er WQ15和原始菌株Monascus ruberGIM3.240，按照實(shí)施例2的方法進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，與實(shí)施例2所不同的是在發(fā)酵第三天后，補(bǔ)加1.25g葡萄糖，致使發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖濃度升至60g/L左右，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)到6天，按照實(shí)施例2的方法測定胞外發(fā)酵液色價、色調(diào)。
[0063]結(jié)果如圖3所示，突變菌株發(fā)酵胞外液用紫外分光光度計(jì)測定350、470、510nm處的吸光度分別為80.40,4.14、1.00AU/mL，得到發(fā)酵胞外紅曲黃色調(diào)為80.40 (AU350/AU510);原始菌株發(fā)酵胞外液用紫外分光光度計(jì)測定350、470、510nm處的吸光度分別為16.8、
1.93,0.64AU/mL，得到胞外紅曲黃色調(diào)為26.25 (AU350/AU510)。可見，突變菌株胞外黃色素色階是原始菌株的4.79倍，且胞外紅曲黃色調(diào)提高了 2.06倍。
[0064]實(shí)施例4利用高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株按補(bǔ)料方法制備紅曲黃色素
[0065]將高產(chǎn)胞外黃色素紅曲霉菌株Monascus ruber WQ15和原始菌株Monascus ruberGIM3.240，按照實(shí)施例2的方法進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，與實(shí)施例2所不同的是在發(fā)酵第三天后，補(bǔ)加7.5g的葡萄糖，使發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖濃度升高至310g/L左右，繼續(xù)培養(yǎng)到15天，按照實(shí)施例2的方法測定胞外發(fā)酵液色價、色調(diào)。
[0066]結(jié)果如圖4所示，突變菌株發(fā)酵胞外液用紫外分光光度計(jì)測定350、470、510nm處的吸光度分別為134.90,6.52,1.15AU/mL，得到發(fā)酵胞外紅曲黃色調(diào)為117.30 (AU350/AU510);原始菌株發(fā)酵胞外液用紫外分光光度計(jì)測定350、470、510nm處的吸光度分別為
16.77,2.86、1.2AU/mL，得到胞外紅曲黃色調(diào)為13.98 (AU350/AU510)?？梢姡蛔兙臧恻S色素色階是原始菌株的8.04倍，且胞外紅曲黃色調(diào)提高了 7.39倍。
[0067]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株，其特征在于:所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株的名稱為紅色紅曲霉(Monascus ruber)WQ15，保藏編號為CGMCC N0.10910，于2015年7月2日保藏于位于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。2.權(quán)利要求1所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株的選育方法，其特征在于包含以下步驟: (1)孢子懸浮液制備:出發(fā)菌株接種于PDA培養(yǎng)基斜面上，在28?30°C培養(yǎng)2?3d后，用生理鹽水沖洗菌種斜面，經(jīng)玻璃珠打散，去除菌絲，得到含有孢子的懸浮液； (2)紫外誘變:將步驟(I)得到的含有孢子的懸浮液置于平底培養(yǎng)皿中，在15W紫外燈垂直距離下30cm放置，同時磁力攪拌照射一定時間，進(jìn)行紫外誘變； (3)平板分離篩選:接著將步驟(2)誘變后的懸浮液稀釋后涂布于PDA平板，28?30°C恒溫避光倒置培養(yǎng)，待長出菌落后，挑選出菌落形態(tài)發(fā)生變化的菌株，進(jìn)行單菌落劃線分離，經(jīng)反復(fù)分離純化得到較純的誘變菌株； (4)發(fā)酵選育: ①種子液的制備:將步驟(3)純化后得到的誘變菌株接種于滅菌的種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)增殖，每50mL種子培養(yǎng)基接種3?5個培養(yǎng)4_7天的單菌落，150?200rpm培養(yǎng)28?32h，使種子培養(yǎng)基有成熟的孢子，得到種子液； ②發(fā)酵培養(yǎng)及高糖純化:將種子液按8%接種量(V/V)接種到25mL發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)2?4天，然后加入葡萄糖直至糖濃度達(dá)到300g/L以上，再培養(yǎng)直至10?16天，離心、抽濾，得到含胞外紅曲色素的上清液，檢測胞外色素的色價和色調(diào)，得到高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株的選育方法，其特征在于: 步驟(4)中所述的種子培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖lg，酵母浸粉0.15g，魚粉蛋白胨0.5g，KCl 0.025g，KH2PO40.2g，F(xiàn)eSO4.7H20 0.5mg，用蒸餾水定容至 50mL，pH 自然； 步驟(4)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖1.25g，(NH4) 2S040.125g，KH2PO40.125g，MgSO4.7H20 0.0125g，KCl 0.0125g，F(xiàn)eSO4.7H20 0.25mg，ZnSO4.7H200.25mg，MnSO4.H2O 0.75mg，用蒸饋水定容至 25mL，pH 自然。