γ-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的制備方法。具體地，本發(fā)明涉及如下 方法：由纈氨酰甘氨酸或其鹽與y-谷氨酰基供體的酶反應(yīng)，獲得與y-谷氨酰纈氨酰甘 氨酸的混合溶液，通過調(diào)節(jié)其混合溶液中存在的殘留纈氨酰甘氨酸或其鹽的量，從而有效 制備y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體。
【背景技術(shù)】
[0002] y -谷氨酰纈氨酰甘氨酸（y -Glu-Val-Gly)作為賦予食品醇厚味（3夕味）的肽 為人所知（專利文獻(xiàn)1)。Y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸通過諸如化學(xué)合成法或酶法制備。其中， 通過酶法制備y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸時，例如如下進(jìn)行：在y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（y-谷氨 酰轉(zhuǎn)肽酶，以下也稱為"GGT"）的存在下使纈氨酰甘氨酸或其鹽作用于谷氨酰胺之類的谷 氨?；w，獲得含有 Y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸的溶液后，由該溶液獲得Y-谷氨酰纈氨酰 甘氨酸（非專利文獻(xiàn)1)。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0004] 專利文獻(xiàn)
[0005] 專利文獻(xiàn)1:TO2007/055393號公報
[0006] 非專利文獻(xiàn)
[0007] 非專利文獻(xiàn)1: Suzuki，H.等（2008)用細(xì)菌Y-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶提高氨基酸和肽的 風(fēng)味（Improvement of the flavor of amino acids and peptides using bacterial y-gl utamyltranspeptidase).風(fēng)味化學(xué)與生物的近期關(guān)注（In Recent High lights in Flavor Chemistry&Biology). Hofmann，T.等編著? p. 227-232,德國食品化工研宄院

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明要解決的課題
[0009] 本發(fā)明人嘗試著從含有纈氨酰甘氨酸的y -谷氨酰纈氨酰甘氨酸溶液結(jié)晶y -谷 氨酰纈氨酰甘氨酸，結(jié)果發(fā)現(xiàn)多存在以下情況：y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸溶液中殘留較多 纈氨酰甘氨酸或其鹽時，溶液凝膠化，無法結(jié)晶。
[0010] 因此，本發(fā)明的目的是提供能夠有效制備y -谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的方法。
[0011] 本發(fā)明的目的是提供能夠制備具有更大晶體尺寸的y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶 體的方法。
[0012] 本發(fā)明的目的是提供能夠有效制備y -谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的方法。
[0013] 解決課題的方法
[0014] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在從含有纈氨酰甘氨酸的谷氨酰纈氨酰甘氨酸溶液獲得 y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體時，例如，在以纈氨酰甘氨酸為起始物質(zhì)通過酶法獲得y-谷 氨酰纈氨酰甘氨酸時，通過調(diào)節(jié)纈氨酰甘氨酸的殘留量后結(jié)晶Y -谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶 體，就不發(fā)生凝膠化的問題，能夠有效地獲得Y -谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體，從而完成了本 發(fā)明。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過該方法結(jié)晶的Y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體與通過以往的 方法得到的晶體相比，具有較大的晶體尺寸。
[0015] S卩，本發(fā)明是具有以下特征的發(fā)明。
[0016] [1] -種谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的制備方法，該方法包括：
[0017] 在y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶或含有該酶的微生物的存在下，使纈氨酰甘氨酸或其鹽與 y -谷氨?；w反應(yīng)，獲得纈氨酰甘氨酸或其鹽與Y -谷氨酰纈氨酰甘氨酸的混合溶液 的工序，此處，所述混合溶液中存在的纈氨酰甘氨酸相對于y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸的質(zhì) 量比為20質(zhì)量％以上；
[0018] 將獲得的混合溶液中存在的纈氨酰甘氨酸或其鹽的量調(diào)節(jié)為相對于該溶液中的 Y_谷氨酰繳氨酰甘氨酸的質(zhì)量為〇. 1質(zhì)量％以上低于20質(zhì)量％，獲得y-谷氨酰繳氨酰 甘氨酸溶液的工序；以及
[0019] 將所述y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸溶液結(jié)晶，獲得y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的 工序。
[0020] [2]如上述[1]所述的方法，其中，所述混合溶液中存在的纈氨酰甘氨酸或其鹽的 量在其相對于該溶液中的y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸的質(zhì)量在1質(zhì)量％?18質(zhì)量％的范圍 內(nèi)進(jìn)行調(diào)節(jié)。
