多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的抗胰腺癌用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一類多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的抗胰腺癌用途。多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的結構式如下：其中，R1為OCH3或H，R2為Cl或OH，R3為OCH3或H。該多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物是對從紅樹林土壤來源的廈門鏈霉菌(Streptomyces xiamenensis)CGMCC No.4.3534的發(fā)酵液進行分離純化得到。本發(fā)明制得的斑鳩霉素及衍生物具有抑制人胰腺癌細胞的增殖和活力的性能，可用于制備抗胰腺癌的藥物。CGMCC NO.4.353420070401
【專利說明】
多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的抗胰腺癌用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物化學領域，具體涉及一類多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物 (polycyclic tetramate macrolactam，后簡稱PTM)的抗胰腺癌用途。
【背景技術】
[0002] 胰腺導管腺癌（Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC，后簡稱胰腺癌）是消 化系常見的惡性腫瘤之一，死亡率接近發(fā)生率，5年總體生存率低于6 % [T. Seufferlein and J.Mayerle,^Pancreatic cancer in 2015Precision medicine in pancreatic cancer-fact or fiction?,^Nat. Rev.Gastroenterol.Hepatol.,vol.13,pp.74-75, 2016.]。近年來其發(fā)病率和死亡率在全世界范圍內呈現(xiàn)升高趨勢，成為預后最差的惡性腫 瘤之一[J. D. Byrne , et al · ,''Iontophoretic device delivery for the localized treatment of pancreatic ductal adenocarcinoma,^Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A., p.Ahead of Print,2016.]。由于胰腺癌早期易侵襲轉移的特性，確診時超過80%已屬晚 期，僅有約10%_20%患者能進行根治性手術，因此藥物治療在胰腺癌的綜合治療中具有舉 足輕重的位置[C. Scafoglio，et al.，''Functional expression of sodium-glucose transporters in cancer，"Proc·Natl·Acad·Sci·U·S·A·，vol·112，pp·E4111-E4119， 2015.]?，F(xiàn)階段治療胰腺癌的標準一線用藥是吉西他濱(gemcitabine)，為破壞細胞復制的 二氟核苷類代謝拮抗藥物，但是后期易耐藥嚴重制約了藥效。此外聯(lián)合用藥方案 F0LFIRIN0X，包括伊立替康（irinotecan)，奧沙利鉬（oxaliplatin)，5-氟尿啼啶（5-fluorouracil)和亞葉酸（leucovorin)，也在臨床證實能夠延長胰腺癌患者的生存期，但伊 立替康作為喜樹堿類的化合物，其毒性作用不可忽視[X . Liu，et al .，"Irinotecan Delivery by Lipid-Coated Mesoporous Silica Nanoparticles Shows Improved Efficacy and Safety over Liposomes for Pancreatic Cancer，〃ACS Nano，p.Ahead of Print，2016.]。因此，研發(fā)具有抗胰腺癌活性的新型小分子化合物是治療胰腺癌的迫切需 要。

【發(fā)明內容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種活性多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的抗胰腺癌用途。
[0004] 本發(fā)明中，所述為野生型廈門鏈霉菌（Streptomyces xiamenensis)已于2007年4 月遞交CGMCC中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏地址為北京市朝 陽區(qū)大屯路，中國科學院微生物研究所（中國科學院微生物研究所現(xiàn)在的地址是北京市朝 陽區(qū)北辰西路1號院3號），菌種保藏編號為CGMCC No.4.3534。
[0005] 本發(fā)明目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：
[0006] 第一方面，本發(fā)明涉及一種多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物，其結構式如式（I)、 (Π )、（ΙΠ )或(IV)所示：
[0007]
[0008] 其中，R1 為0CH3 或H，R2 為 Cl 或 0H，R3 為 0CH3 或Η。
[0009] 第二方面，本發(fā)明還涉及一種前述的多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的制備方法， 所述方法包括如下步驟：
[0010] S1、廈門鏈霉菌Streptomyces xiamenensis CGMCC Νο·4·3534進行液體發(fā)酵培 養(yǎng)；
[0011] S2、對發(fā)酵液進行離心處理，取上清液用乙酸乙酯萃??；
[0012] S3、采用C18固相萃取的方法，以甲醇-水梯度洗脫，在甲醇洗脫部分即得所述多環(huán) 稠合大環(huán)內酰胺類化合物。
[0013] 優(yōu)選的，步驟S3中，所述甲醇-水梯度洗脫具體為：50%、80 %、100 %甲醇-水梯度 洗脫，每個梯度洗脫體積為200mL。
[0014] 第三方面，本發(fā)明還涉及一種前述的多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物在制備抗胰腺 癌藥物中的用途。
[0015] 第四方面，本發(fā)明還涉及一種抗胰腺癌藥物組合物，其中含有前述的多環(huán)稠合大 環(huán)內酰胺類化合物，或者其藥學上可接受的酸或堿的鹽，或者溶劑化合物作為有效成分。
[0016] 優(yōu)選的，所述藥物組合物為口服制劑或注射制劑。
[0017] 本發(fā)明具有如下有益效果：
[0018] 1、本發(fā)明是從-廈門鏈霉菌（Streptomyces xiamenensis)CGMCC Νο·4·3534的提 取物制得抗胰腺癌藥物化合物，且藥物成分天然；
