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      特異性下丘腦POMC神經(jīng)元SIRT1過表達小鼠模型構(gòu)建方法及其應(yīng)用與流程

      文檔序號:40237771發(fā)布日期:2024-12-06 17:00閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:利用crispr/cas9技術(shù),將cag-lsl-msirt1-3-3xflag-wpre-polya基因片段定點插入到小鼠的h11位點;重組后的小鼠的h11位點后的序列如seq?id?no.1所示。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,將crispr/cas9體系和同源重組載體顯微注射到c57bl/6jgpt小鼠的受精卵中,獲得f0代小鼠;經(jīng)pcr驗證正確的f0代陽性小鼠與c57bl/6jgpt小鼠交配獲得可穩(wěn)定遺傳的f1代陽性小鼠模型;將f1代小鼠與pomc-cre小鼠交配獲得f2代小鼠并對其進行基因鑒定。

      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,構(gòu)建攜帶靶位點同源區(qū)域及目的片段的同源重組載體;將轉(zhuǎn)錄好的sgrna和cas9系統(tǒng)以及純化后的同源重組載體樣品顯微注射到c57bl/6jgpt小鼠的受精卵中,獲得f0代小鼠。

      4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,所述同源重組載體的鑒定引物如下:

      5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,sgrna的序列為5′-ctgagccaacagtggtagta-3′。

      6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,f0代小鼠的鑒定引物如下:

      7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,f1代小鼠的鑒定引物如下:

      8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型構(gòu)建方法,其特征在于,f2代小鼠的鑒定引物如下:

      9.權(quán)利要求1~8任一項所述方法構(gòu)建的特異性下丘腦pomc神經(jīng)元sirt1過表達小鼠模型在制備藥物中的應(yīng)用。

      10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于,所述藥物為改善肥胖的藥物。


      技術(shù)總結(jié)
      本發(fā)明提供特異性下丘腦POMC神經(jīng)元SIRT1過表達小鼠模型構(gòu)建方法及其應(yīng)用,本發(fā)明利用CRISPR/Cas9技術(shù),將CAG?LSL?mSIRT1?3?3xFlag?WPRE?PolyA基因片段定點插入到小鼠的H11位點;重組后的小鼠的H11位點后的序列如SEQ?ID?NO.1所示。本方案合理設(shè)計及修飾sgRNA,保證了構(gòu)建的同源重組載體的高特異性與低脫靶率。將需要進行編輯的目的基因及其載體通過顯微注射的方式導(dǎo)入小鼠體內(nèi),實現(xiàn)目的基因的編輯能夠穩(wěn)定遺傳,最終獲得穩(wěn)定遺傳的基因編輯動物。

      技術(shù)研發(fā)人員:方新宇,張向榮,張少童
      受保護的技術(shù)使用者:南京腦科醫(yī)院
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/12/5
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