專利名稱：利用6－姜酚肟測(cè)定生姜及其制品中6－姜酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥食兼用材料——生姜及其制品中有效成分的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
生姜(Zingiber officinal Roscoe)既是常用的蔬菜、調(diào)味品，又是常用的中藥材(包括鮮姜汁、生姜皮，以及炮制后的煨姜、姜炭等都是中醫(yī)治病常用的藥物)，能夠疆御百邪，有發(fā)表、散寒、止嘔、化痰等功效。因其“可蔬、可和、可果，可藥，其利之博矣”，《神龍本草經(jīng)》將其列為上品，大陸藥典和臺(tái)灣藥典均收載的姜流浸膏、姜酊目前仍然是廣為應(yīng)用的胃病良藥。我國(guó)民間流傳有“晨吃三片姜，賽過(guò)人參湯”、“晚吃蘿卜早吃姜，不用醫(yī)生開藥方”等諺語(yǔ)。正是對(duì)于這些藥食經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，我國(guó)衛(wèi)生部將生姜規(guī)定為藥食兼用資源?，F(xiàn)代科學(xué)研究證實(shí)了生姜的這些保健或藥效作用都與姜酚有直接或間接的關(guān)系。20世紀(jì)80年代，國(guó)外的藥理試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，分離出的粗姜酚能刺激粘膜，促進(jìn)胃液分泌，在腸道中能抑制異常發(fā)酵，促進(jìn)氣體排放，對(duì)大腦皮質(zhì)和血管運(yùn)動(dòng)中樞有興奮作用，能增進(jìn)血液循環(huán)。最新的實(shí)驗(yàn)和臨床觀察證實(shí)姜酚有強(qiáng)心、降血脂、防治心血管疾病、抗氧化、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、止嘔、止暈、抑制前列腺素合成、防腐殺蟲、驅(qū)蟲、護(hù)膚美容等多方面的生物活性。根據(jù)姜酚的這些生物活性，可以開發(fā)適用于不同人群的多種調(diào)味品、保健食品、藥品、化妝品，還可以開發(fā)綠色農(nóng)藥等等。
姜酚(gingerol)是生姜中的辣味物質(zhì)，也是生姜的主要生物活性成分，它包括6-姜酚(1)，8-姜酚(2)，10-姜酚(3)，12-姜酚(4)等十余種成分(見圖1)，這些成分的性質(zhì)、結(jié)構(gòu)是類似的，其分子結(jié)構(gòu)中都有C3-羰基和C5-羥基，這使得姜酚的化學(xué)性質(zhì)極不穩(wěn)定。例如，在酸性條件下，C4的活潑氫極易與C5的羥基一起脫水形成姜腦(Shogaol)；在加熱或堿性條件下，C4和C5間的碳碳鍵斷裂形成姜酮(Zingerone)和相應(yīng)的醛(見圖1)。另外，姜酚的含量少，僅為生姜干重的2％-3％。由于生姜中姜酚穩(wěn)定性差、種類多、含量少，因此，不易于測(cè)定。我國(guó)還沒(méi)有一個(gè)完美的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)生姜及其制中的姜酚進(jìn)行準(zhǔn)確的測(cè)定。
在科學(xué)研究中，人們應(yīng)用滴定法、光度法、溶出伏安法測(cè)定時(shí)間及其制品中姜酚的含量，但這些方法都是測(cè)定的姜酚總量，且因受生姜或生姜制品中本底物質(zhì)的影響，使得測(cè)定結(jié)果常常偏高，有時(shí)與姜酚的實(shí)際含量相差甚遠(yuǎn)。其分析結(jié)果不能滿足以姜酚為主要有效成分生產(chǎn)藥品和保健食品等產(chǎn)品的要求。
