專利名稱:肝癌易感基因分型檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種核酸分型檢測(cè)產(chǎn)品，具體的說，涉及一種用于檢測(cè)肝癌易感基因 分型的試劑盒，并公開了其使用方法。
背景技術(shù)：
肝癌是我國常見惡性腫瘤之一，死亡率高，在惡性腫瘤死亡順位中僅次于胃、食道 而居第三位；在部份地區(qū)的農(nóng)村中則占第二位，僅次于胃癌。我國每年死于肝癌約11萬人， 占全世界肝癌死亡人數(shù)的45%。
肝癌的發(fā)生與基因有密切關(guān)系，例如半胱氨酸9、停泊蛋白2等，這些基因變化將 會(huì)改變個(gè)體患肝癌的風(fēng)險(xiǎn)。高發(fā)病率、高死亡率和與基因之間的關(guān)系，使得人們對(duì)于肝癌易 感基因的分型研究產(chǎn)生了巨大的動(dòng)力。
最早常用的分型技術(shù)是southern雜交，這種技術(shù)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求比較簡單，但是過 程卻十分復(fù)雜，涉及到大量的試劑，容易出現(xiàn)錯(cuò)誤，可控性比較差。到了 80年代，隨著內(nèi)切 酶技術(shù)的進(jìn)步，HFLP技術(shù)成了主流的分型方式，這種方法利用內(nèi)切酶的酶切反應(yīng)代替了雜 交反應(yīng)，使得實(shí)驗(yàn)過程被大大簡化，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性得到提高。但是這種方法有一個(gè)缺陷，分 型過于依賴內(nèi)切酶的種類和數(shù)量，當(dāng)兩種基因型的差別不足以引起已知內(nèi)酶切的酶切位點(diǎn) 的改變，就會(huì)導(dǎo)致分型失敗。如公開號(hào)為的專利CN101078027，公開了一種與肝癌相關(guān)的 ESR1基因多態(tài)性檢測(cè)方法，其中就用到了酶切技術(shù)進(jìn)行基因分型檢測(cè)。不過隨著PCR技術(shù) 的發(fā)展，這個(gè)問題得到了很好的解決，特異性PCR技術(shù)加上熒光顯色技術(shù)成為了現(xiàn)在比較 常見的分型方式，操作簡單、分型準(zhǔn)確。隨著人類基因組計(jì)劃的完工，這種技術(shù)在肝癌的分 型應(yīng)用上越來越顯得疲憊了，因?yàn)楦伟┦且环N多基因疾病，涉及到很多易感基因，而這種技 術(shù)的通量較低，耗時(shí)多，費(fèi)用高。
現(xiàn)在主力研究的肝癌易感基因分型技術(shù)是芯片技術(shù)，這種技術(shù)是利用生物基因芯 片，結(jié)合PCR技術(shù)和計(jì)算機(jī)技術(shù)，同時(shí)優(yōu)化了 southern技術(shù)中的雜交反應(yīng)，提高效率、固化 條件、簡化過程，從而很好地避免了內(nèi)切酶的限制和特異性PCR的低效，最后結(jié)果通過計(jì)算 機(jī)分析，能夠客觀準(zhǔn)確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種用于肝癌易感基因分型檢測(cè)的試劑盒，包括基因芯片，擴(kuò)增液和 聚合酶，所述的擴(kuò)增液包含多重引物，各引物的長度為15_30bp，根據(jù)堿基配對(duì)的原則設(shè)計(jì)， 位于各基因型突變位點(diǎn)所在核酸序列位置的上游或下游。
所述的多重引物共34對(duì)，其相應(yīng)序列如下
1、擴(kuò)增位點(diǎn)EGFL31的引物
Primer1 5-AGACAAGGAGGACGTGGAG-3，
Primer2 5-ATGGTGGGACCTGCGACT-3 ；
2、擴(kuò)增位點(diǎn)EGFL3 II III的引物
5[0012]Primer3 5-CATGAAAGGAAAGGGTGCC-3，
Primer4 5-AGGACACCGCTTCCCACA-3 ;
3、擴(kuò)增位點(diǎn)TP73的引物
Primer5 5-AAGACATGCCCCATCCAGAT-3，
Primer6 5-ACGTGCTCCGCTTTCTTGT-3 ；
4、擴(kuò)增位點(diǎn)EN01 I II的引物
Primer7 5-GGGCGTCATGGTGTCTCA-3，
Primer8 5-CCAGGTCAGCGATGAAGGTAT-3 ；
5、擴(kuò)增位點(diǎn)TNFRSFB I II的引物
Primer9 5-TTCCTGACCAAGCCTCCTC-3，
Primer10 5-CCATTGGGAGCAGGAAGG-3 ；
6、擴(kuò)增位點(diǎn)MASP2 I II的引物
Primer11 5-GACATTGACGAGTGCCAGGT-3，
Primer12 5-CGGCAGGAGCAGTAGAAACC-3 ；
7、擴(kuò)增位點(diǎn)CASP91的引物
Primer13 5-TGGAAGAGCTGCAGGTGGA-3，
Primer14 5-GTCCTCGATCATATGGGGC-3 ；
8、擴(kuò)增位點(diǎn)CASP9 II的引物
Primer15 5-GCGAACTAACAGGCAAGCAG-3，
Primer16 5-TCTGGGTGTTTCCGGTCTG-3 ；
9、擴(kuò)增位點(diǎn)CASP9 III IV的引物
Primer17 5-GCCACTGCCTCATTATCAACA-3，
Primer18 5-GCCCTTCACCTCCACCAT-3 ；
10、擴(kuò)增位點(diǎn)TOR I II的引物
Primer19 5-GCCCACCTCTCACTCTACTTC-3,
Primer20 5-CTGATCTCCCAGGCGTCC-3 ；
11、擴(kuò)增位點(diǎn)SEPm的引物
Primer21 5-GCTTCTGGTGGGACGAGTTC-3，
Primer22 5-GGCATCAGGAGTGTGCAAC-3 ；
12、擴(kuò)增位點(diǎn)E2F2 I II的引物
Primer23 5-GAATGTTTGAAGACCCCACCA-3，
Primer24 5-ACCCAGGAAGGAAGAAACAGAT-3 ；
13、擴(kuò)增位點(diǎn)PINK1的引物
Primer25 5-CATCTAAGCCTCTGGGGTGAA-3，
Primer26 5-CAGCCAACCATCTTGTCTAACTT-3 ；
14、擴(kuò)增位點(diǎn)SI￥N1 I的引物
Primer27 5-GAAGTGCGGAAGAACAAAGAAT-3，
Primer28 5-GGGATGGGGAGAAAGTCAGT-3 ；
15、擴(kuò)增位點(diǎn)STMN1 II的引物[0051]Primer29 5-CAGAAGGCAATAGAAGAGAACAAC-3，
