(lH，brs，H-12)，C-3-GlUA:4.89(lH，d，J = 7.3Hz，H-l，）；C_2，-Gal: 5. 51 (1H, d, J = 7·5Ηζ，Η-1" );C-3，-Ara:6.06(lH，brs，H-l"，）.13CNMR(150MHz，pridine-d 5):S38.6( C-l)，26. 6 (C-2)，91. 5 (C-3)，43. 6 (C-4)，55. 9 (C-5)，18. 8 (C-6)，36. 5 (C-7)，41. 0 (C-8)，46 ? 9 (C-9)，36. 8 (C-10)，24. 2 (C-Il)，125. 2 (C-12)，143. 7 (C-13)，47. 7 (C-14)，67. 5 (C-15)，7 3. 5 (C-16)，48. 3 (C-17)，41. 3 (C-18)，46. 9 (C-19)，36. 3 (C-20)，78. 4 (C-21)，73. 3 (C-22)，2 2. 2 (C-23)，63. I (C-24)，15. 9 (C-25)，17. 3 (C-26)，21. 0 (C-27)，63. 3 (C-28)，29. 5 (C-29)，2 0· 2 (C-30)，105. 2(C-3-GlcUA-l' ），76. 5 (C-2，），86. 0 (C-3，），71. 3 (C-4，），78. 7 (C-5，），169 ? 6(06'），104.8(02' -Glc-1" )，73. 5(C-2" ),75.1 (C-3" )，69. 7(C-4" )，76. 7(C-5") ，61.7(C-6" )，lll.l(C-3，-Ara-1"，），83.6(C-2"，），77.5(C-3"，），85.4(C-4" )，' 62.3 (C-5"，），167.3(C-21-Ang-l)，128.0(C-21-Ang-2)，138.9(C-21-Ang-3)，16.0(C-21-Ang-4)，20.7(C-21-Ang-5)，167.3(C-22-Ang-l)，127.8(C-22-Ang-2)，138.5(C-22-Ang-3)，15. 9 (C-22-Ang-4)，20. 2 (C-22-Ang-5)，52. 3 (C-6' -OCH3) ·
[0101] 化合物18 3-0-(3 ' -0-a-L-呋喃阿拉伯糖基-2 ' -O-β-D-吡喃半乳 糖基）-β -D-6 '-甲基酯-0-吡喃葡萄糖醛酸基-24-羥基-21，22-二-0-當(dāng)歸酰 基-barringogenol C
[0102] 白色粉末（甲醇），10%濃硫酸/乙醇溶液顯紫色。1!1匪1?(6001抱，？4(^116-(1 5):5· 54(lH，brs，H-12)，C-3-GlUA:4.89(lH，d，J = 7·3Ηζ，Η-1，）；C_2，-Gal: 5. 51 (1H, d, J = 7·5Ηζ，Η-1" );C-3，-Ara:6.06(lH，brs，H-l"，）.13CNMR(150MHz，pridine-d 5):S38.4( C-l)，26. 5 (C-2)，91. 6 (C-3)，43. 6 (C-4)，56. O (C-5)，18. 4 (C-6)，33. I (C-7)，41. 6 (C-8)，46 .7(C-9), 36. 4(C-10), 24. O(C-ll), 125. 2(C-12), 142. 7 (C-13), 41. 6 (C-14), 34. 8 (C-15), 6 8. 6 (C-16)，48. O (C-17)，40.0 (C-18)，47. 2 (C-19)，36. 3 (C-20)，78. 7 (C-21)，73. 5 (C-22)，2 7. 5 (C-23)，63. 2 (C-24)，15. 5 (C-25)，16. 6 (C-26)，27. 5 (C-27)，63. 5 (C-28)，29. 5 (C-29)，2 0· 3 (C-30)，104. 8(C-3-GlcUA-l'），78. 7 (C-2，），86. 3 (C-3，），71. 5 (C-4，），77. 5 (C-5，），169 ? 8(06'），103.9(C-2' -Glc-1" )，75.5(C-2" )，78.2(C-3" )，69.5(C-4" )，78.7(C-5") ，61.3(C-6")，111.2(C-3,-Ara-l",)，83.6(C-2" ,)，77.8(C-3",)，85.4(C-4",)，62· 3 (C-5 " ' )，167. 7 (C-21-Ang-l)，128. 9 (C-2)，137. I (C-3)，15. 8 (C-4)，20. 8 (C-5)，168. I (C -22-Ang-l)，129. O (C-2)，137. 2 (C-3)，15. 9 (C-4)，21. O (C-5)，52. 3 (C-6' -OCH3) ·