[0021] [3]如上述[1]或[2]所述的方法，其中，所述混合溶液中存在的纈氨酰甘氨酸或 其鹽的量如下進(jìn)行調(diào)節(jié)：使所述混合溶液中的y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸吸附于吸附樹脂， 而所述混合溶液中的纈氨酰甘氨酸或其鹽流過所述吸附樹脂后，將Y -谷氨酰纈氨酰甘氨 酸從吸附樹脂上洗脫。
[0022] [4]如上述[1]?[3]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，Y-谷氨?；w是谷氨酰胺。
[0023] [5]如上述[1]?[4]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，Y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶或含有該酶 的微生物是屬于腸桿菌科的細(xì)菌。
[0024] [6]如上述[5]所述的方法，其中，所述細(xì)菌是大腸埃希氏菌。
[0025] [7]如權(quán)利要求[1]?[6]中任一項(xiàng)所述的方法，其中，纈氨酰甘氨酸或其鹽與 Y-谷氨?；w的反應(yīng)在選自水或緩沖液的溶劑中進(jìn)行。
[0026] [8] -種y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸的晶體，所述晶體中含有2. 0質(zhì)量％以下的選自 纈氨酰纈氨酸、纈氨酰纈氨酸鹽、纈氨酰纈氨酰甘氨酸和纈氨酰纈氨酰甘氨酸鹽中的一種 以上，且長軸方向長度在35ym以上的晶體的短軸方向直徑的平均值在2. 1ym以上。
[0027] [9]如上述[8]所述的Y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸的晶體，其中，用光學(xué)顯微鏡拍攝 的Y -谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體圖像在415ymX332ym的區(qū)域內(nèi)包含了全體晶體圖像的 結(jié)晶中，長軸方向長度在35ym以上的晶體的短軸方向直徑的平均值在2. 1ym以上。
[0028] [10]如上述[8]或[9]所述的y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸的晶體，其中，y-谷氨酰 纈氨酰甘氨酸晶體中纈氨酰甘氨酸的濃度在3質(zhì)量％以下。
[0029] 通過本發(fā)明可以有效地制備y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體。
[0030] 通過本發(fā)明還可以制備具有較大晶體尺寸的y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體。
[0031] 此外，通過本發(fā)明，由于獲得較大的晶體，因此實(shí)現(xiàn)了更適合于工業(yè)處理的優(yōu)異的 處理工藝。
【附圖說明】
[0032] 圖1是顯示纈氨酰甘氨酸濃度為10質(zhì)量％時（實(shí)施例6)獲得的本發(fā)明的y-谷 氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的光學(xué)顯微鏡照片。
[0033]圖2是顯示纈氨酰甘氨酸濃度為15質(zhì)量％時（實(shí)施例7)獲得的本發(fā)明的Y-谷 氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的光學(xué)顯微鏡照片。
[0034] 圖3是顯示纈氨酰甘氨酸濃度為20質(zhì)量％時（比較例2)獲得的本發(fā)明的y -谷 氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的光學(xué)顯微鏡照片。
[0035] 圖4是顯示纈氨酰甘氨酸濃度為25質(zhì)量％時（比較例3)獲得的本發(fā)明的y -谷 氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的光學(xué)顯微鏡照片。
[0036] 圖5是顯示比較例5中獲得的Y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的光學(xué)顯微鏡照片。
【具體實(shí)施方式】
[0037] [1] y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的制備方法
[0038] 本發(fā)明涉及一種y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸晶體的制備方法，該方法包括：（1)在 y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶或含有該酶的微生物的存在下，使纈氨酰甘氨酸或其鹽與y-谷氨?；?供體反應(yīng)，獲得纈氨酰甘氨酸或其鹽與谷氨酰纈氨酰甘氨酸的混合溶液的工序；（2)將 獲得的混合溶液中存在的纈氨酰甘氨酸或其鹽的量調(diào)節(jié)為相對于該溶液中的y-谷氨酰 纈氨酰甘氨酸的質(zhì)量為〇. 1質(zhì)量％以上低于20質(zhì)量％，獲得y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸溶液 的工序；以及（3)將所述y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸溶液結(jié)晶，獲得y-谷氨酰纈氨酰甘氨 酸晶體的工序。
[0039] (1)獲得y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸混合溶液的工序
[0040] 作為獲得y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸混合溶液的工序，例如有如下方法：(a)在 y -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶或含有該酶的微生物的存在下，使纈氨酰甘氨酸或其鹽與y -谷氨?；?供體反應(yīng)，獲得纈氨酰甘氨酸或其鹽與y-谷氨酰纈氨酰甘氨酸的混合溶液的方法；(b)如 日本專利特開2012-85637號公報