一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及植物有效成分提取技術，特別設及一種從竹葉中制備異荘草素提取物 的方法。
【背景技術】
[0002] 異荘草素（Isoorientin)，亦稱異荘草巧，是荘草素的同分異構(gòu)體，黃色結(jié)晶，分子 式：〔2品。〇11，分子量：448. 38,可溶于甲醇、己醇、異丙醇、正丙醇等有機溶劑，烙點；230°C~ 232 °C?，F(xiàn)代研究表明，異荘草素對屯、肌缺血、缺氧有明顯的保護作用。
[0003] 異荘草素常見的提取來源為荘草（寥科植物荘寥（Polygonum orientals L.)的 干燥果穂及帶葉莖枝）；我們研究發(fā)現(xiàn)竹葉黃酬中異荘草素含量一般在2% W上，而竹葉黃 酬來源于竹葉，提取原料安全廉價，自然資源可W得到更充分的利用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的所要解決的技術問題是提供一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法， 本發(fā)明采用負壓提取，通過控制負壓提取時的料液比、負壓條件和溫度條件等，制備得到高 純度的異荘草素提取物。
[0005] 本發(fā)明解決上述技術問題所采用的技術方案是：
[0006] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[0007] 步驟（1)、原料處理；將竹葉除雜、洗凈；
[000引步驟（2)、負壓提?。粚⑺霾襟E（1)處理的原料放入負壓容器中，加入提取溶劑， 在所述負壓容器中浸提1-化后過濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā)明所述的異荘草素提取物；
[0009] 所述負壓提取的條件為；負壓為-0. 065Mpa~-0. 075Mpa，溫度30~35°C;所述原 料和提取溶劑按照1:10~1:15 (g/ml)的料液比浸提。
[0010] 優(yōu)選的技術方案中，所述步驟（1)中，所述原料洗凈后，還進行W下處理；將洗凈 后的竹葉干燥后粉碎過20-60目篩。
[OCm] 優(yōu)選的技術方案中，所述步驟（2)中，所述提取溶劑為去離子水、或者PH值為 1. 0-3. 0、質(zhì)量分數(shù)為65-85%的己醇溶液。
[0012] 優(yōu)選的技術方案中，所述步驟（2)中，所述負壓提取的條件為；負壓為-0. 065Mpa， 溫度35°C ;所述提取溶劑為所述己醇溶液為PH值為2. 0、質(zhì)量分數(shù)為65 %的己醇溶液；所 述原料和提取溶劑按照1:10 (g/ml)的料液比浸提。
[0013] 優(yōu)選的技術方案中，所述步驟（2)中，所述濃縮的程度為：濃縮至比重10~15,采 用波美計測量。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有如下優(yōu)點：
[0015] (1)本發(fā)明采用負壓提取，通過控制負壓提取時的料液比、負壓條件和溫度條件等 因素，制備得到高純度的異荘草素提取物。本發(fā)明制備的異荘草素提取物中，異荘草素純度 高達8%~10%。所述純度是指在異荘草素提取物中異荘草素的質(zhì)量含量。
[0016] (2)本發(fā)明方法相對于現(xiàn)有技術，提取溫度更低，可w低至30°c，可w確保提取過 程中異荘草素活性成分不被破壞。
【具體實施方式】
[0017] W下通過具體實施例，對本發(fā)明作進一步的詳細描述。
[001引 實施例1 :
[0019] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[0020] 步驟（1)、原料處理；將竹葉除去雜物、洗凈；
