一種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藻類培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 蝦青素(Astaxanthin)是一種酮式類胡蘿卜素，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的自然界中抗氧化 能力最強(qiáng)的物質(zhì)。動(dòng)物學(xué)及臨床試驗(yàn)表明天然蝦青素具有良好的生物安全性和超強(qiáng)的抗氧 化性(Martin,Mark E.&Miguel ,2003)，具有很好的抗炎癥、抗腫瘤、降血脂、延緩衰老、增強(qiáng) 免疫力、預(yù)防心血管疾病、防止體內(nèi)代謝和紫外線輻射產(chǎn)生的自由基造成組織和光氧化損 傷等功能(Lorenz，R.T.，Cysewski&G.R. ,2000)。此外，奸青素還有具有顯著的著色功能，主 要作為珍稀水產(chǎn)品、禽蛋、觀賞動(dòng)物的著色劑。由于天然蝦青素具有良好的生物活性和生物 安全性。因此，天然蝦青素在食品、醫(yī)藥化妝品、保健品、軟飲料加工及水產(chǎn)品、家禽和家畜 (雞、豬和牛）飼料添加劑等行業(yè)具有廣闊的市場(chǎng)前景(Martin,Mark E.&Miguel ,2003)，目 前國(guó)際市場(chǎng)天然奸青素的價(jià)格在5000-6000美元/kg(Astaxanthin-a superb natural antioxidant.Algatech.com)。
[0003] 目前，蝦青素的主要生產(chǎn)方法包括人工合成和生物獲取兩種方式。人工合成蝦青 素不僅價(jià)格昂貴，而且同天然蝦青素在結(jié)構(gòu)、功能、應(yīng)用、穩(wěn)定性、吸收效果和生物安全性等 方面差別顯著。除了人工合成的方法之外，天然蝦青素的生物來源一般有3種:水產(chǎn)品加工 工業(yè)的廢棄物、紅發(fā)夫酵母(Phaffia rhodozyma)和微藻（雨生紅球藻）（Higuera et al·， 2006)。然而，水產(chǎn)品加工工業(yè)的廢棄物中蝦青素含量較低，且提取費(fèi)用較高，不適于進(jìn)行大 規(guī)模生產(chǎn)，天然的紅發(fā)夫酵母中蝦青素平均含量也僅為0.40%，相比之下，雨生紅球藻中蝦 青素含量卻高達(dá)1.0%~3.0%，因此被看作是天然蝦青素的"濃縮品"和最佳生物來源 (01aizola，M.，Huntley&M.E.，2003)。雨生紅球藻蝦青素以其高含量、高品質(zhì)、高的生物活 性受到了廣大國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，成為近些年來國(guó)際上天然蝦青素生產(chǎn)的研究熱點(diǎn)，培養(yǎng) 雨生紅球藻已成為未來獲取天然蝦青素的最佳途徑，從而得到各國(guó)的大力推進(jìn)。
[0004] 雨生紅球藻的生活史相對(duì)比較復(fù)雜，伴隨著的細(xì)胞形態(tài)變化也比較明顯，最常見 的將紅球藻細(xì)胞生活史分為四個(gè)階段:細(xì)胞游動(dòng)階段、形成孢子階段、孢子成熟階段和萌發(fā) 階段；雨生紅球藻的細(xì)胞形態(tài)分為：綠色游動(dòng)細(xì)胞、綠色不動(dòng)細(xì)胞、褐色不動(dòng)細(xì)胞和紅色孢 子(Wenhui Gu et al.，2014)。當(dāng)環(huán)境條件改變，雨生紅球藻開始合成大量的蝦青素來抵御 不利環(huán)境。研究表明鹽脅迫是造成雨生紅球藻大量積累蝦青素的一個(gè)重要因素（陳峰等， 1999;邱保勝，2000;魏東等，2000)。
[0005] 我國(guó)大部分地區(qū)地下礦藏中含有豐富的芒硝;地下水中富含鐵離子。而就目前的 研究階段只有鐵離子對(duì)其影響的相關(guān)研究(Kobayashi M，Kakizono T.，1992)而沒有硫酸 鈉、硫酸鈉和鐵離子的交互作用的相關(guān)研究的文獻(xiàn)資料。因此，通過開展上述工作，尋找促 進(jìn)雨生紅球藻積累蝦青素的合適的硫酸鈉和鐵離子濃度，無疑可加快的雨生紅球藻工廠化 養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展步伐。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基， 該培養(yǎng)基用于誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)雨生紅球藻，可有效地提高蝦青素的含量，從而有效地 提高蝦青素的產(chǎn)量。
[0007] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明上述目的所采用的技術(shù)方案為：