[0019] 2、本發(fā)明的多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物具有可抑制人胰腺癌細胞的增殖和活 力，其抗胰腺癌活性的IC50值為ΙμΜ;
[0020] 3、胰腺癌致死率高，現(xiàn)有抗胰腺癌藥物種類有限;通過臨床研究發(fā)現(xiàn)，化療對于胰 腺癌的治療作用甚微，研究表明這是由于腫瘤周圍的致密纖維反應阻礙了藥物進入胰腺癌 細胞的能力，因此有針對性的尋找特殊結構的新型化合物是發(fā)現(xiàn)胰腺癌治療藥物的重要一 步。本發(fā)明首次對多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的抗胰腺癌活性及毒性進行測定，本發(fā)明 的多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物活性明確，具有良好的市場應用和推廣前景。
【附圖說明】
[0021] 通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本發(fā)明的其它特征、 目的和優(yōu)點將會變得更明顯：
[0022]圖1為本發(fā)明的多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的結構圖；
[0023]圖2為在多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物抑制人胰腺癌細胞增殖實驗中的CCK-8定 量示意圖；其中，A)為抑制人胰腺癌細胞PANC-1增殖實驗中的CCK-8定量示意圖，B)為抑制 人胰腺癌細胞BxCPl增殖實驗中的CCK-8定量示意圖；
[0024] 圖3為乳酸脫氫酶方法檢測化合物1-3的毒性示意圖。
【具體實施方式】
[0025] 下面結合附圖和具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域 的技術人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應當指出的是，對本領域的普 通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于 本發(fā)明的保護范圍。
[0026] 實施例1、多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的結構鑒定
[0027]取 S.xiamenensis M6 菌株（即廈門鏈霉菌（Streptomyces xiamenensis)CGMCC No.4.3534進行液體發(fā)酵培養(yǎng)(30升），7天，離心后上清液用乙酸乙酯萃取3次。將提取液合 并，濃縮，得總提物3克。取總提取物用適量氯仿-甲醇混合溶劑溶解后加9克反相拌樣，上到 裝填有50克正相硅膠玻璃減壓柱上，以甲醇-水梯度洗脫具體為:50 %、80 %、100 %甲醇-水 梯度洗脫，每個梯度洗脫體積為200mL，150~100毫升/瓶接收，洗脫溶劑的極性通過提高氯 仿中甲醇的用量來梯度遞增，每個洗脫流份分別接收200毫升，根據薄層層析檢測合并流 份。采用半制備C18色譜柱，得化合物1-7。采用核磁共振的方法對化合物1-7的結構進行了 解析，其結構與圖1所示吻合。
[0028]表1、化合物1-7的核磁氫譜數據
[0030]
[0031] 表2、化合物1-7的核磁碳譜數據
[0032]
[0033]
[0034] 表1、2中，化合物2-7的核磁數據為首次發(fā)現(xiàn)。
[0035] 實施例2、多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物抑制人胰腺癌細胞的增殖和活力實驗
[0036] 材料如下：
[0037]細胞:人胰腺癌細胞PANC-1，BxCPl;藥物：由上述實施例得到的化合物1。其中，采 用化合物1的為藥物處理實驗組，采用化合物2為藥物處理對比組。
[0038] 方法:將PANC-1，BxCPl細胞接種于96孔板，每孔0.5 X103個細胞。24小時后換液并 加藥，對照組為DMS0，終濃度為1/1000。加藥0，1，2，3，4，5，6天后分別測量細胞活力。測量方 法為，吸出培養(yǎng)基，每孔加入完全培養(yǎng)基1〇〇μ1及CCK-8試劑10μ1，培養(yǎng)箱孵育60分鐘后酶標 儀測量光吸收值，波長為450nm。實驗重復3次。
[0039] 實驗結果如圖2所示，由附圖2可得知:化合物1能夠抑制人胰腺癌的增殖。其IC50 值為1.3和1.439μΜ?；衔?和化合物3均有活性，IC50為3μΜ。
[0040] 化合物1-7的毒性采用乳酸脫氫酶檢測試劑盒進行了評價。如圖3所示，發(fā)現(xiàn)在 IC50濃度范圍附近，其毒性不明顯，這樣對于后期藥物開發(fā)是很有潛力的。
[0041] 以上對本發(fā)明的具體實施例進行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述 特定實施方式，本領域技術人員可以在權利要求的范圍內做出各種變形或修改，這并不影 響本發(fā)明的實質內容。
【主權項】
1. 一類多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物，其結構式如式(I)、（I I)、（I II)或(I V)所示：其中，Rl為OCH3或H，R2為Cl或OH，R3為OCH 3或H。2. -種如權利要求1所述的多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的制備方法，其特征在于，所 述方法包括如下步驟： 51、 廈門鏈霉菌Streptomyces xiamenensis CGMCC No.4.3534進行液體發(fā)酵培養(yǎng)； 52、 對發(fā)酵液進行離心處理，取上清液用乙酸乙酯萃取； 53、 采用C18固相萃取的方法，以甲醇-水梯度洗脫，在甲醇洗脫部分即得所述多環(huán)稠合 大環(huán)內酰胺類化合物。3. 如權利要求2所述的多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物的制備方法，其特征在于，步驟S3 中，所述甲醇-水梯度洗脫具體為:50 %、80 %、100 %甲醇-水梯度洗脫，每個梯度洗脫體積 為200mL。4. 一種如權利要求1所述的多環(huán)稠合大環(huán)內酰胺類化合物在制備抗胰腺癌藥物中的用 途。5. -種抗胰腺癌藥物組合物，其中含有如權利要求1所述的苯并吡喃化合物，或者其藥 學上可接受的酸或堿的鹽，或者溶劑化合物作為有效成分。6. 如權利要求5所述抗胰腺癌藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為口服制劑或 注射制劑。
【文檔編號】C07D487/08GK106008531SQ201610372876
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月30日
【發(fā)明人】徐岷涓, 張志剛, 徐俊, 楊小妹, 何昆燕, 余河霖, 蔣書恒
【申請人】上海交通大學