1.特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:利用crispr/cas9技術(shù),將cag-lsl-msirt1-3-3xflag-wpre-polya基因片段定點插入到小鼠的h11位點;重組后的小鼠的h11位點后的序列如seq?id?no.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,將crispr/cas9體系和同源重組載體顯微注射到c57bl/6jgpt小鼠的受精卵中,獲得f0代小鼠;經(jīng)pcr驗證正確的f0代陽性小鼠與c57bl/6jgpt小鼠交配獲得可穩(wěn)定遺傳的f1代陽性小鼠模型;將f1代小鼠與pomc-cre小鼠交配獲得f2代小鼠并對其進行基因鑒定。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,構(gòu)建攜帶靶位點同源區(qū)域及目的片段的同源重組載體;將轉(zhuǎn)錄好的sgrna和cas9系統(tǒng)以及純化后的同源重組載體樣品顯微注射到c57bl/6jgpt小鼠的受精卵中,獲得f0代小鼠。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,所述同源重組載體的鑒定引物如下:
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,sgrna的序列為5′-ctgagccaacagtggtagta-3′。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,f0代小鼠的鑒定引物如下:
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,f1代小鼠的鑒定引物如下:
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,f2代小鼠的鑒定引物如下:
9.權(quán)利要求1~8任一項所述方法構(gòu)建的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型在制備藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于,所述藥物為改善肥胖的藥物。