專利名稱：流式細(xì)胞儀－細(xì)胞內(nèi)分子探針技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用流式細(xì)胞儀--腫瘤細(xì)胞內(nèi)分子探針技術(shù)在體外、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)示蹤腫瘤細(xì)胞的增生過程，并同時(shí)對(duì)潛在抗腫瘤藥物進(jìn)行快速篩選。
背景技術(shù)：
腫瘤目前已成為對(duì)人類生命構(gòu)成嚴(yán)重威脅的三大疾病之一。因此，研究腫瘤細(xì)胞的增生過程以及尋找有效的抗腫瘤藥物，對(duì)腫瘤的臨床診斷和治療具有重要意義。目前，較常用的檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的增生過程及抗腫瘤藥物篩選方法如溴脫氧尿嘧啶免疫染色法(BrdU(5’-bromo-2’-deoxy-uridin)).微量培養(yǎng)四唑技術(shù)MTT(Microculture tetrazolium technique)、氚示蹤技術(shù)(3H-thymidine incorporation)，等。
這些方法雖被廣泛采用，但都有一定的局限性。如溴脫氧尿嘧啶免疫染色法無(wú)法確定原有的細(xì)胞數(shù)量，且需要抗體，價(jià)格昂貴；氚示蹤技術(shù)有放射性污染，對(duì)人體和環(huán)境有害；幾種方法操作程序都比較復(fù)雜，對(duì)技術(shù)要求較高?？偟膩?lái)說(shuō)，這些方法耗時(shí)，工作量大，且操作者需要相當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)。
最近的一些分子生物學(xué)進(jìn)展，使得利用細(xì)胞內(nèi)分子探針技術(shù)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)DNA或蛋白質(zhì)這一生物工具不斷發(fā)展而且得到快速應(yīng)用。細(xì)胞內(nèi)分子探針包括基因探針(一段DNA序列)和熒光分子探針(熒光染料分子)。分子探針與細(xì)胞內(nèi)DNA或蛋白質(zhì)結(jié)合有較高的穩(wěn)定性，其熒光強(qiáng)度可持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)(數(shù)天至數(shù)月)。這些已被應(yīng)用于體外和體內(nèi)持續(xù)檢測(cè)生物過程(如基因表達(dá)，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互間作用和淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)分化等等)。
本發(fā)明以細(xì)胞內(nèi)分子探針技術(shù)配合流式細(xì)胞儀的使用，可在體內(nèi)體外示蹤腫瘤細(xì)胞的增生過程，并同時(shí)對(duì)大量潛在抗腫瘤藥物進(jìn)行快速篩選，對(duì)各種不同的腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的敏感性進(jìn)行‘高通量’(High-throughput)分析。與傳統(tǒng)的方法相比，本技術(shù)具有對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和藥物療效進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察的優(yōu)點(diǎn)，且無(wú)放射性、更準(zhǔn)確、快捷、操作簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及研發(fā)以流式細(xì)胞儀-細(xì)胞內(nèi)分子探針為手段，動(dòng)態(tài)觀察體外、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖，并對(duì)多種潛在抗腫瘤藥物進(jìn)行快速篩選的簡(jiǎn)單實(shí)用、高效的技術(shù)。
本發(fā)明的具體實(shí)施方式
之一，是用基因探針(一段DNA序列)通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)插入(標(biāo)記)腫瘤細(xì)胞，既重組細(xì)胞。
本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
，是用熒光分子探針標(biāo)記腫瘤細(xì)胞內(nèi)的DNA或蛋白質(zhì)。
本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