由于姜酚本身沸點(diǎn)高，難以汽化，因此，不能采用氣相色譜法測(cè)定姜酚；通過(guò)硅烷化或乙?；色@得能夠揮發(fā)的姜酚衍生物，但仍然因缺乏標(biāo)樣和因形成的衍生物復(fù)雜而難以準(zhǔn)確測(cè)定姜酚。事實(shí)上，目前已幾乎沒(méi)有人采用該法了。
高壓液相色譜法可常溫測(cè)定，能夠最大限度地減少姜酚在測(cè)定過(guò)程中的變化，是相對(duì)較好的測(cè)定方法。然而，不僅姜酚色譜峰的定性需要姜酚標(biāo)樣，而且根據(jù)色譜分析的定量理論知道，測(cè)定姜酚時(shí)的內(nèi)標(biāo)(或外標(biāo))工作曲線、相對(duì)定量校正因子等都需要以酚標(biāo)樣為前提進(jìn)行測(cè)定。因此，該測(cè)定方法仍然受姜酚標(biāo)樣的限制。
總之，由于姜酚穩(wěn)定性差，標(biāo)樣難得，目前還不能對(duì)生姜及其制品中的姜酚進(jìn)行準(zhǔn)確、快速測(cè)定。
姜酚肟是姜酚類似物，CN 1680290A對(duì)6-姜酚肟等姜酚肟類似物的生產(chǎn)方法及其作用作了詳細(xì)的描述。其中所描述的6-姜酚肟可以在一定的條件下發(fā)生脫肟反應(yīng)而形成6-姜酚，可以作為定性或定量測(cè)定6-姜酚的標(biāo)樣，但到目前為止，還沒(méi)有這方面的探索。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種應(yīng)用6-姜酚肟快速、準(zhǔn)確測(cè)定生姜及其制品中6-姜酚含量的方法。
本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的以6-姜酚肟脫肟反應(yīng)形成的6-姜酚進(jìn)行定性測(cè)定，并以6-姜酚肟作為測(cè)定內(nèi)標(biāo)，從而測(cè)定生姜及其制品中的姜酚含量。
具體包括如下步驟A、生姜及其制品的樣品處理將被測(cè)物溶于乙腈與醋酸的混合液中配制成樣品溶液；并在該樣品溶液中加入6-姜酚肟作為內(nèi)標(biāo)；B、把6-姜酚肟溶于乙腈與醋酸的混合液中，混勻后在40～80℃溫度下反應(yīng)10～72小時(shí)，生成6-姜酚，并用高壓液相色譜儀測(cè)定6-姜酚和6-姜酚肟的高壓液相色譜圖，作為定性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；C、用高壓液相色譜儀分別測(cè)定樣品中6-姜酚和6-姜酚肟的峰面積；
D、通過(guò)下式計(jì)算被測(cè)物中6-姜酚含量C＝1.051 X fi As C0/A0…………………………①式中C所測(cè)樣品中的6-姜酚濃度；X稀釋倍數(shù)；fi6-姜酚肟與6-姜酚282nm時(shí)的摩爾吸光度比，此處作為二者的相對(duì)校正因子，此處取1.181；As樣品中6-姜酚的峰面積；C0樣品中6-姜酚肟的濃度；A0樣品中6-姜酚肟的峰面積；1.051由6-姜酚肟分子量/6-姜酚分子量＝309/294而計(jì)算得。
為了較好實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，所述A步驟中，在處理生姜及其制品的樣品時(shí)，利用2體積的乙腈與3體積的質(zhì)量濃度為2％的醋酸混合液進(jìn)行提取、稀釋、定容，配成含0.2克鮮姜/ml的樣品溶液后，再加入1～10微克/ml的6-姜酚肟作為內(nèi)標(biāo)。
所述B步驟中，稱取6-姜酚肟1～20毫克，溶于1ml乙腈中，加入2％ NaHCO3溶液1.5ml，混勻后置50～60℃烘箱中反應(yīng)12～15小時(shí)。
