壁上還分別設(shè)有用于輸入生理鹽水的進(jìn)液管6、用于輸入空氣和C02的混合氣體的進(jìn)氣管5和用于輸入培養(yǎng)液的輸液管7，所述進(jìn)液管6、進(jìn)氣管5和輸液管7上均設(shè)有一用于調(diào)節(jié)輸入量的調(diào)節(jié)閥11，每個(gè)調(diào)節(jié)閥11均與所述控制模塊電連;所述進(jìn)液管6、進(jìn)氣管5和輸液管7均與所述容器I內(nèi)部相連通;所述保溫箱12上設(shè)有五個(gè)分別與所述單向雙入口管3、單向雙出口管4、進(jìn)液管6、進(jìn)氣管5和輸液管7對(duì)應(yīng)配合穿出的通孔。，每個(gè)調(diào)節(jié)閥11均與所述控制模塊電連?？諝夂虲02的混合氣體的比例95%:5%，所述進(jìn)液管6、進(jìn)氣管5和輸液管7的入接口均是無(wú)菌無(wú)毒容易入接且可以自動(dòng)可以控制流入量的栗裝置，通過(guò)調(diào)節(jié)閥11調(diào)節(jié)輸入量，入接口只可出不可進(jìn)以防止外面的東西吸入細(xì)胞培養(yǎng)液和生理鹽水瓶里面去。
[0024]在本實(shí)施例中，所述單向雙入口管3包括位于單向雙入口管3頂端的血液標(biāo)本入口和包裝病毒轉(zhuǎn)染液入口，所述單向雙出口管4的底端設(shè)置有第一出口和第二出口，所述第一出口與廢液袋相連通，所述第二出口與輸液袋相連通;所述廢液袋容置有少量防腐劑。廢液袋里面加入少量防腐劑，以防止細(xì)菌和真菌生長(zhǎng)，房間里面為潔凈環(huán)境，空氣要過(guò)濾，角落不能有死角，要易于消毒。
[0025]在本實(shí)施例中，所述單向雙入口管3的下端和單向雙出口管4的上端分別設(shè)有一第一單向閥9和第二單向閥10，所述第一單向閥9和第二單向閥10均與控制模塊電連。第一單向閥9只進(jìn)不出，在血標(biāo)本輸入時(shí)打開(kāi)，其余時(shí)間關(guān)閉，防止外部空氣進(jìn)入;第二單向閥10只出不進(jìn)，在排液的過(guò)程中打開(kāi)，其他時(shí)間關(guān)閉，防止外部空氣進(jìn)入，更好的保證容器I的密閉性。
[0026]在本實(shí)施例中，所述容器I的外形為橢圓形或者圓形，所述容器I的底面呈水平。
[0027]在本實(shí)施例中，在步驟SI中，所述抗體為CD3單克隆抗體、CD3多克隆抗體、CD28抗體、CD4或⑶8。⑶28可以同時(shí)與⑶3—起粘附在磁珠表面起著刺激T細(xì)胞生長(zhǎng)作用，也可以將⑶28融合蛋白加入到培養(yǎng)液中起到刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。CD3也可以用⑶4或者CD8抗體來(lái)取代，來(lái)分離T細(xì)胞里面的⑶4陽(yáng)性或⑶8陽(yáng)性細(xì)胞亞群。
[0028]在本實(shí)施例中，在所述步驟S3中，通過(guò)LYTROILLUM照相機(jī)拍照計(jì)算每個(gè)磁珠顆粒2上的吸附的T細(xì)胞數(shù)。T細(xì)胞轉(zhuǎn)染之后培養(yǎng)10-14天，每一個(gè)病人的血細(xì)胞根據(jù)健康程度，是否經(jīng)化療藥損傷，確定培養(yǎng)的天數(shù)，如果數(shù)量較少，增長(zhǎng)緩慢，可以相應(yīng)增加CD28磁珠和IL-2細(xì)胞生長(zhǎng)因子，通過(guò)照相機(jī)照相計(jì)數(shù)，達(dá)到所需細(xì)胞數(shù)目之后用緩沖液洗脫下來(lái)，收集在生理鹽水中，準(zhǔn)備輸回到病人身上。LYTRO ILLUM照下磁珠照片計(jì)數(shù)隨機(jī)20個(gè)磁珠表面的吸附細(xì)胞數(shù)，乘以總磁珠數(shù)，計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。而無(wú)需將容器I取出，放在用傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。LYTRO ILLUM照相機(jī)拍攝的景深很長(zhǎng)的照片可以改變照片的焦距清楚讀出不同層面磁珠的細(xì)胞數(shù)。
[0029]在本實(shí)施例中，在所述步驟SI中，通過(guò)搖晃容器I，使得抗體與血液標(biāo)本中的T細(xì)胞進(jìn)行充分結(jié)合30min-40min，完成T細(xì)胞的分離。
[0030]在本實(shí)施例中，所述容器I放置于一潔凈室內(nèi)，所述潔凈室的入口處自外向內(nèi)依次設(shè)有一更、二更、三更衣服通道以及貨物通道，所述潔凈室還設(shè)置有傳遞窗。