，在體外(in vitro)將標(biāo)記了熒光分子探針的至少一種腫瘤細(xì)胞系分別與待測(cè)抗腫瘤藥物培養(yǎng)；腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂時(shí)，子細(xì)胞攜帶的熒光將減半。在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)由流式細(xì)胞儀收獲。用正向光衍射(forward scatter)比電子密度(side scatter)來(lái)確定熒光的強(qiáng)弱和峰值，并使用設(shè)定的程序?qū)z測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。
本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
，由流式細(xì)胞儀收獲時(shí)，激光激發(fā)待測(cè)樣品的熒光標(biāo)記物產(chǎn)生熒光，因其激發(fā)光的波長(zhǎng)不同，不同的熒光標(biāo)記物產(chǎn)生不同顏色的熒光。故不同的腫瘤細(xì)胞系可用不同顏色的熒光分子探針標(biāo)記，之后數(shù)種腫瘤細(xì)胞可與至少一種待測(cè)抗腫瘤藥物分別培養(yǎng)。由于所標(biāo)記的不同的腫瘤細(xì)胞系熒光顏色不同，可在單一試管內(nèi)同時(shí)由流式細(xì)胞儀收所獲，進(jìn)行多色熒光分析(可同時(shí)檢測(cè)4色)，從而使單一試管內(nèi)的檢測(cè)指標(biāo)成倍提高，形成高通量式測(cè)定模式。
本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
，是在體內(nèi)(in vivo)將標(biāo)記有基因探針的腫瘤細(xì)胞，既重組細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。腫瘤細(xì)胞繁殖時(shí)，基因探針表達(dá)。給以待測(cè)抗腫瘤藥物治療。收獲時(shí)單個(gè)腫瘤細(xì)胞群被從組織中提取，由流式細(xì)胞儀收獲分析。并使用設(shè)定的程序?qū)z測(cè)結(jié)果進(jìn)行半定量和定量分析。
本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
，是本選擇性流式細(xì)胞儀-腫瘤細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或DNA分子探針技術(shù)，用于(但不限于)以下范圍體內(nèi)體外腫瘤細(xì)胞的示蹤，抗腫瘤藥物的快速篩選。


三種不同的腫瘤細(xì)胞系用不同顏色的熒光分子探針標(biāo)記之后，分別與一種待測(cè)抗腫瘤藥物培養(yǎng)(未給藥組作對(duì)照)。由于所標(biāo)記的不同的腫瘤細(xì)胞系熒光顏色不同，可在單一試管內(nèi)同時(shí)由流式細(xì)胞儀收所獲，用正向光衍射(forward scatter)比電子密度(side scatter)來(lái)確定熒光的強(qiáng)弱和峰值，并使用設(shè)定的程序?qū)z測(cè)結(jié)果進(jìn)行多色熒光分析。結(jié)果顯示未給藥組三種腫瘤細(xì)胞系細(xì)胞攜帶熒光均隨培養(yǎng)時(shí)間而遞減，表明腫瘤細(xì)胞增殖進(jìn)行有絲分裂，子細(xì)胞攜帶的熒光減半。而抗腫瘤藥物治療組相應(yīng)的三種腫瘤細(xì)胞攜帶熒光并未隨培養(yǎng)時(shí)間而遞減，表明腫瘤細(xì)胞增殖受阻，腫瘤細(xì)胞對(duì)該種抗腫瘤藥物敏感性高。
具體實(shí)施例方式
細(xì)胞內(nèi)分子探針包括自基因探針和熒光分子探針。
基因探針是一段DNA序列，編碼一個(gè)很容易被偵測(cè)到的蛋白或酶。它們可以人工引入到一個(gè)細(xì)胞內(nèi)來(lái)監(jiān)測(cè)基因的表達(dá)，以得到細(xì)胞定位或整體細(xì)胞生物傳感器的作用。包括(但不限于)綠色熒光蛋白基因green fluorescentprotein(GFP)，半乳糖激酶基因(β-galactosidase)，熒光素酶基因(luciferase)，等等。20多年前，Marlene DeLuca’s第一個(gè)成功的獲得表達(dá)螢火蟲熒光素酶基因(luc基因)的轉(zhuǎn)基因煙草，基因探針的生物發(fā)光的應(yīng)用進(jìn)入了一個(gè)新時(shí)代?；蛱结樀闹饕攸c(diǎn)就在于光信號(hào)的高度可測(cè)性，高光子產(chǎn)生效率。因此應(yīng)用基因探針的檢測(cè)極限可以達(dá)到10-18到10-21摩爾?；蛱结樀母叨瓤蓚蓽y(cè)性使得它非常適合于微小化的生物分析裝置(如微矩陣，微流設(shè)備和高密度的微孔板)，以用于小量樣品體積的基因和蛋白的高通量篩選。