Primer30 5-CGGTTCTCTTTATTAGCTTCCATT-3 ；
16、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYH I的引物
Primer31 5-GCCTCCCTCCTTCCATTTT-3，
Primer32 5-TGTCACTGGGCTGCACTGAA-3 ；
17、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYH II的引物
Primer33 5-GCCCTCACCTCCCTGTCTT-3，
Primer34 5-CAAGTGGGTCTGTAAGCAATCAA-3 ；
18、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYH III IV的引物
Primer 355-GATCTCCCTTCCCAGCTCC-3,
Primer36 5-GAATGGAGGGAATCGGCAG-3 ；
19、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYH V的引物
Primer37 5-TTCCGAGGGAGCCTGCTAA-3，
Primer38 5-GAAGACGGGCAGAAGAGGT-3 ；
20、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYH VI的引物
Primer39 5-ATGAGGAAGCCACGAGCAG-3，
Primer40 5-ACCGACGGACGAAGGACA-3 ；
21、擴(kuò)增位點(diǎn)JUN的引物
Primer41 5-ATCGCTGCCTCCAAGTGC-3，
Primer42 5-GCTGTGCCACCTGTTCCCT-3 ；
22、擴(kuò)增位點(diǎn)THEAI II的引物
Primer43 5-CTGGTAGAGAAGCCCAAACACT-3，
Primer44 5-CCTTGTGCTATTTCAGGAGACTT-3 ；
23、擴(kuò)增位點(diǎn)THEA III的引物
Primer45 5-GAGGCAGGACCAGCTCCACA-3，
Primer46 5-CGTTCCCTCCCTTATCCCAT-3 ；
24、擴(kuò)增位點(diǎn)THEA IV的引物
Primer47 5-GCCTCGGAAGTGGAACA-3，
Primer48 5-GGCATTCCTTCTGTCTC-3 ；
25、擴(kuò)增位點(diǎn)GSTM1 I II的引物
Primer49 5-CCTTATTTGTCCTCTTTCCTTGC-3，
Primer50 5-CGTGAACTCGGGTGTACCT-3 ；
26、擴(kuò)增位點(diǎn)PHGDH 的引物
Primer51 5-CACTGGTGTCAGATGGGGAG-3，
Primer52 5-AGGTTAGAAGTGGAACTGGAAGG-3 ；
27、擴(kuò)增位點(diǎn)DEFB1 I II III的引物
Primer53 5-CAATCATTGGGCCAATTTCTT-3，
Primer54 5-CTGCGTCATTTCTTCTGGTCA-3 ；
28、擴(kuò)增位點(diǎn)MTMR9 的引物
7[0090]Primer55 5-AGCAACTGCTGTTGAATTTTCA-3，
Primer56 5-GCACCTCCTCCCGTTTGT-3 ；
29、擴(kuò)增位點(diǎn)FDFT1的引物
Primer57 5-TGGACCAGGACTCGCTCAG-3，
Primer58 5-CAGCGCCTGGATTAACAGC-3 ；
30、擴(kuò)增位點(diǎn)NAT 1 I II的引物
Primer59 5-ACATTGTCGATGCTGGGTTT-3，
Primer60 5-CTGTTCCCTTCTGATTTGGTCTA-3 ；
31、擴(kuò)增位點(diǎn)D0K2的引物
Primer61 5-GCCTCCAGCATGTCCAGC-3，
Primer62 5-GTACTTTGGGCCTTTCTTTAG-3
32、擴(kuò)增位點(diǎn)EPHX2 I II的引物
Primer63 5-CACCGGGAGGAGCAGATG-3，
Primer64 5-GAGGGAAGCAAAGAGGGAGTAT-3 ；
33、擴(kuò)增位點(diǎn)ADRB3的引物
Primer65 5-CTTTCCGCCCGAGGAGTCT-3，
Primer66 5-TTCCCGGAGAGGCAGGAG-3 ；
34、擴(kuò)增位點(diǎn)BNIP3L的引物
Primer67 5-TACCATCCTCATCCTCCATCC-3，
Primer68 5-CTCTGTCCTGATTCATGTTGTGC-3。
一種使用上述試劑盒的方法，包括擴(kuò)增檢測(cè)樣本，和用基因芯片進(jìn)行反應(yīng)檢測(cè)，所 述的樣本擴(kuò)增步驟為梯度降溫?cái)U(kuò)增。
本發(fā)明應(yīng)用生物易感基因分析原理，結(jié)合PCR技術(shù)和計(jì)算機(jī)技術(shù)，同時(shí)優(yōu)化了 southern技術(shù)中的雜交反應(yīng)，提高效率、固化條件、簡化過程，從而很好地避免了內(nèi)切酶的 限制和特異性PCR的低效；最后結(jié)果通過計(jì)算機(jī)分析，能夠客觀準(zhǔn)確地進(jìn)行多個(gè)肝癌易感 性基因的分析。
具體實(shí)施例
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
應(yīng)當(dāng)理解，下面實(shí)施例中未說明的常規(guī)條件和方法，通常按照所屬領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)人員 常規(guī)采用方法如薩姆布魯克和拉塞爾主編的《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》第三版，或按照制造廠 商所建議的步驟和條件。
實(shí)施例1:引物合成
向生物寡核苷酸鏈合成公司(生工)定制
發(fā)明內(nèi)容
中所提及的引物。
實(shí)施例2:制作基因芯片
(1)探針準(zhǔn)備
將探針用3X的檸檬酸緩沖液(SSC)統(tǒng)一配制成1500nM終濃度，4°C密封保存。探 針可用申請(qǐng)?zhí)?00910203530. 5中所述基因芯片所用序列。
(2)玻片準(zhǔn)備[0120]1、將玻片垂直放置在玻璃架上，然后把架子放在玻璃缸內(nèi)。
2、用50克NaOH溶解于200ml去離子水，再加上300ml 95%乙醇(不要用100% 的乙醇)，配制500ml的堿性洗液，把玻片完全浸沒在洗液中至少2個(gè)小時(shí)。
