源于人多能干細(xì)胞的胰腺細(xì)胞的包封的制作方法
【專利說明】源于人多能干細(xì)胞的胰腺細(xì)胞的包封
[0001] 相關(guān)申請的奪叉引用
[0002] 本申請為非臨時申請，其依據(jù)35U.S.C. §119(e)要求2008年11月14日提交的 題為"源于HES細(xì)胞的胰腺祖細(xì)胞的包封"的美國臨時專利申請No. 61/114, 857和2008年 12月9日提交的題為"胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞的包封"的美國臨時專利申請No. 61/121，084的優(yōu) 先權(quán)。上文列出的各優(yōu)先權(quán)申請的公開內(nèi)容通過引用將其全文并入本文。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及源于人胚胎干細(xì)胞和其 它人多能細(xì)胞的細(xì)胞的包封。
[0004] 發(fā)曰月背景
[0005] 人胚胎干（hES)細(xì)胞和從成人分化的細(xì)胞誘導(dǎo)的多能干（iPS)細(xì)胞特別適合于細(xì) 胞治療應(yīng)用，這是因為它們是多能的且可自我更新。基于在分化多能干細(xì)胞培養(yǎng)物中能夠 出現(xiàn)極為多樣的細(xì)胞類型，成功實現(xiàn)有效的、定向分化對于人多能干細(xì)胞的治療應(yīng)用是有 用的。使用不同生長和信號傳導(dǎo)因子以及小分子對于使人多能干細(xì)胞有效的定向分化成各 種中間細(xì)胞類型，包括胰腺細(xì)胞系是必要的。
[0006] 發(fā)明概沐
[0007] 本文所述的實施方案涉及在哺乳動物中生成胰島素的方法，所述方法通過下述步 驟進(jìn)行：向宿主哺乳動物中提供可植入的腔室（chamber)，向所述腔室提供源于人多能干 細(xì)胞（例如hES或iPS細(xì)胞）的胰腺祖細(xì)胞，使所述胰腺祖細(xì)胞成熟成為成熟的胰腺激素 分泌細(xì)胞，其中所述胰腺激素分泌細(xì)胞為響應(yīng)體內(nèi)葡萄糖刺激生成胰島素的胰島素分泌細(xì) 胞，從而在所述哺乳動物中體內(nèi)生成胰島素。在一些實施方案中，所述腔室在引入胰腺祖細(xì) 胞之前植入到哺乳動物中。在其它實施方案中，在引入胰腺祖細(xì)胞之前使所述腔室血管化。 還在其它實施方案中，在植入之前將細(xì)胞引入所述腔室。
[0008] -個實施方案涉及在哺乳動物中生成胰島素的方法，所述方法包括：(a)向可植 入的可半滲透裝置中提供人rox-i陽性的胰腺祖細(xì)胞群；(b)使該細(xì)胞群在所述裝置中成 熟為胰島，其中所述胰島包含內(nèi)分泌細(xì)胞和腺泡細(xì)胞，并且其中所述內(nèi)分泌細(xì)胞至少為響 應(yīng)體內(nèi)葡萄糖刺激生成胰島素的胰島素分泌細(xì)胞，從而體內(nèi)為所述哺乳動物生成胰島素。
[0009] 另一個實施方案涉及用于將細(xì)胞群植入到哺乳動物宿主中的細(xì)胞包封組件。一方 面，該組件包含限定用于包封活細(xì)胞的至少一個腔室的密封外緣。另一方面，該組件包含具 有外周邊緣的壁機(jī)構(gòu)，其中該組件包含在所述壁機(jī)構(gòu)的外周邊緣的第一密封件（seal)，從 而形成該包封組件。在一些方面，該組件包含有效降低腔室容積的第二密封件。
[0010] 另一個實施方案涉及冷凍保存的人胰腺祖細(xì)胞群。在該實施方案的一個方面，所 述細(xì)胞群適合移植到哺乳動物中。
[0011] 另一個實施方案涉及獲得適于移植的細(xì)胞群的方法。在該實施方案的一個方面， 通過包括下述步驟的方法獲得適于移植的細(xì)胞：a)人胰腺祖細(xì)胞群接觸冷凍保存溶液，從 而獲得用于冷凍保存的細(xì)胞群；b)降低用于冷凍保存的祖細(xì)胞的溫度至大約-196°C，以獲 得冷凍保存的細(xì)胞；和C)提高所述冷凍保存的細(xì)胞的溫度，從而獲得適于移植的胰腺祖細(xì) 胞群。在一些實施方案中，用于冷凍保存的祖細(xì)胞的溫度降低至低于0°C、-10°C、-20°C、-3 (rc、-4(rc、-5(rc、-6(rc、-7(rc、-8(rc、-9(rc、-i〇(rc、-ii(rc、-i2(rc、-i3(rc、-i4(rc、-i5(rc、-i6(rc、-i7(rc、-i8(rc、-i9(rc、-2〇(rc、-2i(rc、-22(rc、-23(rc、-24(rc、-25(rcs-26(rc。
[0012] 附圖簡沐
[0013] 圖1為雙開口包封裝置的透視圖，該包封裝置具有內(nèi)部超聲焊接部分（weld)以分 隔主腔。