[0031]在本實(shí)施例中，還包括一用于支撐所述電磁鐵8的機(jī)械手，所述機(jī)械手設(shè)置于所述容器I下方且經(jīng)一電機(jī)驅(qū)動(dòng)繞所述容器轉(zhuǎn)動(dòng);所述機(jī)械手還經(jīng)一縱向驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)上下移動(dòng)。所述機(jī)械手可以設(shè)置于保溫箱12的下方或周側(cè)，用于搖晃容器I，便于T細(xì)胞充分分離。所述縱向驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)可以為縱向設(shè)置的絲桿機(jī)構(gòu)。
[0032]綜上所述，本發(fā)明提供的一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，占用空間小，成本低，可以實(shí)現(xiàn)T細(xì)胞的一體式培養(yǎng)，避免交叉感染。
[0033]上列較佳實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)進(jìn)行了進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，所應(yīng)理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于，將血液標(biāo)本輸入至一密閉的容器中，所述容器容置于一密閉的37°c的保溫箱內(nèi)，在所述容器中依次完成T細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、轉(zhuǎn)染、后續(xù)擴(kuò)增和提取，包括以下步驟: 步驟SI:將血液標(biāo)本經(jīng)容器頂部的入口輸入至容器內(nèi)，容器內(nèi)容置有若干個(gè)磁珠顆粒，每個(gè)磁珠顆粒上附著有用于與血液標(biāo)本中T細(xì)胞或自然殺傷T細(xì)胞結(jié)合的抗體，所述抗體與血液標(biāo)本中的T細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，進(jìn)行充分結(jié)合，完成T細(xì)胞的分離； 步驟S2:通過(guò)一電磁鐵將磁珠顆粒吸附聚集于容器內(nèi)側(cè)壁上，將血液標(biāo)本中未與磁珠顆粒反應(yīng)結(jié)合的細(xì)胞經(jīng)容器底部的出口流出至廢液袋，同時(shí)往容器中輸入生理鹽水進(jìn)行沖洗； 步驟S3:沖洗結(jié)束后，關(guān)閉容器的出口，將培養(yǎng)液和含有空氣和C02的混合氣體輸入至容器中，同時(shí)電磁鐵斷電，磁珠顆粒上吸附的T細(xì)胞在容器中進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)算此時(shí)T細(xì)胞的數(shù)量為N，N為正整數(shù)，且大于O; 步驟S4:在培養(yǎng)液的作用下，T細(xì)胞在容器中擴(kuò)增，待T細(xì)胞的數(shù)量大于5N時(shí)，將病毒轉(zhuǎn)染液輸入至容器內(nèi)，進(jìn)行T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染； 步驟S5:轉(zhuǎn)染后的T細(xì)胞在容器中進(jìn)行后續(xù)擴(kuò)增至特定數(shù)量； 步驟S6:打開(kāi)容器的出口，容器中的培養(yǎng)液流出至一廢液袋中； 步驟S7:將生理鹽水輸入至容器內(nèi)，加力將T細(xì)胞從磁珠顆粒表面洗脫，將T細(xì)胞提取輸入至一含有生理鹽水的輸液袋中供臨床使用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于:所述容器的頂部入口處設(shè)有一呈Y型的單向雙入口管，所述容器的底部出口處設(shè)有一用于排液的單向雙出口管；所述電磁鐵設(shè)置于容器的外側(cè)壁且與一控制模塊電連;所述容器的側(cè)壁上還分別設(shè)有用于輸入生理鹽水的進(jìn)液管、用于輸入空氣和C02的混合氣體的進(jìn)氣管和用于輸入培養(yǎng)液的輸液管，所述進(jìn)液管、進(jìn)氣管和輸液管上均設(shè)有一用于調(diào)節(jié)輸入量的調(diào)節(jié)閥，每個(gè)調(diào)節(jié)閥均與所述控制模塊電連;所述進(jìn)液管、進(jìn)氣管和輸液管均與所述容器內(nèi)部相連通;所述保溫箱上設(shè)有五個(gè)分別與所述單向雙入口管、單向雙出口管、進(jìn)液管、進(jìn)氣管和輸液管對(duì)應(yīng)配合穿出的通孔。