[0103] 化合物19 3-0- (3 ' -O- a -L-呋喃阿拉伯糖基-2 ' -O- β -D-吡喃半乳糖 基）-β -D-6 ' - 丁基酯-0-吡喃葡萄糖醛酸基-21-0-當(dāng)歸?；?22-0-(2-甲基）-丁酰 基-Rl-barrigenol
[0104] 白色粉末（甲醇），10%濃硫酸/乙醇溶液顯紫色。4匪1?(6001抱，？4(^116-(15):5· 54(lH，brs，H-12)，C-3-GlUA:4.91(lH，d，J = 7.3Hz，H-l' ）；C-2，-Gal:5.53(lH，d，J = 7·5Ηζ，Η-1" );C-3，-Ara:6.03(lH，brs，H-l"，）.13CNMR(150MHz，pridine-d 5):S38.9( C-l)，26. 5 (C-2)，89. 9 (C-3)，39. 6 (C-4)，55. 5 (C-5)，18. 8 (C-6)，36. 4 (C-7)，40. 9 (C-8)，47 ? I (C-9)，36. 9 (C-10)，24. 0 (C-Il)，125. 2 (C-12)，143. 7 (C-13)，47. 7 (C-14)，67. 5 (C-15)，7 2. 9 (C-16)，48. 5 (C-17)，41. 4 (C-18)，46. 8 (C-19)，36. 7 (C-20)，78. 4 (C-21)，73. I (C-22)，2 7. 8 (C-23)，16. 7 (C-24)，15. 7 (C-25)，17. 5 (C-26)，21. I (C-27)，63. I (C-28)，29. 5 (C-29)，2 0· 2(C-30)，105. 2(C-3-GlcUA-l' ），76.4(C-2，），86.0(C-3，），71.3(C-4，），78.7(C-5，），169 ? 6(06'），104.8(02' -Gal-1" ),73.4(C-2" ),75.1 (C-3" )，69. 7(C-4" )，76. 7(C-5") ，61.8(C-6")，lll.l(C-3,-Ara-l",)，83.6(C-2" ,)，77.5(C-3",)，85.4(C-4",)，62· 2(C-5"，），167. 5(C-21-Ang-1)，128. 6(C-21-Ang-2)，138. 7(C-21-Ang-3)，15. 8(C-21-Ang -4)，21.1(C-21-Ang-5)，176.4(C-22-MB-l)，41.0(C-22-MB-2)，29.6(C-22-MB-3)，11.84(C-22-MB-4)，17. 0(C-22-MB-5)，65. I(C-6' -n-Bu-1)，30. 8(C-6' -n-Bu-2)，19. 2(C-6' -n-B u-3), 13. 7(C-6r -n-Bu-4).
[0105] 實(shí)施例4 :19個(gè)三萜皂苷類化合物及兩種文冠果提取物的體外抗人腦膠質(zhì)瘤 (U87-MG)、人肝癌細(xì)胞OfepG-2)、人胰腺癌細(xì)胞（PANC-I)、人胃癌細(xì)胞（NCI-N87)、人結(jié)腸 癌細(xì)胞（C〇1〇-320DM)的活性測(cè)定
[0106] 通過CCK-8檢測(cè)試劑盒檢測(cè)化合物1-19和2種提取物對(duì)5種人源腫瘤細(xì)胞株 (Col〇-320DM，!fepG-2、U87-MG、PANC-l、NCI-N87)的增殖抑制作用 IC5。。實(shí)驗(yàn)操作
[0107] (1)細(xì)胞培養(yǎng)
[0108] 收集對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，計(jì)數(shù)，用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞，然后調(diào)整細(xì)胞濃度至合 適濃度，接種96孔板，每孔接種100 μ 1細(xì)胞懸液，最后細(xì)胞在37°C，100%相對(duì)濕度，5% CO2 培養(yǎng)箱中孵育24小時(shí)。
[0109] (2)樣品制備
[0110] 用DMSO稀釋化合物至相應(yīng)濃度。
[0111] (3)ic5。實(shí)驗(yàn)
[0112] (a)接種細(xì)胞于96孔板，每孔加100 μ I細(xì)胞懸液，于37°C，100%相對(duì)濕度，5% CO2 培養(yǎng)箱中孵育24小時(shí)。