3、用去離子水全面沖洗浸泡過的箔片5次，最后在去離水中完全浸沒搖洗5分鐘。
4、用35ml多聚L賴氨酸(poly-L-lysine) ,35ml滅菌過濾的PBS和280ml的去離 子水配制350ml修飾液。
5、將第三步中玻片洗凈以后迅速放入修飾液中，輕輕搖動(dòng)1小時(shí)，注意減少暴露 在空氣中的時(shí)間。
6、把修飾處理過的玻片插進(jìn)一個(gè)裝有干凈去離子水的缸中，上下抽動(dòng)5次，把玻 片轉(zhuǎn)移到一個(gè)低速離心機(jī)中，旋轉(zhuǎn)是玻片干燥，5分鐘。用鋁箔包裹干燥的玻片，防止灰塵， 放進(jìn)真空干燥爐中，45°C，10分鐘。室溫密封保存，一般在一個(gè)月以后使用。
(3)芯片制備
1、將樣本放置于96孔板中，用基因芯片點(diǎn)樣儀，每針吸裝lul探針，把探針點(diǎn)在多 聚L賴氨酸處理過的玻片，點(diǎn)樣量為5nl，每組探針點(diǎn)在相鄰位置，便于觀察。
2、用玻片水合艙和金屬加熱板對(duì)玻片進(jìn)行再次水合化和快速干燥的處理。將玻片 的點(diǎn)樣面對(duì)著水蒸氣5-15秒，然后點(diǎn)樣面背著加熱器5秒。
3、UV交聯(lián)。用紫外線是DNA交聯(lián)到玻片上，照射能量為60mJ。
4、配置封閉液。將6克丁二酸酐放入3-甲基-2-吡咯烷酮溶液中，定容335ml，再 加入15ml 1M的硼酸鈉溶液。
5、迅速把第三步完成的玻片浸沒于封閉液中，15分鐘。結(jié)束以后把玻片放入剛沸 過的水中，晃動(dòng)3-5次，浸沒2分鐘。然后將玻片放入95%的乙醇中，上下提拉3-5次，離心思干。
實(shí)施例3:試劑盒制備
(1)擴(kuò)增液配制
以 25ml (滅菌雙蒸水 18. 5ul, lOxPCR buffer 2. 5ul)緩沖液，引物(10umol/L，上 游下游各lul)2ul，dNTP(10mmol/L，dTTP Dig-dUTP = 10 1)，按前述比例配制成擴(kuò)增 液。體系中的引物為lOumol/L指的是
發(fā)明內(nèi)容
中包括的所有引物各自的濃度均達(dá)到這個(gè) 水平。
(2) Taq 酶(聚合酶)(2U/ul)(購自 TAKARA)。
實(shí)施例4 檢測(cè)基因的擴(kuò)增和標(biāo)記
(1) 口腔粘膜細(xì)胞的DNA提取
1、將粘有口腔粘膜細(xì)胞的棉簽頭放入裝有l(wèi)ml 10% SDS的離心管中，充分浸潤。 加入50ul的蛋白酶K，37°C保溫1-2小時(shí)，加入lml 5mol/L的NaCl，混勻，5000rpm，離心數(shù)秒。
2、取上清液于新離心管，用等體積酚氯仿異戊醇(25 24 1)抽提。待分 層后，3000rpm離心5分鐘。
3、取上層水相至干凈離心管，加2倍體積乙醚抽提(在通風(fēng)情況下操作)。移去上 層乙醚，保留下層水相。
4、加1/10體積3mol/LNaAc，及2倍體積無水乙醇顛倒混合沉淀DNA。室溫下靜止
910分鐘，離心棄上清。
5、用70%乙醇中漂洗沉淀，離心棄上清，重復(fù)一次。放入烘箱內(nèi)數(shù)分鐘將剩余的酒 精除去，用50ulTE溶解DNA，-20°C保存。
(2)基因擴(kuò)增
1、以 25ml (滅菌雙蒸水 18. 5ul，IOxPCR buffer 2. 5ul)，引物(10umol/L，上游 下游各 lul) 2ul，dNTP(10mmol/L, dTTP Dig-dUTP =10 1)，Taq 酶(聚合酶)(2U/ ul)0. 5ul，配成含聚合酶的擴(kuò)增液，加入DNA樣品Iul組成多重PCR體系，擴(kuò)增目的基因。體 系中的引物為lOumol/L指的是
發(fā)明內(nèi)容
中包括的所有引物各自的濃度均達(dá)到這個(gè)水平。
2、擴(kuò)增條件94°C 5分鐘預(yù)變性；94°C 30秒，64°C 30秒，72°C 30秒，5個(gè)循環(huán)； 940C 30 秒，61°C 30 秒，72°C 30 秒，5 個(gè)循環(huán)；94°C 30 秒，58°C 30 秒，72°C 30 秒，5 個(gè)循 環(huán)；94°C 30秒，550C 30秒，72°C 30秒，30個(gè)循環(huán)；72°C延伸10分鐘。
實(shí)施例5 雜交反應(yīng)與檢測(cè)結(jié)果
(1)點(diǎn)樣雜交
配制雜交液，包括0.02 % SDS、5XSSC、50 %去離子甲酰胺、0. 1 % N-laurysarosine,50mmol · L-I 磷酸鈉、pH 7. 0、2%封閉劑。
用移液槍將2ul Dig標(biāo)記的PCR產(chǎn)物吸加到IOul雜交液中，95°C預(yù)變性2分鐘， 然后在冰上冷卻5分鐘。將待雜交混合液置于芯片上的探針區(qū)域，并蓋上蓋玻片(防止水 分在雜交過程中蒸發(fā))，置于42°C的雜交爐內(nèi)1. 5小時(shí)。
雜交后小心拿出玻片，浸入盛有洗液1(2 X SSC，0. 1% SDS)的玻片槽，玻片點(diǎn)樣面 朝下，保證芯片陣列區(qū)的安全，將玻片在洗液中晃動(dòng)2-3次，移入盛有洗液2 (1 X SSC)的玻 片槽中，輕柔地?fù)u晃玻片槽2-3分鐘，再將玻片移入盛有洗液3(0. 2xSSC)2分鐘，然后離心 甩干玻片。實(shí)驗(yàn)過程均應(yīng)在室溫。
(2)顯色
6mg 二氨基聯(lián)苯胺(DAB)溶于IOmlTBS (0. 05M ρΗ7· 6)，再加入0. Iml濃度為3 %的 H2O2，過濾掉沉淀物，配制成顯色液。取Iml顯色液，控制顯色時(shí)間10-15分鐘，然后用IxPBS 溶液清洗，終止反應(yīng)。最后通過基因芯片掃描儀，讀取芯片上的信息。
(3)結(jié)果判斷
利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行灰度值分析，同組探針中，如果第一個(gè)探針和第二個(gè)探針的雜交 信號(hào)比值< 0. 33，基因型為第二種探針對(duì)應(yīng)的純合型；大于3. 0，基因型為第一種探針對(duì)應(yīng) 得純合型；1. 5到0. 67，基因型為雜合型；其余情況視為實(shí)驗(yàn)失敗，重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
序列表
<110>上海裕隆基因科技中心有限公司
<120>肝癌易感基因分型檢測(cè)試劑盒
<160>68
<210>1
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
10[0164]<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因EGFL3分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl。
<400>1