4.權(quán)利要求1所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株在生產(chǎn)紅曲黃色素中的應(yīng)用。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株在生產(chǎn)紅曲黃色素中的應(yīng)用，其特征在于包括如下步驟: 1、將所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行好氧發(fā)酵，使得紅曲霉菌處于對數(shù)生長期或穩(wěn)定期； I1、接著補(bǔ)加碳源，該碳源在發(fā)酵培養(yǎng)基中的濃度為至少60g/L，繼續(xù)好氧發(fā)酵； II1、將發(fā)酵好的發(fā)酵液進(jìn)行固液分離，取液體，得到胞外水溶性紅曲黃色素。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株在生產(chǎn)紅曲黃色素中的應(yīng)用，其特征在于:步驟(I)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成如下??每10mL基本發(fā)酵培養(yǎng)基中，含葡萄糖 5g、(NH4) 2S040.5g、KH2PO40.5g、KCl 0.05g MgSO4.7H20 0.05g、FeSO4.7H20 1.0mg、ZnSO4.7H20 1.0mg、MnSO4.H2O 3.0mg，用蒸餾水定容至 100ml，pH 自然。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株在生產(chǎn)紅曲黃色素中的應(yīng)用，其特征在于:步驟(I)中所述的紅曲霉菌株在接種于發(fā)酵培養(yǎng)基時，是將紅曲霉菌進(jìn)行活化、擴(kuò)大培養(yǎng)后再接種入發(fā)酵培養(yǎng)基中。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株在生產(chǎn)紅曲黃色素中的應(yīng)用，其特征在于: 步驟(I)中所述的好氧發(fā)酵的時間如下:當(dāng)紅曲霉菌的接種量為體積百分比5?10%時，好氧發(fā)酵的時間為2?4天； 步驟(I)、(II)中所述的好氧發(fā)酵的條件為:27?34°C、150?250rpm振蕩培養(yǎng)； 步驟(II)中所述的碳源在發(fā)酵培養(yǎng)基中的濃度為60?300g/L，上限不作限制； 步驟(II)中所述的碳源為葡萄糖、蔗糖和甘油或同類碳源中的至少一種； 步驟(II)中所述的好氧發(fā)酵時間為6?16天； 步驟(III)中所述的固液分離的方法為離心。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株在生產(chǎn)紅曲黃色素中的應(yīng)用，其特征在于: 步驟(I)中所述的好氧發(fā)酵的時間如下:當(dāng)紅曲霉菌的接種量為體積百分比8%時，好氧發(fā)酵的時間為3天； 步驟(I)、(II)中所述的好氧發(fā)酵的條件為:30°C、ISOrpm振蕩培養(yǎng)。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株及其選育方法與應(yīng)用。該紅曲霉菌株的名稱為紅色紅曲霉(Monascus？ruber)WQ15，保藏編號為CGMCC？No.10910，于2015年7月2日保藏于位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。該高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株通過出發(fā)菌株進(jìn)行紫外誘變選育得到。通過常規(guī)液態(tài)發(fā)酵，該高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株的胞外黃色素色階比原始菌株提高了72％；在補(bǔ)加300g/L葡萄糖發(fā)酵時，該高產(chǎn)胞外黃色素的紅曲霉菌株的胞外黃色素色階比原始菌株提高了7.04倍。因此，可將其用于生產(chǎn)胞外黃色素。CGMCC No. 1091020150702
【IPC分類】C12N15/01, C12P17/18, C12N13/00, C12R1/645, C12N1/14
【公開號】CN105062895
【申請?zhí)枴緾N201510449543
【發(fā)明人】吳振強(qiáng), 陳功, 汪梅花
【申請人】華南理工大學(xué)
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年7月28日