一種新的木藜蘆烷型二萜化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從半枝蓮的干燥全草中分離得到的一種具有 治療肝癌作用的木藜蘆烷型二萜化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]半枝蓮Scutellaria barbata，又名并頭草、狹葉韓信草，為唇形科黃苳屬多年生 草本植物，常生于潮濕的池沼、田頭、溪澗等地，浙江、江蘇、安徽、河南、四川、廣東、福建、陜 西等省均有分布。半枝蓮性寒，味辛、苦，具有清熱解毒、散瘀止血、利尿消腫等功效，用于治 療疔瘡腫毒、咽喉腫痛、跌打傷痛、水腫、黃疸、蛇蟲咬傷等，是民間常用中草藥。
[0003] 半枝蓮的化學成分研究始見于1981年王兆全發(fā)表在《中草藥》的"半枝蓮化學成分 研究簡報"，至今研究人員通過現(xiàn)代植物化學研究技術(shù)從半枝蓮中分離鑒定出上百種單體 化合物，主要是黃酮類和二萜類，還有生物堿、留體、酚類、鞣質(zhì)及多糖等成分。黃酮類化合 物是半枝蓮的主要成分之一，結(jié)構(gòu)涵蓋黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇、查爾酮等多種類型。二 萜是半枝蓮另一類主要化學成分，也是目前研究重點。結(jié)構(gòu)主要為新克羅烷型二萜，包括半 枝蓮二砲（scutellone)類、半枝蓮內(nèi)酯（scuterivulactone)類、半枝蓮生物堿 (Scutebarbatine)類和半枝蓮素(barbatin)類等?；钚詫嶒烇@示，二砲類生物堿具有良好 的細胞毒性，能有效抑制多種人腫瘤細胞的生長。
[0004] 現(xiàn)代藥理活性研究表明，半枝蓮具有良好的抗腫瘤活性，因此作為抗腫瘤和抗炎 藥物廣泛用于原發(fā)性肝癌、肺癌、宮頸癌等惡性腫瘤的輔助治療。其中野黃芩苷、漢黃芩素、 芹菜素、木犀草素等具有良好的抗菌、抗氧化和抗腫瘤活性。此外，半枝蓮還能通過抑制腫 瘤血管生成來阻斷人體對腫瘤細胞的供養(yǎng)，從而達到抑制腫瘤細胞增殖和轉(zhuǎn)移的目的。除 上述活性外，半枝蓮還具有保肝、抗病毒和利尿排石等活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從半枝蓮的干燥全草中分離得到的一種具有治療肝癌 作用的木藜蘆烷型二萜化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將半枝蓮的干燥全草粉碎， 用75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽 和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用75%乙醇洗脫8個柱 體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75%乙醇洗脫 浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為90:1、65:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1、15:1 和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010]進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80%。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實驗ECD值比較；
[0020] 圖3為化合物（I)對HepG2及L02細胞增殖的影響(n = 3)。
【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0022]實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0023] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0024]制備方法：（a)將半枝蓮的干燥全草（8kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提?。?5L X 3 次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(351g)和正丁醇萃取 物；（b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積， 再用75%乙醇洗脫8個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏 (133g);(c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為90:1(8個柱體 積）、65:1 (8個柱體積）、30:1 (6個柱體積）、15 :1 (8個柱體積)和1:1 (5個柱體積）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4(31g)用正相硅膠進一步分離，依次用 體積比為25:1(8個柱體積）、15:1(10個柱體積)和5:1(6個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2(17g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純 的化合物（I)(31mg)。