[0008] -種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基中含有： Na2S04 1.25-1.95g f?嫁酸、II':鐵 0.0丨丨447-0.023971 g NaGI 1.5g K2HPO.j 0.04g MgS04.7H：O 0,075g CaC!；.2H20 0.036g 檸檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0.001 g
[0009] Na2(；O3 0.02 g hbBCb 0.00286 g MnCI：..4H；0 0.00186 g ZnS04.7H20 0.00022 g Na?.Mo04,2H'：0 0,00039 g CuS04.5H20 0.00008 g CoCi；,.6H20 0.00004 g Vm 0.000001 g V?i2 〇.〇〇〇〇〇〇01 g
[0010] VH 0.0000001 go
[0011] -種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基中含有： Na：S〇4 1.69g 檸檬酸亞鐵 0.019] 35g NaCl l.5g K2HPO4 0.04g MgS(：)4.7H20 0.075g CaCh.2H_:0 0.036g 檸檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0 001 g .Ra2C〇3 Q,.02 g:
[0012] H3BO; 0.00286 g MnCl2.4H；0 0.00186 g ZnS04.7H；-0 0.00022 g Na2Mo04.2H20 0.00039 g CuS04.5H：0 0.00008 g CoC1：..6H20 0.00004 g Vbi 0.000001 g Vbi2 〇.〇〇〇〇〇〇01 g Vh 0.0000001
[0013] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果和優(yōu)點(diǎn)在于：
[0014] 該培養(yǎng)基充分利用了硫酸鈉和鐵離子的交互作用對(duì)雨生紅球藻的影響，誘導(dǎo)培養(yǎng) 雨生紅球藻10天后，雨生紅球藻細(xì)胞中蝦青素的積累量達(dá)到最大。試驗(yàn)表明，用該培養(yǎng)基誘 導(dǎo)培養(yǎng)雨生紅球藻10天，與對(duì)比例1相比，雨生紅球藻細(xì)胞中生物量、蝦青素濃度、蝦青素含 量分別提高了 12.89%、49.54%、32.48%。由此可見，該培養(yǎng)基可有效地提高蝦青素的含 量，從而有效地提高蝦青素的產(chǎn)量，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0015] 圖1為實(shí)施例1的雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)雨生紅球藻過程中藻細(xì)胞的 形態(tài)變化圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0017] 實(shí)施例1
[0018] -種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基中含有： Na.：S04 1,25g 檸檬酸亞鐵 （).017709g Nad 1.5g K2HPO4 0.04g MgS0^.7H：0 0.075g CaCh.2 丨七0 0.036g 檸檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0.001 g Na.：CO, 0.02 g
[0019] H3BO3 0.00286 g MnCI；>,4H20 0.00186 g ZnS〇4.7H2〇 0.00022 g Na2Mo0.t.2H2〇 0.00039 g CuS04.5H：0 0.00008 g CoCl2,6H2〇 0.00004 g VBJ (維生素 Bl) 0.000001 g VB12 (維生素 B12) 〇.〇〇〇〇〇〇01 g i (維生素 H) 0.0000001 g〇
[0020] 該雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備方法，其步驟是：
[0021 ] 1、母液的配制
[0022] 1)將似(：1、1(2冊(cè)〇4、]\%5〇4.7!12〇丄&(：12.2!12〇、檸檬酸40了厶-2似、似2〇)37個(gè)組分按照 所需的量分別配制100倍的母液，再分別存放于4°c的冰箱中；
[0023 ] 2)將H3B〇3、MnCl 2 · 4H20、ZnS〇4 · 7H20、Na2Mo〇4 · 2H20、CuS〇4 · 5H20、CoCl 2 · 6H20、Vbi、Vbi2 和Vh9個(gè)組分按照所需的量混合配制1000倍的母液，再存在于4°C的冰箱中；