[002U 步驟（2)、負壓提??；將所述步驟（1)處理的竹葉放入負壓容器中，加入PH值為 2.0、質(zhì)量分數(shù)為65%的己醇溶液（所述竹葉和己醇溶液按照l:10(g/ml)的料液比浸提， 即按照Ig竹葉添加10ml己醇溶液的比例）；在負壓容器中浸提化后過濾并收集濾液，濃 縮至比重10 (波美計測量），得本發(fā)明所述的異荘草素提取物。所述負壓提取的條件為；負 壓-0. 065Mpa，溫度 35°C。
[0022] 經(jīng)HPLC測定，最終異荘草素提取物中，異荘草素的純度為8. 3%。
[0023] 實施例2 ;
[0024] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[002引步驟（1)、原料處理；將竹葉除去雜物、洗凈；干燥后粉碎過50目篩，得到竹葉粉；
[0026] 步驟（2)、負壓提??；向所述步驟（1)的竹葉粉中加入PH值為2.0、質(zhì)量分數(shù)為 70%的己醇溶液（所述竹葉粉和己醇溶液按照l:10(g/ml)的料液比浸提，即按照Ig竹葉 粉添加10ml己醇溶液的比例）；在負壓容器中浸提1.化后過濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā) 明所述的異荘草素提取物。所述負壓提取的條件為；負壓-0. 〇65Mpa，溫度30°C。
[0027] 經(jīng)HPLC測定，最終異荘草素提取物中，異荘草素的純度為11.8%。
[002引實施例3 ;
[0029] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[0030] 步驟（1)、原料處理；將竹葉除去雜物、洗凈；
[003U 步驟（2)、負壓提?。合蛩霾襟E（1)的竹葉粉中加入PH值為2.0、質(zhì)量分數(shù) 為75%的己醇溶液（所述竹葉和己醇溶液按照l:12(g/ml)的料液比浸提，即按照Ig竹 葉添加12ml己醇溶液的比例）；在負壓容器中浸提1.化后過濾并收集濾液，濃縮濃縮至 比重10 (波美計測量），得本發(fā)明所述的異荘草素提取物。所述負壓提取的條件為；負 壓-0. 075Mpa，溫度 30°C。
[0032] 經(jīng)HPLC測定，最終異荘草素提取物中，異荘草素的純度為8. 5%。
[0033] 實施例4 ;
[0034] 一種從竹葉中制備異荘草素提取物的方法，包括W下步驟：
[003引步驟（1)、原料處理；將竹葉除去雜物、洗凈；干燥后粉碎過20目篩，得到竹葉粉；
[0036] 步驟（2)、負壓提取；向所述步驟（1)的竹葉粉中加入去離子水（所述竹葉粉和去 離子水按照l:15(g/ml)的料液比浸提，即按照Ig竹葉粉添加15ml去離子水的比例）；在 負壓容器中浸提1.化后過濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā)明所述的異荘草素提取物。所述負 壓提取的條件為；負壓-0. 〇65Mpa，溫度30°C。
[0037] 經(jīng)HPLC測定，最終異荘草素提取物中，異荘草素的純度為8. 6%。
[003引實施例5嗜酸粒細胞性細胞調(diào)亡誘導試驗和MBP激酶活性實驗
[0039] 嗜酸粒細胞性細胞調(diào)亡誘導試驗：試驗根據(jù)Vermes等的方法（Journal of Immunological Methods 184卷39-51頁1995年）進行。使嗜酸粒細胞性細胞HL-60細 胞懸浮于RPMI1640培養(yǎng)基中，細胞濃度為1-3 X 1〇6細胞/ml。向該細胞懸浮液500 y 1中 添加被檢測物質(zhì)（上述實施例1-4中最后收集得到的異荘草素提取物）或培養(yǎng)基，使異荘 草素提取物在細胞懸浮液中的濃度為100 y g/ml，在37°C、5% Ch的條件下培養(yǎng)6小時或 24小時。離屯、洗凈后，加入磯脂獻結(jié)合蛋白（Annexin)V緩沖液，然后添加5ul磯脂獻結(jié)合 蛋白V-門TC。通過流動血細胞計數(shù)法，W磯脂獻結(jié)合蛋白V陽性細胞作為細胞調(diào)亡誘導細 胞，用相對總細胞數(shù)的百分比評價。