[0014] 圖2為圖1所示的包封裝置的頂截面視圖。
[0015] 圖3為圖1所示的包封裝置的側(cè)視圖，其具有沿著內(nèi)部超聲焊接區(qū)通過該裝置中 心獲取的橫截面。
[0016] 圖4為圖1所示的包封裝置的側(cè)視圖，其具有沿著開口的軸并通過被分隔的腔的 中心獲取的橫截面。
[0017]圖5為圖1所示的包封裝置的端視圖，其具有通過被分隔的腔獲取的橫截面。
[0018] 圖6為包封裝置的透視圖，其沒有裝載口且包含定期超聲點焊部分以分隔內(nèi)腔。
[0019] 圖7為圖6所示的包封裝置的頂部橫截面視圖。
[0020] 圖8為圖6所示的包封裝置的側(cè)視圖，其具有通過被分隔的腔中心獲取的橫截面。
[0021] 圖9為圖6所示的包封裝置的端視圖，其具有通過被分隔的腔的橫截面。
[0022] 圖10為包封裝置的透視圖，其沒有裝載口且包含定期超聲點焊部分以分隔內(nèi)腔。 每個點焊部分都去除了中心以促進(jìn)血管化。
[0023] 圖11為圖10所示的包封裝置的放大視圖。
[0024] 優(yōu)詵實施方案的詳沐
[0025] 本文所述的實施方案涉及通過在哺乳動物中植入處在包封裝置中的源于人胚胎 干細(xì)胞的人胰腺祖細(xì)胞，從而體內(nèi)生成胰島素的方法，所述包封裝置包括生物可相容的基 于聚乙二醇的裝置和機(jī)械/醫(yī)學(xué)裝置。
[0026] 除非另有說明，本文使用的術(shù)語為相關(guān)領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)常規(guī)用法 所理解的。除了下文提供的術(shù)語定義以外，分子生物學(xué)中的常用術(shù)語的定義還可 見于Rieger等人，1991Glossaryofgenetics:classicalandmolecular, 5th Ed.，Berlin:Springer-Verlag;和見于CurrentProtocolsinMolecularBiology,F. M.Ausubel等人，Eds.，CurrentProtocol,ajointventurebetweenGreenePublishing Associates，Inc，andJohnWiley&Sons，Inc·，（1998 增刊）。應(yīng)該理解，在本說明書和權(quán)利 要求書中使用的"a"或"an"可以表示一個或多個，取決于其使用的上下文。因此，例如，述 及"細(xì)胞"可以表示可以使用至少一個細(xì)胞。
[0027] 此外，出于本說明書和所附權(quán)利要求書的目的，除非另有說明，所有表示成分的數(shù) 量的數(shù)字、材料的百分比或比例、反應(yīng)條件和在本說明書和權(quán)利要求書中使用的其它數(shù)值 在所有情況下都將被理解為通過術(shù)語"約"修飾。相應(yīng)地，除非相反指出，在以下說明書和所 附權(quán)利要求書中提出的數(shù)值參數(shù)為可以依據(jù)本發(fā)明想要獲得的期望性質(zhì)而改變的近似值。 6每個數(shù)值參數(shù)都應(yīng)該至少根據(jù)報道的有效數(shù)字和通過應(yīng)用常規(guī)舍入技術(shù)來理解，絲毫不 想將等同原則的應(yīng)用限制于權(quán)利要求書的范圍。
[0028]在一個實施方案中，使用生物可相容的聚乙二醇（PEG)包封源于hES的細(xì)胞?；?于PEG的包封更詳細(xì)地描述于題為"用于治療疾病的包封生物材料的植入"的美國專利No. 7, 427, 415 ;題為"用于包封生物材料的凝膠"的美國專利No. 6, 911，227 ;以及題為"用 于包封生物材料的凝膠"的美國專利No. 6, 911，227、5, 529, 914、5, 801，033、6, 258, 870中， 它們通過引用以其全文并入本文。
[0029] 在另一個實施方案中，包封裝置為TheraCyte裝置（Irvine,California)。 TheraCyte細(xì)胞包封裝置進(jìn)一步描述于美國專利No. 6, 773, 458 ;6, 156, 305 ;6, 060, 640 ; 5, 964, 804 ；5, 964, 261 ；5, 882, 354 ；5, 807, 406 ；5, 800, 529 ；5, 782, 912 ；5, 741, 330 ； 5, 733, 336 ；5, 713, 888 ；5, 653, 756 ；5, 593, 440 ；5, 569, 462 ；5, 549, 675 ；5, 545, 223 ； 5, 453, 278 ;5, 421，923 ;5, 344, 454 ;5, 314, 471 ;5, 324, 518 ;5, 219, 361 ;5, 100, 392 ;和 5, 011，494中，上述所有專利通過全文引用以其全文并入本文。