[0024] 2、培養(yǎng)基的配制
[0025]將按要求配制成100倍的母液的各組分分別取10mL/L，將按要求配制成1000倍的 母液的組分取lmL/L，所需的Na2S04和檸檬酸亞鐵按照所需的量現(xiàn)配現(xiàn)用，用蒸餾水定容至 1L后用1M的NaOH溶液或者HC1溶液調(diào)節(jié)pH至7.1，并用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌20分鐘，即得雨 生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0026] 實(shí)施例2
[0027] -種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基中含有： Na2S〇4 1.35g 檸檬酸亞鐵 0.013282g NaCl l.5g K2HP〇4 0.04g MgS〇4.7H20 0.075g CaCl；..2H：0 0.036g 梓檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0.001 g Na2CQ3 0,02 g
[0028] H3BO：1 0.00286 g MnCI2.4H20 0.00186 g ZnS〇4.7H20 0.00022 g Na2Mo〇4.2H20 0.00039 g CuS04.5H：0 0.00008 g CoCl：.6H；0 O.OOOQ4 g Vm 0.000001 g VBi：. 〇.〇〇〇〇〇〇01 g Vh 0.0000001
[0029]該雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備方法和實(shí)施例1相同，只是Na2S〇4和梓檬酸亞鐵 所需的量不同。
[0030] 實(shí)施例3
[0031] -種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基中含有： Na2S〇4 1,35g Ι?檬酸亞鐵 0.022136g NaCI 1.5g K：HP〇4 0.04g MgS04,7H20 0.075g CaCl：.2H：0 0.036g 梓檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0.001 g Na：C〇i 0.02 g
[0032] H3BO3 0.00286 g MnC'b，4H?0 0.00186 g Z11SQ4.7H2Q 0.00022 g Na2Mo04.2H：.0 0.00039 g CuS04.5H：0 0.00008 g CoCi2.6H20 0.00004 g VB1 0.000001 g VB12 〇.〇〇〇〇〇〇01 g ￥h 0.0000001 g,>
[0033] 該雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備方法和實(shí)施例1相同，只是Na2S〇4和梓檬酸亞鐵 所需的量不同。
[0034] 實(shí)施例4
[0035] -種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基中含有： Na2S04 1 35g 檸檬酸亞鐵 0,0:1770? NaCi 1.5g
[0036] K2HP〇4 0.04g MgS〇4.7H2〇 0.075g CaCb.2H2〇 0 036g 檸機(jī)酸 0.006 ：g EDTA-2Na 0.001 g Na:CO， 0.02 g H3BQ3 0.00286 g Μη01：.4Η：0 0.00186 g ZnS04.7H20 0.00022 g
[0037] Na2MoO^,2H20 0,00039 g CuS04.5H.〇 0.00008 g C0GI2.6H2O 0.00004 g ￥b1 0.000001 g ￥bi2 〇.〇〇〇〇〇〇01 g ￥h 〇.〇〇〇〇〇〇lgH
[0038] 該雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備方法和實(shí)施例1相同，只是Na2S〇4和梓檬酸亞鐵 所需的量不同。
[0039] 實(shí)施例5
[0040] -種雨生紅球藻的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基中含有： Na>SO.) 1.60g 檸檬酸亞鐵 0 011447g NaGl 1.5g K：HP〇4 0.04g MgS04.7H：0 (X075g CaCl：.2H，0 0.036g
[0041 ] 衧檬酸 0,006 g EDTA-2Na 0.001 g Ka，C03 0.02 g H3BO3 0.00286 g MnCl2.4H2〇 0.00186 g ZnSG4.7H2G 0.00022 g Na2