專利名稱：：南方紅豆杉飲片質量標準及其檢測方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及中藥，具體涉及中藥南方紅豆杉飲片質量標準及其檢測方法。
背景技術：
：紅豆杉作為中藥在《本草綱目》等醫(yī)學古籍中已有記載，傳統(tǒng)用藥葉入藥消炎、止痛、治療疥癬；種子用于治療食積、消化不良和蛔蟲?。粯淦ぶ委熖悄虿?。近年來科學研究發(fā)現(xiàn)紅豆杉植株內含有紫杉醇等高效抗癌活性成分，用于婦科癌癥、前列腺、上胃腸道、肺癌等有較好的治療效果。紫杉醇成分被譽為"晚期腫瘤的最后一道防線"，"十五年來最有效的抗癌制劑之一"，療效確實，使用安全，已開發(fā)了很多藥物。中醫(yī)認為紅豆杉有益氣養(yǎng)陰、補血生津、解毒抗癌的功效。本發(fā)明涉及南方紅豆杉是紅豆杉的品種之一，在中國分布最為廣泛，主產(chǎn)于福建、浙江、江西、湖南、湖北、四川等地。南方紅豆杉飲片質量標準在國家標準和地方標準中尚無收載，但是，質量標準及其檢測方法是確保中藥飲片質量的關鍵，南方紅豆杉飲片作為治療癌癥的有效藥物，研究其質量標準及其檢測方法是一項重要工作
發(fā)明內容本發(fā)明所要解決的技術問題在于克服上述不足之處，結合南方紅豆杉的特性，研究設計南方紅豆杉質量標準及其檢測方法。本發(fā)明提供了南方紅豆杉飲片的質量標準為本品為紅豆杉禾斗植物南方紅豆杉7in:wwa/re/fe附ee"/ev/.^S.K/fwexZiw栽培品的帶葉枝條；性狀本品呈段狀。莖呈細圓柱形，直徑約14mm，有的切面有細小的髓，表面黃綠色至黃褐色，嫩枝具縱棱；葉多切斷；完整者條形，黃綠色至黃褐色，長1.53cm，寬0.250.35cm，上部漸窄，先端急尖或漸尖，葉柄短，葉片全緣，近革質，上面中脈隆起明顯。質脆，易折斷，氣微，味苦、澀；鑒別本品粉末黃綠色至黃褐色，氣孔較多。葉肉薄壁細胞類圓形，排列較疏松。木栓細胞方形或多角形，內含棕黃色物。薄壁細胞類方形、多角形。螺紋管胞多見，少數(shù)為梯紋管胞，直徑2060um;檢査水分不得過12.5%。總灰分不得過8.0%。酸不溶性灰分不得過1.0%。浸出物照水溶性浸出物不得少于18.0%。含量測定本品按干燥品計算，含10-脫乙酰巴卡亭III(C29H360u)不得少于0.03%。性味與歸經(jīng)微甘、苦，平；有小毒。歸腎、心經(jīng)。功能與主治消腫散結，通經(jīng)利尿；用于腫瘤、腎病、類風濕關節(jié)炎等癥。用法與用量39g。注意可能引起惡心、嘔吐、皮疹。IC藏置通風、干燥、避光處。本發(fā)明另一目的是提供了南方紅豆杉飲片的檢測方法，該方法包括下列步驟原料本品為紅豆杉科植物南方紅豆杉roxwsma/w/(7e附ee"/ev"S.i:i/t/ex丄/w栽培品的帶葉枝條；性狀本品呈段狀。莖呈細圓柱形，直徑約14mm，有的切面有細小的髓，表面黃綠色至黃褐色，嫩枝具縱棱；葉多切斷；完整者條形，黃綠色至黃褐色，長1.53cm，寬0.250.35cm，上部漸窄，先端急尖或漸尖，葉柄短，葉片全緣，近革質，上面中脈隆起明顯。質脆，易折斷，氣微，味苦、澀；鑒別(1)本品粉末黃綠色至黃褐色，氣孔較多。葉肉薄壁細胞類圓形，排列較疏松。木栓細胞方形或多角形，內含棕黃色物。薄壁細胞類方形、多角形。螺紋管胞多見，少數(shù)為梯紋管胞，直徑2060um;(2)取本品粉末lg，加甲醇50ml，超聲處理(溫度405(TC)40分鐘，濾過，濾液4050。C減壓回收至干，殘渣加水-三氯甲烷(l:2V/V)的混合液45ml溶解，分取下層三氯甲烷，4050。C減壓回收至干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取10-脫乙酰巴卡亭m對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液5ul，對照品溶液2yl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(8:1.2:0.8V/V)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%香草醛濃硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。檢査水分照水分測定法(中國藥典2005年版一部附錄KH第一法)不得過12.5%?？偦曳植坏眠^8.0%(中國藥典2005年版一部附錄KK)。酸不溶性灰分不得過1.0%(中國藥典2005年版一部附錄僅K)。浸出物照水溶性浸出物測定法項下熱浸法(中國藥典2005年版一部附錄XA)測定，不得少于18.0%。含量測定照高效液相測定法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，水為流動相B，按下表進行梯度洗脫；檢測波長為232nm。