[0030] 在一個實施方案中，描述了用于從多能干細(xì)胞培養(yǎng)物或源于hES的細(xì)胞培養(yǎng)物的 單細(xì)胞懸液制備hES細(xì)胞團(tuán)塊懸液的方法。所述多能干細(xì)胞培養(yǎng)物可以最初在成纖維細(xì) 胞飼養(yǎng)層（feeder)上培養(yǎng)，或者它們可以不使用飼養(yǎng)層。分離hESC和在人飼養(yǎng)層細(xì)胞上 培養(yǎng)hESC的方法描述于題為"用于在人飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞的方法"的美國專 利No. 7, 432, 104中，其通過引用以其全文并入本文。用于制備hES細(xì)胞團(tuán)塊懸液培養(yǎng)物和 /或源于hES的細(xì)胞團(tuán)塊懸液培養(yǎng)物的多種方法詳細(xì)描述于2008年10月4日提交的題為 "干細(xì)胞團(tuán)塊懸液組合物及其分化方法"的美國申請No. 12/264, 760中，其通過引用以其全 文并入本文。
[0031] 本文所述的分化培養(yǎng)條件和源于hES的細(xì)胞類型基本上類似于上文的D'Amour等 人2006年所述的，或描述于美國專利No. 7, 534,608 ;2007年3月2日提交的美國專利申 請No. 11/681,687 ;和2007年7月5日提交的美國專利申請No. 11/773,944中的那些，它 們的公開內(nèi)容通過引用以其全文并入本文。D'Amour等人描述了 5步分化方案：階段1 (主 要結(jié)果為定形內(nèi)胚層產(chǎn)生），階段2(主要使roxi陰性的前腸內(nèi)胚層產(chǎn)生），階段3 (主要使 roxi陽性的前腸內(nèi)胚層產(chǎn)生），階段4(主要使胰腺內(nèi)胚層或胰腺內(nèi)分泌祖細(xì)胞產(chǎn)生）和階 段5 (主要使表達(dá)激素的內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生）。
[0032] 本文所用的"定形內(nèi)胚層（DE) "是指能夠分化成為腸管細(xì)胞或源于腸管的器官的 多能內(nèi)胚層細(xì)胞系。根據(jù)某些實施方案，定形內(nèi)胚層細(xì)胞為哺乳動物細(xì)胞，且在優(yōu)選實施方 案中，定形內(nèi)胚層細(xì)胞為人細(xì)胞。在一些實施方案中，定形內(nèi)胚層細(xì)胞表達(dá)或未能顯著表 達(dá)某些標(biāo)志物。在一些實施方案中，在定形內(nèi)胚層細(xì)胞中表達(dá)一種或多種選自CER、F0ZA2、 SOX17、CXCR4、MIXLl、GATA4、HNF3-0、GSC、FGF17、VWF、CALCR、F0XQ1、CMK0R1 和CRIP1 的標(biāo) 志物。在其它實施方案中，選自0CT4、α-胎蛋白（AFP)、血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM)、SPARC、S0X7 和HNF4_a中的一種或多種標(biāo)志物不在定形內(nèi)胚層細(xì)胞中顯著表達(dá)。為了清楚起見，將定 形內(nèi)胚層細(xì)胞區(qū)別于其它內(nèi)胚層譜系的細(xì)胞，例如前腸內(nèi)胚層或腸內(nèi)胚層或roxi陰性的 前腸內(nèi)胚層細(xì)胞，這些細(xì)胞相比定形內(nèi)胚層都可識別地表達(dá)HNF4-a。定形內(nèi)胚層細(xì)胞群及 其制備方法還描述于題為"定形內(nèi)胚層"的美國專利No. 7, 510, 876,其以其全文并入本文。 [0033] 其它實施方案還涉及名為"roxi陰性的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞"或"前腸內(nèi)胚層細(xì)胞"或 "腸內(nèi)胚層"或其等同物的細(xì)胞培養(yǎng)物。在一些實施方案中，前腸內(nèi)胚層細(xì)胞表達(dá)S0X17、HNFl-0、HNF4-a和F0XA1標(biāo)志物，但不實質(zhì)上表達(dá)？0)(1、4??、5(?7、5(?1。？0)(1陰性的前 腸內(nèi)胚層細(xì)胞群及其制備方法還描述于2006年10月27日提交的題為"表達(dá)Η)Χ1的背部 和腹部前腸內(nèi)胚層"的美國申請No. 11/588, 693,其通過引用以其全文并入本文。并且，與 定形內(nèi)胚層細(xì)胞或階段1的細(xì)胞相比，腸內(nèi)胚層可識別地表達(dá)HNF4-a;參見下文實施例。