agacaaggag gacgtggag 19
<210>2
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因EGFL3分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer2。
<400>2
atggtgggac ctgcgact 19
<210>3
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因EGFL3分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer3。
<400>3
catgaaagga aagggtgcc 19
<210>4
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因EGFL3分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer4。
<400>4
aggacaccgc ttcccaca 18
<210>5
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因TP73分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer5。
<400>5[0198]aagacatgcc ccatccagat 20
<210>6
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因TP73分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer6。
<400>6
acgtgctccg ctttcttgt 19
<210>7
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因ENOl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer7。
<400>7
gggcgtcatg gtgtctca 18
<210>8
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因ENOl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer8。
<400>8
ccaggtcagc gatgaaggtat 21
<210>9
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因TNFRSFB分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer9。
<400>9
ttcctgacca agcctcctc 19
<210>10
<211>18
12[0233]<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因TNFRSFB分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為PrimerlO。
<400>10[0238]ccattgggag caggaagg 18[0239]<210>11[0240]<211>20[0241]<212>DNA[0242]<213>人工序列[0243]<220>[0244]<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基因 MASP2分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl 1。[0245]<400>11[0246]gacattgacg agtgccaggt 20[0247]<210>12[0248]<211>20[0249]<212>DNA[0250]<213>人工序列[0251]<220>[0252]<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基因 MASP2分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl2。[0253]<400>12[0254]cggcaggagc agtagaaacc 20[0255]<210>13[0256]<211>19[0257]<212>DNA[0258]<213>人工序列[0259]<220>[0260]<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基因 CASP9分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl3。[0261]<400>13[0262]tggaagagct gcaggtgga 19[0263]<210>14[0264]<211>19[0265]<212>DNA[0266]<213>人工序列[0267]<220>[0268]<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因CASP9分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl4。
<400>14
gtcctcgatc atatggggc 19
<210>15
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因CASP9分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl5。
<400>15
gcgaactaac aggcaagcag 20
<210>16
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因CASP9分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl6。
<400>16
tctgggtgtt tccggtctg 19
<210>17
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因CASP9分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl7。
<400>17
gccactgcct cattatcaac a 21
<210>18
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因CASP9分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl8。
<400>18[0302]gcccttcacc tccaccat18
<210>19