所述C步驟中，高壓液相色譜儀測(cè)定條件為流動(dòng)相2體積的乙腈與3體積的2％醋酸混合液；流速1～2mL/min；色譜柱反相[C18]柱4.6mm×25cm；柱溫30℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)282nm。
本發(fā)明利用6-姜酚肟常溫下呈現(xiàn)結(jié)晶粉狀狀態(tài)，容易保存和使用的特性，使用6-姜酚肟作為測(cè)定時(shí)的內(nèi)標(biāo)，可準(zhǔn)確快速地測(cè)量出生姜及其制品中6-姜酚的含量，具有廣泛的實(shí)用價(jià)值。


圖1是姜酚在不同條件下分解成姜腦或姜酮的變化示意圖。
圖2是6-姜酚的高壓液相色譜圖。
圖3是6-姜酚肟的高壓液相色譜圖。
圖4是測(cè)定鮮姜中6-姜酚的高壓液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一鮮姜中6-姜酚的測(cè)定1、樣品的處理將鮮姜洗凈、切條后，置打漿機(jī)中打漿。稱取1.000克姜漿，利用2體積乙腈與3體積2％醋酸混合液，將其定容至10ml，即配成0.200克鮮姜/ml的樣品溶液。將其置超聲波勻漿器中振蕩混勻，于3000轉(zhuǎn)速離心，取上清液用0.22μm尼龍濾膜過(guò)濾。濾液即可作為測(cè)定鮮姜中6-姜酚的樣品。進(jìn)樣量2微升。
在所準(zhǔn)備的樣品中加入5微克6-姜酚肟作為內(nèi)標(biāo)。
2、高壓液相色譜儀測(cè)定的條件測(cè)定時(shí)的進(jìn)樣量為2微升。流動(dòng)相2體積的乙腈與3體積的2％醋酸混合液；流速1～2mL/min；色譜柱反相[C18]柱4.6mm×25cm；柱溫30℃；紫外監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)282nm。分別記錄6-姜酚峰面積與6-姜酚肟的峰面積。
3、6-姜酚的定性稱取6-姜酚肟5～20毫克，溶于1ml乙腈中，加入2％ NaHCO3溶液1.5ml，混勻后置60℃烘箱中反應(yīng)12～15小時(shí)。該反應(yīng)液中的6-姜酚肟可變成6-姜酚，以此反應(yīng)生產(chǎn)的6-姜酚進(jìn)行定性。按照上述條件測(cè)定6-姜酚和6-姜酚肟的高壓液相色譜圖分別為圖2和圖3。
4、鮮姜中6-姜酚測(cè)定及其含量的計(jì)算由上述鮮姜樣品所測(cè)的6-姜酚的高壓液相色譜圖為圖4。據(jù)①式計(jì)算6-姜酚的含量為0.09±0.041％(n＝3)。
實(shí)施例二姜油樹脂中6-姜酚的測(cè)定1、樣品的處理稱取姜油樹脂0.1000克，用2體積乙腈與3體積2％醋酸混合液定容至5ml，即配制成每毫升含0.02克姜油樹脂的樣品溶液。將其置超聲波勻漿器中振蕩混勻，于10000轉(zhuǎn)速離心，取上清液用0.22μm尼龍濾膜過(guò)濾。濾液即可作為測(cè)定鮮姜中6-姜酚的樣品。
2、高壓液相色譜儀測(cè)定的條件同實(shí)施例一。
3、6-姜酚的定性同實(shí)施例一。
4、生姜及其制品中6-姜酚含量的計(jì)算據(jù)①式計(jì)算6-姜酚的含量為4.01±0.18％(n＝3)。
實(shí)施例三 干姜中6-姜酚的測(cè)定1、樣品的處理稱取1.000克干姜，用2體積的乙腈與3體積的2％醋酸混合液10毫升，置超聲波勻漿器中振蕩混勻，于3000～10000轉(zhuǎn)速離心，取上清液用0.22μm尼龍濾膜過(guò)濾。用2體積的乙腈與3體積的2％醋酸混合液進(jìn)行進(jìn)行定容至100毫升。在所準(zhǔn)備的樣品中加入500微克6-姜酚肟作為內(nèi)標(biāo)。
2、高壓液相色譜儀測(cè)定的條件同實(shí)施例一。
3、6-姜酚的定性同實(shí)施例一。
4、生姜及其制品中6-姜酚含量的計(jì)算按照①式計(jì)算6-姜酚的含量為0.22±0.016％(n＝3)。