[0034] 本文所述的其它實施方案涉及"roxi陽性的偏向背部的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞"、"roxi 陽性的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞"或"PDX1陽性的內(nèi)胚層"或其等同物的細(xì)胞培養(yǎng)物。在一些實施 方案中，PDX1陽性的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞表達(dá)roxi、HNF6、S0X9和PR0X1標(biāo)志物，但不實質(zhì)上 表達(dá)^?6.1、？了？認(rèn)、0?六、〇]^(：、5(?17、!1即18或!1即431口3。？0乂1陽性的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞群 及其制備方法還描述于2006年10月27日提交的題為"表達(dá)Η)Χ1的背部和腹部前腸內(nèi)胚 層"的美國申請No. 11/588, 693,其通過引用以其全文并入本文。
[0035] 本文所述的其它實施方案涉及"胰腺祖細(xì)胞"、"PDX1陽性的胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞"、 "roxi陽性的胰腺祖細(xì)胞"、"胰腺上皮"、"PE"或其等同物的細(xì)胞培養(yǎng)物。roxi陽性的胰腺 祖細(xì)胞是多能的，且可以在胰腺中產(chǎn)生多種細(xì)胞，包括但不限于腺泡細(xì)胞、導(dǎo)管細(xì)胞和內(nèi)分 泌細(xì)胞。在一些實施方案中，與不會可識別地表達(dá)roxi和NKX6. 1的非前胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞 相比，該roxi陽性的胰腺祖細(xì)胞表達(dá)高水平的這些標(biāo)志物。roxi陽性的胰腺祖細(xì)胞還表達(dá) 低水平的PTF1A、CPA、cMYC、NGN3、PAX4、ARX和NKX2. 2、INS、GCG、GHRL、SST和PP，甚至不 表達(dá)。
[0036] 可選擇地，其它實施方案涉及"roxi陽性的胰腺內(nèi)胚層端細(xì)胞"或其等同物的細(xì)胞 培養(yǎng)物。在一些實施方案中，類似于roxi陽性的胰腺祖細(xì)胞，PDX1陽性的胰腺內(nèi)胚層端細(xì) 胞表達(dá)高水平的roxi和NKX6.1，但是不同于roxi陽性的胰腺祖細(xì)胞，roxi陽性的胰腺內(nèi) 胚層端細(xì)胞額外地表達(dá)高水平的PTF1A、CPA和cMYC。roxi陽性的胰腺內(nèi)胚層端細(xì)胞還表 達(dá)低水平的NGN3、PAX4、ARX和NKX2. 2、INS、GCG、GHRL、SST和PP，甚至不表達(dá)。
[0037] 其它實施方案涉及"胰腺內(nèi)分泌前體細(xì)胞"、"胰腺內(nèi)分泌祖細(xì)胞"或其等同物的細(xì) 胞培養(yǎng)物。胰腺內(nèi)分泌祖細(xì)胞是多能的，且產(chǎn)生成熟的內(nèi)分泌細(xì)胞，包括α、β、δ和PP 細(xì)胞。在一些實施方案中，相比其它非內(nèi)分泌祖細(xì)胞類型，胰腺內(nèi)分泌祖細(xì)胞表達(dá)高水平的 NGN3、ΡΑΧ4、ARX和ΝΚΧ2. 2。胰腺祖細(xì)胞還表達(dá)低水平的INS、GCG、GHRL、SST和ΡΡ，甚至不 表達(dá)。
[0038] 其它實施方案還涉及"胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞"、"胰腺激素分泌細(xì)胞"、"胰腺胰島激素表 達(dá)細(xì)胞"或其等同物的細(xì)胞培養(yǎng)物，所述等同物是指體外源于例如α、β、δ和/或PP細(xì) 胞或其組合的多能細(xì)胞的細(xì)胞。該內(nèi)分泌細(xì)胞可以是多激素的或單激素的，例如表達(dá)胰島 素、胰高血糖素、胃饑餓素、生長激素抑制素和胰腺多肽或其組合。因此，該內(nèi)分泌細(xì)胞可以 表達(dá)一種或多種胰腺激素，其具有人胰島細(xì)胞的至少部分功能。胰島激素表達(dá)細(xì)胞可以是 成熟的或不成熟的。基于某些標(biāo)志物的差別表達(dá)，或者基于它們的功能，例如體外或體內(nèi)葡 萄糖響應(yīng)，可以將不成熟的胰島激素表達(dá)細(xì)胞與成熟的胰島激素表達(dá)細(xì)胞相區(qū)分。胰腺內(nèi) 分泌細(xì)胞還可以表達(dá)低水平的NGN3、PAX4、ARX和ΝΚΧ2. 2,甚至不表達(dá)。