<211 >21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因TOR分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primerl9。
<400>19
gcccacctct cactctactt c 21
<210>20
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因FGR分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer20。
<400>20
ctgatctccc aggcgtcc18
<210>21
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因SEPm分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer21。
<400>21
gcttctggtg ggacgagttc 20
<210>22
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因SEPm分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer22。
<400>22
ggcatcagga gtgtgcaac 19
<210>23
<211>21[0337]<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因E2F2分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer23。
<400>23
gaatgtttga agaccccacc a 21
<210>24
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因E2F2分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer24。
<400>24
acccaggaag gaagaaacag at 22
<210>25
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因PINKl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer25。
<400>25
catctaagcc tctggggtga a21
<210>26
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因PINKl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer26。
<400>26
cagccaacca tcttgtctaa ctt 23
<210>27
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>[0372]<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因STMNl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer27。
<400>27
gaagtgcgga agaacaaaga at 22
<210>28
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因STMNl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer28。
<400>28
gggatgggga gaaagtcagt20
<210>29
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因STMNl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer29。
<400>29
cagaaggcaa tagaagagaa caac 24
<210>30
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因STMNl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer30。
<400>30
cggttctctt tattagcttc catt 24
<210>31
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer31。
<400>3119
<210>32
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer32。
<400>32
tgtcactggg ctgcactgaa20
<210>33
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer33。
<400>33
gccctcacct ccctgtctt19
<210>34
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer34。
<400>34
caagtgggtc tgtaagcaat caa 23
<210>35
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer35。
<400>35
gatctccctt cccagctcc19
<210>36
<211>19
18[0441]<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer36。
<400>36
gaatggaggg aatcggcag19
<210>37
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer37。
<400>37
ttccgaggga gcctgctaa19
<210>38
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer38。
<400>38
gaagacgggc agaagaggt 19
<210>39
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer39。
<400>39
atgaggaagc cacgagcag 19
<210>40
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
19[0476]<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MUTYH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer40。