熒光分子探針來(lái)源于一系列生物熒光染料，包括(但不限于)藍(lán)色螢光氯甲基衍生物氨基-，羥-和difluoro hydroxycoumarinCMAC(7-amino-4-chloromethylcoumarin、CMHC(4-chloromethyl-7-hydroxy-coumarin)和CMF2HC(4-chloromethyl-6，8-difluoro-7-hydroxycoumarin)，綠色螢光氯甲基衍生物(CMFDA5-chloromethylfluorescein diacetate)、BODIFY(8-chloromethyl-4，4-difluoro-1，3，5，7-tetramethyl-4-bora-3a，4a-diaza-s-indacene)，橙色螢光CMTMR(5-(and-6)-((4-chloromethyl)benzoyl)amino)、吖啶Acridine(3，6-bis(Dimethylamino)、Bisbenzimide，和紅色螢光CMTPX，等。
熒光分子探針的特點(diǎn)是1)對(duì)活細(xì)胞內(nèi)的DNA或蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的親和力。這些所選生物熒光染料分子一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，迅速與細(xì)胞內(nèi)的DNA或蛋白質(zhì)結(jié)合，且有較高的穩(wěn)定性。熒光分子探針能自由穿透細(xì)胞膜并存在于細(xì)胞內(nèi)。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，即通過化學(xué)反應(yīng)被變換成不能滲透細(xì)胞膜的反應(yīng)產(chǎn)物。熒光分子探針試劑由最初不發(fā)熒光變?yōu)闊晒夥肿犹结樈?jīng)歷了兩次的細(xì)胞內(nèi)化學(xué)反應(yīng)。分子探針包含了一個(gè)與硫烴起反應(yīng)的氯甲基團(tuán)，在谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶作用下起反應(yīng)。在多數(shù)細(xì)胞里，谷胱甘肽水平較高(~10mM)，并且谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶是普遍存在的。雖然分子探針首先與細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽起反應(yīng)，但產(chǎn)物是不發(fā)熒光的。第二步由細(xì)胞內(nèi)酯酶起作用，其反應(yīng)產(chǎn)物才具熒光性。
2)被熒光分子探針標(biāo)記了的細(xì)胞在分裂時(shí)，熒光強(qiáng)度減半，將其熒光只傳給其子代(至少可傳4-8代)，而并不傳給與之相連的其他細(xì)胞。
3)熒光分子探針的熒光強(qiáng)度可持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，至少4天至數(shù)月。而其他的可滲透入細(xì)胞內(nèi)的染料則無(wú)此特性，包括被廣泛應(yīng)用的鈣黃綠素(calcein AM)和BCECF-AM等，它們的熒光強(qiáng)度在生理溫度下僅能在活細(xì)胞中存在數(shù)小時(shí)。
本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，是用分子探針標(biāo)記腫瘤細(xì)胞。(1)將基因探針(特定的DNA序列)以基因載體(Vector)為載體，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)(Transgenic technique)插入到腫瘤細(xì)胞內(nèi)的DNA；(2)將熒光分子探針(生物熒光染料分子)加入適合的試劑，通過細(xì)胞微量培養(yǎng)技術(shù)(Microculture technique)標(biāo)記腫瘤細(xì)胞內(nèi)的DNA或蛋白質(zhì)。
本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
，在體外(in vitro)將標(biāo)記了熒光分子探針的至少一種腫瘤細(xì)胞系分別放入96孔板培養(yǎng)基，與一種以上待測(cè)抗腫瘤藥物共同分別進(jìn)行微量培養(yǎng)。腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂時(shí)，子細(xì)胞攜帶的熒光減半。在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)由流式細(xì)胞儀收獲。此一部分實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)不同的腫瘤細(xì)胞系對(duì)多種抗腫瘤藥物的敏感性。