[0039] 相比間質(zhì)的定形內(nèi)胚層細(xì)胞，上文細(xì)胞類型中的絕大多數(shù)為上皮化的。在一些實 施方案中，胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞表達(dá)選自表3的一種或多種標(biāo)志物和/或相關(guān)的下述美國申請 的表4中的一種或多種標(biāo)志物：2006年10月27日提交的題為"表達(dá)Η)Χ1的背部和腹部前 腸內(nèi)胚層"的美國申請11/588,693,以及2005年4月26日提交的題為"表達(dá)Η)Χ1的內(nèi)胚 層"的美國申請No. 11/115, 868,這些申請通過引用以其全文并入本文。
[0040] 在某些實施方案中，術(shù)語"富集的"、"分離的"、"分開的"、"分選的"、"純化的"或 通過耗盡而純化或其等同方式是指這樣的細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞群或細(xì)胞樣品：其含有至少 15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、 90 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %或100 %的目的細(xì)胞系或具有某種細(xì)胞表型，例如表達(dá)該 細(xì)胞表型的某細(xì)胞標(biāo)志物或不表達(dá)該細(xì)胞表型的某細(xì)胞標(biāo)志物基因特征的目標(biāo)細(xì)胞。用于 純化、富集、分離、分開、分選和/或耗盡源于hES細(xì)胞的內(nèi)胚層譜系細(xì)胞的方法還描述于 2008年4月21日提交的題為"用于純化內(nèi)胚層和源于人胚胎干細(xì)胞的胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞的 方法"的美國申請NO. 12/107, 020,其通過引用以其全文并入本文。
[0041] 本文使用的術(shù)語"接觸"（即，例如可分化細(xì)胞的細(xì)胞接觸化合物）意在包括將化 合物和細(xì)胞一起體外孵育（例如將化合物添加到培養(yǎng)的細(xì)胞中）。術(shù)語"接觸"不意在包括 細(xì)胞體外暴露于包含ErbB3配體和任選地可能天然存在于受試者中的TGF-β家族成員的 限定的細(xì)胞培養(yǎng)基（即可能作為自然生理過程的結(jié)果而發(fā)生的暴露）。細(xì)胞和包含ErbB3 配體和任選的TGF-β家族成員的限定的細(xì)胞培養(yǎng)基接觸的步驟可以以任何適合的方式進(jìn) 行。例如，可以在貼壁培養(yǎng)中或在懸浮培養(yǎng)中處理細(xì)胞。應(yīng)該理解，與限定的培養(yǎng)基接觸的 細(xì)胞可以進(jìn)一步用細(xì)胞分化環(huán)境處理，以穩(wěn)定細(xì)胞或分化細(xì)胞。
[0042] 本文使用的術(shù)語"分化"是指比其來源的細(xì)胞類型更為分化的細(xì)胞類型的產(chǎn)生。在 一些實施方案中，術(shù)語"分化"表示產(chǎn)生比其來源的細(xì)胞具有更少命運選擇的細(xì)胞。因此該 術(shù)語包括部分和終末分化的細(xì)胞類型。源于hES細(xì)胞的分化細(xì)胞通常被稱為源于hES的細(xì) 胞或源于hES的細(xì)胞團(tuán)塊培養(yǎng)物，或源于hES的單細(xì)胞懸液，或源于hES的細(xì)胞貼壁培養(yǎng)物 等。