[0113] (b)加入用DMSO稀釋的待測(cè)化合物，設(shè)置10個(gè)濃度點(diǎn)。
[0114] (c)加藥后的細(xì)胞置于37°C，100%相對(duì)濕度，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育72小時(shí)；
[0115] (d)吸棄培養(yǎng)基，加入含10% CCK-8的完全培養(yǎng)基置于37°C培養(yǎng)箱中孵育2~6 小時(shí)，染色。
[0116] (e)酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長處的吸光度，以650nm處吸光度作為參比，計(jì)算抑制 率。
[0117] (5)數(shù)據(jù)處理
[0118] 按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長的抑制率：
[0119] 腫瘤細(xì)胞生長抑制率％ = [(Ac-AsV(Ac-Ab)] X 100%
[0120] As:樣品的OA (細(xì)胞+CCK-8+待測(cè)化合物）
[0121] Ac:陰性對(duì)照的 OA (細(xì)胞 +CCK-8+DMS0)
[0122] Ab:陽性對(duì)照的OA (培養(yǎng)基+CCK-8+DMS0)
[0123] 采用軟件Graphpad Prism 5擬合IC50曲線并計(jì)算出IC50值。
[0124] 19個(gè)化合物及兩種文冠果提取物的IC50值見下表
[0125]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 三萜皂苷類化合物，其特征在于，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：其中，&可以為當(dāng)歸?；h(huán)氧當(dāng)歸?；蛘唠p當(dāng)歸?；〈倪惶腔?；r2可以為當(dāng)歸 ?；?、乙?；蛘?-甲基丁酰基；R3為三糖基或者雙糖基取代；R4為羥基或者乙?；?；1? 5為 羥基或者氫；R6為甲基或者羥甲基；R7為單糖基、雙糖基、三糖基、當(dāng)歸酰基取代的糖基、正 丁酯基取代的糖基、甲酯基取代的糖基。2. 權(quán)利要求1所述化合物，其特征在于，選自：3. -種藥物組合物，包含權(quán)利要求1或2所述的三萜皂苷類化合物和藥學(xué)上可接受的 載體。4. 文冠果果殼提取物，其特征在于，采用以下方法提取： 取干燥文冠果果殼、果柄粉碎，然后按照重量體積比1:2-1:8加入50 % -70 %乙醇，回 流提取1-3次，每次0. 5-4h，所得提取液經(jīng)減壓回收溶劑濃縮，濃縮液依次用1-5倍體積的 乙酸乙酯、正丁醇萃取等體積的乙酸乙酯和正丁醇萃取1-5次，得文冠果正丁醇萃取物，即 得提取物1。5. 文冠果果殼提取物，其特征在于，采用以下方法提取： 取干燥文冠果果殼，粉碎，然后按照重量體積比1:2-1:8加入50% -70 %乙醇，回流提 取1-3次，每次0. 5-4h，所得提取液經(jīng)減壓回收溶劑濃縮，濃縮液經(jīng)大孔樹脂AB-8分離純 化，以乙醇-水為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，收集30% -80%乙醇提取物，即得提取物2。6. 如權(quán)利要求1或2所述的三萜皂苷類化合物的制備方法，其特征在于， 取干燥文冠果果殼、果柄粉碎，然后按照重量體積比1:2-1:8加入50 % -70 %乙醇，回 流提取1-3次，每次0. 5-4h，所得提取液經(jīng)減壓回收溶劑濃縮，濃縮液依次用1-5倍體積的 乙酸乙酯、正丁醇萃取等體積的乙酸乙酯和正丁醇萃取1-5次，得文冠果正丁醇萃取物，即 得提取物1。 或取干燥文冠果果殼，粉碎，然后按照重量體積比1:2-1:8加入50% -70%乙醇，回流 提取1-3次，每次0. 5-4h，所得提取液經(jīng)減壓回收溶劑濃縮，濃縮液經(jīng)大孔樹脂AB-8分離純 化，以乙醇-水（0 %，10 %，30 %，50 %，80 %，95 % )為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，收集30 % -80 % 乙醇提取物，即得提取物2; 應(yīng)用硅膠柱色譜對(duì)提取物1或2進(jìn)行分離，用二氯甲烷：甲醇：水30:1:1~1: 1:1進(jìn) 行梯度洗脫，所得流份可經(jīng)薄層檢識(shí)后合并，所得流份應(yīng)用中低壓或HPLC色譜制備分離， 以甲醇：水（10:90~100:0)或乙腈：水（10:90~100:0)進(jìn)行梯度洗脫制備的化合物，或 流份以反復(fù)硅膠柱色譜法，以氯仿-甲醇或二氯甲烷-甲醇（100:0~〇: 100)為流動(dòng)相梯 度洗脫，所得流份經(jīng)薄層檢識(shí)后合并，流份再用Sephadex LH-20脫色素，以甲醇/水為流動(dòng) 相，分離制備得到化合物。 