一種豬血降血壓肽的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種豬血降血壓肽的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]豬血易于獲得，成本低，并且通過血液開發(fā)出的產(chǎn)品有各種功能性，因此豬血有著保健品開發(fā)的前景，尤其在國外一些發(fā)達(dá)國家如歐洲一些國家及日本，豬血的利用率已達(dá)50%以上，他們主要是開發(fā)肽類試劑、肽類藥物以及功能食品和食品添加劑。這些功能性肽類，比人工合成添加劑更安全，更衛(wèi)生，迎合了社會發(fā)展的需要。因此，以豬血為底物開發(fā)生物活性肽，可以提高生豬屠宰加工企業(yè)產(chǎn)品附加值，顯示出巨大的市場前景。
[0003]降血壓肽(ACEIP)又稱ACE抑制肽，是一類具有顯著降血壓功效的多肽短鏈物質(zhì)，可競爭性地與ACE結(jié)合達(dá)到降壓效果。
[0004]天然食品中的降血壓肽通常是由蛋白質(zhì)水解酶在溫和條件下水解蛋白質(zhì)而獲得的一類多肽，具有降壓效果且無副作用。研究表明，豬血中具有較強(qiáng)降血壓肽，因此開發(fā)研究一種從豬血中提取、純化降血壓肽的成熟方法，可以一舉多得。目前從豬血中提取降血壓肽的技術(shù)方法和產(chǎn)品尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，本發(fā)明提供一種成本低、效果好的利用豬血蛋白制取降血壓肽的方法。
[0006]本發(fā)明為達(dá)到以上目的，是通過這樣的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:提供一種豬血降血壓肽的制備方法，包括以下步驟:
(1)采集新鮮豬血，以5g/ L的梓檬酸鈉抗凝，在4°C、8000r / min離心lOmin，收集下層沉淀，以獲得紅血球；將紅血球加入同等體積的生理鹽水沖洗并離心兩次后加入2倍體積的蒸餾水，超聲波細(xì)胞破碎輔助溶血20min，然后在4°C、4000r / min離心lOmin，得到血紅蛋白溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫?br> (2)取血紅蛋白溶液，加入適量的胰蛋白酶酶解，攪拌，2mol/LNaoH溶液維持體系PH8.0,45-50°C，6-10h ;將酶解反應(yīng)產(chǎn)物迅速升溫至85°C并保持此溫度10?15分鐘，再迅速冷卻至50°C以下，調(diào)節(jié)pH值至5.0左右，8000r / min離心15min，獲得上清酶解液，4°C冷減備用；
(3)活性炭用量為酶解液總重的5-30%，溫度55°C，攪拌脫色20-30min;再進(jìn)行粗濾處理后得粗濾酶解液；將粗濾酶解液在0.1?0.2Mpa的工作壓力和O?45°C的工作溫度下，采用截留分子質(zhì)量為5kD-2kD超濾膜進(jìn)行超濾處理，截留5kD-2kD蛋白肽酶解液，得降血壓肽酶解液，_20°C保存。
[0007]以上所述的一種利用豬血紅蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是:所述步驟(2)中胰蛋白酶是酶比活力25\10411/^;胰蛋白酶加酶量是20001] / g。
[0008]本發(fā)明的一種豬血降血壓肽的制備方法，具有如下優(yōu)點(diǎn): 1.本發(fā)明所制備的降血壓肽是豬血紅蛋白經(jīng)生物酶水解而得，屬于天然提取物，具有天然、無毒、無污染、無殘留、無副作用、高效等特點(diǎn)，是一種新型的綠色降血壓藥物。
[0009]2.本發(fā)明所采用的原料來源廣泛，價(jià)格低廉，經(jīng)過本發(fā)明的技術(shù)轉(zhuǎn)化可以有效的提高豬血副產(chǎn)物的附加值，對繼續(xù)促進(jìn)生豬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展有重要的意義。
[0010]3.本發(fā)明的產(chǎn)品可以作為藥品、保健食品、食品、食品添加劑等，工藝科學(xué)合理，操作簡單，具有較強(qiáng)的工業(yè)實(shí)施性。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1
(I)采集新鮮豬血100L，以5g / L的梓檬酸鈉抗凝，在4°C、8000r / min離心lOmin，收集下層沉淀，以獲得紅血球約45L (固含30%);在紅血球中加入45L生理鹽水蒸餾水沖洗并離心兩次后加入90體積的蒸餾水，超聲波細(xì)胞破碎輔助溶血20min，然后在4°C、4000r /min離心lOmin，得到血紅蛋白溶液135L。
[0012](2)取適量血紅蛋白溶液，加入IlOg胰蛋白酶酶解(酶比活力為25X 104u/g)，攪拌，2mol/LNaoH溶液維持體系pH8.0，50°C，5h ;將酶解反應(yīng)產(chǎn)物迅速升溫至85°C并保持此溫度15分鐘，再迅速冷卻至O?30°C以終止酶解反應(yīng)，調(diào)節(jié)pH值至7.0左右，8000r /min離心15min，獲得上清酶解液130L。