[0043] 本文使用的術(shù)語"可分化的細(xì)胞"用于描述可以分化成至少部分成熟的細(xì)胞，或 者可以參與細(xì)胞分化，例如與可以分化成至少部分成熟的細(xì)胞的其它細(xì)胞融合的細(xì)胞或 細(xì)胞群。本文使用的"部分成熟的細(xì)胞"、"祖細(xì)胞"、"不成熟細(xì)胞"、"前體細(xì)胞"、"多能細(xì) 胞"或其等同物包括不是終末分化的那些細(xì)胞，例如定形內(nèi)胚層細(xì)胞、roxi陰性的前腸內(nèi) 胚層細(xì)胞、PDX1陽性的胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞，roxi陽性的胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞進(jìn)一步包括roxi陽 性的前胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞和roxi陽性的胰腺內(nèi)胚層端細(xì)胞。所有細(xì)胞都是表現(xiàn)出來自相同 器官或組織的成熟細(xì)胞的至少一個表型特征，例如形態(tài)或蛋白表達(dá)，但是可以進(jìn)一步分化 成至少一種其它細(xì)胞類型。例如，正常的成熟肝細(xì)胞典型地表達(dá)例如白蛋白、纖維蛋白原、 α-1-抗胰蛋白酶、凝血素凝集因子（prothrombinclottingfactor)、轉(zhuǎn)鐵蛋白和解毒酶 (detoxificationenzyme)，如細(xì)胞色素P-450等及其它的蛋白。因此，本文使用的"部分成 熟的肝細(xì)胞"可以表達(dá)白蛋白或另外的一種或多種蛋白，或者開始具有正常的成熟肝細(xì)胞 的外觀或功能。
[0044] 本文使用的術(shù)語"基本上"是指大的限度或程度，例如，上下文中的"基本上類似 的"可以用于描述一種方法以大范圍或程度類似于另一種方法。然而，本文使用的術(shù)語"基 本上不含"，例如，"基本上不含"或"基本上不含污染物"，或"基本上不含血清"或"基本上 不含胰島素或胰島素樣生長因子"或其等同物表示，溶液、培養(yǎng)基、補(bǔ)充物、賦形劑等為至 少98%或至少98. 5%、或至少99%、或至少99. 5%、或至少100%不含血清、污染物或其等 同物。在一個實施方案中，限定的培養(yǎng)基不含血清，或為100%不含血清，或基本上不含血 清。相反地，本文使用的術(shù)語"基本上類似的"或其等同方式表示，組合物、過程、方法、溶液、 培養(yǎng)基、補(bǔ)充物、賦形劑等為至少50 %、55 %、60 %、65 %、70 %、75 %、80 %、至少85 %、至少 90%、至少95%、或至少99%類似于在本文說明書中之前描述的、或在以其全文并入本文 的之前描述的過程或方法中的過程、方法、溶液等。
[0045] 并且，本文與細(xì)胞群的組合物一起使用的術(shù)語"實質(zhì)上"或"基本上"表示占主導(dǎo) 地位地或主要地。在一些實施方案中，這些術(shù)語表示細(xì)胞群中的至少85%的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少86 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少87 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少88 %的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少89%的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少90%的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少91%的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少92 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少93 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少94 %的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少95 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少96 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少97 %的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少98 %的細(xì)胞、或細(xì)胞群中的至少99 %的細(xì)胞。在其它實施方案中，術(shù)語或短語 "實質(zhì)上不含"或"基本上不含"是指在任何細(xì)胞培養(yǎng)物中存在最低量或少量的組