<400>40
accgacggac gaaggaca 18
<210>41
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因JUN分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer41。
<400>41
atcgctgcct ccaagtgc 18
<210>42
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因JUN分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer42。
<400>42
gctgtgccac ctgttccct19
<210>43
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因THEA分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer43。
<400>43
ctggtagaga agcccaaaca ct 22
<210>44
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因THEA分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer44。
<400>44[0510]ccttgtgcta tttcaggaga ctt 23
<210>45
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因THEA分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer45。
<400>45
gaggcaggac cagctccaca20
<210>46
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因THEA分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer46。
<400>46
cgttccctcc cttatcccat 20
<210>47
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因THEA分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer47。
<400>47
gcctcggaag tggaaca17
<210>48
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因THEA分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer48。
<400>48
ggcattcctt ctgtctc17
<210>49
<211>23[0545]<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因GSTMl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer49。
<400>49
ccttatttgt cctctttcct tgc 23
<210>50
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因GSTMl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer50。
<400>50
cgtgaactcg ggtgtacct 19
<210>51
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因PHGDH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer51。
<400>51
cactggtgtc agatggggag 20
<210>52
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因PHGDH分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer52。
<400>52
aggttagaag tggaactgga agg 23
<210>53
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
22[0580]<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因DEFBl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer53。
<400>53
caatcattgg gccaatttct t 21
<210>54
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因DEFBl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer54。
<400>54
ctgcgtcatt tcttctggtc a 21
<210>55
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MTMR9分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer55。
<400>55
agcaactgct gttgaatttt ca 22
<210>56
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因MTMR9分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer56。
<400>56
gcacctcctc ccgtttgt18
<210>57
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因FDFTl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer57。
<400>57[0614]tggaccagga ctcgctcag19
<210>58
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因FDFTl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer58。
<400>58
cagcgcctgg attaacagc19
<210>59
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因NATl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer59。