[0013](3)酶解液中加入活性炭用量20kg，溫度55°C，攪拌脫色30min ;再進(jìn)行粗濾處理后得粗濾酶解液；將粗濾酶解液在0.1?0.2Mpa的工作壓力和O?45°C的工作溫度下，采用截留分子質(zhì)量為5kD及2KD超濾膜進(jìn)行處理，收集截留5kD-2kD蛋白肽(降血壓肽)酶解液 65L，-20°C保存。
[0014]檢測結(jié)果，所得降血壓肽對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制率為76.68%，降血壓作用明顯。
[0015]實(shí)施例2
(I)采集新鮮豬血50L，以5g / L的梓檬酸鈉抗凝，在4°C、8000r / min離心lOmin，收集下層沉淀，以獲得紅血球約23L (固含30%);在紅血球中加入23L生理鹽水蒸餾水沖洗并離心兩次后加入46體積的蒸餾水，，超聲波細(xì)胞破碎輔助溶血20min，然后在4°C、4000r /min離心lOmin，得到血紅蛋白溶液69L。
[0016](2)取適量血紅蛋白溶液，加入55g胰蛋白酶酶解(酶比活力為25X 104u/g)，攪拌，2mol/LNaoH溶液維持體系pH8.0，50°C，5h ;將酶解反應(yīng)產(chǎn)物迅速升溫至85°C并保持此溫度15分鐘，再迅速冷卻至50°C以下，調(diào)節(jié)pH值至7.0左右，8000r / min離心15min，獲得上清酶解液67L。
[0017](3)酶解液中加入活性炭用量10kg，溫度55°C，攪拌脫色30min ;再進(jìn)行粗濾處理后得粗濾酶解液；將粗濾酶解液在0.1?0.2Mpa的工作壓力和O?45°C的工作溫度下，采用截留分子質(zhì)量為5kD及2KD超濾膜進(jìn)行處理，收集截留5kD-2kD蛋白肽(降血壓肽)酶解液 33L，-20°C 保存。
[0018]檢測結(jié)果，所得降血壓肽對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制率為76.42%，降血壓作用明顯。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種豬血降血壓肽的制備方法，其特征是包括以下步驟: (1)采集新鮮豬血，以5g/ L的梓檬酸鈉抗凝，在4°C、8000r / min離心lOmin，收集下層沉淀，以獲得紅血球；將紅血球加入同等體積的生理鹽水沖洗并離心兩次后加入2倍體積的蒸餾水，超聲波細(xì)胞破碎輔助溶血20min，然后在4°C、4000r / min離心lOmin，得到血紅蛋白溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫? (2)取血紅蛋白溶液，加入適量的胰蛋白酶酶解，攪拌，2mol/LNaoH溶液維持體系PH8.0,45-50°C，6-10h ;將酶解反應(yīng)產(chǎn)物迅速升溫至85°C并保持此溫度10?15分鐘，再迅速冷卻至50°C以下，調(diào)節(jié)pH值至7.0左右，8000r / min離心15min，獲得上清酶解液，4°C冷減備用； (3)活性炭用量為酶解液總重的5-30%，溫度55°C，攪拌脫色20-30min;再進(jìn)行粗濾處理后得粗濾酶解液；將粗濾酶解液在0.1?0.2Mpa的工作壓力和O?45°C的工作溫度下，采用截留分子質(zhì)量為5kD-2kD超濾膜進(jìn)行超濾處理，截留5kD-2kD蛋白肽酶解液，得降血壓肽酶解液，_20°C保存。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用豬血紅蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是:所述步驟(2)中胰蛋白酶是酶比活力25X 104u/g。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用豬血紅蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是:所述步驟(2)中胰蛋白酶加酶量是2000U / go
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種豬血降血壓肽的制備方法，包括以下步驟：將豬全血分離得豬血球，再將豬血球溶血、酶解、脫色、超濾，即得降血壓肽；所述胰蛋白酶的加酶量是2000U／g，在pH8、溫度45℃～50℃條件下，酶解反應(yīng)時(shí)間6～10h，此條件下降血壓肽酶解液對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制率為75%以上，具有顯著的降血壓作用。
【IPC分類】C07K1/34, C12P21/06
【公開號】CN105112485
【申請?zhí)枴緾N201510620518
【發(fā)明人】寧發(fā)子, 王玉峰, 鄧軍
【申請人】重慶都好生物科技有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年9月26日