[0025] 結(jié)構(gòu)確證：無色針狀（甲醇），熔點239~240°C ;HR-ESIMS顯示[M+Na] +為m/z 399.2120，結(jié)合核磁特征可得分子式為C22H32O5，不飽和度為7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρηι， DMS0-d6,400MHz):H-l(2.71，t，J = 9.3)，H-2(2.17，m)，H-2(1.79，dd，J=14.6,9.3)，H-3 (3.64，d，J = 4.6)，H-6(2.27，d，J=10.0)，H-7(1.75，d，J=14.4)，H-7(2.36，dd，J=14.4， 10.0)，H-9(2.19，m)，H-ll(1.48，m)，H-ll(1.77，m)，H-12(1.97，m)，H-12(1.75，m)，H-13 (2.ll，t，J=3.0)，Η-14(5·16，s)，H-15(1.87，s)，H-15(1.86，s)，H-17(1.28，s)，H-18 (0.92，s)，H-19(1.12，s)，H-20(5.22，s)，H-20(5.14，s)，16-0Ac(2.05，s);核磁共振碳譜數(shù) 據(jù) Sc(ppm，DMS0-d6，100MHz):58.8(CH，l-C)，36.3(CH2,2-C)，84.4(CH，3-C)，51.1(C，4-C)， 76.7(C，5-C)，53.1(CH，6-C)，40.5(CH2,7-C)，50.1(C，8-C)，58.2(CH，9-C)，153.3(C，10-C)，26.4(CH2，n-C)，27.8(CH2，12-C)，54.3(CH，13-C)，82.0(CH，14-C)，56.2(CH 2，15-C)， 79.9(C，16-C)，24.4(CH3，17-C)，22.7(CH 3，18-C)，20.1(CH3，19-C)，112.1(CH2,20-C)， 172.6(C，16-0AC)，21.3(CH 3，16-0AC);碳原子標記參見圖1。紅外光譜表明該化合物含有羥 基（3435cm-3和酯羰基（1716cm-匪R譜顯示三個甲基0!11.28,8，!1 3-17;1.12,8，!13-19;0.92，s，H3-18)，一個乙?；?0H2.O5，s)，兩個環(huán)外烯烴質(zhì)子 0H5.22，s，H-2Oa;5.14，s， H-20b)，一個?；醮渭谆|(zhì)子0耶.16,8，!1-14)，兩個含氧次甲基質(zhì)子0!13.64，(1，了 = 4.6Hz，H-3;2.27，d，J=10.0Hz，H-6)，以及一個次甲基質(zhì)子（SH2.71，t，J = 9.3Hz，H-l)</3C 匪R和DEPT譜顯示了22個碳信號，一個酯羰基（SC172 · 6，-0C0CH3)，環(huán)外雙鍵〇(：153.3，(：-1〇;112丄(：-2〇)，四個季碳包括兩個含氧季碳0〇76.7，(：-5 ;79.9，(：-16;51.1，(：-4;5〇丄(：-8)，六個次甲基其中包括三個含氧次甲基0〇84.4，(：-3 ;82.〇，(：-14;58.8，(：-1;58.2，(：-9; 54.3,〇13;53.1，〇6)，五個亞甲基（3〇56.2,〇15;40.5，(：-7 ;36.3，(：-2;27.8，(：-12;26.4， C-11 )，以及四個甲基0C24.4，C-17; 22.7，C-18;21.3，-0C0CH3; 20.1，C-19)。兩個含氧碳信 號（δ〇76.7和53.1)以及氫質(zhì)子信號（δΗ2.27，d，J= 10.0Hz)表明該化合物含有一個5，6-環(huán) 氧基團。HMBC譜中，!1-13〇!12.11，^ = 3.〇他）與酯羰基0(：172.6)的相關(guān)性表明(：-130 C54.3)位連有一個乙酰氧基。H-9通常在木藜蘆烷型二萜類化合物中為β構(gòu)型。N0ESY譜中H-1和Η-9β的相關(guān)性表明Η-1為β構(gòu)型。H-2a/H-20a/H 3-l 8/Η-6/Η-3的相關(guān)性表明環(huán)Α和Β為順 式連接，且H-3和H-6為α構(gòu)型。Η_7α與H-14，H_20b與H-ΙΙα的相關(guān)性表明了環(huán)B和C為順式連 接，以及Η-14為α構(gòu)型。環(huán)C和D的順式連接是由N0ESY譜