理論板數(shù)以IO-脫乙酰巴卡亭III峰計應不低于3500。時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)0277822273578—2022—80對照品溶液的制備取在4045'C減壓干燥12小時以上的10-脫乙酰巴卡亭III對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含O.lmg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉末(過三號篩)lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50ml放置過夜，超聲處理(功率300W，頻率50kHz，溫度4050。C，40分鐘，濾過；再加入甲醇20，超聲處理20分鐘，合并濾液，減壓蒸干，殘渣以水-三氯甲垸(1:2V/V)的混合液45ml,分次溶解并轉移至分液漏斗中，分取下層三氯甲烷，水層再加三氯甲烷20ml，振搖提取，合并三氯甲垸液，4050'C減壓蒸干，殘渣以甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10"1，注入液相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計算，含IO-脫乙酰巴卡亭III(C29H3eOn)不得少于0.03%。本發(fā)明原料來源經(jīng)實地考察、實驗室鑒定，確定來源為南方紅豆杉7ia:ms附fl/7-e,(7eweeef/ev/.」S.K//mexIiw。本發(fā)明建立了南方紅豆杉飲片的質量標準及其檢測方法，本發(fā)明方法檢測結果重復性好，數(shù)據(jù)準確。使用本發(fā)明的方法能較好地控制南方紅豆杉飲片的質量，為進一步制備南方紅豆杉抗癌藥，提供符合質量標準的南方紅豆杉原料，有利于藥物的安全有效，有較大的應用價值。具體實施例方式實施例1鑒別10(1)性狀本試驗為真?zhèn)舞b別。用肉眼觀察。經(jīng)IO批樣品復核檢驗，形狀均符合規(guī)定。(2)鑒別顯微鑒別本試驗為真?zhèn)舞b別。本品粉末過65目篩，挑取少許置載玻片上滴加水合氯醛，，在酒精燈上加熱透化并滴加水合氯醛，蓋上蓋玻片。置顯微鏡下觀察。復核檢驗10批樣品，均具有明顯的顯微鑒別特征。薄層鑒別本試驗為真?zhèn)舞b別。供試品溶液的制備取本品粉末lg，加甲醇50ml，超聲處理40分鐘，溫度45°C，濾過，濾液45。C減壓回收至干，殘渣加水-三氯甲垸(1:2V/V)的混合液45ml溶解，分取下層三氯甲烷，45。C減壓回收至干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。對照品溶液的制備取10-脫乙酰巴卡亭III對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。展開劑三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(8:1.2:0.8V/V)硅膠板硅膠H板點樣量對照品2ul，供試品5ul顯色劑10%香草醛濃硫酸溶液。方法預制硅膠H板干燥箱11(TC烘30分鐘活化，干燥器中放冷后，用毛細管點樣，對照品2ul，供試品5ul;放入已放有展開劑的展開缸中，上行展開815cm，取出，晾干；噴以10%香草醛濃硫酸溶液，105。C干燥箱加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。復核檢驗4批樣品，結果符合規(guī)定。實施例2(1)水分本試驗為品質檢驗。照水分測定法(中國藥典2005年版一部附錄KH第一法)測定。取供試品25g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，精密稱定；打開瓶蓋在105°C干燥5小時將瓶蓋蓋好，移至干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定，再在上述溫度干燥l小時，稱重，根據(jù)減失的重量，計算供試品的含水量。檢驗5批樣品，平均值為11.3。數(shù)據(jù)見下表。(2)總灰分本試驗為品質檢驗。照(中國藥典2005年版一部附錄KK)灰分測定法測定。本品粉碎過二號篩，取35g置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準確至O.Olg)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至580，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量(％)。檢驗5批樣品，平均值為4.3。