<400>59
acattgtcga tgctgggttt20
<210>60
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因NATl分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer60。
<400>60
ctgttccctt ctgatttggt cta 23
<210>61
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因D0K2分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer61。
<400>61
gcctccagca tgtccagc18
<210>62
<211>21[0649]<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因D0K2分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer62。
<400>62
gtactttggg cctttcttta g 21
<210>63
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因EPHX2分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer63。
<400>63
caccgggagg agcagatg18
<210>64
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因EPHX2分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer64。
<400>64
gagggaagca aagagggagt at 22
<210>65
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因ADRB3分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer65。
<400>65
ctttccgccc gaggagtct19
<210>66
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>[0684]<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因ADRB3分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer66。
<400>66
ttcccggaga ggcaggag18
<210>67
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因BNIP3L分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer67。
<400>67
taccatcctc atcctccatc c 21
<210>68
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根據(jù)核酸堿基配對(duì)原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作檢測(cè)肝癌易感基 因BNIP3L分型位點(diǎn)的DNA引物，命名為Primer68。
<400>68
ctctgtcctg attcatgttg tgc 23
權(quán)利要求
一種肝癌易感基因分型檢測(cè)試劑盒，包括基因芯片，擴(kuò)增液和聚合酶，其特征在于所述的擴(kuò)增液包含多重引物，各引物的長度為15 30bp，根據(jù)堿基配對(duì)的原則設(shè)計(jì)，位于各位點(diǎn)所在核酸序列位置的上游或下游。
2.如權(quán)利要求
1所述的試劑盒，其特征在于所述的多重引物的序列如下[1、擴(kuò)增位點(diǎn)EGFL3I的引物 Primerl 5-AGACAAGGAGGACGTGGAG-3， Primer2 5-ATGGTGGGACCTGCGACT-3 ；[2、擴(kuò)增位點(diǎn)EGFL3II III的引物 Primer3 5-CATGAAAGGAAAGGGTGCC-3， Primer4 5-AGGACACCGCTTCCCACA-3 ；[3、擴(kuò)增位點(diǎn)TP73的引物Primer5 5-AAGACATGCCCCATCCAGAT-3， Primer6 5-ACGTGCTCCGCTTTCTTGT-3 ；[4、擴(kuò)增位點(diǎn)ENOlI II的引物 Primer7 5-GGGCGTCATGGTGTCTCA-3， Primer8 5-CCAGGTCAGCGATGAAGGTAT-3 ；[5、擴(kuò)增位點(diǎn)TNFRSFBI II的引物 Primer9 5-TTCCTGACCAAGCCTCCTC-3， PrimerlO 5-CCATTGGGAGCAGGAAGG-3 ；[6、擴(kuò)增位點(diǎn)MASP2I II的引物 Primerll 5-GACATTGACGAGTGCCAGGT-3， Primer12 5-CGGCAGGAGCAGTAGAAACC-3 ；[7、擴(kuò)增位點(diǎn)CASP9I的引物 Primer13 5-TGGAAGAGCTGCAGGTGGA-3， Primer14 5-GTCCTCGATCATATGGGGC-3 ；[8、擴(kuò)增位點(diǎn)CASP9II的引物 Primer15 5-GCGAACTAACAGGCAAGCAG-3， Primer16 5-TCTGGGTGTTTCCGGTCTG-3 ；[9、擴(kuò)增位點(diǎn)CASP9III IV的引物 Primer17 5-GCCACTGCCTCATTATCAACA-3， Primer18 5-GCCCTTCACCTCCACCAT-3 ；[10、擴(kuò)增位點(diǎn)TORI II的引物 Primer19 5-GCCCACCTCTCACTCTACTTC-3， Primer20 5-CTGATCTCCCAGGCGTCC-3 ；[11、擴(kuò)增位點(diǎn)SEPNl的引物 Primer21 5-GCTTCTGGTGGGACGAGTTC-3， Primer22 5-GGCATCAGGAGTGTGCAAC-3 ；[12、擴(kuò)增位點(diǎn)E2F2I II的引物 Primer23 5-GAATGTTTGAAGACCCCACCA-3，Primer24 5-ACCCAGGAAGGAAGAAACAGAT-3 ；13、擴(kuò)增位點(diǎn)PINKl的引物 Primer25 