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于:所述單向雙入口管包括位于單向雙入口管頂端的血液標(biāo)本入口和包裝病毒轉(zhuǎn)染液入口，所述單向雙出口管的底端設(shè)置有第一出口和第二出口，所述第一出口與廢液袋相連通，所述第二出口與輸液袋相連通;所述廢液袋容置有少量防腐劑。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于:所述單向雙入口管的下端和單向雙出口管的上端分別設(shè)有一第一單向閥和第二單向閥，所述第一單向閥和第二單向閥均與控制模塊電連。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于:所述容器的外形為橢圓形或者圓形，所述容器的底面呈水平。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于:在步驟SI中，所述抗體為CD3單克隆抗體、CD3多克隆抗體、CD28抗體、CD4或CD8。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于:在所述步驟S3中，通過(guò)LYTRO ILLUM照相機(jī)拍照計(jì)算每個(gè)磁珠顆粒上的吸附的T細(xì)胞數(shù)。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于:在所述步驟SI中，通過(guò)搖晃容器，使得抗體與血液標(biāo)本中的T細(xì)胞進(jìn)行充分結(jié)合30min-40min，完成T細(xì)胞的分離。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于:所述容器放置于一潔凈室內(nèi)，所述潔凈室的入口處自外向內(nèi)依次設(shè)有一更、二更、三更衣服通道以及貨物通道，所述潔凈室還設(shè)置有傳遞窗。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，其特征在于:還包括一用于支撐所述電磁鐵的機(jī)械手，所述機(jī)械手設(shè)置于所述容器下方且經(jīng)一電機(jī)驅(qū)動(dòng)繞所述容器轉(zhuǎn)動(dòng)；所述機(jī)械手還經(jīng)一縱向驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)上下移動(dòng)。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種一體式T細(xì)胞培養(yǎng)提取方法，將血液標(biāo)本輸入至容器內(nèi)，磁珠顆粒的抗體與血液標(biāo)本中的T細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，完成T細(xì)胞的分離；將血液標(biāo)本中未與磁珠顆粒反應(yīng)結(jié)合的細(xì)胞經(jīng)容器流出至廢液袋，同時(shí)往容器中輸入生理鹽水進(jìn)行沖洗；沖洗結(jié)束后，將培養(yǎng)液輸入至容器中，磁珠顆粒上吸附的T細(xì)胞在容器中進(jìn)行培養(yǎng)；T細(xì)胞在容器中擴(kuò)增，將病毒轉(zhuǎn)染液輸入至容器內(nèi)，進(jìn)行T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；轉(zhuǎn)染后的T細(xì)胞在容器中進(jìn)行后續(xù)擴(kuò)增至特定數(shù)量；然后將T細(xì)胞從磁珠顆粒表面洗脫，輸入至一含有生理鹽水的輸液袋中供臨床使用，使得病人與病人之間的細(xì)胞在同一個(gè)空間之內(nèi)互相之間沒(méi)有機(jī)會(huì)接觸和產(chǎn)生可能的交叉污染。
【IPC分類】C12N5/0783
【公開(kāi)號(hào)】CN105670993
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610253713
【發(fā)明人】林基禎, 倪華, 劉力
【申請(qǐng)人】福州創(chuàng)方醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年6月15日
【申請(qǐng)日】2016年4月22日