酸菌中的與耐酸性有關(guān)的因子，在上述耐酸性試驗(yàn)中存活率高的乳酸菌(高耐酸性乳酸菌)與以往的普通的乳酸菌(即，耐酸性試驗(yàn)中存活率低的乳酸菌：低耐酸性乳酸菌)之間進(jìn)行了基因組分析。在該基因組分析中，作為高耐酸性乳酸菌所共有的、伴有氨基酸突變的突變，提取出kup基因中的移碼突變、無義突變。進(jìn)而，將上述高耐酸性乳酸菌多次傳代而誘發(fā)突變時(shí)，得到失去耐酸性的乳酸菌，因此在其與上述高耐酸性乳酸菌之間也進(jìn)行了基因組分析。其結(jié)果是，在失去耐酸性的乳酸菌中，所誘發(fā)的突變導(dǎo)致上述高耐酸性乳酸菌中提取出的kup基因中的移碼突變、無義突變消失，基本回復(fù)到原低耐酸性乳酸菌的kup基因的核苷酸序列。

6、由此，本發(fā)明人們根據(jù)這些見解發(fā)現(xiàn)，kup基因是與乳酸菌的耐酸性有關(guān)的因子，該kup基因的功能被抑制的乳酸菌對酸的耐受性足夠優(yōu)異。由此還發(fā)現(xiàn)，通過人為地抑制kup基因的功能能夠提高乳酸菌的耐酸性，以kup基因的功能受到抑制為指標(biāo)能夠容易地篩選對酸的耐受性足夠優(yōu)異的乳酸菌，從而完成了本發(fā)明。

7、因此，本發(fā)明提供下述方式。

8、[1]

9、一種乳酸菌的耐酸性提高方法，其包括人為地抑制乳酸菌的kup基因的功能的工序。

10、[2]

11、根據(jù)[1]所述的方法，其中，上述乳酸菌為乳桿菌科(lactobacillaceae)乳酸菌。

12、[3]

13、根據(jù)[1]或[2]所述的方法，其中，上述乳酸菌為乳桿菌屬(lactobacillus)乳酸菌。

14、[4]

15、一種耐酸性提高的乳酸菌的制造方法，其包括人為地抑制乳酸菌的kup基因的功能的工序。

16、[5]

17、根據(jù)[4]所述的制造方法，其中，上述乳酸菌為乳桿菌科(lactobacillaceae)乳酸菌。

18、[6]

19、根據(jù)[4]或[5]所述的制造方法，其中，上述乳酸菌為乳桿菌屬(lactobacillus)乳酸菌。

20、[7]

21、一種乳酸菌，其kup基因的功能受到抑制。

22、[8]

23、根據(jù)[7]所述的乳酸菌，其為乳桿菌科(lactobacillaceae)乳酸菌。

24、[9]

25、根據(jù)[7]或[8]所述的乳酸菌，其為乳桿菌屬(lactobacillus)乳酸菌。

26、[10]

27、一種乳酸菌組合物，其含有[7]～[9]中任一項(xiàng)所述的乳酸菌。

28、[11]

29、根據(jù)[10]所述的乳酸菌組合物，其還含有鏈球菌屬(streptococcus)乳酸菌。

30、[12]

31、根據(jù)[10]或[11]所述的乳酸菌組合物，其為乳酸菌發(fā)酵劑。

32、[13]

33、根據(jù)[10]或[11]所述的乳酸菌組合物，其為發(fā)酵乳。

34、[14]

35、一種高耐酸性乳酸菌的篩選方法，其包括選擇工序，所述選擇工序以kup基因的功能受到抑制為指標(biāo)來選擇乳酸菌。

36、[15]

37、一種發(fā)酵乳的制造方法，其包括發(fā)酵工序，所述發(fā)酵工序向含有原料乳的調(diào)制乳液體中添加選自由通過[4]～[6]中任一項(xiàng)制造方法得到的乳酸菌、[7]～[9]中任一項(xiàng)所述的乳酸菌、[10]～[13]中任一項(xiàng)所述的乳酸菌組合物及通過[14]的篩選方法選出的乳酸菌組成的組中的任意者而使其發(fā)酵，得到發(fā)酵乳。

38、[16]根據(jù)[15]所述的發(fā)酵乳的制造方法，其包括進(jìn)一步向上述調(diào)制乳液體中添加鏈球菌屬(streptococcus)乳酸菌的工序。

39、發(fā)明的效果

40、根據(jù)本發(fā)明，能夠提供對胃酸等酸的耐受性足夠優(yōu)異的乳酸菌及含有其的乳酸菌組合物、對酸的耐受性提高的乳酸菌的制造方法、乳酸菌的耐酸性提高方法、對酸的耐受性足夠優(yōu)異的乳酸菌的篩選方法、以及使用這些乳酸菌和/或乳酸菌組合物的發(fā)酵乳的制造方法。

1.一種乳酸菌的耐酸性提高方法，其包括人為地抑制乳酸菌的kup基因的功能的工序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述乳酸菌為乳桿菌科(lactobacillaceae)乳酸菌。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(lactobacillus)乳酸菌。

4.一種耐酸性提高的乳酸菌的制造方法，其包括人為地抑制乳酸菌的kup基因的功能的工序。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制造方法，其中，所述乳酸菌為乳桿菌科(lactobacillaceae)乳酸菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制造方法，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(lactobacillus)乳酸菌。

7.一種乳酸菌，其kup基因的功能受到抑制。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的乳酸菌，其為乳桿菌科(lactobacillaceae)乳酸菌。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的乳酸菌，其為乳桿菌屬(lactobacillus)乳酸菌。

10.一種乳酸菌組合物，其含有權(quán)利要求7所述的乳酸菌。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的乳酸菌組合物，其還含有鏈球菌屬(streptococcus)乳酸菌。

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的乳酸菌組合物，其為乳酸菌發(fā)酵劑。

13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的乳酸菌組合物，其為發(fā)酵乳。

14.一種高耐酸性乳酸菌的篩選方法，其包括選擇工序，所述選擇工序以kup基因的功能受到抑制為指標(biāo)來選擇乳酸菌。

15.一種發(fā)酵乳的制造方法，其包括發(fā)酵工序，所述發(fā)酵工序向含有原料乳的調(diào)制乳液體中添加選自由通過權(quán)利要求4～6中任一項(xiàng)的制造方法得到的乳酸菌、權(quán)利要求7～9中任一項(xiàng)所述的乳酸菌、權(quán)利要求10～13中任一項(xiàng)所述的乳酸菌組合物及通過權(quán)利要求14的篩選方法選擇出的乳酸菌組成的組中的任意種而使其發(fā)酵，得到發(fā)酵乳。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的發(fā)酵乳的制造方法，其包括向所述調(diào)制乳液體中進(jìn)一步添加鏈球菌屬(streptococcus)乳酸菌的工序。