本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
，是在體內(nèi)(in vivo)將標(biāo)記有分子探針的腫瘤細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)，子細(xì)胞攜帶的熒光將減半；給以待測(cè)抗腫瘤藥物治療。收獲時(shí)單個(gè)腫瘤細(xì)胞群被從組織中提取。在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)由流式細(xì)胞儀收獲。這一實(shí)施方式，可對(duì)腫瘤細(xì)胞在一個(gè)單獨(dú)動(dòng)物體內(nèi)的生長(zhǎng)繁殖，及機(jī)體對(duì)治療干預(yù)的抗腫瘤藥物的反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)視(real-time monitoring)。
本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
，是在體內(nèi)(in vivo)將標(biāo)記有基因探針的腫瘤細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)生長(zhǎng)。給以待測(cè)抗腫瘤藥物治療。收獲時(shí)腫瘤細(xì)胞群被從相關(guān)的組織(如肝、淋巴節(jié)等)中提取并培養(yǎng)，給以適當(dāng)?shù)拇碳ぃ瑫?huì)特異性的激活控制基因(基因探針)表達(dá)和蛋白合成的調(diào)控序列，再利用流式細(xì)胞儀技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。這一實(shí)施方式，可對(duì)腫瘤細(xì)胞在單獨(dú)動(dòng)物體內(nèi)的生長(zhǎng)、繁殖、轉(zhuǎn)移，及機(jī)體對(duì)治療干預(yù)的抗腫瘤藥物的反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)視(real-time monitoring)。
本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式
，是收獲時(shí)，使用程序化、多價(jià)流式細(xì)胞儀-微載體收獲技術(shù)，在設(shè)定的程序下，根據(jù)的細(xì)胞的大小(正向光衍射比電子密度)，所標(biāo)記的不同的腫瘤細(xì)胞系熒光分子探針顏色(發(fā)射波長(zhǎng))不同，在單一試管內(nèi)順序收獲不同的腫瘤細(xì)胞系；至少包含2種以上的不同熒光分子探針標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞系。進(jìn)行多色熒光分析(可同時(shí)檢測(cè)4色)，從而使單一試管內(nèi)的檢測(cè)指標(biāo)成倍提高，形成高通量式測(cè)定模式。
激光激發(fā)待測(cè)樣品的熒光標(biāo)記物產(chǎn)生熒光，流式細(xì)胞儀接收熒光。因其激發(fā)光的波長(zhǎng)不同，不同的熒光標(biāo)記物產(chǎn)生不同顏色的熒光。由于有不同顏色(波長(zhǎng))的熒光分子探針，故不同的腫瘤細(xì)胞系可用不同顏色的熒光分子探針標(biāo)記。之后數(shù)種標(biāo)記了分子探針的腫瘤細(xì)胞可分別與一種或多種待測(cè)抗腫瘤藥物共同微量培養(yǎng)。由于所標(biāo)記的不同的腫瘤細(xì)胞系熒光顏色不同，可在單一試管內(nèi)同時(shí)由流式細(xì)胞儀收所獲，使用多種波長(zhǎng)的熒光分子探針和多頻道流式細(xì)胞分析，進(jìn)行多色熒光分析(如紅色、綠色、橙色及藍(lán)色熒光、)。在多重發(fā)光測(cè)試中，光信號(hào)是同時(shí)產(chǎn)生，測(cè)試是獨(dú)立進(jìn)行，可以在一個(gè)反應(yīng)試管里測(cè)試不同的發(fā)射光波。這種方法可以在一個(gè)反應(yīng)試管里定量?jī)蓚€(gè)以上分析物和測(cè)試兩個(gè)以上發(fā)光反應(yīng)。由于可同時(shí)對(duì)數(shù)種腫瘤細(xì)胞系及多種待測(cè)抗腫瘤藥物進(jìn)行微量培養(yǎng)，以及多種波長(zhǎng)的熒光分子探針和多頻道流式細(xì)胞儀的使用，可同時(shí)觀測(cè)數(shù)種腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性，從而使檢測(cè)的樣本量大大提高，形成高通量式(High throughput)測(cè)定模式。分析測(cè)試僅需要非常短的時(shí)間，所以適用于大量的藥物篩選。