數(shù)據(jù)見下表。(3)酸不溶性灰分本試驗為品質檢驗。照(中國藥典2005年版一部附錄IXK)灰分測定法測定。取灰分測定法所得灰分，在坩堝中小心加入稀鹽酸約10ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10分鐘，表面皿用熱水5ml沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內的殘渣用水洗于濾紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應為止。殘渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中酸不溶性灰分的含量(％)。檢驗5批樣品，平均值為0.5。數(shù)據(jù)見下表5批樣品檢査項數(shù)據(jù)序號批號水分總灰分酸不溶性灰分108090112.02.80.3208090212.33.70.530809038.45.01.3408092011.93.90.008102412.46.30.6平均值11.34.30.5(4)浸出物本試驗為品質檢驗。照水溶性浸出物測定法項下熱浸法(中國藥典2005年版一部附錄XA)測定。取供試品約2g，精密稱定，置250ml的錐形瓶中，精密加水50ml，密塞，稱定重量，靜置1小時后，連接回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸l(wèi)小時，放冷后取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105"C干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外，易干燥品計算供試品中水溶性浸出物的的含量(％)。檢驗5批樣品，平均值為25.6。數(shù)據(jù)見下表。(5)含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，水為流動相B，按下表進行梯度洗脫；檢測波長為232mn。理論板數(shù)以IO-脫乙酰巴卡亭III峰計應不低于3500。時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)0277822273578—2022—80對照品溶液的制備取在40'C減壓干燥12小時的10-脫乙酰巴卡亭III對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含O.lmg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉末(過三號篩)lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50ml放置過夜，超聲處理(功率300W，頻率50kHz，45°C，40分鐘，濾過；再加入甲醇20，超聲處理20分鐘，合并濾液，減壓蒸干，殘渣以水-三氯甲烷(h2V/V)的混合液45ml，分次溶解并轉移至分液漏斗中，分取下層三氯甲垸，水層再加三氯甲烷20ml，振搖提取，合并三氯甲垸液，45'C減壓蒸干，殘渣以甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。檢驗5批樣品，平均值為0.048。數(shù)據(jù)見下表。浸出物、含量測定數(shù)據(jù)序號批號浸出物％含量測定％108090126.10.050208090230.50.05314<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>權利要求1、一種南方紅豆杉飲片的質量標準，其特征在于其質量標準為(1)本品為紅豆杉科植物南方紅豆杉Taxusmaireilemeeetlevl.S.Y.HuexLiu栽培品的帶葉枝條；(2)性狀本品呈段狀，莖呈細圓柱形，直徑約1～4mm，有的切面有細小的髓，表面黃綠色至黃褐色，嫩枝具縱棱；葉多切斷；完整者條形，黃綠色至黃褐色，長1.5～3cm，寬0.25～0.35cm，上部漸窄，先端急尖或漸尖，葉柄短，葉片全緣，近革質，上面中脈隆起明顯；質脆，易折斷，氣微，味苦、澀；(3)鑒別本品粉末黃綠色至黃褐色，氣孔較多，葉肉薄壁細胞類圓形，排列較疏松，木栓細胞方形或多角形，內含棕黃色物，薄壁細胞類方形、多角形，螺紋管胞多見，少數(shù)為梯紋管胞，直徑20～60μm；(4)水分不得過12.5％；(5)總灰分不得過8.0％；(6)酸不溶性灰分不得過1.0％；(7)浸出物照水溶性浸出物不得少于18.0％；(8)含量測定本品按干燥品計算，含10-脫乙酰巴卡亭IIIC29H36O11不得少于0.03％；性味與歸經(jīng)微甘、苦，平；有小毒，歸腎、心經(jīng)；功能與主治消腫散結，通經(jīng)利尿；用于腫瘤、腎病、類風濕關節(jié)炎癥；用法與用量3～9g；注意可能引起惡心、嘔吐、皮疹；貯藏置通風、干燥、避光處。