權(quán)利要求
1.一種利用6-姜酚肟測(cè)定生姜及其制品中的6-姜酚的方法，其特征在于以6-姜酚肟脫肟反應(yīng)形成的6-姜酚進(jìn)行定性測(cè)定，并以6-姜酚肟作為測(cè)定內(nèi)標(biāo)，從而測(cè)定生姜及其制品中的姜酚含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于包括如下步驟A、生姜及其制品的樣品處理將被測(cè)物溶于乙腈與醋酸的混合液中配制成樣品溶液；并在該樣品溶液中加入6-姜酚肟作為內(nèi)標(biāo)；B、把6-姜酚肟溶于乙腈與醋酸的混合液中，混勻后在40～80℃溫度下反應(yīng)10～72小時(shí)，生成6-姜酚，并用高壓液相色譜儀測(cè)定6-姜酚和6-姜酚肟的高壓液相色譜圖，作為定性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；C、用高壓液相色譜儀分別測(cè)定樣品中6-姜酚峰面積和6-姜酚肟的峰面積；D、通過(guò)下式計(jì)算被測(cè)物中6-姜酚含量C＝1.051 X fi As C0/A0；式中C所測(cè)樣品中的6-姜酚濃度；X稀釋倍數(shù)；fi6-姜酚肟與6-姜酚282nm時(shí)的摩爾吸光度比，此處作為二者的相對(duì)校正因子，此處取1.181；As樣品中6-姜酚的峰面積；C0樣品中6-姜酚肟的濃度；A0樣品中6-姜酚肟的峰面積；1.051由6-姜酚肟分子量/6-姜酚分子量＝309/294而計(jì)算得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述A步驟中，在處理生姜及其制品的樣品時(shí)，利用2體積的乙腈與3體積的質(zhì)量濃度為2％的醋酸混合液進(jìn)行提取、稀釋、定容，配成含0.2克鮮姜/ml的樣品溶液后，再加入1～10微克/ml的6-姜酚肟作為內(nèi)標(biāo)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述B步驟中，稱取6-姜酚肟1～20毫克，溶于1ml乙腈中，加入2％NaHCO3溶液1.5ml，混勻后置50～60℃烘箱中反應(yīng)12～15小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述高壓液相色譜儀測(cè)定條件為流動(dòng)相2體積的乙腈與3體積的2％醋酸混合液；流速1～2mL/min；色譜柱反相[C18]柱4.6mm×25cm柱溫30℃；紫外監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)282nm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種以6－姜酚肟脫肟反應(yīng)形成的6－姜酚進(jìn)行定性測(cè)定，并以6－姜酚肟作為測(cè)定內(nèi)標(biāo)，從而測(cè)定生姜及其制品中的姜酚含量。本發(fā)明利用6－姜酚肟常溫下呈現(xiàn)結(jié)晶粉狀狀態(tài)，容易保存和使用的特性，使用6－姜酚肟作為測(cè)定時(shí)的內(nèi)標(biāo)，可準(zhǔn)確快速地測(cè)量出生姜及其制品中6－姜酚的含量，具有廣泛的實(shí)用價(jià)值。
文檔編號(hào)G01N30/06GK1811412SQ200510120629
公開日2006年8月2日 申請(qǐng)日期2005年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日
發(fā)明者黃雪松 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)