本發(fā)明創(chuàng)立以流式細(xì)胞儀-細(xì)胞內(nèi)分子探針技術(shù)為基礎(chǔ)的腫瘤檢測(cè)及抗腫瘤藥物篩選系統(tǒng)，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞在體外、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的增生、轉(zhuǎn)移，及對(duì)抗腫瘤藥物的反應(yīng)；可同時(shí)觀測(cè)數(shù)種腫瘤細(xì)胞對(duì)一種或數(shù)種藥物的敏感性，形成高通量式(High throughput)測(cè)定模式。適用于多種腫瘤的實(shí)驗(yàn)室研究及對(duì)大量抗腫瘤藥物進(jìn)行快速篩選，可廣泛應(yīng)用于科研和制藥產(chǎn)業(yè)。
權(quán)利要求
1.一種流式細(xì)胞儀-細(xì)胞內(nèi)分子探針技術(shù)為基礎(chǔ)的抗腫瘤藥物篩選系統(tǒng)，其特征是一種細(xì)胞內(nèi)分子探針標(biāo)記腫瘤細(xì)胞的制備技術(shù)；一種程序化、多價(jià)流式細(xì)胞儀-細(xì)胞內(nèi)分子探針分析技術(shù)；一種檢測(cè)腫瘤細(xì)胞在體外、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的增生過程的示蹤技術(shù)；一種對(duì)抗腫瘤藥物進(jìn)行快速篩選的技術(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞內(nèi)分子探針標(biāo)記腫瘤細(xì)胞的制備技術(shù)，細(xì)胞內(nèi)分子探針的特征是對(duì)活細(xì)胞內(nèi)的DNA或蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的親和力；熒光強(qiáng)度可持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)；細(xì)胞在分裂時(shí)其子細(xì)胞熒光強(qiáng)度減半(可傳代4-8代)。自發(fā)熒光的DNA片段以質(zhì)粒(Vector)為載體，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)插入到腫瘤細(xì)胞的DNA。自發(fā)熒光的DNA片段包括(但不限于)綠色熒光蛋白基因green fluorescent protein(GFP)，半乳糖激酶基因(β-galactosidase)，熒光素酶基因(luciferase)，等等.熒光分子探針(熒光染料分子)通過細(xì)胞微量培養(yǎng)技術(shù)(Microculture technique)標(biāo)記腫瘤細(xì)胞內(nèi)的DNA或蛋白質(zhì)。熒光染料分子包括(但不限于)CMAC(7-amino-4-chloro methylcoumarin)、CMHC(4-chloromethyl-7-hydroxycoumarin)和CMF2HC(4-chloromethyl-6，8-difluoro-7-hydroxycoumarin)，綠色螢光氯甲基衍生物CMFDA(5-chloromethyl fluorescein diacetate)、BODIFY(8-chloromethyl-4，4-difluoro-1，3，5，7-tetramethyl-4-bora-3a，4a-diaza-s-indacene)，橙色螢光CMTMR(5-(and-6)-((4-chloromethyl)benzoyl)amino)、吖啶(3，6-bis(Dimethylamino)、Bisbenzimide，和紅色螢光CMTPX，等。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種程序化、多價(jià)流式細(xì)胞儀-微載體分析技術(shù)，其特征是可同時(shí)觀測(cè)數(shù)種腫瘤細(xì)胞對(duì)一種或數(shù)種藥物的敏感性，形成高通量式(High throughput)測(cè)定模式。測(cè)定一個(gè)試管內(nèi)的單色標(biāo)記的一種腫瘤細(xì)胞系，用正向光衍射比電子密度來(lái)確定熒光的強(qiáng)弱和峰值，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞在體外增生過程；以及檢測(cè)不同的腫瘤細(xì)胞系對(duì)多種抗腫瘤藥物的敏感性。測(cè)定一個(gè)試管內(nèi)多色標(biāo)記的多種腫瘤細(xì)胞，用正向光衍射比電子密度來(lái)確定熒光的強(qiáng)弱和峰值，使用多種波長(zhǎng)的熒光分子探針和多頻道流式細(xì)胞分析，進(jìn)行多色熒光分析，并使用設(shè)定的程序和適當(dāng)?shù)膶?duì)照(陰性、陽(yáng)性和標(biāo)準(zhǔn))，可對(duì)以上檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行半定量和定量分析。