2、一種南方紅豆杉飲片的檢測方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)原料本品為紅豆杉科植物南方紅豆杉Taxusmaireilemeeetlevl.S.YHuexLiu栽培品的帶葉枝條；(2)性狀本品呈段狀,莖呈細圓柱形，直徑約14mm，有的切面有細小的髓，表面黃綠色至黃褐色，嫩枝具縱棱；葉多切斷；完整者條形，黃綠色至黃褐色，長1.53cm，寬0.250.35cm，上部漸窄，先端急尖或漸尖，葉柄短，葉片全緣，近革質，上面中脈隆起明顯，質脆，易折斷，氣微，味苦、澀；(3)鑒別①粉末顯微鑒別本品粉末黃綠色至黃褐色，氣孔較多，葉肉薄壁細胞類圓形，排列較疏松，木栓細胞方形或多角形，內含棕黃色物，薄壁細胞類方形、多角形，螺紋管胞多見，少數(shù)為梯紋管胞，直徑2060um;②薄層鑒別方法取本品粉末lg，加甲醇50ml，超聲處理40分鐘，溫度405(TC,濾過，濾液5(TC以下減壓回收至干，殘渣加水-三氯甲垸l:2V/V的混合液45ml溶解，分取下層三氯甲垸，溫度4050°C，減壓回收至干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取10-脫乙酰巴卡亭m對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法中國藥典2005年版一部附錄VIB試驗，吸取供試品溶液5ul，對照品溶液2pl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以三氯甲垸-乙酸乙酯-甲醇8:1.2:0.8V/V為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%香草醛濃硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)水分照水分測定法中國藥典2005年版一部附錄KH第一法，不得過12.5%;(5)總灰分不得過8.0%中國藥典2005年版一部附錄KK;(6)酸不溶性灰分不得過1.0%中國藥典2005年版一部附錄KK;(7)浸出物照水溶性浸出物測定法項下熱浸法中國藥典2005年版一部附錄XA測定，不得少于18.0%;(8)含量測定照高效液相測定法中國藥典2005年版一部附錄VID測定對照品溶液的制備取在4045'C減壓干燥12小時的10-脫乙酰巴卡亭III對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品粉末過三號篩lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50ml放置過夜，超聲處理40分鐘(功率300W，頻率50kHz,溫度405(TC，濾過；再加入甲醇20，超聲處理20分鐘，合并濾液，減壓蒸干，殘渣以水-三氯甲烷1:2V/V的混合液45ml，分次溶解并轉移至分液漏斗中，分取下層三氯甲垸，水層再加三氯甲烷20ml，振搖提取，合并三氯甲垸液，4050。C減壓蒸干，殘渣以甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得;測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得，本品按干燥品計算，含IO-脫乙酰巴卡亭III(G晶60n)不得少于0.03%。3、根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于所述步驟(8)含量測定中高效液相測定的色譜條件為十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈與水為流動相，乙腈水為78-20:22-80V/V進行梯度洗脫；時間0-35分鐘；檢測波長為232nm，理論板數(shù)以10-脫乙酰巴卡亭m峰計應不低于3500。全文摘要本發(fā)明提供了一種南方紅豆杉飲片的質量標準及其檢測方法。檢測標準包括性狀呈段狀、鑒別粉末為黃綠色至黃褐色、水分不得過12.5％、總灰分不得過8.0％、酸不溶性灰分不得過1.0％、水溶性浸出物不得少于18.0％和含量測定，按干燥品計算，含10-脫乙酰巴卡亭III(C₂₉H₃₆O₁₁)不得少于0.03％等。本發(fā)明方法檢測結果重復性好，數(shù)據(jù)準確。使用本發(fā)明的方法能較好地控制南方紅豆杉的質量。文檔編號G01N33/15GK101477102SQ20081020430公開日2009年7月8日申請日期2008年12月10日優(yōu)先權日2008年12月10日發(fā)明者王艷春,陳維榮申請人:上?？禈蛑兴庯嬈邢薰?