所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿、二氯甲烷中的一種 或幾種。所述提取溫度在于30-KKTC，提取時(shí)間0. 5-4h ;所述分離方法為綜合色譜分離法。7.具有如下結(jié)構(gòu)的三萜皂苷類化合物的制備方法，其特征在于，取干燥文冠果果殼、果 柄粉碎，然后按照重量體積比1:2-1:8加入50% -70%乙醇，回流提取1-3次，每次0. 5-4h， 所得提取液經(jīng)減壓回收溶劑濃縮，濃縮液依次用1-5倍體積的乙酸乙酯、正丁醇萃取等體 積的乙酸乙酯和正丁醇萃取1-5次，得文冠果正丁醇萃取物，即得提取物1。 或取干燥文冠果果殼，粉碎，然后按照重量體積比1:2-1:8加入50% -70%乙醇，回 流提取1-3次，每次0. 5-4h，所得提取液經(jīng)減壓回收溶劑濃縮，濃縮液經(jīng)大孔樹脂AB-8分 離純化，以乙醇-水（0%，10%，30 %，50 %，80 %，95 % )為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，，收集 30% -80%乙醇提取物，即得提取物2 ; 應(yīng)用硅膠柱色譜對(duì)提取物1或2進(jìn)行分離，用二氯甲烷：甲醇：水30:1:1~1: 1:1進(jìn) 行梯度洗脫，所得流份可經(jīng)薄層檢識(shí)后合并，所得流份應(yīng)用中低壓或HPLC色譜制備分離， 以甲醇：水（10:90~100:0)或乙腈：水（10:90~100:0)進(jìn)行梯度洗脫制備的化合物，或 流份以反復(fù)硅膠柱色譜法，以氯仿-甲醇或二氯甲烷-甲醇（100:0~〇: 100)為流動(dòng)相梯 度洗脫，所得流份經(jīng)薄層檢識(shí)后合并，流份再用Sephadex LH-20脫色素，以甲醇/水為流動(dòng) 相，分離制備得到化合物。 所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿、二氯甲烷中的一種 或幾種。所述提取溫度在于30-KKTC，提取時(shí)間0. 5-4h ;所述分離方法為綜合色譜分離法；8. -種藥物制劑，其特征在于，以權(quán)利要求1或2所述的化合物或權(quán)利要求3所述的組 合物或權(quán)利要求4或5所述的文冠果果殼提取物作為活性成分。9. 權(quán)利要求1或2所述的化合物或權(quán)利要求3所述的組合物或權(quán)利要求4或5所述的 提取物在在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。10. 如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤為腦膠質(zhì)瘤、肝癌、胰腺癌、胃癌 或結(jié)腸癌。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了13種新的齊墩果烷型五環(huán)三萜類化合物以及6種具有齊墩果烷型五環(huán)三萜類化合物的結(jié)構(gòu)和制備方法，一種文冠果果殼、果柄提取物的提取方法，以及上述化合物及提取物在抑制人腦膠質(zhì)瘤、人肝癌、人胰腺癌、人胃癌、人結(jié)腸癌中的應(yīng)用。本發(fā)明公開的有抗癌活性的化合物及提取物可從文冠果果殼、果柄及其他無患子科植物中提取，或從其他生物資源中提取，也可通過化學(xué)合成方法得到。
【IPC分類】C07J63/00, A61P35/00, A61K36/77, A61K31/704
【公開號(hào)】CN105061545
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510504060
【發(fā)明人】王曉波, 高慧媛, 王達(dá), 襲榮剛, 趙林, 吳立軍
【申請(qǐng)人】中國人民解放軍第二一〇醫(yī)院
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年8月17日