[0040] MBP激酶活性試驗：試驗根據(jù)De Souza等的方法炬lood 99卷3432-3438頁2002 年）進行。將嗜酸粒細胞性細胞化-60細胞懸浮于RPMI1640培養(yǎng)基，細胞濃度為1-3X1Q6 細胞/ml。該細胞懸浮液500 y 1中添加被檢測物質(zhì)或培養(yǎng)基，使?jié)舛葹?00 y g/ml，在37°C、 5% 0)2的條件下培養(yǎng)6小時或24小時。離屯、洗凈后，添加可溶解緩沖液，溶解細胞，使用含 有MBP 5mg/ml的凝膠進行電泳。凝膠經(jīng)脫變性、再變性處理后，用32P-ATP標記，實施3小 時的磯酸化反應。凝膠干燥后，使用圖象分析儀解析放射活性。在36kDa生長出標記帶時， 記做MBP激酶活化陽性（+)。
[0041] 異荘草素提取物在化-60細胞中觀察到了濃度依賴性的細胞調(diào)亡誘導。另外進行 凝膠MBP激酶分析（In-gel MBP kinase assay)時，異荘草素提取物激活36kDa MBP激酶。 W上結(jié)果提示。異荘草素提取物對嗜酸粒細胞能誘導細胞調(diào)亡，該細胞調(diào)亡與36kDa MBP 激酶有關。由此推斷本發(fā)明異荘草素提取物中含有可W用于抗嗜酸粒細胞性炎癥作用藥物 的成分。
[0042] 所得結(jié)果如下表1所示：
[0043] 確認實施例2具有強的細胞調(diào)亡誘導活性，并伴有MBP激酶的活化。
[0044] 表 1
[0045]
【主權(quán)項】
1. 一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟（1)、原料處理：將竹葉除雜、洗凈； 步驟（2)、負壓提取：將所述步驟（1)處理的原料放入負壓容器中，加入提取溶劑，在所 述負壓容器中浸提1-2h后過濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā)明所述的異葒草素提取物； 所述負壓提取的條件為：負壓為-〇. 〇65Mpa~-0. 075Mpa，溫度30~35°C;所述原料和 提取溶劑按照1:10~1:15(g/ml)的料液比浸提。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，所述 步驟（1)中，所述原料除雜后，還進行以下處理：將洗凈后的竹葉干燥后粉碎過20-60目篩。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，所述 步驟（2)中，所述提取溶劑為去離子水、或者PH值為1.0-3. 0、質(zhì)量分數(shù)為65-85%的乙醇 溶液。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，所述 步驟⑵中， 所述負壓提取的條件為：負壓為-〇. 〇65Mpa，溫度35°C ; 所述提取溶劑為所述乙醇溶液為PH值為2. 0、質(zhì)量分數(shù)為65%的乙醇溶液； 所述原料和提取溶劑按照1:10(g/ml)的料液比浸提。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從竹葉中制備異葒草素提取物的方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟(1)、原料處理：將竹葉除雜、洗凈；步驟(2)、負壓提?。簩⑺霾襟E(1)處理的原料放入負壓容器中，加入提取溶劑，在所述負壓容器中浸提1-2h后過濾并收集濾液，濃縮，得本發(fā)明所述的異葒草素提取物；所述負壓提取的條件為：負壓為-0.065Mpa～-0.075Mpa，溫度30～35℃；所述原料和提取溶劑按照1:10～1:15(g/ml)的料液比浸提。本發(fā)明采用負壓提取，通過控制負壓提取時的料液比、負壓條件和溫度條件等因素，制備得到高純度的異葒草素提取物。
【IPC分類】C07D407-04
【公開號】CN104650052
【申請?zhí)枴緾N201510078150
【發(fā)明人】季進軍
【申請人】寧波杰順生物科技有限公司
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月13日