由于單一試管內(nèi)的檢測(cè)指標(biāo)成倍提高，而技術(shù)的復(fù)雜程度降低，用于同時(shí)檢測(cè)不同的腫瘤細(xì)胞系對(duì)一種以上抗腫瘤藥物的敏感性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)腫瘤細(xì)胞增生過程的示蹤技術(shù)，其特征是可示蹤腫瘤細(xì)胞在活體內(nèi)的增生過程；在體內(nèi)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的反應(yīng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述，腫瘤細(xì)胞系或腫瘤包括(但不限于)Jurkat細(xì)胞(人T單核細(xì)胞白血病細(xì)胞)、MCF-7細(xì)胞(乳腺癌細(xì)胞系)、KU-8細(xì)胞(男性陰莖癌細(xì)胞系)、U937細(xì)胞(單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系)、HeLa細(xì)胞(人宮頸癌細(xì)胞)、NCI-H929細(xì)胞(人多發(fā)性骨髓瘤癌癥細(xì)胞系)、IM-9細(xì)胞(人淋巴癌細(xì)胞系)、U937細(xì)胞(人組織細(xì)胞瘤細(xì)胞系)，Raji細(xì)胞(人B細(xì)胞瘤細(xì)胞系)，SW1116細(xì)胞(人大腸癌細(xì)胞系)、Hep2細(xì)胞(人鼻咽癌上皮細(xì)胞系)、MDR細(xì)胞(人胃癌細(xì)胞系)、SGC-7901細(xì)胞(人胃癌細(xì)胞系)、LSC-1細(xì)胞(人男性喉癌細(xì)胞系)、SGC-7901細(xì)胞(人胃癌細(xì)胞系)、MHCC97細(xì)胞(人肝癌細(xì)胞系)、5-FU細(xì)胞(人肝癌細(xì)胞系)、HepG2細(xì)胞(人肝癌細(xì)胞系)、A549細(xì)胞(人肺癌細(xì)胞系)、3T3細(xì)胞(小鼠成纖維瘤細(xì)胞系)。直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺癌、卵巢癌、大腸癌、鱗狀細(xì)胞癌、喉癌、胃癌、食道癌、單核細(xì)胞白血病細(xì)胞、單核細(xì)胞白血病細(xì)胞、男性陰莖癌細(xì)胞系、鼻咽癌、皮膚癌。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種對(duì)抗腫瘤藥物進(jìn)行篩選，抗腫瘤藥物(但不限于抗腫瘤藥物)包括各種中成藥、中藥復(fù)方湯劑、草藥及其提取物、化學(xué)合成藥、基因工程抗體、重組細(xì)胞因子、其他基因重組產(chǎn)物等。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和藥物療效進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察的技術(shù)。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用流式細(xì)胞儀－細(xì)胞內(nèi)分子探針技術(shù)在體外、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)示蹤腫瘤細(xì)胞增生過程，同時(shí)對(duì)大量抗腫瘤藥物進(jìn)行快速篩選。(1)將分子探針標(biāo)記腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA或蛋白質(zhì)。(2)將標(biāo)記分子探針的至少一種腫瘤細(xì)胞系分別培養(yǎng)，細(xì)胞分裂時(shí)子細(xì)胞攜帶的熒光將減半；加入待測(cè)抗腫瘤藥物。(3)將標(biāo)記有分子探針的腫瘤細(xì)胞接種到動(dòng)物體內(nèi)，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)子細(xì)胞攜帶的熒光將減半；給以待測(cè)抗腫瘤藥物治療。收獲時(shí)單個(gè)腫瘤細(xì)胞群被從組織中提取。(4)收獲時(shí)使用設(shè)定的程序定量分析腫瘤細(xì)胞的數(shù)量(熒光強(qiáng)度)。(5)流式細(xì)胞儀－腫瘤細(xì)胞內(nèi)分子探針標(biāo)記標(biāo)記技術(shù)，用于(但不限于)以下范圍體內(nèi)體外腫瘤細(xì)胞的示蹤，抗腫瘤藥物的快速篩選。
文檔編號(hào)G01N33/68GK1970788SQ200510016348
公開日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2005年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月23日
發(fā)明者鄭芳, 林遠(yuǎn) 申請(qǐng)人:鄭芳, 林遠(yuǎn)