5-CATCTAAGCCTCTGGGGTGAA-3, Primer26 5-CAGCCAACCATCTTGTCTAACTT-3 ；14、擴(kuò)增位點(diǎn)STMNlI的引物 Primer27 5-GAAGTGCGGAAGAACAAAGAAT-3， Primer28 5-GGGATGGGGAGAAAGTCAGT-3 ；15、擴(kuò)增位點(diǎn)SI￥N1II的引物 Primer29 5-CAGAAGGCAATAGAAGAGAACAAC-3， Primer30 5-CGGTTCTCTTTATTAGCTTCCATT-3 ；16、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYHI的引物 Primer31 5-GCCTCCCTCCTTCCATTTT-3， Primer32 5-TGTCACTGGGCTGCACTGAA-3 ；17、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYHII的引物 Primer33 5-GCCCTCACCTCCCTGTCTT-3， Primer34 5-CAAGTGGGTCTGTAAGCAATCAA-3 ；18、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYHIII IV的引物 Primer35 5-GATCTCCCTTCCCAGCTCC-3， Primer36 5-GAATGGAGGGAATCGGCAG-3 ；19、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYHV的引物 Primer37 5-TTCCGAGGGAGCCTGCTAA-3， Primer38 5-GAAGACGGGCAGAAGAGGT-3 ；20、擴(kuò)增位點(diǎn)MUTYHVI的引物 Primer39 5-ATGAGGAAGCCACGAGCAG-3， Primer40 5-ACCGACGGACGAAGGACA-3 ；21、擴(kuò)增位點(diǎn)JUN的引物 Primer41 5-ATCGCTGCCTCCAAGTGC-3， Primer42 5-GCTGTGCCACCTGTTCCCT-3 ；22、擴(kuò)增位點(diǎn)THEAI II的引物 Primer43 5-CTGGTAGAGAAGCCCAAACACT-3， Primer44 5-CCTTGTGCTATTTCAGGAGACTT-3 ；23、擴(kuò)增位點(diǎn)THEAIII的引物 Primer45 5-GAGGCAGGACCAGCTCCACA-3， Primer46 5-CGTTCCCTCCCTTATCCCAT-3 ；24、擴(kuò)增位點(diǎn)THEAIV的引物 Primer47 5-GCCTCGGAAGTGGAACA-3， Primer48 5-GGCATTCCTTCTGTCTC-3 ；25、擴(kuò)增位點(diǎn)GSTMlI II的引物 Primer49 5-CCTTATTTGTCCTCTTTCCTTGC-3，Primer50 5-CGTGAACTCGGGTGTACCT-3 ；·26、擴(kuò)增位點(diǎn)PHGDH的引物 Primer51 5-CACTGGTGTCAGATGGGGAG-3， Primer52 5-AGGTTAGAAGTGGAACTGGAAGG-3 ；·27、擴(kuò)增位點(diǎn)DEFBlI II III的引物 Primer53 5-CAATCATTGGGCCAATTTCTT-3, Primer54 5-CTGCGTCATTTCTTCTGGTCA-3 ；·28、擴(kuò)增位點(diǎn)MTMR9的引物 Primer55 5-AGCAACTGCTGTTGAATTTTCA-3, Primer56 5-GCACCTCCTCCCGTTTGT-3 ；·29、擴(kuò)增位點(diǎn)FDFTl的引物 Primer57 5-TGGACCAGGACTCGCTCAG-3， Primer58 5-CAGCGCCTGGATTAACAGC-3 ；·30、擴(kuò)增位點(diǎn)NATlI II的引物 Primer59 5-ACATTGTCGATGCTGGGTTT-3， Primer60 5-CTGTTCCCTTCTGATTTGGTCTA-3 ；·31、擴(kuò)增位點(diǎn)D0K2的引物 Primer61 5-GCCTCCAGCATGTCCAGC-3， Primer62 5-GTACTTTGGGCCTTTCTTTAG-3 ；·32、擴(kuò)增位點(diǎn)EPHX2I II的引物 Primer63 5-CACCGGGAGGAGCAGATG-3， Primer64 5-GAGGGAAGCAAAGAGGGAGTAT-3 ；·33、擴(kuò)增位點(diǎn)ADRB3的引物 Primer65 5-CTTTCCGCCCGAGGAGTCT-3， Primer66 5-TTCCCGGAGAGGCAGGAG-3 ；·34、擴(kuò)增位點(diǎn)BNIP3L的引物 Primer67 5-TACCATCCTCATCCTCCATCC-3， Primer68 5-CTCTGTCCTGATTCATGTTGTGC-3。
3. 一種使用權(quán)利要求
1所述的試劑盒的方法，包括擴(kuò)增檢測(cè)樣本，用基因芯片進(jìn)行反 應(yīng)檢測(cè)，其特征在于，樣本擴(kuò)增步驟為梯度降溫?cái)U(kuò)增。
專利摘要
本發(fā)明提供一種用于肝癌易感基因分型的試劑盒。包括基因芯片，擴(kuò)增液和聚合酶，所述的擴(kuò)增液包含多重引物，各引物的長度為15-30bp，根據(jù)堿基配對(duì)的原則設(shè)計(jì)，位于各基因型突變位點(diǎn)所在核酸序列位置的上游或下游?？赏ㄟ^多重PCR擴(kuò)增這些位點(diǎn)所在的片斷，便于檢測(cè)。本發(fā)明克服了傳統(tǒng)的分型方法效率低、操作復(fù)雜、可控性差、分型局限性大等缺點(diǎn)，采用現(xiàn)代生物基因芯片檢測(cè)技術(shù)，制備所得通量大、效率高的分型試劑盒，能夠最大限度的囊括已知的易感基因位點(diǎn)，并通過特定設(shè)計(jì)的引物，提高檢測(cè)靈敏度。通過本發(fā)明提供的肝癌易感基因分型試劑盒，能夠幫助我們快速對(duì)樣本進(jìn)行分型，對(duì)于肝癌的循證醫(yī)學(xué)的發(fā)展有極大的作用。
文檔編號(hào)C12Q1/68GKCN101928750SQ200910053540
公開日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2009年6月22日
發(fā)明者汪寧梅, 穆宇豪, 穆海東, 顧杰鋒, 黎颯 申請(qǐng)人:上海裕隆基因科技中心有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan