專利名稱：微囊藻毒素的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)微囊藻毒素類物質(zhì)的分析測(cè)定，具體涉及一種微囊藻毒素的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
微囊藻毒素類物質(zhì)是藍(lán)藻門微囊藻屬中許多藻種產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，具有較強(qiáng)毒性和促腫瘤性。1996年，巴西曾經(jīng)發(fā)生50余人因微囊藻毒素中毒死亡的事件，舉世矚目。淡水水體中微囊藻屬藻類的廣泛存在及水體污染和富營(yíng)養(yǎng)化程度的加據(jù)，藍(lán)藻水華頻發(fā)，使微囊藻毒素對(duì)人群健康和飲用水安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅。目前現(xiàn)有的對(duì)微囊藻毒素的分析測(cè)定方法主要有色譜法、酶聯(lián)免疫法和蛋白磷酸酶抑制法等。色譜法可以對(duì)微囊藻毒素類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析測(cè)定，結(jié)果可靠，但色譜法所用儀器價(jià)格昂貴(用高效液相色譜儀)，需要專業(yè)人員進(jìn)行操作，前處理繁雜，分析周期長(zhǎng)、樣品用量較大，不易于推廣應(yīng)用。酶聯(lián)免疫法測(cè)定方便，容易掌握，但該方法假陽性出現(xiàn)幾率大，準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性差，尚不能完全準(zhǔn)確定量分析。蛋白磷酸酶抑制法靈敏度高、檢測(cè)限低，但該方法還不夠成熟，酶反應(yīng)體系中許多變量尚未進(jìn)行量化和建立統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)；該方法選擇性較差，環(huán)境中許多物質(zhì)(無機(jī)物和有機(jī)物)對(duì)測(cè)定均有干擾；此外，商品蛋白磷酸酶價(jià)格昂貴，其制備對(duì)設(shè)備和操作人員均有一定要求，使該方法的實(shí)際應(yīng)用受到很大限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種微囊藻毒素的測(cè)定方法，該方法方便易行，能快速、方便和準(zhǔn)確地對(duì)微囊藻毒素進(jìn)行定性和定量分析。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的基本構(gòu)思是基于微囊藻毒素具有可結(jié)合金屬離子的環(huán)形結(jié)構(gòu)和其分子中具有含氮的可以質(zhì)子化的基團(tuán)，通過實(shí)驗(yàn)研究建立一種支持電解質(zhì)系統(tǒng)，利用氫催化波對(duì)微囊藻毒素進(jìn)行定量分析。
經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)微囊藻毒素在由硼砂和硝酸鎳組成的支持電解質(zhì)系統(tǒng)中在掃描電位為-1.55伏附近產(chǎn)生一個(gè)氫催化波，并可應(yīng)用于定性和定量分析。方法所用的分析儀器為能進(jìn)行單掃描極譜分析的各種極譜儀，如常用國(guó)產(chǎn)JP-2型示波極譜儀等。測(cè)定時(shí)包括以下步驟(1)稱取7.626-9.533克硼砂(Na2B4O7·10H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，定容至100毫升容量瓶中待用。稱取0.0291-0.1163克硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，得到鎳離子，再定容至50毫升容量瓶中待用。
(2)分別移取0.05-0.20毫升上述配制好的硼砂溶液和0.05-0.20毫升配制好的硝酸鎳溶液于圓柱型玻璃電解池中，加入0.05-0.10毫升0.5摩爾/升氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)系統(tǒng)的pH值為8.5至9.5，再分別加入0.1-0.4毫升待測(cè)的微囊藻毒素溶液和0.1-0.75毫升二次蒸餾水。在此系統(tǒng)中，硼砂和硝酸鎳溶液組成支持電解質(zhì)系統(tǒng)，它們?cè)陔娊獬刂械淖罱K濃度分別為硼砂的濃度可選擇1～5×10-2摩爾/升，其最佳值為2×10-2摩爾/升；由硝酸鎳電離出的鎳離子的濃度可選擇1～4×10-4摩爾/升，其最佳值為3×10-4摩爾/升。
(3)將上述配制好的待測(cè)溶液搖勻后靜置15分鐘-48小時(shí)，讓其充分反應(yīng)，然后于20-25℃下進(jìn)行測(cè)定。
(4)用示波極譜儀對(duì)上述待測(cè)溶液進(jìn)行測(cè)定。采用圓柱型玻璃電解池，使用三電極系統(tǒng)，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，滴汞電極為工作電極，滴汞的速度為5～7秒/滴。將此三電極插入電解池待測(cè)溶液中，進(jìn)行陰極化掃描，起始掃描電位為-1.1伏～-1.4伏，記錄氫催化波峰電流，該氫催化波相應(yīng)的峰電位在-1.55伏附近。
(5)先用微囊藻毒素標(biāo)樣按上述實(shí)驗(yàn)方法和步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲得不同濃度微囊藻毒素相對(duì)應(yīng)的氫催化波的峰電流。以微囊藻毒素濃度對(duì)相應(yīng)的氫催化波峰電流作圖，繪制出工作曲線，再對(duì)試樣進(jìn)行測(cè)定，最后用工作曲線法進(jìn)行定量分析。此外，為了節(jié)約測(cè)量成本及對(duì)微量試樣進(jìn)行分析，使用內(nèi)徑為14毫米，高度為20毫米的圓柱型玻璃電解池。
本發(fā)明所提出的對(duì)微囊藻毒素進(jìn)行定性和定量分析方法，測(cè)定準(zhǔn)確、結(jié)果可靠、具有較好選擇性、儀器價(jià)格便宜；且操作簡(jiǎn)單、成本低廉、分析時(shí)間短、應(yīng)用廣泛、便于普及推廣。
具體實(shí)施例方式
以下所述實(shí)施實(shí)例詳細(xì)說明了本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，所用溶劑均為二次蒸餾水，所用試劑均為分析純?cè)噭?br> 實(shí)施例1本方法測(cè)定步驟如下1.硼砂溶液和硝酸鎳溶液的配制稱取9.533克硼砂(Na2B4O7·10H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，轉(zhuǎn)移至100毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。稱取0.0291克硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，得到鎳離子，轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。
2.組成測(cè)定體系分別移取0.20毫升硼砂(Na2B4O7·10H2O)溶液和0.2毫升硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)0.20毫升于圓柱型玻璃電解池中；用0.05毫升0.5摩爾/升的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)系統(tǒng)的pH值為8.5。再分別加入0.30毫升待測(cè)微囊藻毒素樣品和二次蒸餾水0.25毫升，使總體積為1.0毫升。
3.靜置反應(yīng)將上述溶液搖勻后靜置20分鐘，然后于20℃下用示波極譜儀進(jìn)行測(cè)定。
4.儀器測(cè)定用示波極譜儀進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)使用三電極系統(tǒng)，滴汞電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極；滴汞時(shí)間約為5～7秒/滴。將此三電極插入電解池待測(cè)溶液中，用示波極譜儀進(jìn)行陰極化掃描，掃描起始電位為-1.3伏，記錄氫催化波峰電流，該氫催化波相應(yīng)的峰電位約為-1.55伏。
5.定量分析先用微囊藻毒素標(biāo)樣按上述實(shí)驗(yàn)方法和步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲得不同濃度微囊藻毒素相對(duì)應(yīng)的極譜峰電流。以微囊藻毒素濃度對(duì)相應(yīng)的極譜峰電流作圖，繪制出工作曲線，再對(duì)試樣進(jìn)行測(cè)定，最后用工作曲線法進(jìn)行定量分析。
實(shí)施例2本方法測(cè)定步驟如下1.硼砂溶液和硝酸鎳溶液的配制稱取7.626克硼砂(Na2B4O7·10H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，轉(zhuǎn)移至100毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。稱取0.0291克硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，得到鎳離子，轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。
2.組成測(cè)定體系分別移取0.05毫升硼砂(Na2B4O7·10H2O)溶液和0.2毫升硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)于圓柱型玻璃電解池中；用0.1毫升0.5摩爾/升氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)系統(tǒng)的pH值為9.0。再分別加入0.2毫升待測(cè)微囊藻毒素樣品和0.45毫升二次蒸餾水，使總體積為1.0毫升。
3.靜置反應(yīng)將上述溶液搖勻后靜置15分鐘，然后于22℃下用示波極譜儀進(jìn)行測(cè)定。
4.儀器測(cè)定用示波極譜儀進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)使用三電極系統(tǒng)，滴汞電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極；滴汞時(shí)間約為5～7秒/滴。將此三電極插入電解池待測(cè)溶液中，用示波極譜儀進(jìn)行陰極化掃描，掃描起始電位為-1.2伏，記錄氫催化波峰電流，該氫催化波相應(yīng)的峰電位約為-1.55伏。
5.定量分析先用微囊藻毒素的標(biāo)樣按上述實(shí)驗(yàn)方法和步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲得不同濃度微囊藻毒素相對(duì)應(yīng)的極譜峰電流。以微囊藻毒素濃度對(duì)相應(yīng)極譜峰電流作圖，繪制出工作曲線，再對(duì)試樣進(jìn)行測(cè)定，最后用工作曲線法進(jìn)行定量分析。
實(shí)施例3本方法測(cè)定步驟如下1.硝酸鎳溶液和硼砂溶液的配制稱取0.1000克硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。稱取8.500克硼砂(Na2B4O7·10H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，得到鎳離子，轉(zhuǎn)移至100毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。
2.組成測(cè)定體系分別移取0.20毫升硼砂(Na2B4O7·10H2O)溶液和0.05毫升硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)于圓柱型玻璃電解池中；用0.05毫升0.5摩爾/升氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液的pH值為9.0；然后再分別加入0.30毫升待測(cè)微囊藻毒素樣品和二次蒸餾水0.40毫升，使總體積為1.0毫升。
3.靜置反應(yīng)將上述溶液搖勻后靜置3小時(shí)，然后在23℃下用示波極譜儀上進(jìn)行測(cè)定。
4.儀器測(cè)定用示波極譜儀上進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)使用三電極系統(tǒng)，滴汞電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極；滴汞時(shí)間為5～7秒/滴。將此三電極插入電解池待測(cè)溶液中，用示波極譜儀進(jìn)行陰極化掃描，掃描起始電位為-1.35伏，當(dāng)使用中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所用薄層色譜法制備的微囊藻毒素樣品時(shí)，產(chǎn)生的氫催化波位于-1.57伏，記錄-1.57伏處的峰電流，然后進(jìn)行分析。
5.定量分析先用微囊藻毒素標(biāo)樣按上述實(shí)驗(yàn)方法和步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲得不同濃度微囊藻毒素相對(duì)應(yīng)的極譜峰電流。以微囊藻毒素濃度對(duì)相應(yīng)的極譜峰電流作圖，繪制出工作曲線，再對(duì)試樣進(jìn)行測(cè)定，最后用工作曲線法進(jìn)行定量分析。
實(shí)施例4本方法測(cè)定步驟如下1.硼砂溶液和硝酸鎳溶液的配制稱取9.500克硼砂(Na2B4O7·10H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，轉(zhuǎn)移至100毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。稱取0.1000克硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，得到鎳離子，轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。
2.組成測(cè)定體系分別移取0.10毫升硼砂(Na2B4O7·10H2O)溶液和0.05毫升硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)于圓柱型玻璃電解池中；用0.05毫升0.5摩爾/升氫氧化鈉(NaOH)調(diào)節(jié)溶液的pH值為9.0；然后再分別加入0.40毫升待測(cè)微囊藻毒素樣品和二次蒸餾水0.40毫升，使總體積為1.0毫升。
3.靜置反應(yīng)將上述溶液搖勻后靜置12小時(shí)，然后于25℃下用示波極譜儀進(jìn)行測(cè)定。
4.儀器測(cè)定用示波極譜儀進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)使用三電極系統(tǒng)，滴汞電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極；滴汞時(shí)間為5～7秒/滴。將此三電極插入電解池待測(cè)溶液中，起始掃描電位為-1.27伏，進(jìn)行陰極化掃描，記錄氫催化波峰電流，該氫催化波相應(yīng)的峰電位約為-1.55伏。
5.定量分析先用微囊藻毒素標(biāo)樣按上述實(shí)驗(yàn)方法和步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲得不同濃度微囊藻毒素相對(duì)應(yīng)的極譜峰電流。以微囊藻毒素濃度對(duì)相應(yīng)的極譜峰電流作圖，繪制出工作曲線。對(duì)試樣按上述方法和步驟進(jìn)行測(cè)定，最后用工作曲線法進(jìn)行定量分析。
實(shí)施例5本方法測(cè)定步驟如下1.硼砂溶液和硝酸鎳溶液的配制準(zhǔn)確稱取8.500克硼砂(Na2B4O7·10H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，轉(zhuǎn)移至100毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。準(zhǔn)確稱取0.0600克硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，得到鎳離子，轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶中，定容后搖勻待用。
2.組成測(cè)定體系分別移取0.20毫升硼砂(Na2B4O7·10H2O)溶液和0.20毫升硝酸鎳(Ni(NO3)2·6H2O)于圓柱型玻璃電解池中；用0.05毫升0.5摩爾/升氫氧化鈉(NaOH)調(diào)節(jié)溶液的pH值為8.5，再分別加入0.20毫升待測(cè)微囊藻毒素樣品及二次蒸餾水0.35毫升，使總體積為1.0毫升。
3.靜置反應(yīng)將上述溶液搖勻后靜置20小時(shí)，然后于25℃下用示波極譜儀進(jìn)行測(cè)定。
4.儀器測(cè)定用示波極譜儀進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)使用三電極系統(tǒng)，滴汞電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極；滴汞時(shí)間為5～7秒/滴。將此三電極插入電解池待測(cè)溶液中，用示波極譜儀進(jìn)行陰極化掃描，掃描的起始掃描電位為-1.15伏，當(dāng)使用中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所用高效液相色譜法制備的微囊藻毒素樣品時(shí)，產(chǎn)生的氫催化波位于-1.55伏，記錄-1.55伏處的峰電流，然后進(jìn)行分析。
5.定量分析先用微囊藻毒素的標(biāo)樣按上述實(shí)驗(yàn)方法和步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲得不同濃度微囊藻毒素相對(duì)應(yīng)的極譜峰電流。以微囊藻毒素濃度對(duì)極譜峰電流作圖，繪制出工作曲線。對(duì)試樣按上述方法和步驟進(jìn)行測(cè)定，最后用工作曲線法進(jìn)行定量分析。
權(quán)利要求
1.一種微囊藻毒素的測(cè)定方法，該方法包括以下步驟A、稱取7.626-9.533克硼砂，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，定容至100毫升容量瓶待用；稱取0.0291-0.1163克硝酸鎳，用二次蒸餾水溶解于燒杯中，得到鎳離子，再定容至50毫升容量瓶中待用；B、分別移取0.05-0.20毫升配制好的硼砂溶液和0.05-0.20毫升配制好的硝酸鎳溶液于圓柱型玻璃電解池中，加入0.05-0.10毫升0.5摩爾/升的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為8.5-9.5，再分別加入0.10-0.40毫升待測(cè)的微囊藻毒素溶液和0.10-0.75毫升二次蒸餾水；電解池中硼砂的濃度為1-5×10-2摩爾/升，由硝酸鎳電離出的鎳離子的濃度為1-4×10-4摩爾/升；C、將上述配制好的溶液搖勻后靜置15分鐘-48小時(shí)，于20-25℃下進(jìn)行測(cè)定；D、用示波極譜儀對(duì)上述待測(cè)溶液進(jìn)行測(cè)定，采用圓柱型玻璃電解池，使用三電極系統(tǒng)，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，滴汞電極為工作電極，測(cè)定時(shí)滴汞速度為5～7秒/滴，將此三電極插入電解池待測(cè)溶液中，測(cè)定時(shí)起始掃描電位為-1.1伏～-1.4伏，用示波極譜儀進(jìn)行陰極化掃描，記錄氫催化波峰電流，該峰電流相應(yīng)的峰電位在-1.55伏附近。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微囊藻毒素的測(cè)定方法，所用圓柱型玻璃電解池的內(nèi)徑為14毫米、高度為20毫米。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種微囊藻毒素的測(cè)定方法。首先分別稱取一定量的硼砂和硝酸鎳，用蒸餾水溶解于燒杯中，并定容于容量瓶中；其次是移取配制好的硼砂和硝酸鎳溶液于圓柱型玻璃電解池中，再分別加入微囊藻毒素溶液和二次蒸餾水，并調(diào)節(jié)溶液pH值；第三是將硼砂和硝酸鎳溶液搖勻靜置；第四是用示波極譜儀測(cè)定。本發(fā)明方法易行，能快速準(zhǔn)確地對(duì)微囊藻毒素進(jìn)行定性和定量分析，分析時(shí)間短，應(yīng)用廣泛，便于推廣。
文檔編號(hào)G01N27/48GK1542443SQ20031011132
公開日2004年11月3日 申請(qǐng)日期2003年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月4日
發(fā)明者周培疆, 劉斌, 宋立榮, 吳新國(guó), 甘蘭琴, 肖邦定 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)